专利名称：不含罗苏伐他汀烷基醚的罗苏伐他汀及其盐以及制备它们的方法
相关申请
本申请要求了以下申请的权益2005年2月22日提交的美国临时申请No.60/655,580；2005年4月28日提交的美国临时申请No.60/676,388；2005年10月3日提交的美国临时申请No.60/723,491；2005年10月4日提交的美国临时申请No.60/723,875；2005年11月2日提交的美国临时申请；2005年12月15日提交的美国临时申请No.60/751,079；2006年1月19日提交的美国临时申请No.60/760,506；和2006年1月25日提交的美国临时申请No.待定(Awaited)(档案号(Attorney Docket)No.1662/71804))。
发明领域 本发明涉及含低水平烷基醚杂质的罗苏伐他汀及其盐和中间体，以及制备其的方法。
背景技术：
罗苏伐他汀钙的化学名称为(7-[4-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-(N-甲基-N-甲基磺酰氨基)嘧啶-5-基]-(3R，5S)-二羟基-(E)-6-庚烯酸钙盐)，具有下面的化学式
罗苏伐他汀钙 罗苏伐他汀钙为HMG-CoA还原酶抑制剂，由Shionogi开发，每日口服一次，用于治疗高脂血症(Ann Rep，Shionogi，1996；Directcommunications，Shionogi，8 Feb 1999 & 25 Feb 2000)。罗苏伐他汀钙为超级他汀类药物(superstatin)，与第一代他汀类药物相比，其更有效地降低LDL-胆固醇和甘油三酯。
罗苏伐他汀钙以名称CRESTOR上市用于治疗哺乳动物如人。根据CRESTOR的制造者的建议，其每日给药剂量为约5mg-约40mg. USRE专利No.37,314公开了罗苏伐他汀钙的制备，其中除去中间体1的醇保护基团R2，
中间体1
中间体2 得到中间体2的步骤通过采用氢氟酸溶液来进行。但是，工业规模使用氢氟酸有些问题，因为其有很强的腐蚀性和很高的吸入毒性；还应避免与玻璃或金属接触。
美国专利No.05/222,415中公开了另外的除去中间体1的甲硅烷基保护基团的方法。按照该申请的公开，采用甲磺酸的甲醇溶液代替氢氟酸；但是，该方法会导致终产物被罗苏伐他汀-钙-甲基醚杂质污染，如实施例4中所示例。
罗苏伐他汀-钙-甲基醚 象任何合成化合物一样，罗苏伐他汀钙会包含不同来源的的外来化合物或杂质。罗苏伐他汀钙或任何活性药学成分(API)中的这些杂质是不希望有的，在极端的情况下，甚至可能会对用包含API的剂型治疗的患者有害。
在API中的杂质可来自API自身的降解，其与API在储存过程中的稳定性相关，还可来自生产过程包括API的化学合成。过程杂质包括未反应的起始原料、包含在起始原料中的化学衍生物杂质、合成反应副产物及降解产物。
API储存过程中的稳定性为API贮存期的重要因素，其会影响到API的商业化性能。得自生产过程中的API纯度也会影响到API的商业化性能。在商业生产过程中引入的杂质必须被限制在很小的量，优选基本上不存在。例如，API生产的ICH Q7A指导方针要求通过在生产过程中规定原材料的质量、控制程序参数如温度、压力、时间和化学计量比率，包括纯化步骤如结晶、蒸馏和液-液萃取来保持过程杂质低于设定限。
在API生产过程中的特定阶段，必须分析纯度，因为化学反应的产物很少为符合药用标准的具有足够纯度的单一化合物。在大多数情况下，反应的副产品和副产物以及在反应中添加的试剂也会存在于产物混合物中。通常，用HPLC或TLC分析API以确定是否适于继续加工及最后用于药用产品。API无需绝对纯净，通常难以达到理论上的理想绝对纯度。但是，要设定纯度标准以确保API尽可能不含杂质，从而能尽可能安全地用于临床。如上所述，在美国，食品和药品管理局指导方针推荐一些杂质的量要限制低于0.1％。
一般而言，副产品、副产物和添加的试剂(统称为“杂质”)用分光计和/或其他物理方法鉴定，然后联系峰位置，如在色谱图中或在TLC板上的点。(Strobel p.953，Strobel，H.A.；Heineman，W.R.，Chemical InstrumentationA Systematic Approach，3rd dd.(Wiley &SonsNew York 1989))。然后，可通过其在TLC板上的相对位置(其中在板上的位置以距离板基线的cm数表示)或通过其在HPLC色谱图上的相对位置(其中在色谱图上的位置通常以样品注射到柱子中与特定成分通过检测器洗脱出来之间的分钟数表示)来鉴定杂质。在色谱图中的相对位置称为“保留时间”。
保留时间可根据仪器的条件以及许多其他因素在平均值附近变化。为了减少这些变量对准确鉴定杂质的影响，操作者采用“相对保留时间”(“RRT”)来鉴定杂质。(Strobel p.922)。杂质的RRT为其保留时间除以参照标记或参照标准的保留时间。优选将除API外的其它化合物以足以被检测而不足以使柱子饱和的量加入到或使之存在于混合物中，并用这样的化合物作为参照标记或参照标准来测定RRT。
本领域中熟练技术人员知道，通过了解它们的化学结构和合成途径，并通过确证影响终产物中杂质的量的参数可大大提高处理过程杂质的水平。
在本申请中，API中的杂质罗苏伐他汀钙-烷基醚被用作参照标记或参照标准。
本领域需要具有低水平罗苏伐他汀-钙-烷基醚的罗苏伐他汀钙，以及制备具有低水平罗苏伐他汀-钙-甲基醚的罗苏伐他汀钙的方法。
发明简述 在一个方面，本发明提供了具下面结构的式I-醚化合物，
