用于治疗血液学恶性肿瘤的抗lag-3抗体的制作方法
【专利摘要】提供了使用抗LAG?3抗体对血液学恶性肿瘤，如复发性或难治性慢性淋巴细胞性白血病或淋巴瘤的临床治疗的方法。具体的恶性包括例如慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、何杰金氏淋巴瘤(HL)或非何杰金氏淋巴瘤(NHL)。
【专利说明】用于治疗血液学恶性肿瘤的抗LAG-3抗体
[0001] 对相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2014年1月28日提交的美国临时专利申请No. 61 /932，589的优先权和 权益，将其内容完整收入本文。
[0003] 发明背景
[0004] 淋巴细胞活化基因-3(LAG-3;⑶223)是一种在活化的⑶4+和CD8+T细胞以及NK和树 突细胞亚群的细胞表面上表达的I型跨膜蛋白（Triebel F等，J.Exp.Med. 1990; 171:1393-1405 !Workman CJ等 J. Immunol · 2009; 182(4): 1885-91)与T辅助细胞活化的共受体 CD4紧密近缘。这两种分子都具有4个胞外Ig样域，并且其发挥功能活性都需要结合其配体， 即II类主要组织相容性复合物(MHC)。与CD4不同的是，LAG-3仅在活化的T细胞的细胞表面 上表达，并且其从细胞表面上的切离终止LAG-3信号传导。LAG-3也能以可溶性蛋白质的形 式出现，但是它不结合II类MHC，并且功能未知。
[0005] 已经报告了LAG-3在促进调节性T细胞(Treg)活性中以及在负调节T细胞活化和增 殖中发挥重要的作用(Workman CJ等，J. Immunol .2005; 174:688-695)。天然的Treg和诱导 的Treg都表达增加的LAG-3，这是它们的最大阻抑功能所需要的（Camisaschi C等， J· Immunol · 2010; 184:6545-6551 及Huang CT等，Immunity · 2004; 21:503-513)。此外，LAG-3 在CD4+效应T细胞上的异位表达降低这些的增殖能力，并且赋予它们针对第三方T细胞的调 节潜力(Huang CT等，Immunity · 2004; 21: 503-513)。最近的研究也已经显示，LAG-3在耗竭 的对淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(exhausted lymphocytic choriomeningitis virus, LCMV)特异性的⑶8+T细胞上的高表达对这些细胞的无应答状态有贡献，并且限制⑶8+T细胞 抗肿瘤应答（Blackburn SD 等，Nat.Immunol.2009;10:29-37及 Grosso JF等， J. Cl in. Invest. 2007; 117:3383-3392)。实际上，在2种鼠模型中，LAG-3通过对CD8+T细胞的 直接影响而维持对自身抗原和肿瘤抗原的耐受性(Grosso JF等，J. Cl in. Invest. 2007; 117:3383-3392)。
[0006] 埃巴二氏病毒感染是血液学恶性肿瘤中潜在的T细胞耗竭诱导中要考虑的又一个 因素。已知EBV关联的CLU里克特(Richter)综合征、和淋巴瘤病例通常比它们的EBV(-)对 应物更具攻击性（Tsimberidou AM等，Leuk淋巴瘤2006;47:827;Ansell SM等，Am J Hematol 1999;60:99.;Dolcetti R等，Infectious Agents and Cancer 2010;5:22; Kanakry JA等，Blood 2013; 121:3547)。令人感兴趣的是，还已经证明检查点抑制物，如H)-Ll和LAG-3,在EBV关联的恶性肿瘤中有表达（Green MR等，Clin Cancer Res 2012; 18: 1611;Monti S等，Blood 2005; 105:1851)。实际上已经证明了慢性病毒感染中有LAG-3的高 表达，并且在鼠模型中用抗LAG-3抗体阻断其表达能够降低病毒滴度和检查点抑制物的表 达(Blackburn SD等,Nat · Tmmunol · 2009; 10:29-37)。此外，已经评估LAG-3表达单独或与其 它标志组合作为CLL和何杰金氏淋巴瘤中的预后或预测标志（Zhang J等，BMC Bioinformatics 2010;ll(Suppl 9):S5;Kotaskova J等，J Mol Diagn 2010;12(3):328-334)。新出现的数据指示，肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)和外周血上的LAG-3表达介导血液学 恶性肿瘤中的T细胞耗竭(Dickinson JD等,Leuk Lymphoma 2006;47(2):231_44)。此外，用 特异性抗体的LAG-3阻断已经在白血病（Berrien-Elliott，M等，Cancer Research 2013;73 (2) :605-616)和实体瘤模型(Woo,S-R等，Cancer Research 2011;72(4) :917-927;Goding， S · R.等，Journal of Immunology ,Baltimore ,Md. 1950; 190(9): 4899-909)中显不了抗肿瘤 活性。因此，LAG-3是血液学恶性肿瘤中的一种治疗靶标。单独用抗LAG-3抗体，和用抗LAG-3 抗体与标准护理(例如依鲁替尼（ibrutinib)，来那度胺（Ienalidomide))或与其它检查点 抑制剂(例如纳武单抗(n i vo Iumab))组合来阻断LAG-3，值得在临床研究中进一步探索。
[0007] 因而，本发明的一个目的是提供使用抗LAG-3免疫疗法治疗具有血液学恶性肿瘤 的受试者的改进方法。
[0008] 发明概述
[0009] 本文中提供了治疗人患者中的恶性，特别是血液学恶性肿瘤(例如，源自髓样或淋 巴样细胞系的恶性肿瘤，如白血病、淋巴瘤和骨髓瘤）的方法，所述方法包括对患者施用抗 LAG-3抗体，其中抗体根据特定的临床剂量方案（即，以特定的剂量和根据特定的给药日程 表)施用(或适于施用）。在一个实施方案中，人患者患有复发性或难治性慢性淋巴细胞性白 血病或淋巴瘤，如慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、何杰金氏淋巴瘤(HL)或非何杰金氏淋巴瘤 (NHL) 0
[0010] 一种示例性抗LAG-3抗体是BMS-986016,其包含分别具有如SEQ ID N0:1和2中列 出的序列的重链和轻链，或BMS-986016的抗原结合片段和变体（参见例如WO 2014/ 008218)。在其它实施方案中，抗体包含BMS-986016的重链和轻链互补决定区（CDR)或可变 区（VR)。因而，在一个实施方案中，抗体包含具有SEQ ID N0:3中列出的序列的BMS-986016 的重链可变(VH)区的CDRl、CDR2和CDR3域，和具有SEQ ID NO: 5中列出的序列的BMS-986016 的轻链可变(VL)区的⑶R1、CDR2和⑶R3域。在另一个实施方案中，抗体包含分别在SEQ ID N0:7、8和9中列出的CDR1、CDR2和CDR3重链序列，和分别在SEQ ID N0:10、ll和12中列出的 CDRl、⑶R2和⑶R3轻链序列。在另一个实施方案中，抗体具有分别包含SEQ ID NO: 3和/或 SEQ ID N0:5中列出的氨基酸序列的VH和/或VL区。在另一个实施方案中，抗体包含分别由 SEQ ID N0:4和/或SEQ ID N0:6中列出的核酸序列编码的VH和/或VL区。在另一个实施方案 中，抗体与上文提及的抗体竞争结合LAG-3上的相同表位和/或结合LAG-3上的相同表位。在 另一个实施方案中，抗体与上文提及的抗体具有至少约90 %可变区氨基酸序列同一性(例 如，与SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5的至少约90%、95%或99%可变区同一性）。
[0011]因而，在一个方面中，提供了用于治疗人患者中的复发性或难治性慢性淋巴细胞 性白血病和淋巴瘤(例如CLL、HL或NHL)的方法，所述方法包括对患者施用有效量的：
[0012] 抗LAG-3抗体包含具有SEQ ID N0:3中列出的序列的重链可变区的CDR1、CDR2和 ⑶R3域，和具有SEQ ID NO:5中列出的序列的轻链可变区的⑶RU⑶R2和⑶R3域，
[0013] 其中所述方法包括至少一个施用周期，其中所述周期是8周的时间，其中对于所述 至少一个周期中的每一个，以20、80、240或800mg的剂量施用4剂抗LAG-3抗体。在另一个实 施方案中，以约〇. 03、0.25、1或3mg/kg体重的剂量施用4剂抗LAG-3抗体。
[0014] 在一个实施方案中，以下述剂量施用抗LAG-3抗体：
[0015] (a)20mg 抗 LAG-3 抗体；
[0016] (b)80mg 抗 LAG-3 抗体；
[0017] (c)240mg 抗 LAG-3 抗体；或
[0018] (d)800mg 抗 LAG-3 抗体。
[0019] 在另一个实施方案中，以下述剂量施用抗LAG-3抗体：
[0020] (a)0.03mg/kg 抗 LAG-3 抗体；
[0021] (b)0.03mg/kg 抗 LAG-3 抗体；
[0022] (c)0.25mg/kg 抗 LAG-3 抗体；
[0023] (d)lmg/kg 抗 LAG-3 抗体;或
[0024] (e)3mg/kg 抗 LAG-3 抗体。
[0025] 在一个实施方案中，抗LAG-3抗体的剂量按mg/kg体重计算。在另一个实施方案中， 抗LAG-3抗体的剂量是统一固定剂量。在另一个实施方案中，使用中间剂量的LAG-3抗体。例 如，可以以0.4mg/kg的剂量施用抗LAG-3抗体。在另一个实施方案中，调节剂量方案以提供 最佳的期望的响应(例如有效的响应）。
[0026]在另一个实施方案中，在每个周期的第1天、第15天、第29天和第43天施用抗LAG-3 抗体。在另一个实施方案中，治疗由最多达12个周期组成。
[0027] 在一个实施方案中，施用抗LAG-3抗体作为第一（"前"）线治疗(例如，初始或第一 治疗）。在另一个实施方案中，施用抗LAG-3抗体作为第二线治疗(例如在用相同或不同治疗 剂的初始治疗后，包括在复发后和/或在第一治疗失败的情况下）。可以通过任何合适的手 段对受试者施用抗LAG-3抗体。在一个实施方案中，抗体配制用于静脉内施用。
[0028] 可以使用任何合适的手段评估本文中提供的治疗方法的效力。在一个实施方案 中，治疗产生至少一种治疗效应，例如，恶性细胞数目随时间的减少、完全响应、部分响应、 和病情稳定。
[0029] 还提供了试剂盒，其包含适合用于本文中描述的方法的治疗有效量的药物组合 物，所述药物组合物含有抗LAG-3抗体，如BMS-986016，和可药用载体。在一个实施方案中， 试剂盒包含：
[0030] (a)-定剂量的抗LAG-3抗体，该抗体包含具有SEQ ID N0:3中列出的序列的重链 可变区的⑶R1、CDR2和⑶R3域，和具有SEQ ID N0:5中列出的序列的轻链可变区的⑶R1、 CDR2和CDR3域;和
[0031] (b)关于在本发明的方法中使用抗LAG-3抗体的说明。
[0032] 在另一个方面中，提供了在至少一个周期中施用的抗LAG-3抗体，所述抗LAG-3抗 体包含具有SEQ ID N0:3中列出的序列的重链可变区的CDRUCDR2和CDR3域，和具有SEQ ID NO: 5中列出的序列的轻链可变区的⑶Rl、CDR2和⑶R3域，其中对于每个周期，以20、80、240 或800mg的剂量施用4剂抗LAG-3抗体。在另一个实施方案中，以0.03、0.25、1或3mg/kg体重 的剂量施用4剂抗LAG-3抗体。
[0033] 附图简述
[0034]图1是显示I期临床试验的若干部分的图示。
