一种重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子喷雾剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物制药领域，涉及一种喷雾剂及其制备方法，尤其涉及一种重组人 粒细胞巨噬细胞刺激因子喷雾剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)也被称 为集落刺激因子3 (CSF-3 )、粒细胞-巨·细胞分化蛋白（granulocyte-macrophage differentiation factor ,GM-DF)、多能造血素（pluripoietin，pCSF)和集落刺激因子β (CSF-β)等。G-CSF有两种变异体，一种含有174个氨基酸(b型），另一种含有177个氨基酸(a 型），均是选择性剪切的产物。较小的变异体占主体，并比大的变异体显示更强的生物学活 性。
[0003] G-CSF因具有迅速升高白细胞计数的作用，越来越多地应用于恶性肿瘤化疗患者， 是目前临床上研究较多和应用广泛的造血正调控细胞因子，能刺激造血干细胞增殖、分化， 增加中性粒细胞计数，促进巨噬细胞生长。维持恶性肿瘤患者体内粒细胞、淋巴细胞、巨噬 细胞等细胞的正常生理功能十分重要，因为这些细胞能协同作用，抑制肿瘤细胞生长。实验 研究与临床应用证明，G-CSF能增强外周血单核细胞、淋巴细胞的细胞毒性，增强LAK细胞功 能，可增加基质分泌血管生成抑制素，以抑制肿瘤血管生成和转移等。目前，恶性肿瘤患者 进行大剂量化疗，配合外周血干细胞移植治疗中，国内外的临床治疗学家多采用G-CSF作为 干细胞动员剂，以支持患者骨髓移植后促进造血功能恢复。恶性肿瘤放、化疗时加用G-CSF 已成为常规治疗手段。
[0004] G-CSF作为小细胞肺癌、非何杰金病、睾丸癌、神经细胞癌、多发性骨髓瘤、乳腺癌、 卵巢癌、急性粒细胞白血病等患者的化疗辅助用药，具有3个良好作用：1)降低细胞毒剂诱 发的毒副反应;2)减轻患者化疗反应和缩短化疗所致白细胞计数减少时间；3)防止患者感 染或降低感染发生率。据《Inpharma》2002年1345期报道，美国华盛顿大学科研人员研究了 粒细胞集落刺激因子(G-CSF)在传染病治疗应用后指出，长期接受G-CSF治疗已广泛用于先 天性和获得性中性白细胞减少症患者的标准治疗中，也可用于高危患者化疗诱发的中性白 细胞减少症和发热性中性白细胞减少症的治疗。对于患有严重细菌和真菌感染者的中性白 细胞减少症输血治疗中，加用G-CSF也有协同治疗作用。研究还证明，G-CSF对HIV感染患者 中性白细胞减少和诱发的细菌性感染也同样具有良好的治疗与预防效果。此外，G-CSF对社 区获得性肺炎和非中性白细胞减少症患者伴发的各种传染病也有良好作用。
[0005] 可见，G-CSF普通注射剂在临床上已应用广泛。1994年，日本中外制药株式会社研 制成功并上市rG-CSF(来格司亭，Lenograstim;商品名：Neutrogin，中文商品名：诺以托或 罗津），其后麒麟公司的rG-CSF(商品名:Gran，中文商品名：惠尔血），美国Amgen/Roche公司 研制的rDNAG-CSF(非格司亭，Molgramostim)等，先后在世界各国上市，也在中国上市销售。 国内杭州九源基因工程有限公司研制的重组人粒细胞集落刺激因子(注射用rhG-CSF，商品 名叫航九源），北京双鹭药业有限公司粒生素(rhG-CSF)，江苏江安制药有限公司（G-CSF)， 济南齐鲁制药厂产rhG-CSF(瑞白）先后被批准上市。造血生长因子-粒细胞集落刺激因子 (G-CSF)正式上市临床治疗应用已有10多年的历史。但其在临床使用中存在主要问题是半 衰期短，静脉注射后快速从体循环中消失，平均保留时间为1.34小时，消除半衰期为1.3-4.2小时。为维持较长时间血药浓度与提高疗效，临床应用中1日要给药1-2次，既增加了患 者费用，又增加患者痛苦。