式I-醚 其中R为除甲基酯以外的羧基保护基团，R1为C1-C8直链或支链烷基。在另一方面，本发明提供了式I-醚的化合物，其中R为除甲基酯以外的羧基保护基团，R1为C2-C8直链或支链烷基。
在另一方面，本发明提供了分离的式I-醚化合物，其中R为羧基保护基团，R1为C2-C8直链或支链烷基。在本发明优选的方面，R1为甲基。
在本发明特别优选的方面，R为叔丁基羧基，R1为甲基，式I-醚化合物与TB-21-甲基醚的结构相符，
TB-21-甲基醚 在另一方面，本发明提供了制备分离的式I-醚化合物的方法，其中R为羧基保护基团，R1为C1-C8直链或支链烷基。
在又另一方面，本发明提供了具下面结构的式II-醚化合物，
II-醚 其中R为羧基保护基团，R1为C1-C8直链或支链烷基。在另一方面，本发明提供了式I-醚化合物，其中R为羧基保护基团，R1为C2-C8直链或支链烷基。
在本发明特别优选的方面，R为叔丁基羧基，R1为甲基，式II-醚化合物与TBRE-甲基醚的结构相符，
TBRE-甲基醚 在另一方面，本发明提供了制备式II-醚的方法，其中R如上述定义，R1为C1-C8直链或支链烷基。
在另一方面，本发明提供了具下面结构的式III-醚化合物(又称为罗苏伐他汀烷基醚(Rosu-alkylether))及其盐，
III-醚(罗苏伐他汀烷基醚) 其中R1为C1-C8直链或支链烷基，M为H或金属阳离子。在另一方面，本发明提供了式III-醚化合物，其中R1为C2-C8直链或支链烷基，M为H或金属阳离子。在本发明优选的方面，R1为甲基。在本发明另一优选的方面，M为Ca+2. 在本发明特别优选的方面，M为Ca+2，R1为甲基，式III-醚化合物与具下面结构的罗苏伐他汀钙甲基-醚相符，
罗苏伐他汀钙甲基-醚 在另一方面，本发明提供了制备分离的化合物III-醚的方法，其中R1为C1-C8直链或支链烷基，M为H或金属阳离子。
在另一方面，本发明提供了式I化合物，
式I 其中R为羧基保护基团，用HPLC峰面积法测定具有约0.02％-约1.5％的式I-醚化合物。
在又另一方面，本发明提供了式II化合物
式II 其中R为羧基保护基团，用HPLC峰面积法测定具有约0.02％-约1.5％的式II-醚化合物。
在一个方面，本发明提供了式III化合物，被称为罗苏伐他汀或Rosu，
式III(Rosu) 其中M为H或金属阳离子，优选Ca+2，用HPLC峰面积法测定具有约0.02％-约0.2％的式III-醚化合物(罗苏伐他汀烷基醚)。
在另一方面，本发明提供了式I-醚、式II-醚和罗苏伐他汀烷基醚作为参照标准的用途。
在又另一方面，本发明提供了测定式I化合物样品中的式I-醚化合物，式II化合物样品中的式II-醚化合物，或Rosu样品中的罗苏伐他汀烷基醚的量的方法 a)用HPLC或TLC分别测定分别包含已知量的式I-醚、式II-醚或罗苏伐他汀烷基醚的参照标准中的式I-醚、式II-醚或罗苏伐他汀烷基醚的相应的峰面积； b)用HPLC或TLC分别测定分别包含的式I和式I-醚化合物或式II和式II-醚化合物或Rosu罗苏伐他汀烷基醚的样品中的式I-醚、式II-醚或罗苏伐他汀烷基醚的相应的峰面积；和 c)比较步骤(a)和步骤(b)的峰面积，分别确定式I-醚、式II-醚或罗苏伐他汀烷基醚的量。
在另一方面，本发明提供了式I-醚、式II-醚和罗苏伐他汀烷基醚作为参照标记的用途。
在又另一方面，本发明提供了确证式I化合物样品中的式I-醚化合物，式II化合物样品中的式II-醚化合物，或Rosu样品中的罗苏伐他汀烷基醚存在的方法，所述方法包括 a)用HPLC或TLC分别测定分别包含式I-醚、式II-醚或罗苏伐他汀烷基醚化合物的参照标记中式I-醚、式II-醚或罗苏伐他汀烷基醚化合物的相应保留时间； b)用HPLC和TLC分别测定分别包含式I和式I-醚化合物或式II和式II-醚化合物或Rosu罗苏伐他汀烷基醚的样品中式I-醚、式II-醚或罗苏伐他汀烷基醚的相应的保留时间；和 c)比较步骤(a)和步骤(b)的保留时间，分别确证样品中式I-醚、式II-醚或罗苏伐他汀烷基醚的存在。
在另一方面，本发明提供了HPLC方法，所述方法包括以下步骤将式I、式II或Rosu的样品与比率为1∶1的乙腈和水的混合物混合，得到溶液；将该溶液注射到温度保持在约25℃的100X4.6mm BDS Hypersil C-18(或类似的)柱子中；用体积比为3∶2的缓冲液∶乙腈混合物和乙腈以及比率为2∶9∶9的缓冲液∶乙腈∶乙醇混合物对柱子中的样品进行梯度洗脱；用UV检测器优选在243nm波长分别测定在相关样品中的式I-醚、式II-醚或罗苏伐他汀烷基醚化合物的量。
在又另一方面，本发明提供了制备式I化合物的方法，其中式I-醚化合物的水平受到控制，所述方法包括以下步骤将式IV结构的化合物，
式IV 与C1-C5醇混合得到溶液；在约-10℃-约30℃下冷却该溶液；将化合物IV的溶液与甲磺酸在比率为约6-约30(v/v)的C1-C5醇水混合物中的溶液混合得到反应混合物；在最高温度为约35℃的温度下加热反应混合物，得到具有控制的式I-醚水平的式I化合物。
在另一方面，本发明提供了通过按照上述方法制备式I化合物然后将其转化为Rosu来制备用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％Rosu-醚的Rosu及其盐的方法。