[0035]图2是显示临床试验的筛选、治疗、临床随访和存活随访期的图示。
[0036]图3是显示生物标志物取样日程表的表格。
[0037] 图4显示了NSCLC细胞中的LAG-3的IHC分析的结果。
[0038]图5显示了胃癌细胞中的LAG-3的IHC分析的结果。
[0039]图6是比较黑素瘤细胞中相对于肿瘤切片中的所有其它细胞类型的LAG-3阳性细 胞百分比的图。
[0040] 图7是比较NSCLC细胞中相对于肿瘤切片中的所有其它细胞类型的LAG-3阳性细胞 百分比的图。
[0041] 图8是比较肾细胞癌(RCC)细胞中相对于肿瘤切片中的所有其它细胞类型的LAG-3 阳性细胞百分比的图。
[0042] 图9是比较胃癌细胞中相对于肿瘤切片中的所有其它细胞类型的LAG-3阳性细胞 百分比的图。
[0043] 图10是比较鳞状头颈部癌细胞中相对于肿瘤切片中的所有其它细胞类型的LAG-3 阳性细胞百分比的图。
[0044]图11的表汇总了基于非何杰金氏淋巴瘤细胞的LAG-3光学显微镜分析，相对于肿 瘤切片中的所有其它细胞类型，淋巴样细胞(肿瘤细胞和TILS)中的LAG-3阳性细胞的百分 比。
[0045]图12显示了NHL和DBLCL细胞中的LAG-3的IHC分析的结果；（A)低倍视图和(B)高倍 视图。
[0046]图13显示了 NHL和FL细胞中的LAG-3的IHC分析的结果；（A)低倍视图和(B)高倍视 图。
[0047]图14显示了NHL、TMA和CLL细胞中的LAG-3的IHC分析的结果；（A)低倍视图和(B)高 倍视图。
[0048] 发明详述
[0049] I.定义
[0050] 如本文中使用，术语"受试者"或"患者"是人类癌症患者(例如具有晚期实体瘤，如 晚期难治性实体瘤的患者）。
[0051 ] 如本文中使用，"血液学恶性肿瘤"（hematological malignancy)指影响血液、骨 髓和/或淋巴结的癌症类型。此类恶性肿瘤以恶性或癌性细胞为特征，并且源自两种主要的 血细胞谱系一一髓样细胞系（其产生粒细胞、红细胞、凝血细胞、巨噬细胞和肥大细胞)和淋 巴样细胞系（其产生B、T、NK和浆细胞）中的任一种。这些癌症包括白血病、淋巴瘤和骨髓瘤 的所有类型，例如急性、慢性、淋巴细胞性和/或髓性白血病，如急性淋巴细胞性白血病 (ALL )、急性髓性白血病(AML )、慢性淋巴细胞性白血病(CLL )、和慢性髓性白血病(CML )、未 分化AML(M0)、成髓细胞性白血病(Ml)、成髓细胞性白血病(M2;具有细胞成熟）、前髓细胞性 白血病(M3或M3变体[M3V])、髓单核细胞性白血病(M4或M4变体伴嗜酸粒细胞增多[M4E])、 单核细胞性白血病(M5)、红白血病(M6)、巨核母细胞性白血病(M7)、孤立性粒细胞肉瘤、和 绿色瘤;淋巴瘤，如何杰金氏淋巴瘤(HL)、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、B细胞淋巴瘤、T细胞淋 巴瘤、淋巴浆细胞样淋巴瘤、单核细胞样B细胞淋巴瘤、粘膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤、 间变性大细胞淋巴瘤、成年T细胞淋巴瘤/白血病、套细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞 淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤、肠 T细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤、 淋巴母细胞性淋巴瘤、移植后淋巴增殖性病症、真性组织细胞性淋巴瘤、原发性中枢神经系 统淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、淋巴母细胞性淋巴瘤(LBL)、伯基特(Burkitt)氏淋巴瘤、 弥漫性组织细胞性淋巴瘤(DHL)、皮肤T细胞淋巴瘤(CTLC)(又称作蕈样肉芽肿病或塞扎里 (Sezary)综合征）、和淋巴衆细胞样淋巴瘤(LPL)伴沃尔登斯特伦(Waldenstrom)巨球蛋白 血症;骨髓瘤，如IgG骨髓瘤、轻链骨髓瘤、非分泌性骨髓瘤、郁积型骨髓瘤(又称作无痛性骨 髓瘤）、孤立性浆细胞瘤、和多发性骨髓瘤。可以使用本发明的方法治疗的具体的癌症包括 例如慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、何杰金氏淋巴瘤(HL)或非何杰金氏淋巴瘤(NHL)。
[0052] 如本文中使用，"有效（的）治疗"指产生有益的效果，例如疾病或病症的至少一种 症状的改善，的治疗。有益的效果的形式可以是相对于基线的改善，即相对于启动根据所述 方法的疗法前做出的测量或观察的改善。有益的效果的形式也可以是阻止、减缓、延迟或稳 定血液学恶性肿瘤的标志的有害进展。有效的治疗可以指减轻血液学恶性肿瘤的至少一种 症状。此类有效治疗可以例如减轻患者疼痛，减少恶性细胞的大小和/或数目，可以降低或 阻止恶性细胞的转移，和/或可以减缓恶性细胞生长。
[0053] 术语"有效量"指作用剂的提供期望的生物学、治疗和/或预防结果的量。所述结果 可以是疾病的体征、症状或原因中的一种或多种的减少、改善、缓和、减轻、延迟和/或缓解， 或者生物学系统的任何其它期望的变化。当指血液学恶性肿瘤时，有效量包含足以降低恶 性细胞的生长速率（如抑制恶性肿瘤的进展）或者阻止或延迟其它不想要的恶性细胞增殖 的量。在一些实施方案中，有效量是足以延迟恶性细胞形成的量。在一些实施方案中，有效 量是足以阻止或延迟恶性细胞复发的量。有效量可以在一次或多次给药中施用。有效量的 药物或组合物可以：（i)减少恶性细胞的数目；（ii)抑制、延迟、在一定程度上减缓并且可以 停止恶性细胞浸润；（iii)抑制（即在一定程度上减缓并且可以停止恶性细胞转移；（iv)阻 止或延迟恶性细胞的发生和/或复发;和/或(vii)在一些程度上缓解的一种或多种与恶性 有关的症状。在一个例子中，"有效量"是已在临床上证明可影响恶性肿瘤的显著减少或减 缓恶性肿瘤的进展(如恶性细胞数目的增加）的抗LAG-3抗体量。如本文中使用的，术语"固 定剂量"、"统一剂量"和"统一固定剂量"可互换使用，指不管患者的重量或体表面积(BSA) 对患者施用的剂量。因此，固定剂量或统一剂量不作为mg/kg剂量规定，而是作为作用剂(例 如抗LAG-3抗体)的绝对量规定。
[0054] 如本文中使用，"基于体表面积(BSA)的剂量"指按照患者个体的体表面积(BSA)调 节的剂量(例如抗LAG-3抗体的剂量）。基于BSA的剂量可以以mg/kg体重提供。有多种无需直 接测量而获得BSA的计算方法已经公开，其中最广泛使用的是Du Bois公式(Du Bois，EF， Arch. Intern.Medicine 1916;17:863-871;及Verbraecken J等，Metabolism-Clinical and Experimental 2006;55(4) :515-24)。其它示例性BSA公式包括Mosteller公式 (Mosteller 等，N.Engl.J.Med. 1987 ;317 : 1098)、Haycock 公式（Haycock 等， J.Pediatr · I978;93:62_66)、Gehan和George公式（Gehan等，Cancer Chemother .Rep· I97O， 54:225_235)、Boyd公式（Current JD，The Internet Journal of Anesthesiology 1998,2 (2);及Boyd，Edith(1935),University of Minnesota . The Institute of Child Welfare ,Monograph Series ,No. x.London: Oxford University Press)、Fujimoto公式 (Fujimoto S等，Nippon Eiseigaku Zasshi 1968;5:443-50)、Takahira公式(Fujimoto S 等，Nippon Eiseigaku Zasshi 1968;5:443_50)、Schlich公式（Schlich E等，Ern^illl丨ngs Umschau 2010；57:178-183)〇
[0055] 术语"抗体"描述了包含至少一个抗原衍生的抗原结合位点（例如VH/VL区或Fv，或 CDR)的多肽。抗体包括已知的抗体形式。例如，抗体可以是人抗体、人源化抗体、双特异性抗 体或嵌合抗体。抗体也可以是Fab、Fab' 2、ScFv、SMIP、A.fflbody?、纳米抗体(nanobody)、或 域抗体。抗体也可以属于以下同种型之任一种：IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAl、IgA2、 IgAsec、IgD、和IgE。抗体可以是天然存在的抗体或者可以是经过改变（例如通过突变、缺 失、取代、与非抗体部分缀合）的抗体。例如，抗体可以包含一种或多种变体氨基酸(与天然 存在的抗体相比），其中这些变体氨基酸改变抗体的特性(例如功能特性）。例如，许多此类 变化是本领域中已知的，其影响例如半衰期、效应器功能、和/或患者对抗体的免疫应答。术 语抗体还包括包含至少一个抗体衍生的抗原结合位点的人工多肽构建体。
[0056]术语"LAG-3"指淋巴细胞活化基因-3。术语"LAG-3"包括变体、同等性、同源物、直 向同源物和侧向同源物(paralog)。例如，对人LAG-3蛋白特异性的抗体在一些情形下可以 与来自除人外的物种的LAG-3蛋白发生交叉反应。在其它实施方案中，对人LAG-3蛋白特异 性的抗体可以对人LAG-3蛋白完全特异，并且可以不展现出物种交叉反应性或其它类型的 交叉反应性，或者可以与来自某些其它物种的LAG-3起交叉反应，而不与其它所有物种的 LAG-3起交叉反应(例如，与猴LAG-3，但不是小鼠 LAG-3起交叉反应）。术语"人LAG-3"指人源 序列LAG-3,如具有Genbank登录号NP_002277(SEQ ID如：13)的人1^6-3的完全氨基酸序 列。术语"小鼠 LAG-3"指小鼠源序列LAG-3，如具有Genbank登录号NP_032505的小鼠 LAG-3的 完全氨基酸序列。LAG-3在本领域中又称为例如⑶223。人LAG-3序列与Genbank登录号NP_ 002277的人LAG-3可以由于非保守区中具有例如一个或多个保守突变而差异，并且LAG-3与 Genbank登录号NP_002277的人LAG-3基本上具有相同的生物学功能。例如，人LAG-3的一种 生物学功能是在LAG-3的胞外域中具有被本公开的抗体所特异性结合的表位;或者，人LAG-3的一种生物学功能是结合MHC II类分子。
[0057] 术语"猴LAG-3"意图涵盖由旧世界猴和新世界猴表达的LAG-3蛋白，包括但不限于 食蟹猴LAG-3和猕猴LAG-3。猴LAG-3A的代表性氨基酸序列是猕猴LAG-3氨基酸序列，其也以 Genbank登录号XM_001108923保存。猴LAG-3的另一种代表性氨基酸序列是如US 2011/ 0150892A1中描述的克隆pa23-5的备选猕猴序列。与Genbank保存的序列相比，此备选猕猴 序列在419位有单独一个氨基酸差异。
[0058] 特定的人LAG-3序列一般会与Genbank登录号NP_002277的人LAG-3在氨基酸序列 上至少90%相同，并且含有这样的氨基酸残基：当与其它物种(例如鼠）的LAG-3氨基酸序列 相比时，这些残基标识该氨基酸序列为人源。在某些情况中，人LAG-3可以与Genbank登录号 NP_002277的LAG-3在氨基酸序列上至少95%，或甚至至少96%、97%、98%或99%相同。在 某些实施方案中，人LAG-3序列与Genbank登录号NP_002277的LAG-3序列表现出不超过10个 氨基酸差异。在某些实施方案中，人LAG-3可以与Genbank登录号NP_002277的LAG-3序列表 现出不超过5个，或甚至不超过4、3、2或1个氨基酸差异。可以如本文中描述的那样测定百分 比同一性。
[0059] II.抗 LAG-3 抗体
