联苯衍生物的制作方法

专利名称：联苯衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及适用于治疗肺病的新的联苯衍生物。本发明也涉及包含这类联苯衍生物的药物组合物，制备这类联苯衍生物的方法和中间体，以及应用这类联苯衍生物治疗肺病的方法。

背景技术：
通常用支气管扩张剂治疗肺病，例如哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)。广泛应用的一类支气管扩张剂由β2肾上腺素能受体(肾上腺素受体)激动剂，例如沙丁胺醇、福莫特罗和沙美特罗组成。这些化合物通常通过吸入给药。另一类支气管扩张剂由毒蕈碱受体拮抗剂(抗胆碱能化合物)，例如ipratropium和tiotropium组成。这些化合物通常也通过吸入给药。
用于治疗肺病的包含β2肾上腺素能受体激动剂和毒蕈碱受体拮抗剂两者的药物组合物在本领域中也是已知的。例如，美国专利No.6433027公开了包含毒蕈碱受体拮抗剂例如噻托溴铵以及β2肾上腺素能受体激动剂例如富马酸福莫特罗的药物组合物。
虽然具有β2肾上腺素能受体激动剂或毒蕈碱受体拮抗剂活性的化合物是已知的，但是先前未公开具有β2肾上腺素能受体激动剂和毒蕈碱受体拮抗剂两种活性的化合物。拥有β2肾上腺素能受体激动剂和毒蕈碱受体拮抗剂两种活性的化合物是极为合乎需要的，因为这类双功能化合物能够通过两种独立的作用模式提供支气管扩张，而只具有单一的分子药物动力学。
发明概述 本发明提供适用于治疗肺病的新的联苯衍生物。除了其它的性质以外，本发明化合物已经被发现拥有β2肾上腺素能受体激动剂和毒蕈碱受体拮抗剂两种活性。
因此，在它的组合物的方面之一，本发明涉及式I化合物
其中 a是0或1-3的整数； R1每个独立地选自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)环烷基、氰基、卤素、-OR1a、-C(O)OR1b、-SR1c、-S(O)R1d、-S(O)2R1e和NR1fR1g； R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g每个独立地是氢、(1-4C)烷基或苯基-(1-4C)烷基； b是0或1-3的整数； R2每个独立地选自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)环烷基、氰基、卤素、-OR2a、-C(O)OR2b、-SR2c、-S(O)R2d、-S(O)2R2e和-NR2fR2g； R2a、R2b、R2c、R2d、R2e、R2f和R2g每个独立地是氢、(1-4C)烷基或苯基-(1-4C)烷基； W与相对于哌啶环中氮原子的3-或4-位相连并且代表O或NWa； Wa是氢或(1-4C)烷基； C是0或1-4的整数； R3每个独立地选自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)环烷基、氰基、卤素、-OR3a、-C(O)OR3b、-SR3c、-S(O)R3d、-S(O)2R3e和-NR3fR3g；或两个R3基团结合以形成(1-3C)亚烷基、(2-3C)亚烯基或环氧乙烷-2、3-二基； R3a、R3b、R3C、R3d、R3e、R3f和R3g独立地是氢或(1-4C)烷基； R4是下式的二价基团-(R4a)d-(A1)e-(R4b)f-Q-(R4c)g-(A2)h-(R4d)i- 其中 d、e、f、g、h和i各自独立地选自0和1； R4a、R4b、R4c和R4d各自独立地选自(1-10C)亚烷基、(2-10C)亚烯基和(2-10C)亚炔基，其中每个亚烷基、亚烯基或亚炔基基团是未取代的或被独立地选自(1-4C)烷基、氟、羟基、苯基和苯基-(1-4C)烷基的1-5个取代基取代； A1和A2各自独立地选自(3-7C)亚环烷基、(6-10C)亚芳基、-O-(6-10C)亚芳基、(6-10C)亚芳基-O-、(2-9C)亚杂芳基、-O-(2-9C)亚杂芳基、(2-9C)亚杂芳基-O-和(3-6C)亚杂环基，其中每个亚环烷基是未取代的或被独立地选自(1-4C)烷基的1-4个取代基取代，并且每个亚芳基、亚杂芳基或亚杂环基基团是未取代的或被独立地选自卤素、(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基、-S-(1-4C)烷基、-S(O)-(1-4C)烷基、-S(O)2-(1-4C)烷基、-C(O)O(1-4C)烷基、羧基、氰基、羟基、硝基、三氟甲基和三氟甲氧基的1-4个取代基取代； Q选自键、-O-、-C(O)O-、-OC(O)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