专利名称：从植物提取物中分离加兰他敏的方法
技术领域：
本发明涉及植物有效药用成分的提取方法，尤其是从含石蒜科生物碱的植物提取物中，将加兰他敏与其它众多生物碱分离的方法。
背景技术：
加兰他敏(galanthamine)是1950年代前苏联学者发现的一种菲啶类生物碱，为可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂，原用于小儿麻痹后遗症及重症肌无力、术后肠肌麻痹、尿潴留以及作为箭毒的解毒剂，近年来用于治疗早老性痴呆，并有望成为治疗老年性痴呆的首选药物。
加兰他敏化学名为，11-甲基-3-甲氧基-4α，5，9，10，11，12-六氢-6H-苯并呋喃[3α，3，2-ef][2]苯并氮杂卓-6-醇，结构式如下图。
药用加兰他敏是从天然植物中提取的。这些植物分布在石蒜属、雪花水仙属、文殊兰属、水仙属、网球花属、水鬼蕉属等领域。其中以石蒜属植物具有代表性。现有技术从植物提取物中分离加兰他敏的方法主要是有机溶剂萃取法。利用亲脂性生物碱溶于亲脂性有机溶剂，而其盐溶于水的性质，以及总生物碱中各种单体生物碱之间碱性的差异，在不同的pH条件下进行分离。
另有以酸性白土吸附加兰他敏的报导。其方法是以酸性白土吸附石蒜科植物提取物中的总生物碱，再以碱碱化，乙醇回流解吸，进而利用生物碱的溶解性和碱性的差异实现加兰他敏的分离。
专利号CN96192578.7“分离加兰他敏的方法”，是以石蒜科植物水仙或文殊兰的球茎为生物材料，经粉碎与碳酸钠粉末混合，采用特定沸点汽油进行浸渍，除去溶剂。分段调节提取物pH4、pH9，以乙醚萃取得加兰他敏，使用异丙醇重结晶，得高纯度的加兰他敏。
上述提取、分离加兰他敏的技术存在有机溶剂消耗大、萃取时容易产生乳化现象、影响分离提取效果、操作工时长等缺点和不足。
随着离子交换树脂应用领域的不断扩展，许多生物碱的分离也采用离子交换的方法。但上述专利文献和非专利文献均未见到有关与本发明权利要求相同的以离子交换树脂吸附、洗脱加兰他敏的方法的记载。
发明内容含石蒜科生物碱植物提取物中含有石蒜碱、加兰他敏、力可拉敏等数十种生物碱。本发明提供一种通过离子交换色谱分离加兰他敏的方法，具有收率高、纯度好、省工时、省材料的优点。
本发明的任务是按以下技术方案实现的。
含石蒜科生物碱植物提取物经过预处理，根据所用树脂的选择性，将样品处理为酸性、中性或碱性，以阳离子交换树脂进行吸附、洗脱，跟踪检测洗脱流份，浓缩富集加兰他敏段流份，得加兰他敏游离碱粗品，再以有机溶剂重结晶，得纯度为99％左右的加兰他敏游离碱结晶。同时，该过程还可得到其他副产物——纯度很高的力可拉敏(lycoramine)和石蒜碱(lycorine)等生物碱。
所述阳离子交换树脂的母体是苯乙烯二乙烯苯、酚醛树脂、交联聚苯乙烯、葡聚糖中之一种。阳离子交换树脂的功能基是磺酸基、甲基磺酸基、磷酸基、羧基和酚基中之一种所形成的强酸、中强酸、弱酸阳离子交换树脂。优选的阳离子交换树脂是STREAMLINE SP树脂。
本发明基本工艺方法如下1.含石蒜科生物碱植物提取物的预处理预处理的目的是有利于植物提取物样品的吸附或交换。根据所采用的色谱技术采用不同的预处理方法。其中包括，用酸或碱调节上样溶液的pH值；通过过滤或离心的方法除去溶液中的固体颗粒；以及将样品经过初步分离后再进行色谱分离等方法。用于调节pH值的酸无特定限制，优选的是盐酸或硫酸，浓度为0.1％-10％；用于调节pH值的碱也无特定限制，优选的是氢氧化钠或氨水，浓度为1％-20％2.样品的交换或吸附离子交换树脂进行转型，以任何方式放置于交换柱内，将样品与离子交换树脂进行吸附或交换。吸附或交换可采用动态法，也可采用静态法，而优选的是动态法。
3.洗涤以高于平衡缓冲溶液离子强度而低于洗脱溶液离子强度的洗涤溶液洗涤阳离子交换树脂，从阳离子交换树脂上洗脱下未被结合物。洗涤溶液体积为柱体积的2-3倍，流速为2-3ml/min。
4.有效成分的洗脱将吸附或交换上去的有效成分物质释放，重新转人洗脱溶液。控制洗脱溶液体积，流速2-3ml/min。洗脱方式可采用动态洗脱或静态洗脱，但优选的是动态洗脱方式。洗脱可采用梯度洗脱或非梯度洗脱。
洗脱溶液可以是比平衡溶液的离子强度大的盐溶液，以及为增强离子洗脱效果而采取的有机溶剂作为增强剂。优选的盐是氯化钠，浓度为0.1mol/L-10mol/L，优选的增强剂是乙醇，浓度为10％-20％；洗脱溶液也可以是比平衡溶液pH值大的缓冲溶液；洗脱溶液还可以是碱和有机溶剂的混合溶液，优选的碱是氨，浓度为1％-20％，优选的有机溶剂是乙醇，浓度为10％-95％。
