辅酶Q₁₀清洁纯化工艺的制作方法

专利名称：辅酶Q₁₀清洁纯化工艺的制作方法
技术领域：
本发明属于生化技术领域，更具体涉及一种辅酶QK)清洁纯化工艺。
背景技术：
辅酶Qu) (Coenzyme Qh)筒称CoQh))是一种代谢激活剂，能激活细胞呼吸，加速产生三 磷酸腺苷(ATP),并起到解毒急救作用；可改变细胞和组织的缺氧状态，对肝、脑、心脏及 神经系统均有较好的保护和改善作用；它还有增强体内的非特异性免疫力。辅酶Qw是细胞 自身产生的天然抗氧剂，能抑制线粒体的过氧化，保护生物膜结构的完整性，对免疫力有非 常特殊的增强作用，能提高吞噬细胞的吞噬率，增强抗体的产生，改善T细胞功能，其结构 如下
辅酶Cho的制备方法主要分为3种生物提取法、微生物发酵法和化学合成法。生物提取法
是最传统的生产工艺，该方法生产的是侧链双键几何构型全反式的天然产品，易被人体吸收，
产品纯度较高，质量较好；但是由于生物体内辅酶Qu)含量低，各种化学成分复杂，并受原 料来源限制，因此该方法生产成本高、产品价格昂贵，规模化生产受到限制，在现代工业生 产上己被逐渐淘汰。现阶段辅酶Q1()的制备基本采用茄尼醇半合成法以及微生物发酵法。但 是半合成法和微生物发酵法在后期提纯、开发高精度分离装置与技术等方面尚存在一些问题。

发明内容
本发明的目的是提供一种辅酶Cho清洁纯化工艺，该工艺操作简单，成本低廉，得到的 辅酶Qw纯度高、质量好，具有显著的经济效益，适合大规模推广应用。
本发明的辅酶Ch()清洁纯化工艺将辅酶Qu)用有机溶剂溶解，应用高效液相制备柱或中
压硅胶填充柱或大孔树脂柱，以洗脱剂洗脱，根据谱图或薄层色谱法分析，分段收集，获得
高纯度的辅酶Qu)产 品。
本发明的显著优点是本发明的工艺操作简单，成本低廉，得到的辅酶Qu)纯度高，最
高纯度可达99.5%、质量好，具有显著的经济效益，适合大规模推广应用。