-N(Qa)C(O)-、-C(O)N(Qb)-、-N(Qc)S(O)2-、-S(O)2N(Qd)-、-N(Qe)C(O)N(Qf)-、-N(Qg)S(O)2N(Qh)-、-OC(O)N(Qi)-、-N(Qj)C(O)O-和-N(Qk)； Qa、Qb、Qc、Qd、Qe、Qf、Qg、Qh、Qi、Qj和Qk各自独立地选自氢、(1-6C)烷基、A3和(1-4C)亚烷基-A4，其中烷基基团是未取代的或被独立地选自氟、羟基和(1-4C)烷氧基的1-3个取代基取代；或者与它们连接的氮原子和基团R4b或R4c一起形成4-6元的亚氮杂环烷基基团； A3和A4各自独立地选自(3-6C)环烷基、(6-10C)芳基、(2-9C)杂芳基和(3-6C)杂环基，其中每个环烷基是未取代的或者被独立地选自(1-4C)烷基的1-4个取代基取代，并且每个芳基、杂芳基或杂环基基团是未取代的或者被独立地选自卤素、(1-4C)烷基和(1-4C)烷氧基的1-4个取代基取代； 条件是R4连接的两个氮原子之间的最短链上的邻接原子数目在4-16范围内； R5代表氢或(1-4C)烷基； R6是-NR6aCR6b(O)或-CR6CR6dOR6e且R7是氢；或者R6和R7一起形成-NR7aC(O)-CR7b＝CR7c-、-CR7d＝CR7e-C(O)-NR7f-、-NR7gC(O)-CR7hR7i-CR7jR7k-或-CR7lR7m-CR7nR7o-C(O)-NR7p-； R6a、R6b、R6C、R6d和R6e每个独立地是氢或(1-4C)烷基；并且 R7a、R7b、R7c、R7d、R7e、R7f、R7g、R7h、R7i、R7j、R7k、R7l、R7m、R7n、R7o和R7p每个独立地是氢或(1-4C)烷基； 或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
在它的组合物方面的另一方面，本发明涉及式II化合物
其中 R4如本文所定义(包括任何特定或优选的实施方案)； W代表O或NH； 或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
在它的组合物方面的还另一方面，本发明涉及式III化合物
其中 R4如本文所定义(包括任何特定或优选的实施方案)； W代表O或NH； 或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
在它的组合物方面的还另一方面，本发明涉及式IV化合物
其中 R4如本文所定义(包括任何特定或优选的实施方案)； W代表O或NH； 或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
在它的组合物方面的另一方面，本发明涉及包含药学上可接受的载体和治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体的药物组合物。这类药物组合物可以任选地包含其它治疗剂。因此，在一个实施方案中，本发明涉及这样一种药物组合物，其中该组合物进一步包含治疗有效量的甾体抗炎药，例如皮质类固醇。
本发明化合物拥有β2肾上腺素能受体激动剂和毒蕈碱受体拮抗剂两种活性。因此，式I化合物适用于治疗肺病，例如哮喘和慢性阻塞性肺病。
因此，在它的方法方面之一，本发明涉及治疗肺病的方法，该方法包括给予需要治疗的患者治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
此外，在它的方法方面的另一方面，本发明涉及在患者中提供支气管扩张的方法，该方法包括给予需要支气管扩张的患者治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
本发明也涉及治疗慢性阻塞性肺病或哮喘的方法，该方法包括给予需要治疗的患者治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
因为本发明化合物拥有β2肾上腺素能受体激动剂和毒蕈碱受体拮抗剂两种活性，所以这类化合物也适用作研究工具。因此，在它的方法方面的还另一个方面，本发明涉及应用式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体作为研究工具来研究生物系统或样本，或者来发现具有β2肾上腺素能激动剂和毒蕈碱受体拮抗剂两种活性的新化学化合物的方法。