[0060] 可以使用本领域中公知的方法产生适合用于本发明的抗人LAG-3抗体(或自其衍 生的VH/VL域）。或者，可以使用本领域中公认的抗LAG-3抗体。例如，可以使用US2011 / 0150892A1中记载的抗人LAG-3抗体(其教导在此通过提及并入），该序列被称为单克隆抗体 25F7(又称为"25F7"和"LAG3.1)。可以使用的其它公认的抗LAG-3抗体包括US 2011/007023 (其教导也在此通过提及并入）中描述的MP731。
[0061 ]也可以使用与任何上文提及的公认抗体竞争对LAG-3的结合的抗体。
[0062] 示例性抗LAG-3抗体是BMS-986016,或其抗原结合片段和变体;BMS-986016包含分 别包含SEQ ID NO: 1和2中显示的序列的重链和轻链，其在WO 2014/008218中有描述，在此 通过提及并入该文献的教导。
[0063] 在其它实施方案中，抗体具有BMS-986016的重链和轻链⑶R或可变区。因而，在一 个实施方案中，抗体包含具有SEQ ID N0:3中列出的序列的BMS-986016的VH区的CDRUCDR2 和CDR3域，和具有SEQ ID NO: 5中列出的序列的BMS-986016的VL区的CDRl、CDR2和CDR3域。 在另一个实施方案中，抗体包含分别包含SEQ ID NO: 7、8和9中列出的序列的⑶Rl、CDR2和 CDR3域，和分别包含SEQ ID NO: 10、11和12中列出的序列的CDRl、CDR2和CDR3域。在另一个 实施方案中，抗体包含分别包含SEQ ID NO: 3和/或SEQ ID NO: 5中列出的氨基酸序列的VH 和/或VL区。在另一个实施方案中，抗体包含分别由SEQ ID N0:4和/或SEQ ID N0:6中列出 的核酸序列编码的重链可变(VH)和/或轻链可变(VL)区。在另一个实施方案中，抗体与上文 提及的抗体竞争结合LAG-3上的相同表位和/或与上文提及的抗体结合LAG-3上的相同表 位。在另一个实施方案中，抗体结合包含氨基酸序列PGHPLAPG(SEQ ID勵:14)的人1^6-3的 表位。在另一个实施方案中，抗体结合包含氨基酸序列HPAAPSSW(SEQIDN0:15)或 PAAPSSWG(SEQ ID 从)：16)的人1^6-3的表位。
[0064]在另一个实施方案中，抗体与上文提及的抗体具有至少约90%可变区氨基酸序列 同一性（例如与SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5至少约90%、95%或99%可变区同一性）。
[0065] III.药物组合物
[0066] 适合于对人患者施用的药物组合物通常配制用于胃肠外施用，例如在液体载体 中，或者适合于复原成液体溶液或悬浮液以供静脉内施用。
[0067] -般地，此类组合物通常包含可药用载体。如本文中使用，术语"可药用"意指得到 政府管理机构批准或者在美国药典或另一种公认的药典中列出用于动物，特别是用于人。 术语"载体"指可以与化合物一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。此类可药用载体可 以是无菌液体，如水和油，包括石油、动物、植物或合成起源的那些油，如花生油、大豆油、矿 物油、芝麻油、聚乙二醇蓖麻油酸甘油酯等。可以采用水或水性溶液盐水和水性右旋糖和甘 油溶液作为载体，特别是用于注射溶液(例如包含抗LAG-3抗体）。可以配制用于胃肠外施用 的液体组合物以通过注射或连续输注施用。通过注射或输注的施用路径包括静脉内、腹膜 内、肌肉内、鞘内和皮下。在一个实施方案中，静脉内施用抗LAG-3抗体。
[0068] IV.患者群体
[0069] 本文中提供了使用抗LAG-3抗体治疗人患者中的血液学恶性肿瘤(例如复发性或 难治性慢性淋巴细胞性白血病或淋巴瘤)的临床方法。
[0070] 可以使用本发明的方法治疗的癌症的例子包括源自两种主要的血细胞谱系，即髓 样细胞系（其产生粒细胞、红细胞、凝血细胞、巨噬细胞和肥大细胞)或淋巴样细胞系（其产 生B、T、NK和浆细胞）中任一种的所有血液学恶性肿瘤。这些癌症包括白血病、淋巴瘤和骨髓 瘤的所有类型，例如急性、慢性、淋巴细胞性和/或髓性白血病，如急性淋巴细胞性白血病 (ALL )、急性髓性白血病(AML )、慢性淋巴细胞性白血病(CLL )、和慢性髓性白血病(CML )、未 分化AML(M0)、成髓细胞性白血病(Ml)、成髓细胞性白血病(M2;具有细胞成熟）、前髓细胞性 白血病(M3或M3变体[M3V])、髓单核细胞性白血病(M4或M4变体伴嗜酸粒细胞增多[M4E])、 单核细胞性白血病(M5)、红白血病(M6)、巨核母细胞性白血病(M7)、孤立性粒细胞肉瘤、和 绿色瘤;淋巴瘤，如何杰金氏淋巴瘤(HL)、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、B细胞淋巴瘤、T细胞淋 巴瘤、淋巴浆细胞样淋巴瘤、单核细胞样B细胞淋巴瘤、粘膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤、 间变性大细胞淋巴瘤、成年T细胞淋巴瘤/白血病、套细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞 淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤、肠 T细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤、 淋巴母细胞性淋巴瘤、移植后淋巴增殖性病症、真性组织细胞性淋巴瘤、原发性中枢神经系 统淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、淋巴母细胞性淋巴瘤(LBL)、伯基特(Burkitt)氏淋巴瘤、 弥漫性组织细胞性淋巴瘤(DHL)、皮肤T细胞淋巴瘤(CTLC)(又称作蕈样肉芽肿病或塞扎里 (Sezary)综合征）、和淋巴衆细胞样淋巴瘤(LPL)伴沃尔登斯特伦(Waldenstrom)巨球蛋白 血症;骨髓瘤，如IgG骨髓瘤、轻链骨髓瘤、非分泌性骨髓瘤、郁积型骨髓瘤(又称作无痛性骨 髓瘤）、孤立性浆细胞瘤、和多发性骨髓瘤。可以使用本发明的方法治疗的具体的癌症包括 例如慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、何杰金氏淋巴瘤(HL)或非何杰金氏淋巴瘤(NHL)。
[0071] 在一个实施方案中，人患者患有复发性或难治性慢性淋巴细胞性白血病或淋巴 瘤。在一个具体的实施方案中，人患者患有慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、何杰金氏淋巴瘤 (HL)或非何杰金氏淋巴瘤(NHL)。
[0072] 可以在治疗之前、期间或之后针对一种或多种上文描述的临床属性测试或选择患 者。
[0073] V.治疗方案
[0074]适合于治疗人患者中的血液学恶性肿瘤的治疗方案包括例如对患者施用有效量 的：
[0075] 抗LAG-3抗体包含具有SEQ ID N0:3中列出的序列的重链可变区的CDR1、CDR2和 ⑶R3域，和具有SEQ ID NO:5中列出的序列的轻链可变区的⑶RU⑶R2和⑶R3域，
[0076] 其中所述方法包括至少一个施用周期，其中所述周期是8周时间，其中对于所述至 少一个周期中的每一个，以约1、3、10、20、50、80、100、130、150、180、200、240、280、300、350、 400、450、500、550、600、650、700、750、或80011^的统一剂量施用至少4剂抗1^6-3抗体。在另 一个实施方案中，以0.01、0.03、0.25、0.1、0.3、1或3、5、8或1011^/1^体重的剂量使用4剂抗 LAG-3抗体。
[0077] 在一个实施方案中，以下述剂量施用抗LAG-3抗体：
[0078] (a)20mg 抗 LAG-3 抗体；
[0079] (b)80mg 抗 LAG-3 抗体；
[0080] (c)240mg 抗 LAG-3 抗体;或
[0081] (d)800mg 抗 LAG-3 抗体。
[0082] 在另一个实施方案中，以下述剂量施用抗LAG-3抗体：
[0083] (a)0.3mg/kg 抗 LAG-3 抗体；
[0084] (b)0.25mg/kg 抗 LAG-3 抗体；
[0085] (c)lmg/kg 抗 LAG-3 抗体;或
[0086] (d)3mg/kg 抗 LAG-3 抗体。
[0087]在一个实施方案中，抗LAG-3抗体的剂量按体重，例如mg/kg体重计算。在另一个实 施方案中，抗LAG-3抗体的剂量是统一固定剂量。在另一个实施方案中，抗LAG-3抗体的剂量 随时间而改变。例如，抗LAG-3抗体最初可以以高剂量施用，并且可以随时间而降低。在另一 个实施方案中，抗LAG-3抗体最初以低剂量施用，并且随时间而升高。
[0088] 在另一个实施方案中，每一剂施用的抗LAG-3抗体的量是恒定的。在另一个实施方 案中，施用的抗体量随每剂而变化。例如，抗体的维持(或后续)剂量可以高于第一次施用的 负荷剂量或者与第一次施用的负荷剂量相同。在另一个实施方案中，抗体的维持剂量可以 低于负荷剂量或者与负荷剂量相同。
[0089] 在另一个实施方案中，抗LAG-3抗体配制用于静脉内施用。在一个实施方案中，在 每个周期的第1天、第15天、第29天和第43天施用抗LAG-3抗体。
[0090] 在其它实施方案中，每周一次、每两周一次或两周三次、每月一次施用抗LAG-3抗 体，或者只要观察到临床益处就施用LAG-3抗体，或者施用LAG-3抗体直到有完全响应、确认 的进行性疾病、或不能管理的毒性为止。
[0091] 在另一个实施方案中，施用的周期是8周，在必要时，其可以重复。在另一个实施方 案中，治疗由最多达12个周期组成。
[0092] 在另一个实施方案中，每一个8周的周期施用4剂抗LAG-3抗体。
[0093] 在另一个实施方案中，抗LAG-3抗体作为第一线治疗（例如，初始或第一治疗）施 用。在另一个实施方案中，抗LAG-3抗体作为第二线治疗施用（例如在初始治疗或第一治疗 后，包括在复发后和/或在第一治疗失败的情况下）。
[0094] VI.结果
[0095] 对疗法的响应可以包括下述标准：
[0096] 2007恶性淋巴瘤的国际工作组（IWG)响应标准（Cheson，BD等J Clin 0η(：ο1·2007; 25:579)
[0099]关键词:CR =完全缓解，CT =计算机断层摄影术;FDG = [ 18F]氟脱氧葡萄糖；IWG = 国际工作组;NA =不适用;PD =进行性疾病;PET =正电子发射断层摄影术;PR =部分缓解； SD =病情稳定；SF1D =直径乘积的和（sum of the product of the diameter)。
[0100] 2008修改版的CLL的国际工作组（IWG)响应标准(Hallek M等，Blood.2008;lll (12):5446-5456)
[0104] 优选地，根据本文中公开的方法治疗的患者经历恶性肿瘤的至少一种体征的改 善。在一个实施方案中，改善由恶性细胞数目的减少来度量。在另一个实施方案中，可以使 用完全血液计数和/或血膜评估对疗法的响应性。在另一个实施方案中，可以使用来自淋巴 结的活检和/或骨髓活检评估对疗法的响应性。
[0105] 在一个实施方案中，被治疗的患者展现出完全响应(CR)、部分响应(PR)、病情稳定 (SD)、免疫相关完全疾病（irCR)、免疫相关部分响应(irPR)或免疫相关病情稳定(irSD)。在 另一个实施方案中，治疗的患者经历恶性细胞的生长速率的降低，即恶性细胞生长的抑制。 在另一个实施方案中，可以阻止或延迟恶性细胞的复发;可以在一定程度上缓解一种或多 种与癌症有关的症状D
[0106]在其它实施方案中，根据本文中提供的任何方法施用有效量的抗LAG-3抗体产生 至少一种治疗效果，其选自：随时间推移出现的恶性细胞数目的减少、完全缓解、部分缓解、 或病情稳定。在其它实施方案中，治疗方法产生的可比较临床效益率(comparable benefit rate) (CBR = CR+PR+SD彡6个月）好于与另一种治疗方案的抗LAG-3抗体实现的可比较临床 效益率。在其它实施方案中，与另一种治疗方案相比，临床效益率的改善是约20%20%、 30%、40%、50%、60%、70%、80% 或更多。