国内外目前解决该问题的方法是采取皮下注射及PEG化修饰的方 法，延长其体内滞留时间。经科技攻关，美国Amgen制药公司开发出长效粒细胞集落刺激因 子PEG-G-CSF(商品名SD/01)，其人体血浆半衰期为7.05h，静脉注射PEG-G-CSF后12h，外周 血中性粒细胞计数达到峰值，且峰值稳定地维持24~72h，168h后才恢复至原值(rhG-CSF由 峰值下降至原值为48h)。人体多次临床对比试验研究结果表明，肿瘤化疗患者于化疗前2周 和化疗后24h各皮下注射30yg/kgPEG-G-CSF，对中性粒细胞计数与⑶34+细胞计数的实际动 员作用，和rhG-CSF5yg/kgl日1次连续皮下注射的治疗作用相当，且无明显不良反应。
[0006] 但注射毕竟给病人带来痛苦和不便，在蛋白多肽类药物非注射给药途径研究中， 鼻腔及口腔尤其上颚、舌下等都有望成为蛋白给药的较佳部位，喷雾剂由于不含抛射剂，不 使用耐压容器，其喷出的的雾滴较细，在喷射部位分布均匀、不易流失、吸收快、生物利用度 高，目前应用越来越广泛。
[0007] 同时，由于rhG-CSF易被酶水解和肾脏清除，在体内半衰期短，需每日给药，重复注 射不仅增加了患者的痛苦，也会引起一些不良反应。因此，国内外正在不断研发能够降低酶 解机会，增加药物稳定性，延长血浆消除半衰期，减小血药浓度波动的长效制剂。
【发明内容】
[0008] 本发明为解决现有技术中的上述问题，提出一种重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子 喷雾剂及其制备方法。本发明的喷雾剂能够降低酶解机会，增加药物稳定性，具有延长血浆 消除半衰期、减小血药浓度波动以及提升人体白细胞功能。
[0009] 为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
[0010] 本发明第一个方面是:提供一种重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子的喷雾剂，以脂 质体、乳剂、胶束、合成或天然脂肪及挥发油为药物载体，每1000重量份的喷雾剂溶液中包 括(0.01 -5.0)重量份的重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子;其中，
[0011] 所述脂质体包括磷脂、胆固醇、水溶性载体；
[0012] 所述乳剂包括油相、表面活性剂、助表面活性剂和/或水；
[0013] 所述胶束包括吸收促进剂(通常为表面活性剂）、助溶剂、抗氧化剂与螯合剂、抑菌 剂及缓冲溶液；
[0014] 所述合成或天然脂肪油及挥发油为具有C6-C18中等链长的脂肪酸甘油脂，且所 述合成或天然脂肪油及挥发油类占喷雾剂组合物总量的1 一99.999%。
[0015] 进一步地，每1000重量份的喷雾剂溶液中包括(0.01-0.02)重量份的重组人粒细 胞巨噬细胞刺激因子;每1000重量份的喷雾剂溶液中包括(0.05-0.4)重量份的重组人粒细 胞巨噬细胞刺激因子。每1000重量份的喷雾剂溶液中包括(0.05-0.2)重量份的重组人粒细 胞巨噬细胞刺激因子。每1000重量份的喷雾剂溶液中包括(0.05-0.1)重量份的重组人粒细 胞巨噬细胞刺激因子。
[0016] 进一步地，每1000重量份的喷雾剂溶液中包括(0.1-0.4)重量份的重组人粒细胞 巨噬细胞刺激因子。每1000重量份的喷雾剂溶液中包括(ο. 2-0.3)重量份的重组人粒细胞 巨噬细胞刺激因子。每1000重量份的喷雾剂溶液中包括(0.25)重量份的重组人粒细胞巨噬 细胞刺激因子。
[0017] 进一步地，所述重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子包括天然基因重组人粒细胞巨噬 细胞刺激因子，经化学修饰的糖基化或PEG化的重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子及其突变 体。