本发明也涉及适用于制备式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体的方法和新的中间体。因此，在它的方法方面的另一方面，本发明涉及制备式I化合物的方法，该方法包括 (a)使式1化合物或其盐与式2化合物反应； (b)使式3化合物或其盐与式4化合物反应； (c)使式5化合物与式6化合物偶联； (d)对于其中R5代表氢原子的式I化合物，在还原剂存在下，使式3化合物与式7化合物或其水合物反应； (e)在还原剂存在下，使式1化合物与式8化合物或其水合物反应； (f)使式9化合物与式10化合物反应；或者 (g)在还原剂存在下，使式11化合物或其水合物与式10化合物反应； 然后除去任何保护基团以形成式I化合物；其中式1-11的化合物如本文所定义。
在一个实施方案中，上述方法进一步包括形成式I化合物的药学上可接受的盐的步骤。在另一个实施方案中，本发明涉及本文描述的其它方法；并涉及通过本文描述的任何方法制备的产品。
本发明也涉及式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体，用于治疗或用作药物。
此外，本发明涉及式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体用于制备药物的用途；特别是用于制备用于治疗肺病的药物。
发明详述 在它的组合物方面之一，本发明涉及式I的新的联苯衍生物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。这些化合物包含一个或多个手性中心，因此除非另外指出，本发明涉及外消旋混合物；纯立体异构体(即对映异构体或非对映异构体)；富含立体异构体的混合物等。除非另外指出，当本文展示或命名特定立体异构体时，本领域技术人员将理解少量的其它立体异构体可以存在于本发明的组合物中，条件是组合物作为整体的有用性不被这类其它异构体的存在消除。
特别地，式I化合物在下式中由符号*指出的碳原子处包含手性中心
在本发明的一个实施方案中，由符号*指定的碳原子具有(R)构型。在这一实施方案中，优选式I化合物在符号*指定的碳原子具有(R)构型或者富集呈在这一碳原子具有(R)构型的立体异构体形式。在本发明的另一实施方案中，符号*指定的碳原子具有(S)构型。在这一实施方案中，优选式I化合物在符号*指定的碳原子具有(S)构型或者富集呈在这一碳原子具有(S)构型的立体异构体形式。在一些情况下，为了优化本发明化合物的β2肾上腺素能激动剂活性，优选符号*指定的碳原子具有(R)构型。
式I化合物也包含多个碱性基团(例如氨基基团)，因此式I化合物可以作为游离碱或以各种盐形式存在。所有这类盐形式都包括在本发明范围内。此外，式I化合物的溶剂化物或其盐包括在本发明的范围内。
此外，除非另外指出，当可适用时，式I化合物的所有顺-反或E/Z异构体(几何异构体)、互变异构形式和拓扑异构形式包括在本发明的范围内。
本文采用的用以命名本发明化合物及其中间体的命名法一般是利用商业上可购得的AutoNom软件(MDL，San Leandro，California)派生的。通常，其中W是O的式I化合物被命名为联苯-2-基氨基甲酸的酯衍生物；并且其中W是NWa的式I化合物被命名作为脲衍生物。
代表性实施方案 下述取代基和值是为了提供本发明各方面和实施方案的有代表性的例子。这些有代表性的值是为了进一步定义和说明这些方面和实施方案，并不是为了排除其它实施方案或限制本发明的范围。在这一方面，除非具体指出，优选特定值或取代基的表述不是为了以任何方式从本发明排除其它值或取代基。
在式I化合物的特定实施方案中，a和b独立地是0、1或2；包括0或1。在一个实施方案中，a和b都是0。
当存在时，R1每一个可以在与其相连的苯环的2、3、4、5或6-位。在一个实施方案中，R1每一个独立地选自(1-4C)烷基、卤素、-OR1a和-NR1fR1g；例如甲基、氟、氯、溴、羟基、甲氧基、氨基、甲基氨基、二甲基氨基等。R1的特定值是氟或氯。
当存在时，R2每一个可以在与其相连的亚苯基的3、4、5或6-位(与氮原子连接的在亚苯环上的碳原子是位置1)。在一个实施方案中，R2每一个独立地选自(1-4C)烷基、卤素、-OR2a和-NR2fR2g；例如甲基、氟、氯、溴、羟基、甲氧基、氨基、甲基氨基、二甲基氨基等。R2的特定值是氟或氯。
R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g和R2a、R2b、R2c、R2d、R2e、R2f和R2g每一个当分别在R1和R2中使用时，独立地是氢、(1-4C)烷基或苯基-(1-4C)烷基；例如氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基或苄基。在一个实施方案中，这些基团独立地是氢或(1-3C)烷基。在另一实施方案中，这些基团独立地是氢、甲基或乙基。
在本发明的一个实施方案中，W是O。在另一个实施方案中，W是NWa。
总的来说，已经发现其中W代表O的化合物对于毒蕈碱和β2肾上腺素能受体显示尤其高的亲和性。因此，在本发明的特定实施方案中，W优选代表O。