[0107] VII.试剂盒和单位剂量形式
[0108] 本文中还提供了试剂盒，其包含以适合于用于前述方法的治疗有效量的药物组合 物，所述药物组合物含有抗LAG-3抗体如BMS-986016，和可药用载体。任选地，试剂盒还可以 包含使用说明，例如包括施用日程表，以允许从业人员（例如内科医生、护士或患者)施用其 中含有的组合物以对具有癌症（例如实体瘤）的患者施用组合物。试剂盒还可以包含注射 器。
[0109] 任选地，试剂盒包含多包单剂药物组合物，每包含有有效量的抗LAG-3,用于根据 上文提供的方法进行单次施用。试剂盒中也可以包含施用药物组合物必需的仪器或装置。 例如，试剂盒可以提供一个或多个含有一定量的抗LAG-3抗体的预充式注射器。
[0110] 在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗人患者中的血液学恶性肿瘤的试剂 盒，所述试剂盒包含：
[0111] (a)-定剂量的抗LAG-3抗体，其包含具有SEQ ID N0:3中列出的序列的重链可变 区的CDRl、CDR2和CDR3域，和具有SEQ ID NO: 5中列出的序列的轻链可变区的CDRl、CDR2和 CDR3域;和
[0112] (b)关于在本文中描述的任何方法和临床剂量方案中使用抗LAG-3抗体的使用说 明。
[0113] 以下实施例仅仅是例示性的，并且不应解释为以任何方式限制本公开的范围，因 为本领域技术人员在阅读本公开后容易想到许多变型和等同方案。
[0114] 在本申请全文中引用的所有参考文献、GenBank条目、专利和公布的专利申请的内 容通过提及明确并入本文。 实施例
[0115] 实施例1:抗LAG-3抗体(BMS-986016)的临床前药理学
[0116] 抗 LAG-3 抗体，BMS-986016
[0117] BMS-986016是一种对人LAG-3特异性的全人源抗体，是从经免疫接种的表达人免 疫球蛋白基因的转基因小鼠中分离的。它作为I gG4同种型抗体表达，包含一个稳定化铰链 突变(S228P)，用于减弱Fc受体结合，以降低或排除抗体或补体介导的靶细胞杀伤的可能 性。SEQ ID N0:1和2中分别列出了BMS-986016的重链和轻链氨基酸序列。
[0118] 使用Biacore和酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定了BMS-986016结合重组人LAG-3 抗原的能力。使用流式细胞分析和Scatchard分析测量对人和灵长类LAG-3+转染体和对活 化的人或灵长类T细胞的结合。BMS-986016以高亲和力(K D = 0.12-0.5nM)结合人LAG-3,并 且抑制LAG-3对表达其配体MHC II类的细胞的结合（IC50,0.671^)31^-986016结合经转染 的CHO细胞上和活化的猕猴T细胞上的猕猴LAG-3的亲和力(EC50，21.5-34.3nM)低于其结合 活化的人T细胞的亲和力。在缺乏二次共刺激的条件下，高浓度的BMS-986016不引发培养的 人外周血细胞的可测量的细胞因子应答，该药物也不介导可测量的抗体依赖性或补体依赖 性靶细胞杀伤。BMS-986016促进与MHC II类阳性抗原呈递细胞共培养的表达人LAG-3的抗 原特异性小鼠 T细胞杂交瘤的活化。另外，当在超抗原刺激测定法中单独或与纳武单抗(抗 I3D-I抗体)组合添加 BMS-986016时，BMS-986016增强人T细胞的活化。
[0119] 实施例2:抗LAG-3抗体(BMS-986016)的毒性
[0120]进行以下临床前毒理学研究：
[0121] A.BMS-986016和纳武单抗在猕猴中的符合GLP的4周静脉内组合毒性研究，恢复期 6周
[0122] 用BMS-986016的单一药剂治疗的相关结果如下：
[0123] 1.以最高达100mg/kg/周施用的单一药剂BMS-986016未产生不利的变化。
[0124] 2.认为单一药剂BMS-986016 的 NOAEL 是 100mg/kg/周（均值 AUC[0-168h] =474,000 yg · h/mL)。施用的剂量(100mg/kg BMS-986016)是当前研究建议的最大剂量的彡10倍。
[0125] B. BMS-986016在人与选定的猕猴组织中的符合GLP的组织交叉反应性研究
[0126] 交叉反应性的相关结果如下：
[0127] 1.在下述人组织的质膜或质膜颗粒中观察到用BMS-986016-FITC的阳性染色:膀 胱的单个核白细胞、血细胞、结肠-大肠、眼、食道、小肠、胃、肾、肺、淋巴结、胎盘、唾液腺、皮 肤、脾、胸腺、扁桃体、子宫-宫颈、和子宫-子宫内膜;和骨髓的造血细胞。另外，在人垂体内 分泌细胞上皮的细胞膜中观察到用BMS-986016-FITC的染色。在评估的有限的一组猕猴组 织内，在脾的单个核白细胞的质膜或质膜颗粒中观察到BMS-986016-FITC的染色。
[0128] 2.鉴于有关正常人淋巴样组织(淋巴结、扁桃体、脾、胸腺、骨髓和粘膜相关的淋巴 样组织）的生发中心和滤泡间T细胞区中并且具有淋巴细胞的形态学和分布的LAG-3表达细 胞的科研报告(Huard等，Immunogenetics 1994; 39(3): 213-217)，此研究中（人和猕猴组织 中）单个核白细胞和造血细胞的BMS-986016-FITC染色是预期到的。
[0129] 3.由于LAG-3mRNA在人垂体中表达，而且在一项尝试性组织交叉反应性研究中在 人垂体的腺垂体中观察到LAG3.1-G4P-FITC染色，还预期人垂体内分泌细胞上皮细胞质和 细胞质颗粒有BMS-986016-FITC染色。虽然BMS-986016在体内预期不会接触到细胞质区室， 而且猴中的重复剂量毒理学研究显示对脑垂体没有影响，但这些发现可能有临床意义并且 将被监测。C.使用人外周血单个核细胞的BMS-986016的体外细胞因子释放和淋巴细胞活化 评估
[0130] 体外细胞因子释放和淋巴细胞活化评估的相关结果如下：
[0131] 1.不管浓度、供体、或温育时间如何，BMS-986016在被呈递给人外周血单个核细胞 (PBMC)时未诱导细胞因子释放。观察到的细胞因子水平处于或接近测定的定量下限，各供 体中没有剂量依赖性或模式的证据（几-10、几-2、11^-5、几-1〇、几-12?7〇和1?1丫）或者大 体上与来自与阴性对照温育的PBMC的细胞因子(IL-6、IL-8、TNF-a)的水平重合。
[0132] 2.与缺乏细胞因子释放一致的是，没有BMS-986016诱导T或NK细胞活化（以⑶25和 ⑶69的表面表达来度量）的证据。用BMS-986016刺激后T细胞和NK细胞上的这些标志物的表 达水平与用阴性对照刺激后观察到的相似。
[0133]总体上，这些数据指示BMS-986016不拥有诱导T或NK细胞活化或细胞因子释放的 激动剂潜力。
[0134] 实施例3:抗LAG-3抗体(BMS-986016)的临床前代谢和药动学
[0135] 依照关于生物技术来源的药品的监管准则（ICH Harmonised Tripartite Guideline，S6(R1)Preclinical Safety Evaluation of Biotechnology-Derived Pharmaceuticals. International Conference on Harmonisation，2011)，尚未在动物中 进行BMS-986016的代谢研究。预期单克隆抗体(单抗)在体内会经由不依赖于细胞色素 P450 酶的生物化学途径降解成小肽和氨基酸。
[0136] BMS-986016在猕猴中表明有利的药动学(PK)特性。从单剂和重复剂量IV PK研究 均可见，BMS-986016以双指数方式衰变，并且暴露大致是与剂量成比例的。系统清除(CLTp) 从0.12至0.22mL/h/kg不等，并且终末半衰期(T-HALF)为133至414小时不等。稳态时的分布 体积(Vss)是62至72mL/kg，提示血浆外的分布有限。在一些猴中检测到抗BMS-986016抗体， 但是抗BMS-986016抗体的存在似乎对BMS-986016暴露没有影响。
[0137] 实施例4:复发性或难治性CLL和淋巴瘤患者中的1期临床试验
[0138] 在具有复发性或难治性CLL和淋巴瘤的患者中进行了抗LAG-3抗体(BMS-986016) 的1期临床试验以证明施用BMS-986016作为一项治疗的效力。
[0139] 这是BMS-986016的一项1期、开放标签研究，其中BMS-986016作为单一药剂对具有 复发性或难治性CLL和淋巴瘤的受试者施用。研究将分2个部分进行。A部分是在具有复发性 或难治性CLL、HL和NHL的受试者中的3+3+3剂量渐增设计。B部分是各有约12名受试者的4个 疾病约束群体中的分组扩充（图1)。当已经确定A部分的MTD(若未建立MTD，则为MAD)时将启 动B部分中的治疗。
[0140]受试者将完成研究的多达3个时期：筛选(最长28天）、治疗(最多达12个研究治疗8 周周期）、和临床随访(最后一剂研究药物后的135天;若效力信号明显，则可以在选定的病 例中考虑更长的随访期）。对于家庭妊娠测试，育龄妇女会具有额外的随访评估到第165天。
[0141] 治疗期由多达12个8周治疗周期组成。每个治疗周期包含在第1天、第15天、第29天 和第43天施用的4剂BMS-986016。允许受试者继续研究疗法，直至以下任一项的第一次出 现：（1)满足中断标准，（2)完成最大数目即12个8周周期，（3)经确认的进行性疾病(PD)，或 (4)临床恶化。中断治疗的受试者将进入135天临床随访期（图2)。
[0142] 在整个给药间隔期(dosing interval)，在选定的时间实施身体检查、生命体征测 量、12导联心电图(ECG)、脉搏血氧测定法和临床实验室评估。在整个研究过程中，紧密监测 受试者的AE。在开始施用研究药物后收集血液以进行药动学(PK)分析。
[0143] 让受试者继续治疗直至12个8周周期，或者直到经确认的H)，或者直到满足如本文 中描述的中断标准未知。受试者参与研究总共可以长达约2.3年，包括28天筛选期、最多达 12个8周治疗周期、和135天临床随访期。研究的总持续时间预期从第一名受试者的第一次 访视的时间起到登记的最后一名受试者的必需的随访止为约4.3年。
[0144] A部分:剂量渐增
[0145] 在A部分中，将使用3+3+3设计评估BMS-986016的安全性。图1和表1 (下文列出）中 提供了剂量渐增期间评估的剂量水平。最初在每个剂量分组中治疗三名受试者;在剂量分 组1中，前3名受试者将指定为前哨受试者，并且会相隔至少5天开始治疗。后续分组中的受 试者不要求遵守治疗开始日期之间的5天时间间隔。
[0146] 剂量渐增将基于DLT评估间隔期期间经历的DLT的数目，如由医学监护者和研究人 员确定的。DLT评估间隔期在治疗的第一天开始，并且继续8周，即到第一个周期的第56日。
[0147] A部分中的剂量渐增将如下进行：
[0148] -若剂量分组中的前3名可评估受试者无一在DLT评估间隔期内经历DLT，则接下来 的3名受试者将在高一级的剂量分组治疗。
[0149] -若分组中的前3名可评估受试者中的1名在DLT评估间隔期内经历DLT，则将在该 剂量分组中治疗3名额外的受试者。
[0150]-若前6名可评估受试者中不超过1名在DLT评估间隔期内经历DLT，则将接下来的3 名受试者纳入高一级剂量的分组。
[0151 ]-若分组中的前6名可评估受试者的2名经历DLT，则将该分组扩充成9名可评估受 试者。
[0152]-若分组中的前3名受试者的多2名，前6名可评估受试者的多3名，或前9名可评估 受试者的多3名在DLT评估间隔期内经历DLT，则该剂量水平已经超过MTD，并且将终止剂量 渐增。
[0?53]表1 :A部分的剂量渐增日程表
[0155] B部分:分组渐增