在一个方面，本发明提供了通过结晶法来降低式II化合物样品中的式II-醚化合物的水平的方法，所述方法包括以下步骤将式II化合物粗品与选自芳香烃类化合物、C1-C5醇、酯、酮、醚、C5-C8直链或支链烃、腈、其混合物，及其与水的混合物的有机溶剂混合，得到反应混合物；在约25℃-约110℃下加热反应混合物得到溶液；将该溶液冷至约-10℃-约20℃以诱导式II化合物沉淀；回收式II化合物。
在一个方面，本发明提供了通过按照上述方法制备式II化合物来制备用HPLC峰面积法测定含约0.2％-约0.02％式II-醚化合物的式II化合物的方法。
在另一方面，本发明提供了提供了通过按照上述方法制备式II化合物并将其转化为Rosu来制备用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％式II-醚化合物的Rosu及其盐的方法。
在又另一方面，本发明提供了制备用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％罗苏伐他汀烷基醚的Rosu的方法，所述方法包括 a)获得一个或多个批次的式I化合物的一个或多个样品； b)测定每个样品中式I-醚化合物的水平； c)根据对各个批次样品的测定，选择用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％水平式I-醚的式I化合物的批次；和 d)用所选的批次制备Rosu。
在又另一方面，本发明提供了制备用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％罗苏伐他汀烷基醚的Rosu的方法，所述方法包括 a)获得一个或多个批次的式II化合物的一个或多个样品； b)测定每个样品中式II-醚化合物的水平； c)根据对各个批次样品的测定，选择用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％水平式II-醚的式II化合物的批次；和 d)用所选的批次制备Rosu。
在又另一方面，本发明提供了制备包含用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％罗苏伐他汀烷基醚的Rosu的药物制剂方法，所述方法包括 a)获得一个或多个批次的Rosu的一个或多个样品； b)测定每个样品中式罗苏伐他汀烷基醚化合物的水平； c)根据对各个批次样品的测定，选择用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％水平罗苏伐他汀烷基醚的Rosu的批次；和 d)用所选的批次制备含Rosu的制剂。
在又另一方面，本发明提供了包含用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％罗苏伐他汀烷基醚的Rosu或其盐及至少一种药学可接受赋形剂的的药用组合物。
在一个方面，本发明提供制备药用组合物的方法，所述方法包括将用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％罗苏伐他汀烷基醚的Rosu或其盐与至少一种药学可接受赋形剂混合。
发明详述 本发明提供了具有低水平杂质特别是罗苏伐他汀烷基醚杂质的罗苏伐他汀及其盐，以及制备其的方法。本发明的方法通过在合成过程中控制杂质出现水平的方法使制备的罗苏伐他汀具有低水平杂质。在罗苏伐他汀的合成中，反应产物(即API)的纯度通过HPLC或TLC分析测定。
本发明提供了具下面结构的式I-醚化合物，
式I-醚 其中R为除甲基酯以外的羧基保护基团，R1为C1-C8直链或支链烷基。
本申请的结构中的羧基保护基团可为任何合适的羧基保护基团，特别是酯、酰胺或酰肼。在本申请的结构中，所述羧基保护基团更优选为酯，最优选为叔丁基酯。
式I-醚为中间体化合物IV转化为式I化合物的过程中产生的杂质，
式IV 其中R为羧基保护基团，
式I 在中间体化合物IV向式I化合物转化的过程中，用HPLC峰面积法测定式I-醚的水平可高达约20％。该杂质的存在是成问题的，因为该杂质会参与合成罗苏伐他汀的剩余步骤，产生其他杂质，最终污染罗苏伐他汀。本发明的方法控制式-醚的形成水平，并提供纯化式II的中间体化合物的方法。因此本发明使得所制备的终产物罗苏伐他汀包含低水平的罗苏伐他汀烷基醚。
本发明包括在合成式I化合物的过程中控制式I-醚化合物的水平的方法，所述方法包括以下步骤 a)将式IV化合物与C1-C5醇混合得到溶液； b)将该溶液在约-10℃-约30℃下冷却； c)将步骤b)的溶液与甲磺酸在比率为约6-约30(v/v)的C1-C5醇水混合物中的溶液混合，得到反应混合物；和 d)在最高约35℃下加热该反应混合物，得到具有控制水平的式I-醚杂质的式I化合物。
合适的C1-C5醇包括甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇和戊醇。优选的醇包括甲醇、乙醇和异丙醇。在稀释条件下进行反应可控制所形成的式I-醚的量。优选地，步骤a)中形成的溶液包含约13-约19体积的C1-C5醇/g式IV化合物和约0.5-约1体积水/g式IV化合物。
在步骤b)中优选将该溶液冷至约0℃-约20℃。优选地，步骤c)中C1-C5醇和水混合物的比率为约20.6(v/v)。步骤b)的溶液可一次性或以连续的部分与甲磺酸溶液混合，如以逐滴加入的方式。优选地，在醇和水中的甲磺酸溶液为逐滴加入到步骤b)中得到反应混合物。该反应混合物优选经约0.5-5小时形成，更优选经1小时。在形成该反应混合物时，温度优选保持在约-10℃-约30℃。然后将该反应混合物加热至不超过35℃，优选约20℃-约35℃。在形成反应混合物和加热反应混合物时控制温度可控制形成的反应副产物式I-醚的量。