当提及W时，可以特别提及其中W在相对于哌啶环氮原子的4-位与哌啶环连接的化合物。
当W是NWa时，Wa是氢或(1-4C)烷基；例如氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。在一个实施方案中，Wa是氢或(1-3C)烷基。在另一个实施方案中，Wa是氢、甲基或乙基；例如氢或甲基。在另一个实施方案中，Wa是氢且NWa是NH。
在式I化合物的特定实施方案中，c是0、1或2；包括0或1。在一个实施方案中，c是0。
在一个实施方案中，每个R3在哌啶环的3、4或5-位(其中哌啶环的氮原子是1位)。在另一个实施方案中，R3在哌啶环的4-位。在这些实施方案的特定方面，每个R3独立地选自(1-4C)烷基；例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。在另一方面，每个R3独立地是甲基或乙基。
在另一个实施方案中，R3在哌啶环的1-位，即在哌啶环的氮原子上，因此形成季铵盐。在这一实施方案的一个特定方面，每个R3独立地选自(1-4C)烷基；例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。在另一方面，每个R3独立地是甲基或乙基。
在还另一个实施方案中，两个R3基团结合以形成(1-3C)亚烷基或(2-3C)亚烯基基团。例如，在哌啶环上2和6-位的两个R3基团能够结合以形成亚乙基桥(即哌啶环和R3基团形成8-氮杂双环[3.2.1]辛烷环)；或者在哌啶环上1和4-位的两个R3基团能够结合以形成亚乙基桥(即哌啶环和R3基团形成1-氮杂双环[2.2.2]辛烷环)。在这一实施方案中，也可以存在如本文所定义的其它R3基团。
在还另一个实施方案中，两个R3基团结合以形成环氧乙烷-2，3-二基基团。例如，在哌啶环上2和6-位的两个R3基团能够结合以形成3-氧杂三环[3.3.1.02，4]壬烷环)。在这一实施方案中，也可以存在如本文所定义的其它R3基团。
R3a、R3b、R3c、R3d、R3e、R3f和R3g每一个当在R3中使用时独立地是氢或(1-4C)烷基；例如氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。在一个实施方案中，这些基团独立地是氢或(1-3C)烷基。在另一个实施方案中，这些基团独立地是氢、甲基或乙基。
在式I化合物的一个实施方案中，R5是氢或(1-4C)烷基；例如氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。在另一个实施方案中，每个R5独立地是氢、甲基或乙基。在特定实施方案中，R5是氢。
在本发明的一个实施方案中，R6是-NR6aCR6b(O)且R7是氢，其中R6a和R6b每一个独立地是氢或(1-4C)烷基，例如氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。在一个实施方案中，这些基团独立地是氢或(1-3C)烷基。在另一个实施方案中，这些基团独立地是氢、甲基或乙基。在这一实施方案中，R6的特定值是-NHCHO。
在另一个实施方案中，R6和R7一起形成-NR7aC(O)-CR7b＝CR7c-、-CR7d＝CR7e-C(O)-NR7f-、-NR7gC(O)-CR7hR7i-CR7jR7k-或-CR7lR7m-CR7nR7o-C(O)-NR7p-；其中R7a、R7b、R7c、R7d、R7e、R7f、R7g、R7h、R7i、R7j、R7k、R7l、R7m、R7n、R7o和R7P每一个独立地是氢或(1-4C)烷基；例如氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。在一个实施方案中，这些基团独立地是氢或(1-3C)烷基。在另一个实施方案中，这些基团独立地是氢、甲基或乙基。在这一实施方案中，R6和R7的特定值是R6和R7一起形成-NHC(O)-CH＝CH-、-CH＝CH-C(O)-NH-、-CH2-CH2-C(O)NH-或-NHC(O)-CH2-CH2-；包括其中R6和R7一起形成-NHC(O)-CH＝CH-或-CH＝CH-C(O)-NH-；和特别地，其中R6和R7一起形成-NHC(O)-CH＝CH-(即氮原子连接在R6且碳原子连接在R7，与R6和R7连接的羟基苯环一起形成8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基基团)。