[0156] 分组扩充的目的是收集更多关于BMS-986016的安全性、可耐受性、初步效力、PK和 药效学数据的信息。为B部分选择的剂量将不超过A部分中的MTD(或未测定MTD，则为MAD)， 可以是A部分中评估的剂量中间的剂量，并且可以纳入对其它数据的评估，包括延迟毒性以 及来自A部分的PK和药效学数据。也可以使用建模来为B部分中评估的剂量的选择提供信 息。
[0157] 4个扩充分组将限于图1和表2(下文列出）中列出的肿瘤类型。扩充分组的整个招 选过程连续评估毒性事件。若在任何时间，在B部分分组扩充中治疗的所有患者中满足DLT 标准的治疗相关毒性的总比率超过33%，则将该情况与医学监护者和研究人员讨论;可以 中断进一步的招选。根据毒性的性质和等级并且在评估风险:收益比后，可以降低所有分组 或选定分组的剂量。
[0158]表2:适合于B部分的肿瘤类型一分组扩充
[0160] aB部分中的所有受试者未接触过免疫细胞调控抗体方案（ICMAR)，诸如但不限于 抗CTLA-4、抗ro-1、抗ro-L 1、抗ro-L2、抗K IR、抗CD 137、和/或抗0X40抗体，除了抗CD20、阿仑 珠单抗(a I emtuzumab)或本妥昔单抗(br entux imab)抗体疗法外。
[0161] 剂量限制性毒性
[0162] 为了指导关于A部分中的剂量渐增的决策，基于认为与研究治疗相关的不良事件 (AE)的发生率、强度和持续时间来确定剂量限制性毒性(DLT) ALT评估间隔期在治疗的第 一天开始，并且持续到第一个周期的第56天（即8周）。根据国家癌症研究所(NCI)不良事件 常见术语标准（Common Terminology Criteria for Adverse Events)(CTCAE)v4.0对不良 事件评级。为受试者管理的目的，任何满足DLT标准的AE(无论发生的周期）将导致剂量中 断。
[0163] 剂量渐增将基于DLT评估间隔期期间经历的DLT的数目，由医学监控者和研究人员 来确定。不允许受试者内剂量渐增。在8周评估间隔期内接受至少1剂研究药物的受试者视 为DLT测定可评估。对于在DLT评估间隔期内由于DLT以外的原因退出研究和/或在整个DLT 评估间隔期内其安全性数据不可用的受试者，可以在相同剂量水平上替换。如果不能在DLT 评估间隔期内安排的访视时施用输注，那么必须尽快施用。若延迟在1和7天之间，则应当实 施最初安排的访视时的程序，并且认为受试者是DLT测定可评估的。若延迟超过7天，则剂量 视为遗漏并且不会被替换。延迟超过7天的受试者视为DLT测定不可评估。不可评估的受试 者可以在相同剂量水平上替换。
[0164] 研究的持续时间
[0165] 将允许受试者继续治疗直至最多12个8周周期、到经确认的为止、或者到满足中 断的标准为止。受试者参与研究总共可长达约2.3年，包括28天筛选期、最长达12个8周治疗 周期、135天临床随访期，以及对于育龄妇女而言，额外的家庭妊娠测试到第165天。预期研 究的总持续时间是从第一名受试者的第一次访视的时间起，到入选的最后一名受试者的必 需的随访止约4.3年。
[0166] 受试者的数目
[0167] 可以对约84名受试者给药（剂量渐增中约36名受试者，分组扩充中最多达48名受 试者）。
[0168] 研究群体
[0169] 组织学或细胞学确认为患有CLU何杰金氏淋巴瘤或非何杰金氏淋巴瘤(包括T细 胞和B细胞淋巴瘤），且在先治疗后已经复发或者在先治疗难治，并且满足所有进入标准的 男性和女性受试者是适格参加的。
[0170] 剂量渐增(A部分)
[0171] 具有复发性或难治性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、何杰金氏淋巴瘤(HL)或慢性淋巴 细胞性白血病(CLL)的成年受试者是适格的。
[0172] 分组扩充(B部分)
[0173] 将按照表2(上文)在分组扩充期间允许4个剂量限制性组。
[0174] A部分和B部分
[0175] 嗜中性粒细胞计数必须>750/yL，并且血小板计数>50,000AiL。排除具有原发性皮 肤淋巴瘤、与原发性免疫缺陷有关的淋巴增殖性疾病、和与人免疫缺陷病毒(HIV)感染有关 的淋巴瘤的受试者。还排除具有自身免疫性病症的受试者。
[0176] 女性必须不在哺乳或妊娠中。育龄妇女在接受其第一剂研究药物前24小时内必须 有阴性妊娠测试结果。育龄妇女必须同意在其接受最后一剂研究药物后总共24周（30天加 上研究药物经过5个半衰期需要的时间（即总共165天或24周））之内遵循关于避孕方法的指 不。
[0177] 与育龄妇女有性活动的男性必须同意在其接受最后一剂研究药物后总共33周(90 天加上研究药物经历5个半衰期需要的时间（即总共225天或33周））之内基于附录3中的信 息遵循关于避孕方法的指示。
[0178] 肝DLT、非血液学DLT、和血液学DLT分别如下文概述的那样定义。
[0179] 1 ·肝DLT
[0180]认为任何以下药物相关事件是肝DLT:
[0181] ?丙氨酸转氨酶(ALT)或天冬氨酸转氨酶(AST)>8XULN，无论持续时间如何
[0182] · ALT或AST>5X且彡8XULN，医学干预后亦不能在2周内回到彡1级
[0183] ?总胆红素 >5 X ULN
[0184] · ALT或AST>3 X ULN且同时总胆红素 >2 X ULN
[0185] 2.非血液学DLT
[0186] 认为任何以下药物相关事件是非血液学DLT:
[0187] ?需要系统性治疗的2级眼痛或视敏度下降
[0188] ?不响应表面疗法，并且在启动表面疗法后2周内不改善成1级的2级眼痛或视敏 度下降
[0189] ?彡3级非肝或非血液学毒性，除下文所述的之外。
[0190] 下列3级非血液学事件不认为是DLT:
[0191] ?持续〈72小时、不是临床上复杂的、并且自发消退或者响应常规的医学干预的3 级电解质异常
[0192] ?与胰腺炎的症状、临床表现、或放射摄影证据无关的淀粉酶或脂肪酶的3级增加
[0193] ?持续〈48小时，并且自发消退或在常规医学干预下消退到级的3级恶心或呕 吐
[0194] ?在72小时内消退并且与血液动力学欠损(包括低血压、或终末器官灌注障碍的 临床或实验室证据)无关的3级发热
[0195] · 3级燃瘤反应(定义为局在于已知或疑似肿瘤部位的疼痛、刺激、或皮疹）
[0196] ?历时小于7天的3级疲劳
[0197] 3.血液学DLT的定义
[0198] 任何以下药物相关事件将被视为血液学DLT:
[0199] ·4级贫血
[0200] ?任何持续时间的4级发热性嗜中性白血球减少症(febrile neutropenia)
[0201] ?在开始粒细胞集落刺激因子(G-CSF)治疗后5天内不消退到3级以下的4级嗜中 性白血球减少症
[0202] ?血小板输血或血小板计数〈10,000/μL
[0203] ?与临床上显著的出血有关的3级血小板减少
[0204] · 3级溶血
[0205] ?在基线时具有<1级贫血的受试者中的3级贫血
[0206] 认为在8周评估间隔期内接受至少1剂研究药物的受试者是DLT测定可评估的。如 果研究药物不能在DLT评估间隔期内安排的访视时施用，则必须尽快施用。若延迟在1和7天 之间，则应当实施最初安排的访视时的程序，并且受试者视为DLT测定可评估。若延迟超过7 天，则视为剂量遗漏，并且不会被替换。延迟超过7天的受试者将不视为DLT测定可评估。不 可评估的受试者可以在相同剂量水平上替换。若在DLT评估期内遗漏一个剂量的受试者在 其它方面不满足永久中断的标准，则该受试者可以继续治疗。
[0207] 纳入标准
[0208] 1.签名的书面知情同意
[0209] 在实施不被视为标准护理的一部分的任何研究相关程序前，受试者必须在IRB/ IEC认可的书面知情同意表签名并且写下日期。
[0210] 关于活检样品的同意：
[0211] (i)受试者必须同意允许实施治疗前肿瘤活检（例如淋巴结）（所有受试者）。若治 疗前肿瘤活检临床上不可行，则受试者必须同意允许获取存档的肿瘤样品（例如原发性肿 瘤、淋巴结等）。不能提供新鲜的治疗前肿瘤活检或存档的肿瘤样品的受试者不能入选。治 疗前活检产生的组织数量或质量不足的受试者不会仅因此理由而不能入选。
[0212] (ii)受试者必须同意允许在治疗前(对于所有受试者），并且在治疗期间根据临床 指征在在完全响应(CR)、部分响应(PR)、或进行性疾病(PD)时，实施单侧骨髓活检和/或抽 吸。从完成其最后一次治疗起具有骨髓活检和/或抽吸物的受试者不能用那些结果代替要 求的基线骨髓活检。
[0213] 2.目标群体
[0214] (a)受试者的慢性淋巴细胞性白血病、何杰金氏淋巴瘤或非何杰金氏淋巴瘤必须 有组织学或细胞学确认，并且在先治疗后已经复发，或者是在先治疗难治的。
[0215] (b)A部分剂量渐增：
[0216] (i)慢性淋巴细胞性淋巴瘤 [0217] (ii)何杰金氏淋巴瘤
[0218] (iii)非何杰金氏淋巴瘤
[0219] (C)B部分分组扩充 [0220] (i)慢性淋巴细胞性白血病
[0221] (ii)弥散性大B细胞淋巴瘤
[0222] (iii)套细胞淋巴瘤
[0223] (iv)何杰金氏淋巴瘤 [0224] (V)多发性骨髓瘤
[0225] (d)受试者必须具有至少一个>1.5cm的可测量病灶，如通过淋巴瘤（Cheson等， J.Clin.0ncol.2007;25(5):579-586)和CLL(Hallek等，Blood 2008;111(12)5446-5456)响 应标准定义的。认为可测量的肿瘤部位必须尚未接受在先放射疗法。
[0226] (e)仅允许纳入没有在先对免疫细胞调节抗体方案（ICMAR)，如抗CTLAUAro-U 抗H)-L 1、抗TO-L2、抗KIR、抗CD 137、或抗0X40抗体的暴露的受试者。允许在先抗CD20、阿仑 珠单抗或本妥昔单抗抗体治疗。
[0227] (f)受试者必须已经进展或者是至少一种在先标准疗法难治的，所述在先标准疗 法包括放射、免疫疗法、细胞毒性化学疗法、和选定的抗体(抗CD20、阿仑珠单抗或本妥昔单 抗)疗法。下述不视为不同线的治疗:对进行中的方案添加化合物、在休药期后重新开始相 同的方案、或者从IV转换成口服疗法。
[0228] (g)受试者不适格于移植或任何已知有延长生命或挽救生命作用的标准疗法。（适 格于移植或任何已知有延长生命或挽救生命作用的标准疗法、并且已经拒绝移植或任何已 知有延长生命或救生作用的标准疗法的受试者则适格于研究。
[0229] (h)受试者必须是自体移植物后超过100天
[0230] (i)东部协作肿瘤学组（Eastern Cooperative Oncology Group ,EC0G)状态为0或 I
[0231] (j)按照研究人员评估在知情同意时预期寿命彡I 0周
[0232] (k)充分的器官功能，如按照以下定义的：
[0233 ] (i)嗜中性粒细胞彡500/yL(在第一次研究药物施用的1周内不给
[0234]予任何生长因子的条件下是稳定的）
[0235] (ii)血小板彡50X103/yL(在第一次研究药物施用的2周内不允许为达到此水平 而输血）
[0236] (iii)血红蛋白彡8.5g/dL(在第一次研究药物施用的2周内不允许为达到此水平 而输血）
[0237] (iv)肌氨酸酐〈1 · 5 XULN或肌氨酸酐清除彡 40mL/min( Cockcroft-Gault 公式）
[0238] (V)ALT 和 AST彡 3 X ULN
[0239] (vi)总胆红素彡1.5 XULN(除了患有吉尔伯特(Gilbert)氏综合征的受试者外，后 者必须具有正常的直接胆红素）
[0240] (vii)按照研究人员评估的正常的甲状腺功能，或在激素补充上稳定 [0241 ] (1)能够顺应治疗、PK、和药效学样品收集和需要的研究随访。
[0242] (m)受试者重新入选:此研究允许重新入选由于治疗前失败而已经中断研究的受 试者(即受试者尚未被随机化或治疗）。若重新入选，则受试者必须重新签署同意书。
[0243] 3.年龄和生殖状态
[0244] (a)男性和女性，在知情同意时年龄彡18岁
[0245] (b)育龄妇女(WOCBP)在开始研究药物前24小时内必须具有阴性血清或尿液妊娠 测试(尿液妊娠测试:最小灵敏度25IU/L或人绒毛膜促性腺激素[hCG]的等同单位）。