5.洗脱流份的跟踪检测与收集在洗脱流份时，应进行有效物质加兰他敏的跟踪检测。检测方法可以应用薄层层析(TLC)法，也可以应用其他适于检测加兰他敏的方法。根据检测结果，收集、合并与加兰他敏相同Rf值的流份。
6.流份中加兰他敏的浓缩富集浓缩富集洗脱流份中的加兰他敏可以采用萃取和/或蒸馏浓缩的方法。
通常经过浓缩富集，即可得到加兰他敏游离碱的粗品。
7.重结晶可以使用任何常用的有机溶剂对加兰他敏游离碱粗品进行重结晶，优选的溶剂是丙酮。经过数次重结晶，得到纯品加兰他敏游离碱结晶。其纯度在99％左右(HPLC)。
根据本发明的方法，可从植物材料中有效地获得加兰他敏，是一种适合于工业化生产的从含石蒜科生物碱的植物提取物中分离加兰他敏的制备方法。具有收率高、纯度好、工艺操作简单、节省工时、原材料消耗少等优点。
具体实施方式
下列实施例用于详细说明本发明，但不限制本发明的范围。
实施例1石蒜科植物提取物10kg，加1％盐酸溶液溶解、调节并保持溶液酸性。过滤除去溶液中不溶颗粒物，通过平衡好的STREAMLINE SP阳离子交换树脂(2L)进行交换，树脂用水冲洗至中性，以1mol/L的氯化钠溶液进行梯度洗脱，以TLC法跟踪检测，收集与加兰他敏有相同Rf值的流份，以饱和碳酸钠溶液碱化至pH9.2，乙酸乙酯萃取5次(500ml×2，250ml×3)，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏至干，得到加兰他敏游离碱粗品10.2g，以丙酮重结晶，得含量为99％左右的加兰他敏游离碱结晶8.0g。
实施例2石蒜科植物提取物10kg，加1％盐酸溶液溶解、调节并保持溶液酸性。过滤除去溶液中不溶颗粒物，通过转型好的Amberlite CG-120阳离子交换树脂(10L)进行交换，树脂用水冲洗至中性，以5％氨水/乙醇溶液进行梯度洗脱，以TLC法跟踪检测，收集与加兰他敏有相同Rf值的流份，蒸馏回收乙醇。调节溶液至pH9.2，氯仿萃取5次(500ml×2，250ml×3)，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏至干，得到加兰他敏游离碱粗品13.1g，以丙酮重结晶，得含量为99％左右的加兰他敏游离碱结晶8.5g。
实施例3石蒜科植物提取物10kg，加1％盐酸溶液溶解、调节并保持溶液酸性。过滤除去溶液中不溶颗粒物，通过转型好的STREAMLINE SP阳离子交换树脂(2L)进行交换，树脂用水冲洗至中性，分别以0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/L氯化钠/20％乙醇溶液进行洗脱，以TLC法跟踪检测，收集与加兰他敏有相同Rf值的流份，以饱和碳酸钠溶液碱化至pH9.2，乙酸乙酯萃取5次(500ml×2，250ml×3)，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏至干，得到加兰他敏游离碱粗品10.5g，以丙酮重结晶，得含量为99％左右的加兰他敏游离碱结晶8.1g。
实施例4石蒜科植物提取物10kg，加1％氢氧化钠溶液溶解、调节并保持溶液碱性。过滤除去溶液中不溶颗粒物，通过转型好的Amberlite IRC-50阳离子交换树脂(10L)进行交换，树脂用水冲洗至中性，分别以0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/L的氯化钠溶液进行分段洗脱，以TLC法跟踪检测，收集与加兰他敏有相同Rf值的流份，调节溶液至pH9.2，乙酸乙酯萃取5次(500ml×2，250ml×3)，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏至干，得到加兰他敏游离碱粗品10.7g，以丙酮重结晶，得含量为99％左右的加兰他敏游离碱结晶8.2g。