在回收式I化合物之前，反应混合物优选在约30℃加热约2-约10小时。
可通过在约室温下向反应混合物中加入盐水，用有机溶剂，优选冷的甲苯萃取反应混合物，用饱和NaHCO3和盐水洗涤反应混合物，然后干燥有机相，并真空浓缩来回收式I化合物。
如上制备的式I化合物用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约1.5％的式I-醚化合物。
本发明还提供了制备用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％罗苏伐他汀烷基醚的罗苏伐他汀及其盐的方法，所述方法包括如上所述制备式I化合物，并将其转化为罗苏伐他汀或其盐。
本发明还提供了分离的式I-醚化合物，其中R为羧基保护基团，R1为C1-C8直链或支链烷基。在优选的实施方案中，R为叔丁基羧基，R1为甲基，式I-醚化合物与TB-21-甲基醚的结构相符，
TB-21-甲基醚 TB21-甲基醚可由选自下列的数据表征峰在约1.32，1.50，2.43-2.50，2.71-2.84，3.40，4.07，6.53，3.61，6.21(JHz 16.5)，7.14，7.62和7.64ppm处的1H-NMR(CDCl3，300MHz)光谱；和峰在约21.84，28.06，32.32，33.09，40.09，42.46，45.68，57.35，74.38，80.90，115.55(JHz 22)，119.07，132.07(JHz 8)，133.57，133.77(JHz 4)，137.48，157.95，163.73(JHz251)，164.94，170.20，175.39和197.06ppm处的13C-NMR(CDCl3，75MHz)光谱。
本发明还提供了通过快速色谱法从包含式I和式I-醚的样品中分离式I-醚化合物的方法。优选地，用包含庚烷和乙酸乙酯混合物的梯度洗脱剂来分离式I-醚化合物。实施例1中示例了TB21-甲基醚的分离。
可通过共同待审的美国申请No._(Attorney Docket No.1662/85704)中描述的方法用式I化合物制备罗苏伐他汀。因此，将式I化合物转化为下面结构的式II化合物
式II 通过除去羧基保护基团，将式II化合物转化为式III(Rosu)化合物或其盐
式III(Rosu) 其中M为H或金属阳离子，如下面的方案所示
可用共同待审的美国申请No.(Attorney Docket No.1662/85704)中描述的方法将式II化合物与C1-C6醇和水的混合物混合得到反应混合物，向反应混合物中加入，优选分批加入碱如氢氧化物碱在原位得到Rosu-Na2+，然后加入CaCl2将Rosu-钠转化为Rosu-Ca2+。或者也可通过本领域中熟练技术人员已知的任何其他方法来制备Rosu-Ca+2。
在将式I化合物转化为式II化合物和Rosu的过程中，式I-醚杂质也分别转化为式II和Rosu的杂质，称为式II-醚和Rosu-烷基醚。
本发明提供了具下面结构的式II-醚化合物
式II-醚 其中R为羧基保护基团，R1为C1-C8直链或支链烷基；R1优选为甲基。
优选地，R为叔丁基羧基，R1为甲基，因此，式II-醚化合物与具下面结构的TBRE-甲基醚相符，
TBRE-甲基醚 TBRE-甲基醚可由选自下列的数据表征峰在约1.28，1.45，2.34，2.40，2.58，2.63，3.34，3.38，3.53，3.60，4.41，5.5，6.62(JHz 16.5)，7.10，7.64和7.66ppm处的1H-NMR(CDCl3，300MHz)光谱；峰在约21.74，28.14，32.14，33.19，39.95，42.25，42.5，57.0，71，81.12，115.0(JHz 21.7)，122.58，132.26，134.63，139.61，140.13，157.34，163.32(JHz 247.5)，163.50，174.93和174.98ppm处的13C-NMR(CDCl3，75MHz)光谱；和峰在MH+(ES+)552处的质谱。
本发明还提供了用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约1.5％式II-醚化合物的式II化合物以及通过结晶法制备其的方法。所述方法包括将式II化合物粗品与选自芳香烃类化合物、C1-C5醇、酯、酮、醚、C5-C8直链或支链烃、腈、其混合物及其与水的混合物的有机溶剂混合，得到混合物，将该混合物在约25℃-约110℃下加热得到溶液，将该溶液冷至约-10℃-约20℃以诱导式II化合物沉淀，回收式II化合物。
用于本发明方法的式II化合物粗品用HPLC峰面积法测定纯度为约45％-约77％。由上述方法获得的式II化合物用HPLC峰面积法测定的纯度通常为约80％-约95％。
适合用作有机溶剂的芳香烃类化合物包括甲苯和苯。甲苯为优选的芳香烃类化合物。合适的酮为C3-C8酮，优选的酮为丙酮。优选的酯包括乙酸乙酯(称为EtOAc)和乙酸甲酯。优选地，所述醚为四氢呋喃或甲基-叔丁基醚(分别称为THF和MTBE)。优选的C5-C8直链或支链烃包括庚烷和己烷。优选地，所述腈为乙腈(称为ACN)醇、乙腈和丙酮与水、THF、EtOAc或MTBE的混合物也是适用于本发明的有机溶剂，同样适用的还有甲苯和庚烷的混合物。最优选的有机溶剂为甲苯。