图1是含量99.5%辅酶Qk)HPLC谱图
具体实施例方式
辅酶Qu)用有机溶剂溶解，应用高效液相制备柱或中压硅胶填充柱或大孔树脂柱，以洗
脱剂洗脱，根据谱图或薄层色谱法分析，分段收集，获得高纯度的辅酶QK)产品。 采用的辅酶Qu)原料纯度为30% 85%。
所述有机溶剂为氯仿、丙酮、苯、正己垸或石油醚中的一种，溶解至完全即可。 所述洗脱剂为乙酸酯和氯仿或石油醚或正己垸的混合溶液；混合溶液洗脱剂中乙酸酯与氯仿 或石油醚或正己烷的体积比为1 : 5 25，所述乙酸酯为乙酸甲酯或乙酸乙酯；洗脱剂洗脱速 度根据谱图或薄层色谱法分析，先快后慢，检测到辅酶Che成份后洗脱速度放慢，洗脱至检 测无辅酶Qu)成份后结束。
所述高效液相制备柱的树脂或中压硅胶填充柱或大孔树脂柱的硅胶与辅酶Q^质量比为 5 20 : 1。
所述装柱的硅胶经200 30(TC高温活化后重复使用10 200次。 所述的薄层色谱法采用的展开剂为苯、甲醇、乙醇、氯仿或石油醚中的一种或几种。 所述高纯度的辅酶Qn)产品进一步重结晶纯化成更高纯度的产品；所述重结晶所用溶剂 是甲醇、乙醇、丙三醇、丙酮或乙醚中的一种或几种的混合液。 以下是本发明的几个具体实施例，进一步说明本发明，但是本发明不仅限于此。
实施例1
取10g含量85^辅酶Qu)，用正己垸溶解完全后，过高效液相制备柱，采用体积比15 : 1 的正己烷一乙酸乙酯混合溶液作为洗脱剂，根据谱图分段收集，开始流速为10ml/min，至检 测有辅酶Qu)成份后，流速控制为5ml/min，浓度高的浓縮后得到高纯度辅酶Q1Q，最高纯度 可达99.5%。
实施例2
采用纯度为约30%的辅酶Qu)10g，用适量氯仿溶解完全，采用体积比5 : 1的氯仿一乙 酸乙酯混合溶液作为洗脱剂，采用ift效液相制备柱，根据谱图分段收集，浓縮后得到高纯度 辅酶QK)，使用丙酮或乙醚重结晶，最高纯度可达98.7%。纯度不足的辅酶Qu) (85-98%)采 用甲醇、乙醇或乙醚溶解后，于低温重结晶。
实施例3采用纯度为30X的辅酶Qujl0g,用石油醚溶解完全，采用体积比25 : 1的石油醚一乙酸 乙酯混合溶液作为洗脱剂，采用大孔树脂柱，其中大孔树脂与辅酶Qu)质量比为20:1，根 据薄层色谱法分段收集，浓缩后得到高纯度辅酶QK)，使用甲醇或乙醇或乙醚重结晶，最高纯 度可达99%以上。
实施例4
取10g含量约30X辅酶Qu)，用正己垸溶解完全后，采用硅胶填柱，硅胶用量80g，采用 体积比20: 1的正己烷一乙酸乙酯混合溶液作为洗脱剂，采用薄层色谱法检测，进行分段收 集，浓縮后得到高纯度辅酶Qu)，最高纯度可达99.2%。
实施例5
采用纯度为30X的辅酶Qu)10g，用石油醚溶解完全，采用体积比25 : 1的石油醚一乙酸 乙酯混合溶液作为洗脱剂，采用中压硅胶填充柱，其中硅胶与辅酶Qn)质量比为10:1，根 据薄层色谱法分段收集，浓縮后得到高纯度辅酶Qu)，最高纯度可达98.5%以上。
所述装柱的硅胶经200 300'C高温活化后重复使用10 200次。
权利要求
1. 一种辅酶Q10清洁纯化工艺，其特征在于将辅酶Q10用有机溶剂溶解，应用高效液相制备柱或中压硅胶填充柱或大孔树脂柱，以洗脱剂洗脱，根据谱图或薄层色谱法分析，分段收集，获得高纯度的辅酶Q10产品。
2. 根据权利要求l所述的辅酶Qu)清洁纯化工艺，其特征在于所述采用的辅酶Qu)原料纯 度为30% 85%。
3. 根据权利要求1所述的辅酶Qn)清洁纯化工艺，其特征在于所述有机溶剂为氯仿、丙酮、 苯、正己垸或石油醚中的一种，溶解至完全即可。
4. 根据权利要求1所述的辅酶QH)清洁纯化工艺，其特征在于所述洗脱剂为乙酸酯和氯仿 或石油醚或正己烷的混合溶液。
5. 根据权利要求4所述的辅酶Qu)清洁纯化工艺，其特征在于所述混合溶液洗脱剂中乙酸 酯与氯仿或石油醚或正己烷的体积比为1 : 5 25，所述乙酸酯为乙酸甲酯或乙酸乙酯。
6. 根据权利要求4所述的辅酶Q^清洁纯化工艺，其特征在于所述洗脱剂洗脱速度根据谱 图或薄层色谱法分析，先快后慢，检测到辅酶Qw成份后洗脱速度放慢，洗脱至检测无辅 酶Qu)成份后结束。
7. 根据权利要求1所述的辅酶Qu)清洁纯化工艺，其特征在于所述高效液相制备柱的树脂 或中压硅胶填充柱或大孔树脂柱的硅胶与辅酶Qu)质量比为5 20: 1。
8. 根据权利要求6所述的辅酶Qio清洁纯化工艺，其特征在于所述装柱的硅胶经200 300 'C高温活化后重复使用10 200次。
9. 根据权利要求1所述的辅酶Cho清洁纯化工艺，其特征在于所述的薄层色谱法采用的展 开剂为苯、甲醇、乙醇、氯仿或石油醚中的一种或几种。
10. 根据权利要求1所述的辅酶QK)清洁纯化工艺，其特征在于所述高纯度的辅酶Qu)产品 进一步重结晶纯化成更高纯度的产品；所述重结晶所用溶剂是甲醇、乙醇、丙三醇、丙酮或乙醚中的一种或几种的混合液。
全文摘要
本发明提供一种辅酶Q₁₀清洁纯化工艺将辅酶Q₁₀用有机溶剂溶解，应用高效液相制备柱或中压硅胶填充柱，以洗脱剂洗脱，分段收集，获得高纯度的辅酶Q₁₀产品。本发明的工艺操作简单，成本低廉，得到的辅酶Q₁₀纯度高，最高纯度可达99.5％、质量好，具有显著的经济效益，适合大规模推广应用，产品可以经进一步溶解制备成优质美容抗氧化衰老产品。
文档编号C07C43/00GK101445435SQ20081007211
公开日2009年6月3日 申请日期2008年11月13日 优先权日2008年11月13日
发明者敏 赵, 陈燕梅 申请人:三明华健生物工程有限公司