[0246] (C)女性必须不在哺乳。
[0247] (d)育龄妇女必须同意在用BMS-986016治疗的持续期间、以及在完成治疗后总共 165天（24周），即BMS-986016的5个半衰期（135天）加上30天(排卵周期的持续时间）的时间 内，遵循关于避孕方法的指示。
[0248] (e)与育龄妇女有性活动的男性必须同意在BMS-986016治疗的持续时间，以及在 完成治疗后总共225天(33周），即BMS-986016的5个半衰期（135天)加上90天(精液周转的持 续时间）的时间内，遵循关于避孕方法的指示。
[0249] 研究人员应当告知育龄妇女和与育龄妇女有性活动的男性受试者关于预防妊娠 的重要性和意外妊娠的后果。研究人员应当告知育龄妇女和与育龄妇女有性活动的男性受 试者使用高效的避孕方法。高效的避孕方法在持续正确使用时每年的失败率〈1 %。
[0250] 至少，受试者应当同意使用2种避孕方法，一种方法是高效的，另一种是高效的或 不太有效的。
[0251] (f)无精子男性和连续没有异性性活动的育龄妇女免除避孕要求。然而，持续不进 行异性性活动的育龄妇女仍必须进行如本方案中描述的妊娠测试。
[0252] 排除标准
[0253] 1.目标疾病例外
[0254] (a)排除具有原发性皮肤淋巴瘤、与原发性免疫缺陷有关的淋巴增殖性疾病、和与 人免疫缺陷病毒(HIV)感染有关的淋巴瘤的受试者。
[0255] (b)排除具有已知或疑似的中枢神经系统(CNS)转移、或以CNS为活动性疾病的唯 一部位的受试者：
[0256] (i)允许选入具有受控的脑转移的受试者。受控的脑转移定义为在同意时在放射 或手术治疗至少4周后放射摄影无进展者。受试者在知情同意前必须已经停药类固醇至少2 周，并且没有新的或进行性的神经学体征和症状。
[0257] (ii)具有脑转移的体征或症状的受试者不适格，除非通过计算机断层摄影术(CT) 或磁共振成像(MRI)排除脑转移。
[0258] 2.医疗史和并发症
[0259] (a)排除具有在先恶性肿瘤的受试者，除了充分治疗的基细胞或鳞状细胞皮肤癌、 宫颈或膀胱原位癌、或乳腺原位导管或小叶癌之外。具有超过2年前(在知情同意时)诊断的 其它在先恶性肿瘤、已经接受了治愈性目的的治疗且在间隔期内没有疾病证据、并且研究 人员认为复发风险低的受试者是适格的。
[0260] (b)具有任何活动性自身免疫性疾病或已知或疑似自身免疫性疾病史的受试者， 例外是具有孤立性白癜风、消退的儿童哮喘/特应性、受控的肾上腺低能症 (hypoadrenal ism)或垂体功能减退的受试者、和具有格雷夫斯氏病史的甲状腺机能正常的 患者(具有受控的甲状腺机能亢进的受试者在研究药物施用前必须呈甲状腺球蛋白和甲状 腺过氧化物酶抗体和甲状腺刺激性免疫球蛋白阴性）。
[0261] (c)受试者具有需要治疗性剂量的系统性类固醇的自身免疫性溶血性贫血(AIHA) 或自身免疫性血小板减少（ITP)。
[0262] (d)受试者已经经历任何同种异体移植。
[0263] (e)已知的或潜在的医学状况，根据研究人员或发起人的意见，可能导致研究药物 的施用对受试者变得危险，或者可能不利地影响受试者遵守或耐受研究规程和/或研究疗 法的能力，或者导致不能清楚解释在接受治疗的受试者中BMS-986016的耐受性。
[0264] (f)需要每日补充供氧
[0265] (g)不受控制或显著的心血管疾病，包括但不限于下列任一项：
[0266] (i)同意前6个月内的心肌梗死或中风/短暂性脑缺血发作(TIA)。
[0267] (ii)在同意前3个月内的不受控制的心绞痛
[0268] ( i i i )临床上显著的心率不齐(如室性心动过速、心室纤颤或扭转性室速）的任何 历史
[0269] iv)QTc 延长 >480 毫秒
[0270] (V)其它临床上显著的心脏病（即心肌病、具有纽约心脏协会(NYHA)功能分类III-IV的充血性心力衰竭、心包炎、显著的心包积液）（h)HIV或已知的获得性免疫缺陷综合征 (AIDS)的血液筛查阳性(i)任何慢性胰腺炎的历史，如由以下证明的：
[0271] (i)针对甲肝抗体(!tepA IgM)的测试阳性。注意：甲肝病毒感染消退的历史不是排 除标准。
[0272] (ii)针对乙肝表面抗原(HBsAg)和/或乙肝核心抗原的测试阳性
[0273] (iii)针对定性丙肝病毒载量的测试阳性(通过PCR)
[0274] (j)在启动研究药物疗法前< 7天需要系统性抗细菌、抗病毒或抗真菌疗法的活动 性感染的证据
[0275] (k)任何其它重大急性或慢性医学疾患
[0276] (1)不能经历静脉穿刺术和/或耐受静脉通道的受试者
[0277] (m)任何其它合理医学、精神病学、和/或社会原因，如由研究人员确定。
[0278] (η)下列规程或药物之任一：
[0279] (i)在知情同意时前2周内：
[0280] (1)免疫抑制剂量的系统性或表面皮质类固醇（彡7.5mg/天泼尼松(prednisone) 或等同物）
[0281] (2)草药制备物
[0282] (ii)在研究药物施用前4周内：
[0283] (1)任何研究药物或安慰剂
[0284] (2)任何抗癌疗法（化学疗法、用于抗肿瘤目的的单克隆抗体[例如抗CD20、抗 CD30、或阿仑珠单抗抗体疗法]、治疗疫苗、放射疗法、或激素治疗）
[0285] (3)含有活病毒的非肿瘤学疫苗
[0286] (4)变应原脱敏疗法
[0287] (5)重大手术
[0288] (iii)在研究药物施用前6周内：
[0289] (1)亚硝基脲，氟达拉滨（f ludarab ine)
[0290] (iv)研究药物施用前10周内：（1)放射或毒素免疫缀合物(例如本妥昔单抗）
[0291] 3.变态反应和不良药物反应
[0292] (a)对BMS-986016组分的变态反应的历史(例如，对用聚山梨酯80配制的药物的重 度超敏感性反应的历史）
[0293] 4.其它排除标准
[0294] (a)囚犯或非自愿被禁闭的受试者
[0295] (b)被强制拘束以治疗精神病或身体疾病(例如传染病)的受试者
[0296] (c)无法遵守约束和禁止的活动/治疗
[0297] 安全性评估
[0298] 在研究期间及最后一次治疗后135天内连续评估不良事件。根据NCI CTCAE第4.0 版评估不良事件。不良事件使用管理活动医学字典(Medical Dictionary for Regulatory Activities) (MedDRA)的最新版本编集，并且审阅其潜在的意义和重要性。
[0299] 效力评估
[0300]将进行效力评估，并且基于肿瘤类型使用合适效力评估法在eCRF上报告。具有NHL 或HL的受试者使用恶性淋巴瘤响应标准修改版（Cheson等，J. Clin. Oncol. 2007; 25(5): 579-586)评估。具有CLL的受试者使用慢性淋巴细胞性白血病诊断和治疗准则(Hallek等， Blood 2008; 111(12) :5446-56)评估。
[0301] 次要效力评估
[0302] 在每个治疗周期的第50天和第56天之间（直至12个8周治疗周期为止)和在30天随 访访视时进行病情评估。研究人员会为具有充分数据(如通过以下效力标准定义）的受试者 评估肿瘤响应：
[0303] · NHL和HL受试者:恶性淋巴瘤响应标准修改版
[0304] · CLL受试者:慢性淋巴细胞性白血病诊断和治疗准则
[0305] 药动学样品分析
[0306]通过经验证的免疫测定法分析血清样品的BMS-986016。另外，为了技术探索目的， 可以通过测量BMS-986016的探索性分析方法分析选定的血清样品;探索性数据不会报告。 [0307] 探索性生物标志物评估
[0308]在治疗前，以及在A部分和B中的所有受试者的治疗期中的选定时间点，收集肿瘤 组织、骨髓和/或抽吸物。在治疗前，并在治疗期中的选定时间点（在A部分中为每个剂量水 平入选的前3名受试者，在B部分中为所有受试者)采集外周血。若抽出生物标志物样品但是 未施用研究药物，则将保留样品。图3中提供了药效评估的日程表。
[0309] 可溶性生物标志物
[0310] 通过血清中的免疫测定法表征并定量可溶性因子，如细胞因子、趋化因子、可溶性 受体、和针对肿瘤抗原的抗体。分析可以包括但不必限于可溶性CD25、可溶性PD-1、可溶性 LAG-3、和CXCL-9。还使用收集的血清样品评估用单一疗法治疗后引发的肿瘤抗原特异性应 答，以探索哪些抗肿瘤抗体与临床响应最相关。将通过多重测定法和ELISA评估针对癌测试 抗原的抗体水平。
[0311] PBMC和骨髓抽吸物的免疫表型确定
[0312] 将通过流式细胞术定量PBMC制备物中的特定淋巴细胞亚组的比例和T细胞共刺激 标志物的表达水平。分析可以包括但不必限于T、B、和NK细胞的比例、记忆和效应T细胞亚组 的比例、和LAG-3、PD-1、PD-LI、PD-L2、ICOS、和K i 6 7 的表达水平。
[0313] 离体功能测定法
[0314] 为了探索纳武单抗是否会恢复T细胞活化和功能，将PBMC分离并冷冻保存。进行效 应T细胞的功能状态的测定，包括但不限于针对干扰素 -γ (IFN-γ )和CD107的测定。
[0315] 外周血基因表达
[0316] 在全血样品中使用分子方法如Affymetrix微阵列和/或定量RT-PCR分析来定量与 对BMS-986016的响应相关的基因的表达水平。分析可以包括但不必限于与免疫相关途径， 如T细胞活化和抗原加工和呈递相关的基因。
[0317] BMS-986016受体占据
[0318] 将通过基于流式细胞术的受体占据测定法来定量与免疫细胞结合的BMS-986016 的百分比，以及结合的药物的均值荧光强度(MFI)。此测定法将对外周血和(在可用时)骨髓 抽吸物进行。受体占据测定法提供的数据将用来确定在不同生物学区室中与药物相互作用 的T细胞的量和类型。在治疗前采集样品以限定基线，并在收集骨髓抽吸物时采集样品。外 周血和骨髓抽吸物的分析在新鲜样品中进行；因此，样品在收集后立即运送是至关重要的。 [0319] T细胞全集分析
[0320]已经证明，外周T细胞区室的低多样性与转移性乳腺癌中的总体存活不良相关 (Manuel等，Oncoimmunology 2012; 1(4) :432_440。免疫肿瘤学中的一个现行理论提出，一 个多样化且活化的免疫环境，与由免疫幼稚的、耐受化的（tolerized)T细胞组成的偏态的 (skewed)全集相比，更有利于根治肿瘤。为了探索多样化T细胞全集是否可预示对疗法的响 应，对从外周血和肿瘤组织分离的DNA进行下一代高通量DNA测序，以在单一疗法之前和期 间定量T细胞全集的组成。
[0321] SNP 分析
[0322] 为了鉴定潜在的与BMS-986016的安全性和效力有关的多态性，对选定的基因评估 单核苷酸多态性（SNP)。分析将限于与PD-1/PD-L1、LAG-3和活化的T细胞表型，包括PD-I、 I3D-Ll、TO-L2、LAG-3、MHC II和CTLA-4有关的基因和途径连锁的序列多态性。
[0323] 基于肿瘤的生物标志物测量
[0324] 在用BMS-986016治疗之前和之后获得肿瘤活检样本(例如原发性肿瘤，淋巴结）以 表征免疫细胞群体和选定的肿瘤标志物的表达。
[0325] 在所有同意的成年人中收集治疗前的肿瘤活检（例如原发性肿瘤，淋巴结）。若治 疗前肿瘤活检临床上不可行，则必须提供存档的肿瘤组织样品（例如原发性肿瘤，淋巴结）， 即福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)块或未染色的载玻片，以进行关联研究。应当与存档或新 鲜的活检样品一起提交病理学报告。若新鲜的活检和存档的样品两者都有，则应当发送这 两种样品。
[0326] 治疗中的肿瘤活检是任选的，并且在具有基线时的活检的受试者中收集。可以在 周期1期间第50天至第56天(或者若临床上有指征，则更早)获得活检，并在ro时再次获得活 检。活检可以与方案规定的诊断成像相协调。