实施例5石蒜科植物提取物10kg，加1％氢氧化钠溶液溶解、调节并保持溶液碱性。过滤除去溶液中不溶颗粒物，通过转型好的Amberlite IRC-76阳离子交换树脂(10L)进行交换，树脂用pH3.0的缓冲溶液冲洗，分别以pH3.0的0.1mol/L、0.4mol/L、0.8mol/L的氯化钠溶液进行分段洗脱，以TLC法跟踪检测，收集与加兰他敏有相同Rf值的流份，以饱和碳酸钠溶液碱化至pH9.2，乙酸乙酯萃取5次(500ml×2，250ml×3)，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏至干，得到加兰他敏游离碱粗品9.7g，以丙酮重结晶，得含量为99％左右的加兰他敏游离碱结晶7.3g。
以上实施例1～5所用石蒜科植物提取物，均可使用按“从天然植物中提取石蒜科生物碱的工艺”专利申请方法获得的产物。该工艺方法系本申请人的另件发明，中国专利申请号为03153992.0。
权利要求
1.一种从含石蒜科生物碱植物提取物中分离加兰他敏的方法，其特征在于，对经过预处理的植物提取物，使用阳离子交换树脂进行吸附、洗脱，跟踪检测洗脱流份，浓缩富集加兰他敏段流份，得加兰他敏游离碱粗品，再以有机溶剂重结晶，得纯品加兰他敏游离碱结晶。
2.如权利要求1所述的分离加兰他敏的方法，其特征在于，对植物提取物进行预处理的方法是，用酸或碱调节上样溶液的pH值。
3.如权利要求2所述的分离加兰他敏的方法，其特征在于，用作预处理的酸是盐酸或硫酸，浓度为0.1％-10％；用作预处理的的碱是氢氧化钠或氨水，浓度为1％-20％。
4.如权利要求1所述的分离加兰他敏的方法，其特征在于，所述阳离子交换树脂的母体是苯乙烯二乙烯苯、酚醛树脂、交联聚苯乙烯、葡聚糖中之一种。
5.如权利要求1所述的分离加兰他敏的方法，其特征在于，所述阳离子交换树脂的功能基是磺酸基、甲基磺酸基、磷酸基、羧基和酚基中之一种所形成的强酸、中强酸、弱酸阳离子交换树脂。
6.如权利要求1所述的分离加兰他敏的方法，其特征在于，所述阳离子交换树脂是STREAMLINE SP树脂。
7.如权利要求1至6任一权利要求所述的分离加兰他敏的方法，其特征在于，所述的离子交换方法，包括依次进行的下列步骤①用平衡缓冲溶液吸附、交换；②用洗涤缓冲溶液洗涤阳离子交换树脂；③用洗脱缓冲溶液洗脱阳离子交换树脂。
8.如权利要求1所述的分离加兰他敏的方法，其特征在于，在洗脱流份时应用薄层层析(TLC)法进行加兰他敏的跟踪检测。
9.如权利要求1所述的分离加兰他敏的方法，其特征在于，采用萃取和/或蒸馏浓缩的方法浓缩富集洗脱流份中的加兰他敏。
10.如权利要求1所述的分离加兰他敏的方法，其特征在于，用于加兰他敏游离碱粗品重结晶的溶剂是丙酮。
11.如权利要求1所述的分离加兰他敏的方法，其特征在于，样品的交换或吸附采用动态法。
12.如权利要求7所述的分离加兰他敏的方法，其特征在于，样品的交换或吸附采用动态法。
13.如权利要求1所述的分离加兰他敏的方法，其特征在于，洗脱溶液是下述三种溶液之一种①比平衡溶液的离子强度大的盐溶液与10％-20％乙醇的混合溶液；②比平衡溶液pH值大的缓冲溶液；③碱和有机溶剂的混合溶液。
14.如权利要求7所述的分离加兰他敏的方法，其特征在于，洗脱溶液是下述三种溶液之一种①比平衡溶液的离子强度大的盐溶液与10％-20％乙醇的混合溶液；②比平衡溶液pH值大的缓冲溶液；③碱和有机溶剂的混合溶液。
15.如权利要求13或14所述的分离加兰他敏的方法，其特征在于，用于配制洗脱溶液的盐溶液为0.1mol/L-10mol/L氯化钠溶液。
16.如权利要求13或14所述的分离加兰他敏的方法，其特征在于，用于配制洗脱溶液的碱是1％-20％氨水。
17.如权利要求13或14所述的分离加兰他敏的方法，其特征在于，用于配制洗脱溶液的有机溶剂是10％-95％乙醇。
18.如权利要求1或8所述的分离加兰他敏的方法，其特征在于，所述的洗脱方式为梯度洗脱或非梯度洗脱。
全文摘要
本发明涉及植物提取物中有效成分的分离方法，特别是从含石蒜科生物碱的植物提取物中分离加兰他敏的方法。其工艺是，将含石蒜科生物碱的植物提取物经过预处理，经阳离子交换树脂吸附、洗脱，跟踪检测洗脱流份，浓缩富集加兰他敏段流份，得加兰他敏游离碱粗品，再以有机溶剂重结晶，得纯度为99％左右的加兰他敏游离碱结晶。
文档编号C07D491/00GK1611502SQ20031010227
公开日2005年5月4日 申请日期2003年10月30日 优先权日2003年10月30日
发明者傅和亮, 王宁, 何宣扬, 王晓岩, 匡卫文 申请人:广东天普生化医药股份有限公司