式II粗品混合物优选在约40℃-约90℃下加热得到溶液。在冷却前在该溶液中加入晶种，优选在冷却前约1小时加入晶种并保持温度在约20℃-约60℃。优选地，将该溶液冷至约0℃-约5℃。更优选地，将该溶液逐渐冷至约40℃-约70℃以获得混悬液，然后再经约1-约20小时将该混悬液冷至约0℃-约10℃以获得式II化合物的沉淀。当将溶液冷却以获得混悬液时，优选将该混悬液保持约1-约24小时，更优选保持过夜，以获得式II化合物的沉淀。
可通过本领域中常用的方法来回收式II化合物的沉淀，如过滤，用甲苯优选冷却的甲苯洗涤，在真空箱中干燥。
本发明还提供了制备用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％罗苏伐他汀烷基醚的罗苏伐他汀及其盐的方法，所述方法包括如上所述制备式II化合物，并将其转化为罗苏伐他汀或其盐。
本发明还提供了具下面结构的式III-醚化合物(罗苏伐他汀烷基醚)
罗苏伐他汀烷基醚 其中R1为C1-C8直链或支链烷基，优选为甲基，M为H或金属阳离子，优选为Ca+2。
优选地，M为Ca+2，R1为甲基，因此，式II-醚化合物与具下面结构的罗苏伐他汀钙甲基-醚相符，
罗苏伐他汀钙甲基-醚 Rosu钙-甲基醚可由选自下列的数据表征峰在约1.21，1.40，1.70，2.01，2.30，3.13，3.20，3.43，3.45，3.57，3.60，3.74，4.16，5.52，6.51(JHz 16.2)，7.28和7.71ppm处的1H-NMR(DMSO-d6，600MHz)光谱；和峰在MH+(ES+)496处的质谱。
本发明还提供了用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％罗苏伐他汀烷基醚的罗苏伐他汀或其盐。
本发明提供了用式I-醚、式II-醚和罗苏伐他汀烷基醚作为参照标准的方法。当用作参照标准时，所述化合物可用于确定下面化合物的量式I化合物样品中的式I-醚化合物，式II化合物样品中的式II-醚化合物，或Rosu样品中的罗苏伐他汀烷基醚。用所述化合物作为参照标准的方法包括 a)用HPLC或TLC分别测定分别包含已知量的式I-醚、式II-醚或罗苏伐他汀烷基醚的参照标准中的式I-醚、式II-醚或罗苏伐他汀烷基醚的相应的峰面积； b)用HPLC或TLC分别测定分别包含的式I和式I-醚化合物或式II和式II-醚化合物或Rosu和罗苏伐他汀烷基醚的样品中的式I-醚、式II-醚或罗苏伐他汀烷基醚的相应的峰面积；和 c)比较步骤(a)与步骤(b)中测得的HPLC或TLC峰面积，分别确定步骤b)的样品中式I-醚、式II-醚或罗苏伐他汀烷基醚化合物的量。
本发明还提供了用式I-醚、式II-醚和罗苏伐他汀烷基醚化合物作为参照标记的方法。当用作参照标记时，所述化合物用于确证下面化合物的存在式I化合物样品中的式I-醚化合物，式II化合物样品中的式II-醚化合物，或Rosu样品中的罗苏伐他汀烷基醚。用所述化合物作为参照标记的方法包括 a)用HPLC或TLC分别测定分别包含式I-醚、式II-醚或罗苏伐他汀烷基醚化合物的参照标记中式I-醚、式II-醚或罗苏伐他汀烷基醚化合物的相应保留时间； b)用HPLC和TLC分别测定分别包含式I和式I-醚化合物或式II和式II-醚化合物或罗苏伐他汀烷基醚的样品中式I-醚、式II-醚或罗苏伐他汀烷基醚的相应的保留时间；和 c)比较步骤(a)与步骤(b)中的保留时间，分别确证样品中I-醚、式II-醚或罗苏伐他汀烷基醚化合物的存在。
本发明提供了HPLC方法，所述方法包括以下步骤将式I、式II或Rosu化合物的样品与比率为1∶1的乙腈和水的混合物混合得到溶液；将该溶液注射到温度保持在25℃的100X4.6mm BDSHypersil C-18(或类似的)柱子中，用体积比为3∶2的缓冲液∶乙腈混合物和乙腈以及比率为2∶9∶9的缓冲液∶乙腈∶乙醇的混合物作为洗脱剂从柱子中梯度洗脱样品；用UV检测器优选在243nm波长分别测定相应样品中的式I-醚、式II-醚或罗苏伐他汀烷基醚化合物的量。
优选地，所述缓冲液包含浓度为约0.05％的冰醋酸水溶液混合物。
所用洗脱剂为洗脱剂A、洗脱剂B和洗脱剂C的混合物，优选地，其中所述三种洗脱剂的比率随时间变化，即梯度洗脱。例如，在0分钟时，所述洗脱剂包含100％的洗脱剂A，0％洗脱剂B和0％洗脱剂C。在28分钟时，所述洗脱剂可包含60％洗脱剂A，40％洗脱剂B和0％洗脱剂C。在45分钟时，所述洗脱剂可包含0％洗脱剂A，0％洗脱剂B和100％洗脱剂C。在60分钟时，所述洗脱剂可包含0％洗脱剂A，0％洗脱剂B和100％洗脱剂C。
本发明制备用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％罗苏伐他汀烷基醚的Rosu的方法包括 a)获得一个或多个批次的式I化合物的一个或多个样品； b)测定每个样品中式I-醚化合物的水平； c)根据对各个批次样品的测定，选择用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％水平式I-醚的式I化合物的批次；和 d)用所选的批次制备Rosu。
如果在步骤b)中用HPLC峰面积法测得的式I-醚化合物的水平高于约0.02％-约0.2％，其可根据本领域中已知的方法将式I化合物转化为式II化合物，然后再根据上述结晶方法降低式II-醚杂质(在转化过程中得到的)的水平来降低。