[0327] 单侧骨髓活检和/或抽吸对所有受试者上在基线或第一剂研究药物前最长达28天 时完成。从完成其最后一次治疗后具有骨髓抽吸和活检结果的受试者不得使用那些骨髓结 果代替此研究需要的基线骨髓。治疗中的骨髓活检和/或抽吸物样品在CR、PR时或在PD时 (如临床上指示)获得，并且可以与方案规定的诊断成像相协调。
[0328] 活检和骨髓样品可以用于以下的评估：
[0329] 肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)、肿瘤抗原和病毒阳性的表征
[0330] 使用免疫组织化学（IHC)评估免疫浸润物的数目和组成，以确定暴露于治疗之前 和之后FFPE肿瘤组织内存在的免疫细胞亚组。这些IHC分析包括但不必限于以下标志物： CD4、CD8、F0Xp3、PD-I、LAG-3和MHC II。也可以通过评估EBV编码的RNA、LMP-1表达、或类似 的测定法测试肿瘤的埃巴二氏病毒(EBV)状态。例如，根据以下方案对人扁桃体和NHL细胞 进行人LAG-3的IHC分析，并在图4-14B中显示了这些结果：
[0331] 设备和材料：
[0332] Leica自动染色仪
[0333] BioGenex i6000 自动染色仪
[0334] BioCare Medical Decloaking Chamber? Plus [0335]试剂：
[0336] 二甲苯(Xylene)?(EM Science,产品目录编号UN1307)
[0337] 乙醇（AAPER Alcohol and Chemical Co)
[0338] AR10(BioGenex?，产品目录编号 HK057-5K)
[0339] 清洗缓冲液(DAKO?,产品目录编号S3006)
[0340] 过氧化物酶模块(Peroxidase block) (Leica?产品目录编号RE7101-CE)
[0341] 蛋白模块(Protein block) (Leica?产品目录编号RE7102-CE)
[0342] 通用抗体稀释剂(BioGenex?,产品目录编号HK156-5K)
[0343] DAB (Leica? 产品目录编号 RE7190-CE)
[0344] 苏木精（Dako:?，产品目录编号S3309)
[0345] 抗体：
[0347] Novolink Max Polymer DetectionSystem?( Leicai:?),产品目录编号RE7260-CE)
[0348] 程序：
[0349] 1.使用二甲苯(2次，每次5分钟）、100 %乙醇（2次，每次2分钟）、95 %乙醇（2次，每 次2分钟）、70 %乙醇(2次，每次2分钟）、蒸馏H2(KdH2O) (2分钟)在Leica自动染色仪上进行脱 石蜡和复水；
[0350] 2.使用Biocare Medical Decloaking ChamberPlusO?'完成抗原修复。将ARlO溶液 加热到105°C(P1)达20分钟，然后移到下一步(在95°C时P2风扇开启；在90°C时风扇关闭）；
[0351] 3.在室温冷却载玻片15分钟，用水漂洗(约1分钟）；
[0352] 4.在i6000自动染色仪上准备好IHC试剂；
[0353] 5.在i6000自动染色仪上准备好载玻片，使用水笔(pap pen)界定组织区；
[0354] 及
[0355] 6.用BioGenex i6000自动染色仪使用如下所述的研究模式进行IHC。
[0356] i6000 (NovoLink 试剂盒）上的 IHC 步骤：
[0357] 1.应用"过氧化物酶模块"（NovoLink试剂盒)达10分钟，接着用IHC清洗缓冲液漂 洗(3次）；
[0358] 2.对载玻片应用蛋白模块(NovoLink试剂盒），并且在室温温育10分钟，然后用缓 冲液清洗(3次）；
[0359] 3.对载玻片施加抗体，并且在室温温育1小时，并且用缓冲液清洗(3次）；
[0360] 4.对载玻片添加"一抗后模块"（Post Primary Block) (NovoLink试剂盒），并且温 育30分钟，并用缓冲液清洗(3次）；
[0361] 5.对载玻片添加"NovoLink聚合物"（NovoLink试剂盒），并且温育45分钟；
[0362] 6.用IHC清洗缓冲液漂洗载玻片(3次）；
[0363] 7.添加 DAB色原体底物(NovoLink试剂盒），并且显色5分钟；
[0364] 8.通过在室温用ClH2O漂洗5分钟清洗载玻片；
[0365] 9.在室温用苏木精(Dako) 1:1复染色载玻片1分钟；
[0366] 10.然后，通过用ClH2O漂洗(于室温5分钟)清洗载玻片。
[0367] 复水和盖片：
[0368] 1.从i6000自动染色仪卸下载玻片并且在Leica自动染色仪上装好；
[0369] 2.用70%乙醇、95%乙醇、2X100%乙醇(各2分钟)复水载玻片；
[0370] 3.用二甲苯(2次，各2分钟)清洗载玻片;及
[0371 ] 4.在Leica CM5030玻片盖片机(coverslipper)中用Cytoseal封固介质盖片。
[0372]血清中的病毒载量
[0373] 通过在不同时间点的（PCR)在血清中评估埃巴二氏病毒（EBV)和巨细胞病毒 (CMV)-病毒负载状态。然后，将病毒载量与临床结果及肿瘤组织中的标志物如CD4、CD8、 F0Xp3、PD-I、LAG-3和MHC II的表达关联起来。
[0374] T细胞全集的表征
[0375] 如上文描述，对治疗前和治疗后肿瘤组织进行DNA测序以评估T细胞全集的组成。 从FFPE肿瘤块或从RNAlater或等价的制备物分离DNA。
[0376] 基因表达概貌分析
[0377] 通过Aff ymetrix基因阵列技术和/或RT-PCR，检查收集在RNAlater或等价固定剂 中的组织活检和骨髓样品的mRNA基因表达，以检测选定的免疫相关基因的表达。
[0378]细胞遗传学、突变和肿瘤标志物
[0379]若先前尚未完成以下分析，则需要在基线时实施：
[0380]具有何杰金氏淋巴瘤的受试者:扩增9p24.1，⑶30
[0381] 具有CLL的受试者:del llq，del 13q，del 17p，IGHV状态，CD38和β2微球蛋白
[0382] 具有DLBCL的受试者:表型ABC，GCB，或不能分类和β2微球蛋白。
[0383]将这些临床标志物的结果与临床结果和T细胞中的耗竭表型两者相关联。
[0384] 肿瘤样品收集
[0385] 1.活检(原发性肿瘤和/或淋巴结)
[0386] LAG-3状态评估、EBER-ISH和其它生物标志物评估需要至少1个FFPE肿瘤组织块 (优选)或至少10个FFPE未染色的切片。若FFPE不可用，则福尔马林中的肿瘤活检也可以接 受。
[0387] 活检样品应当是切除性的、切口性的或芯针。仅在与发起人的医学监控者讨论后， 方允许细针抽吸物或其它细胞学样品。
[0388] 推荐在10 %中性缓冲福尔马林中固定样品24至48小时。
[0389]若提交载玻片，则推荐的组织切片厚度是4微米并且载玻片必须带正电荷。运输载 玻片应当在2-8°C冷藏下运送。
[0390]若采集新鲜的活检，则推荐多达4个中心活检（core biopsies)。强烈鼓励在进行 程序时由病理学家评估活检质量。将从这些活检获得的肿瘤组织等分到FFPE样品和 RNAlater 中。
[0391]研究人员与放射学人员磋商时，必须确定与程序有关的危险程度，并且认为其可 接受。可以活检在局部麻醉或清醒镇静下完成。应当遵循关于活检的安全实施的机构准则。 可以进行切除性活检以获得肿瘤活检样品。不应进行需要全身麻醉的侵入性程序来获得活 检样本。然而，若因临床指征而进行手术程序，则可以在受试者同意的情况下为研究目的使 用富余的肿瘤组织。
[0392] 2.骨髓和/或抽吸物
[0393] 利用在基线时、在CR或PR时、和在进展时采集的骨髓活检和/或抽吸物评估免疫细 胞和肿瘤细胞的表型和功能状态。
[0394] 使用关于这些规程的机构标准获得骨髓活检和/或抽吸物。关于骨髓活检和抽吸 物收集的详细指导将在实验室规程手册中提供。简言之，需要至少1个FFPE肿瘤组织块(优 选)或至少10个骨髓的FFPE未染色的切片，并且收集约IOmL抽吸物在肝素钠管中，并且在环 境条件下运送。应当与活检样品一并提交病理学报告。
[0395] 不良事件
[0396] 不良事件(AE)定义为在施用研究（医用)产品的临床研究受试者中任何新发的不 良医学事件，或者先前存在的医学状况的恶化，其不一定与治疗具有因果关系。因此，AE是 与研究产品的使用在时间上伴随的任何不利的且非预期的征象（如异常的实验所见）、症 状、或疾病，不管其是否被认为与研究产品相关。
[0397] 与研究药物的因果关系由医师来确定，并且用于评估所有不良事件(AE)。因果关 系可以是下列之一：
[0398]相关:研究药物施用与AE之间有合理的因果关系。
[0399]无关:研究药物施用与AE之间没有合理的因果关系。
[0400] 1.严重不良事件
[0401] 严重不良事件(SAE)是任何不良的医学事件，其在任何剂量下：
[0402] ?导致死亡
[0403] ?威胁生命(定义为受试者在事件发生时有死亡风险的事件;而不指这样的事件： 假如它更严重，会导致死亡）
[0404] ?需要住院收治或者引起现存收治的延长
[0405] ?导致持续或重大的失能/机能不全
[0406] ?是先天性异常/出生缺陷
[0407] ?是重要的医学事件(定义为这样的医学事件:可能不立即威胁生命或者导致死 亡或入院，但是基于适当的医学和科学判断，可能危害受试者或者可能需要干预（例如，药 物，手术）以防止上述定义中列出的其它严重结果之一。此类事件的例子包括，但不限于，急 救室或在家里对变应性支气管痉挛的强化治疗;不导致入院的血液体液不调或惊厥）。认为 潜在的药物诱发的肝损伤(DILI)也是重要的医学事件。
[0408] 传染原(例如病原性或非病原性)经由研究药物的疑似传播是SAE。虽然妊娠、用药 过量、癌症、和潜在的药物诱发的肝损伤(DILI)根据监管定义并非总是严重的，但这些事件 必须作为SAE处理。研究终点中任何认为与研究疗法相关的组成部分(例如，死亡是终点，若 由于过敏反应而发生死亡，则，则必须报告过敏反应)作为SAE报告。
[0409] 认为以下入院不是SAE:
[0410]-到急救室或其它医院科室就诊〈24小时，结果未收治入院（除非认为是重要的医 学或威胁生命的事件）
[0411] -选择性手术，在签署同意前已计划
[0412] -按照规程入院以实施计划的医药/手术程序
[0413] -为获得健康状态的基线/趋势而需要入院的例行健康评估(例如常规的结肠镜检 查术）
[0414]-为了矫正不健康之外的目的，并且在进入研究前已计划的医药/手术入院。在这 些情况下，需要适当的记录。
[0415] -由于与健康状态没有关系并且不需要医学/手术干预的生活情境（例如缺乏住 房、经济不足、看护者休假、家庭情况、管理原因）而入院。
[0416] 在受试者书面同意参与研究后，收集所有SAE(不管与研究药物相关与否），包括那 些认为与方案规定程序相关的SAE。收集所有在筛选期期间和在中断给药的135天内发生的 SAE。若适用的话，收集与任何后来的方案规定程序(例如随访皮肤活检)相关的SAE。追踪所 有SAE到消退或稳定化。
[0417] 2.非严重不良事件
[0418]非严重不良事件是未被分类为严重的AE。非严重AE信息的收集开始于研究药物起 始，并且在中断给药后继续135天。追踪非严重AE到消退或稳定化，或者当它们变得严重时 作为SAE报告。对于引起研究药物中断或不连续的非严重AE，以及(视情况)研究治疗结束时 存在的那些非严重AE，也需要随访。所有鉴定的非严重AE都记录并描述在CRF的非严重AE页 (纸质或电子)上。
[0419] 对在研究过程期间报告/鉴定的AE和/或实验室异常，要求完成补充的CRF。
[0420] 样本大小测定
[0421] I. A部分:剂量渐增
[0422] 每个剂量的样本大小取决于观察到的毒性，无法精确确定。A部分的每个分组中具 有3至9名受试者。
[0423] 2. B部分:分组扩充