本发明还提供了制备用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％罗苏伐他汀烷基醚的Rosu方法，所述方法包括 a)获得一个或多个批次的式II化合物的一个或多个样品； b)测定每个样品中式II-醚化合物的水平； c)根据对各个批次样品的测定，选择用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％水平式II-醚的式II化合物的批次；和 d)用所选的批次制备Rosu。
如果在步骤b)中用HPLC峰面积法测得的式II-醚化合物的水平高于约0.02％-约0.2％，其可根据上述结晶法来降低。
本发明还提供了制备包含用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％罗苏伐他汀烷基醚的Rosu的药物制剂方法，所述方法包括 a)获得一个或多个批次的Rosu的一个或多个样品； b)测定每个样品中罗苏伐他汀烷基醚化合物的水平； c)根据对各个批次样品的测定，选择用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％水平罗苏伐他汀烷基醚的Rosu的批次；和 d)用所选的批次制备含Rosu的制剂。
本发明还提供了制备药用组合物的方法，所述方法包括将用HPLC峰面积法测定含约0.02％-约0.2％罗苏伐他汀烷基醚的Rosu或其盐与至少一种药学可接受赋形剂混合。
已参考某些优选的实施方案描述了本发明，本领域中熟练技术人员应能从说明书中了解其他的实施方案。通过引用下面详细描述本发明特定实施方案的方法的非限制性实施例进一步定义了本发明。
实施例 HPLC方法 柱子 Hypersil BDS C18100×4.6mm，3mm粒径 稀释剂50％水∶50％乙腈 流动相洗脱液和洗脱液B梯度洗脱 梯度洗脱 时间(分钟) 洗脱液A(％) 洗脱液B(％) 洗脱液C(％) 0100 00 28 60 40 0 45 00100 60 00100 洗脱液A60％0.005M甲酸铵缓冲液40％乙腈 洗脱液B100％乙腈 洗脱液C10％0.005M甲酸铵缓冲液90％乙腈∶乙醇(1∶1) UV检测 243nm 运行时间 60min 流速 0.4mL/min 注射体积 10mL 柱温 25℃ 弃去限(Discard limit) 小于0.02％ 样品制备 0.5mg/mL 式I的RT约30.5min 式II的RT 约26.2min ROSU的RT 约9.0min 实施例1TB21-甲基酯的分离 将用HPLC峰面积法测定包含20％TB21-醚杂质的反应混合物用色谱法(Combiflash Companion，Teledyne Isco)纯化。在4g柱子上装150mg样品，将样品用溶剂A庚烷，溶剂BEtOAc的混合物洗脱，在λ＝245nm处检测。
用NMR分析用combiflash在40分钟检测的峰。
NMR鉴定如下
实施例2式II化合物的纯化 将式II的粗品(22.41g，经分析纯度为76.7％)在甲苯(56mL)中搅拌。将该混合物加热至约90℃直至完全溶解。然后将该反应溶液冷至约25℃，在该温度下加入晶种，保持25℃1小时。经2小时将形成的混悬液冷至约0℃，在该温度下搅拌过夜，得到沉淀。过滤所得沉淀，用冷甲苯(10mL)洗涤，在真空箱中于50℃下干燥，得到14.23g(经分析纯度为94.6)式II晶体。
NMR鉴定如下
质谱分析 MH+(ES+)552 实施例3式II化合物从ACNH2O中结晶 将式II化合物(1.75g，用HPLC峰面积法测定含0.20％的式II-甲基醚)与ACN(4.5ml)和水(3ml)的混合物混合，加热至完全溶解。可观察到分成两层，将该混合物冷至室温，然后在冰浴中冷却18小时。然后减压过滤固体，洗涤，减压下在50℃干燥18小时，得到1.26g用HPLC测定含0.07％式II-醚的式II化合物。
实施例4式II化合物的脱保护得到罗苏伐他汀 将式IV化合物(65.61g，经分析纯度为52.3％)溶于装在2L反应器中的MeOH(650ml，10vol)中，冷至约10℃。经1小时将甲磺酸(3.71g，0.73eq.)在MeOH(590ml，9vol)和H2O(44ml，0.97vol)中的溶液加入到反应器中。将所得混合物加热至约30℃，在该温度下搅拌10小时。
将该溶液冷至室温。加入盐水溶液(340ml)，产物用甲苯(2×400ml)萃取。合并两份甲苯层，用饱和NaHCO3溶液(340ml)和盐水溶液(340ml)洗涤。用Na2SO4干燥有机相，最后减压除去溶剂得到46.5g粘稠油状物(经分析纯度为50.6％，甲基-醚0.81％)。
实施例5比较实施例WO 03/097614实施例2，步骤b的重现 将式IV化合物(3g，经分析纯度为71.9％)溶于装在烧瓶中的MeOH(7.5ml)中，加热至约34℃。向烧瓶中加入甲磺酸(0.19)在MeOH(7.5ml)和H2O(3ml)中的溶液。所得混合物在34℃下搅拌7.5小时。
将该混合物冷至室温。加入盐水溶液(340ml)，产物用甲苯(2×400ml)萃取。合并两份甲苯层，用饱和NaHCO3溶液(340ml)和盐水溶液(340ml)洗涤。用Na2SO4干燥有机相，最后减压除去溶剂得到粘稠油状物(2.28g，经分析纯度为50.6％，甲基-醚2.01％)。
实施例6用活性炭在甲苯中萃取式II，将其转化为罗苏伐他汀 向装有机械搅拌的1L反应器中装入EtOH(100mL)、水(60ml)和式II(20g)，形成反应混合物。在25±5℃下向该反应混合物中逐滴加入NaOH(47％1.2eq，3.8g)，将该反应混合物在25±5℃下搅拌2小时。