[0424] 每个分组约12名受试者的样本大小将允许更好地评估毒性比率，并且提供初步效 力的估计值的更大精确性。若分组中的12名受试者中的3名（即〈30%)经历毒性，则真实毒 性比率不大于48 %的置信度为至少90 % (基于Clopper-Pearson精确二项式单侧90 %置信 区间）。另外，对于分组间探索的安全性信号，若研究的扩充部分中的48名受试者中的14名 (即〈30%)经历毒性，则真实的毒性比率不超过40%的置信度有至少90%。
[0425] 每个分组的约12名受试者的样本大小也允许评估分组内具有客观响应(即完全响 应[CR]+部分响应[PR])的受试者的比例，使得客观响应率的双侧90 %置信区间是7 %至 53% (若3名受试者(25%)具有响应），和12%至61 % (若4名受试者(33%)具有响应）。另外， 鉴于真实响应率为15%或更高，在12名受试者的分组中有超过86%的几率看到至少一例响 应。
[0426] 用于分析的群体
[0427] ?所有入选的受试者:所有签署研究的知情同意的受试者(包括筛选落选者）
[0428] ?所有治疗的受试者：所有接受至少一个完整或部分剂量的BMS-986016的受试 者。
[0429] ?响应可评估的受试者:所有具有疾病的可评估基线评定，以及下列之一的治疗 受试者：（1)至少一个可评估的治疗中的疾病评定，（2)临床进展，或(3)在第一次治疗中的 疾病评定前死亡。
[0430] ?药动学分析组:所有具有足够的PK数据以定义至少一项有效的PK参数的治疗受 试者将纳入汇总表中。列出来自治疗受试者的所有可用的血清浓度数据。
[0431] ?免疫原性分析组:所有接受了一个完整或部分剂量的BMS-986016、具有可用的 基线和至少一个基线后免疫原性样品的受试者将纳入汇总表中。列出来自治疗的受试者的 所有可用的数据。
[0432] ?药效学分析组:所有具有特定生物标志物的至少一个有效测量的治疗受试者将 纳入在所述生物标志物的汇总和列表中。
[0433] _
[0434] 1.主要终点
[0435] 此1期研究的主要终点是安全性，安全性在研究水平上通过治疗期间和最后一次 治疗后长达135天内评估的AE、SAE、死亡和实验室异常的比率来量度。对所有接受至少一剂 BMS-986016或纳武单抗的受试者分析安全性。
[0436] 2.次要终点
[0437] a.药动学
[0438]评估BMS-986016的PK作为次要目的，使用从各个时间点的血清浓度对时间数据得 到的以下终点。
[0439] 要评估的PK参数包括：
[0440] Cmax 观察到的最大血清浓度
[0441] Tmax 观察到最大血清浓度的时间
[0442] Ctrough 观察到的谷血清浓度
[0443] Ceoinf 输注结束时观察到的浓度
[0444] Ctau 给药间隔期结束时的浓度(例如336小时时的浓度）
[0445] Css, avg 在给药间隔期中的平均浓度（[AUC(TAU)/tau]
[0446] AUC(TAU) 在一个给药间隔期中的浓度-时间曲线下面积
[0447] CLT 总身体清除
[0448] Vss 稳态时的分布体积
[0449] T-HALFeff AUC 可解释观察到的AUC积累程度的有效消除半衰期
[0450] T-HALFeff Cmax可解释观察到的Cmax积累程度的有效消除半衰期
[0451 ] AI_AUC 积累指数;稳态时的AUC(TAU)与第一剂后的AUC(TAU)的比率
[0452] AI_Cmax Cmax积累指数;稳态时的Cmax与第一剂后的Cmax的比率
[0453] AI_Ctau Ctau积累指数;稳态时的Ctau与第一剂后的Ctau的比率
[0454] AI_Ceoinf Ceoinf积累指数;稳态时的Ceoinf与第一剂后的Ceoinf的比率
[0455] DF 波动程度或波动指数（[Cmax_Ctau]/Css，avg)
[0456] 通过非区室化方法通过已验证的PK分析程序求得个别的受试者PK参数值。分析使 用实际时间。
[0457] b.效力
[0458] 评估以下次要终点以研究BMS-986016的初步抗肿瘤活性：
[0459] ?客观响应率(ORR)，即具有最佳的CR或PR总体响应的受试者的比例
[0460] ?响应持续时间(DOR)，基于与每种疾病类型相关的当前标准
[0461 ] ?评估治疗中的4、6、8和10个月时和最后一剂后30天的界标无进展存活率(PFSR) 作为探索终点。
[0462] 3.探索终点/生物标志物
[0463] 来自外周血的生物标志物终点可以包括在每个安排的时间点的可溶性因子的水 平，以及通过免疫表型分型表征的T细胞的亚组等量度。来自肿瘤活检的生物标志物终点可 以包括，但不限于，淋巴细胞的功能状态和排列，以及淋巴细胞活化基因3(LAG_3)、主要组 织相容性复合物(MHC)II类、程序性细胞死亡I(PD-I)、和程序性细胞死亡配体I (H)-L1)表 达等量度。还可以提供受体占据的量度，如在外周血、骨髓、和淋巴结(若可用的话）中表征 的。
[0464]
[0465] 除非另有规定，以下面两种方式汇总来自A部分和B部分的安全性数据：1)按各剂 量水平区分的总体情况，以及跨所有剂量水平的情况，以及2)每个肿瘤类型内的按剂量水 平区分的总体情况，以及跨所有剂量水平的情况。每个肿瘤类型内的按剂量水平区分汇总 效力数据。
[0466] 1.人口统计学和基线特征
[0467] 将性别和人种的频率分布制成表格。将年龄、体重、高度和体重指数(BMI)的概括 统计量制成表格。
[0468] 2.效力分析
[0469]在具有HL和NHL的受试者中，使用恶性淋巴瘤响应标准修改版（附录1)评估效力。 对于具有CLL的受试者，使用慢性淋巴细胞性白血病诊断和治疗准则。
[0470] 测定选定时间点时的个别的BOR、ORR、DOR和PFSR。使用频率表汇总BOR结果。对B部 分计算0RR、界标PFSR(在治疗中的4、6、8和10个月时和最后一剂后30天）和相应的置信区 间，并且在数据支持下，可以对A部分计算。使用KapIan-Meier方法按肿瘤类型区分评估DOR 和PFSR。其它探索性的效力表示可以包括按照肿瘤类型、治疗、对免疫疗法的在先暴露、或 基线肿瘤标志物对剂量渐增组和分组扩充组中的受试者分群。还对个体疾病负荷随时间的 变化作图。在选定的疾病类型内，可以按剂量水平区分图形呈现个体肿瘤标志物随时间的 变化。根据分析的目的，可以为所有治疗受试者报告效力，或者为响应可评估的受试者报告 效力。
[0471 ] 3.安全性分析
[0472] 安全性终点的分析中包括所有接受研究药物疗法的受试者。根据系统器官类别、 优选项、与研究药物的关系和治疗将所有记录的AE列出并制成表格。根据最近的MedDRA版 本完成编集。按治疗区分列出并汇总生命体征和选定的临床实验室测试结果。列出任何显 著的身体检查所见和临床实验室测试结果。列出任何由研究人员鉴定的ECG异常。
[0473] 4.药动学分析
[0474] 使用非区室分析计算BMS-986016的PK参数。对于BMS-986016的PK参数按治疗和研 究日/周区分将概括统计学制成表格。为了描述对BMS-986016剂量的依赖性，可以提供测量 的每日的Cmax和AUC (TAU)对剂量的散点图。还可以基于幂模型评估BMS-986016的剂量比例 性。
[0475] 5.探索性生物标志物分析
[0476] 利用概括统计学和作图汇总对经历活检的受试者中的TIL、MIL、和其它关键肿瘤 标志物的药效学影响。另外，可以以图形方式，并且基于数据可用性使用合适的建模方法， 探索TIL或MIL变化和肿瘤标志物表达与外周血标志物的量度的关联。还可以以图形方式探 索来自外周血或肿瘤活检的生物标志物量度与临床结果的联系，并且根据需要通过诸如但 不限于逻辑回归的方法进一步评估，并且通过合适的统计量表征。
[0477] 6.免疫原性分析
[0478] 提供所有可用的免疫原性数据的列表。汇总满足规定的终点定义的受试者的数目 和百分比。为了检查免疫原性和安全性之间的潜在关系，可以按照免疫原性状态来探索特 别感兴趣的AE的频率和类型的汇总表。另外，还可以探索免疫原性和效力、药效学标志物 和/或PK之间的潜在关系。
[0479] 序列汇总
【主权项】
1. 一种治疗人患者中的血液学恶性肿瘤的方法，所述方法包括对所述患者施用有效量 的抗LAG-3抗体，所述抗LAG-3抗体包含：重链可变区的⑶Rl、CDR2和⑶R3域，所述重链可变 区具有SEQ ID N0:3中列出的序列；和轻链可变区的⑶R1、CDR2和⑶R3域，所述轻链可变区 具有SEQ ID NO:5中列出的序列， 其中所述方法包括至少一个施用周期，其中所述周期是8周的时间，其中对于所述至少 一个周期中的每一个，如下施用所述抗LAG-3抗体： (a) 4剂的20mg抗LAG-3抗体； (b) 4剂的80mg抗LAG-3抗体； (c) 4剂的240mg抗LAG-3抗体;或 (d) 4剂的800mg抗LAG-3抗体。2. 权利要求1的方法，其中所述抗LAG-3抗体配制用于静脉内施用。3. 权利要求1或2的方法，其中所述治疗由最多达12个周期组成。4. 权利要求1 _3中任一项的方法，其中所述抗LAG-3抗体在每个周期的第1、15、29和43 日施用。5. 权利要求1-4中任一项的方法，其中所述治疗产生至少一种治疗效果，所述治疗效果 选自：减少恶性细胞的数目、抑制恶性细胞浸润、抑制恶性细胞转移、阻止恶性细胞的发生、 和减轻一种或多种与恶性有关的症状。6. 权利要求1-5中任一项的方法，其中所述恶性肿瘤选自：白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。7. 权利要求1-6中任一项的方法，其中所述恶性肿瘤选自：复发性或难治性慢性淋巴细 胞性白血病和淋巴瘤。8. 权利要求7的方法，其中所述恶性肿瘤选自：慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、何杰金氏 淋巴瘤(HL)和非何杰金氏淋巴瘤(NHL)。9. 权利要求1-8中任一项的方法，其中所述抗LAG-3抗体包含 (a) 具有SEQ ID N0:7中列出的序列的重链可变区⑶R1; (b) 具有SEQ ID N0:8中列出的序列的重链可变区⑶R2; (c) 具有SEQ ID N0:9中列出的序列的重链可变区⑶R3; (d) 具有SEQ ID NO: 10中列出的序列的轻链可变区⑶R1; (e) 具有SEQ ID NO: 11中列出的序列的轻链可变区⑶R2;和 (f) 具有SEQ ID勵:12中列出的序列的轻链可变区0?3。10. 权利要求1-9中任一项的方法，其中所述抗LAG-3抗体包含分别具有SEQ ID NO:3和 5中列出的序列的重链可变区和轻链可变区。11. 权利要求1-10中任一项的方法，其中所述抗LAG-3抗体包含分别具有SEQ ID NO: 1 和2中列出的序列的重链和轻链。12. -种用于治疗人患者中的复发性或难治性慢性淋巴细胞性白血病或淋巴瘤的试剂 盒，所述试剂盒包含： (a) -定剂量的抗LAG-3抗体，所述抗LAG-3抗体包含：重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3 域，所述重链可变区具有SEQ ID N0:3中列出的序列;和轻链可变区的⑶R1、CDR2和⑶R3域， 所述轻链可变区具有SEQ ID NO: 5中列出的序列，和 (b) 关于在权利要求1-11中任一项的方法中使用所述抗LAG-3抗体的说明。13.供在至少一个周期中施用的抗LAG-3抗体，所述抗LAG-3抗体包含：重链可变区的 CDR1、⑶R2和⑶R3域，所述重链可变区具有SEQ ID N0:3中列出的序列；和轻链可变区的 ⑶R1、⑶R2和⑶R3域，所述轻链可变区具有SEQ ID NO:5中列出的序列， 其中对于每个周期，如下施用所述抗LAG-3抗体： (a) 4剂的20mg抗LAG-3抗体； (b) 4剂的80mg抗LAG-3抗体； (c) 4剂的240mg抗LAG-3抗体;或 (d) 4剂的800mg抗LAG-3抗体。
【文档编号】A61P35/02GK105992595SQ201580006297
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年1月26日
【发明人】A·A·古铁雷斯, J·格罗索, C·M·希尔, M·塞尔比, K·E·路易斯
【申请人】百时美施贵宝公司