向反应混合物中加入水(140ml)，将反应混合物用甲苯(100mL)洗涤。在25±5℃下将反应混合物搅拌半小时，分离水相。
向水相中加入活性炭，在25±5℃下搅拌30分钟。用Sinter和Hyflo减压过滤水相以除去存在的活性炭。
然后在40℃下将水相减压浓缩至一半体积。向其中加入水(50mL)形成溶液。将该溶液加热至40℃。经30-90分钟在38-45℃下向溶液中逐滴加入CaCl2(4.13g)。然后将溶液冷至25±5℃，在25±5℃搅拌1小时，过滤，用水(4×20ml)洗涤，得到粉末化合物(16.7g干燥的，90％)。
按照该实施例进行了几次实验，表1中列出了这些样品的纯度特性 表1 实施例7罗苏伐他汀钙甲基醚的鉴定
Bruker，600MHz 质谱分析 MH+(ES+)496。
权利要求
1.一种式I-醚化合物，具下式
其中R为除甲基酯以外的羧基保护基团，R1为C1-C8直链或支链烷基。
2.一种分离的式I-醚化合物，
其中R为羧基保护基团，R1为C1-C8直链或支链烷基。
3.一种分离权利要求1或2的化合物的方法，所述方法包括用庚烷和乙酸乙酯的混合物作为梯度洗脱剂对具有至少一种所述化合物的样品进行快速色谱法分离。
4.一种具下式的式I化合物
式I
其中R为除甲基酯之外的羧基保护基团，用HPLC峰面积法测定具有约0.02％-约1.5％的权利要求1的化合物。
5.一种制备权利要求4的化合物的方法，所述方法包括以下步骤
a)将式IV的化合物
式IV
其中R为羧基保护基团，与C1-C5醇混合得到溶液；
b)在约-10℃-约30℃下冷却该溶液；
c)将步骤b)的溶液与甲磺酸在比率为约6-约30(v/v)的C1-C5醇水混合物中的溶液混合，得到反应混合物；和
d)在最高为约35℃的温度下加热反应混合物，得到权利要求4的化合物。
6.权利要求5的方法，其中所述步骤a)中的C1-C5醇选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇和戊醇。
7.权利要求6的方法，其中所述步骤a)中的C1-C5醇为甲醇、乙醇或异丙醇。
8.权利要求5的方法，其中步骤b)包括将所述溶液冷却至约0℃-约20℃。
9.权利要求5的方法，其中所述步骤c)中的C1-C5醇水混合物的比率为约20.6(v/v)。
10.权利要求5的方法，其中将所述甲磺酸在C1-C5醇水混合物中的溶液逐滴加入到步骤b)的溶液中。
11.权利要求5的方法，其中步骤d)包括将反应混合物加热至约20℃-约35℃。
12.权利要求5的方法，其中步骤d)包括将反应混合物加热至约30℃。
13.权利要求5的方法，其中步骤d)包括将反应混合物加热约2-约10小时。
14.一种具下面结构的式II-醚的化合物
式II-醚
其中R为羧基保护基团，R1为C1-C8直链或支链烷基。
15.权利要求1、2和14中任一项的化合物，其中R为叔丁基羧基，R1为甲基。
16.一种制备权利要求14的化合物的方法，所述方法包括将式I-醚的化合物
其中R为除甲基酯以外的羧基保护基团，R1为C1-C8直链或支链烷基，转化为权利要求14的化合物。
17.一种具下式的式II化合物
式II
其中R为羧基保护基团，R1为C1-C8直链或支链烷基，用HPLC峰面积法测定具有约0.02％-约1.5％的权利要求14的化合物。
18.一种制备权利要求17的化合物的方法，所述方法包括
a)将式II的化合物
式II
其中R为羧基保护基团，R1为C1-C8直链或支链烷基，与选自芳香烃类化合物、C1-C5醇、酯、酮、醚、C5-C8直链或支链烃、腈、其混合物和任何这些与水的混合物的有机溶剂混合，得到反应混合物；
b)在约25℃-约110℃加热反应混合物得到溶液；
c)将该溶液冷至约-10℃-约20℃得到沉淀；和
d)回收权利要求17的化合物。
19.权利要求18的方法，其中所述有机溶剂选自甲苯、苯、丙酮、乙酸乙酯、乙酸甲酯、四氢呋喃、甲基-叔丁基醚、庚烷、己烷、乙腈、甲苯与庚烷的混合物，以及醇、乙腈和丙酮与水、THF、EtOAc或MTBE的混合物。
20.权利要求19的方法，其中所述有机溶剂为甲苯。
21.权利要求18的方法，其中步骤b)包括在约40℃-约90℃的温度下加热反应混合物。
22.权利要求18的方法，在步骤c)之前还包括在溶液中加入晶种的步骤。
23.权利要求18的方法，其中步骤b)还包括在步骤c)之前将溶液在约20℃-约60℃的温度下保持约1小时。
24.权利要求18的方法，其中步骤c)包括将溶液冷至约0℃-约5℃。
25.一种制备用HPLC峰面积法测定具有约0.02％-约0.2％下面结构的罗苏伐他汀烷基醚的罗苏伐他汀及其盐的方法
罗苏伐他汀烷基醚
其中R1为C1-C8直链或支链烷基，M为H或金属阳离子，所述方法包括进行权利要求5和18的中任一项的方法并将回收的化合物转化为罗苏伐他汀或其盐。
26.一种具下面结构的式III-醚化合物
式III-醚
其中R1为C1-C8直链或支链烷基，M为H或金属阳离子。
27.权利要求26的化合物，其中R1为甲基，M为Ca+2。
28.一种制备权利要求26的化合物的方法，所述方法包括将式II-醚的化合物
式II-醚
其中R为羧基保护基团，R1为C1-C8直链或支链烷基，转化为权利要求26的化合物。
29.一种用HPLC峰面积法测定具有约0.02％-约0.2％的权利要求26的化合物的罗苏伐他汀或其盐。
30.一种测定样品中化合物的量的方法，所述方法包括用权利要求1、14和26中任一项的化合物作为参照标准进行HPLC或TLC分析。
31.一种测定下面化合物的量的方法
包含权利要求1的化合物和式I化合物的样品中权利要求1的化合物
式I
其中R为除甲基酯之外的羧基保护基团；
包含权利要求14的化合物和式II化合物的样品中权利要求14的化合物
式II
其中R为羧基保护基团，R1为C1-C8直链或支链烷基；
或
包含权利要求26的化合物和式III化合物的样品中权利要求26的化合物
其中M为H或金属阳离子，
所述方法包括以下步骤
a)用HPLC或TLC分别测定分别包含已知量的权利要求1、14或26的化合物的参照标准中的权利要求1、14或26的化合物的相应的峰面积；
b)用HPLC或TLC分别测定分别包含权利要求1和式I的化合物、权利要求14和式II的化合物或权利要求26的化合物和罗苏伐他汀的样品中的权利要求1、14或26的化合物的相应的峰面积；和
c)比较步骤(a)中的峰面积与步骤(b)中的峰面积，分别确定样品中权利要求1、14或26的化合物的量。
32.一种确证样品中化合物存在的方法，所述方法包括用权利要求1、14和26中任一项的化合物作为参照标记进行HPLC或TLC分析。
33.一种确证下面化合物存在的方法
包含权利要求1的化合物和式I化合物的样品中的权利要求1的化合物
式I
其中R为除甲基酯之外的羧基保护基团；
包含权利要求14的化合物和式II化合物的样品中的权利要求14的化合物
式II
其中R为羧基保护基团，R1为C1-C8直链或支链烷基；
或
包含权利要求26的化合物和式III化合物的样品中的权利要求26的化合物
其中M为H或金属阳离子，
所述方法包括以下步骤
a)用HPLC或TLC分别测定分别包含权利要求1、14或26的化合物的参照标记中的权利要求1、14或26的化合物的相应的保留时间；
b)用HPLC或TLC分别测定分别包含权利要求1和式I的化合物、权利要求14和式II的化合物或权利要求26和式III的化合物的样品中的权利要求1、14或26的化合物的相应的保留时间；和
c)比较步骤(a)和步骤(b)的保留时间，分别确证样品中权利要求1、14或26的化合物的存在。
34.一种进行HPLC的方法，所述方法包括以下步骤
a)将包含式I化合物的样品
式I
其中R为除甲基酯之外的羧基保护基团，与比率为1∶1的乙腈和水的混合物混合，得到溶液；
b)将该溶液注射到温度保持在约25℃的100×4.6mm BDSHypersil C-18或类似的柱中；
c)用体积比为3∶2的缓冲液∶乙腈混合物和比率为2∶9∶9的缓冲液∶乙腈∶乙醇的混合物作为洗脱液将样品从柱中梯度洗脱；和
d)用UV检测器测定样品中式II-醚的化合物的量
式II-醚。
35.权利要求34的方法，其中所述步骤d)的检测在243nm波长下进行。
36.一种制备用HPLC峰面积法测定具有约0.02％-约0.2％的权利要求26的化合物的罗苏伐他汀或其盐的方法，所述方法包括以下步骤
a)获得一个或多个批次的式I化合物的一个或多个样品
式I
其中R为除甲基酯之外的羧基保护基团；
b)测定每个样品中权利要求1的化合物的水平；
c)根据对得自各个批次的样品的测定，从步骤a)中选择用HPLC峰面积法测定的权利要求1的化合物的水平为约0.02％-约0.2％的批次；和
d)用所选的批次制备用HPLC峰面积法测定具有约0.02％-约0.2％权利要求26的化合物的罗苏伐他汀。
37.一种制备用HPLC峰面积法测定具有约0.02％-约0.2％的权利要求26的化合物的罗苏伐他汀的方法，所述方法包括以下步骤
a)获得一个或多个批次的式II化合物的一个或多个样品
式II
其中R为羧基保护基团，R1为C1-C8直链或支链烷基；
b)测定每个样品中权利要求14的化合物的水平；
c)根据对得自各个批次的样品的测定，从步骤a)中选择用HPLC峰面积法测定的权利要求14的化合物的水平为约0.02％-约0.2％的批次；和
d)用所选的批次制备用HPLC峰面积法测定具有约0.02％-约0.2％权利要求26的化合物的罗苏伐他汀。
38.权利要求37的方法，其中当步骤b)中用HPLC峰面积法测定的水平高于约0.02％-约0.2％时，所述方法还包括进行权利要求18的方法的步骤。
39.一种制备用HPLC峰面积法测定具有约0.02％-约0.2％权利要求26的化合物的罗苏伐他汀的方法，所述方法包括以下步骤
a)获得一个或多个批次的罗苏伐他汀的一个或多个样品；
b)测定每个样品中权利要求26的化合物的水平；
c)根据对得自各个批次的样品的测定，选择用HPLC峰面积法测定的权利要求26的化合物的水平为约0.02％-约0.2％的批次的罗苏伐他汀；和
d)用所选的批次制备包含用HPLC峰面积法测定具有约0.02％-约0.2％权利要求26的化合物的罗苏伐他汀的制剂。
40.一种药用组合物，所述组合物包含权利要求29的罗苏伐他汀或其盐和至少一种药学可接受赋形剂。
41.一种制备权利要求40的药用组合物的方法，所述方法包括将权利要求29的罗苏伐他汀与至少一种药学可接受赋形剂混合。
42.权利要求1、14和26的化合物作为参照标准的用途。
43.权利要求1、14和26的化合物作为参照标记的用途。
全文摘要
本发明提供了具有低水平烷基醚杂质的罗苏伐他汀及其中间体以及制备它们的方法。
文档编号C07D239/42GK101128437SQ200680005642
公开日2008年2月20日 申请日期2006年2月22日 优先权日2005年2月22日
发明者V·尼达姆-希尔德谢姆, A·巴拉诺夫, N·申卡 申请人:特瓦制药工业有限公司