在式I化合物中，R4是下式的二价基团-(R4a)d-(A1)e-(R4b)f-Q-(R4c)g-(A2)h-(R4d)i- 其中R4a、A1、R4b、Q、R4c、A2、R4d、d、e、f、g、h和i是如本文所定义。在本发明的化合物中，选择组分R4a、A1、R4b、Q、R4c、A2和R4d每一个的值，这样在与R4相连的两个氮原子之间最短链上相邻原子的数目是在4-16范围内，(特别地，4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16)；包括8、9、10、11、12、13或14；例如8、9、10或11；或9或10。当为R4中的每个变量选择值时，本领域技术人员将理解应该选择值使得形成化学稳定基团。
当测定与R4连接的两个氮原子之间最短链上邻接原子的数目时，从邻近哌啶环的氮的R4基团的第一个原子开始，到邻近氨基羟乙基基团的氮的R4基团上的最后一个原子结束，连续地计数链上的每个邻接原子。当两个或更多个链是可能时，使用最短链测定邻接原子的数目。如下所示，例如，当R4是-(CH2)2-NHC(O)-CH2-(苯-1，4-亚基)-CH2-时，如下所示从邻近哌啶环的氮的R4基团中的第一个原子开始，到邻近氨基羟乙基基团的氮的R4基团中的最后一个原子结束，在连续计数的最短链上有10个邻接原子
在R4的一个实施方案中，R4a选自(1-10C)亚烷基、(2-10C)亚烯基和(2-10C)亚炔基，其中亚烷基基团是未取代的或被独立地选自(1-4C)烷基、羟基和苯基的1或2个取代基取代。R4a特定值的有代表性的例子是-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-(CH2)5-、-(CH2)6-、-(CH2)7-、-(CH2)8-、-(CH2)9-、-(CH2)10-、-(CH2)CH(CH3)-、-(CH2)C(CH3)2-和-(CH2)2C(苯基)2-。在另一方面，R4a是-(CH2)C(＝CH2)-。
在一个实施方案中，d是1。
在一个实施方案中，A1是任选地取代的(3-7C)亚环烷基基团；包括亚环己基基团，例如环己-1，4-亚基和环己-1，3-亚基；和亚环戊基基团，例如环戊-1，3-亚基。
在另一个实施方案中，A1是任选地取代的(6-10C)亚芳基基团，包括亚苯基基团，例如苯-1，4-亚基、苯-1，3-亚基和苯-1，2-亚基；和亚萘基基团，例如萘-1，4-亚基和萘-1，5-亚基。
在本发明的另一个实施方案中，A1任选地是取代的(2-9C)亚杂芳基基团，包括亚吡啶基基团，例如吡啶-1，4-亚基；亚呋喃基基团，例如呋喃-2，5-亚基和呋喃-2，4-亚基；亚噻吩基基团，例如噻吩-2，5-亚基和噻吩-2，4-亚基；和亚吡咯基，例如吡咯-2，5-亚基和吡咯-2，4-亚基。
在另一个实施方案中，A1是任选地取代的(3-6C)亚杂环基基团，包括亚哌啶基基团，例如哌啶-1，4-亚基；和亚吡咯烷基基团，例如吡咯烷-2，5-亚基。
在特定实施方案中，A1是任选地取代的亚苯基、亚噻吩基、亚环戊基、亚环己基或亚哌啶基。
在一个实施方案中，e是0。
在特定实施方案中，R4b是(1-5C)亚烷基。R4b的特定值的有代表性的例子是-CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-(CH2)5-；包括亚甲基、亚乙基和亚丙基。
在一个实施方案中，f是0。
在一个特定实施方案中，Q选自键、-N(Qa)C(O)-、-C(O)N(Qb)-、-N(Qc)S(O)2-、-S(O)2N(Qd)-、-N(Qe)C(O)N(Qf)-、-OC(O)N(Qi)-、-N(Qj)C(O)O-或-N(Qk)；例如其中Q是键、-N(Qa)C(O)-或-C(O)N(Qb)-。Q的特定值的有代表性的例子是键、O、NH、-C(O)NH-、-C(O)N(CH3)-、-NHC(O)-、-N(CH3)C(O)-、-S(O)2NH-、-S(O)2N(CH3)-、-NHS(O)2-、-N(CH3)S(O)2-和-NHC(O)NH-。Q的值的另一个例子是与R4c一起是-C(O)(哌啶-1，4-亚基)。
在一个实施方案中，Qa、Qb、Qc、Qd、Qe、Qf、Qg、Qh、Qi、Qj和Qk各自独立地选自氢和(1-6C)烷基，其中烷基基团是取代的或被独立地选自氟、羟基和(1-4C)烷氧基的1-3个取代基取代。例如，Qa、Qb、Qc、Qd、Qe、Qf、Qg、Qh、Qi、Qj和Qk各自独立地选自氢，和(1-3C)烷基，包括氢、甲基、乙基、正丙基和异丙基。Qa、Qb、Qc、Qd、Qe、Qf、Qg、Qh、Qi、Qj和Qk每一个的值的例子是氢。
在另一个实施方案中，Qa、Qb、Qc、Qd、Qe、Qf、Qg、Qh、Qi、Qj和Qk与它们连接的氮原子和R4b或R4c一起形成4-6元的亚氮杂环烷基基团。例如，Qa和Qb与它们连接的氮原子和R4b或R4c一起形成哌啶-4-亚基基团。经由说明，当Q代表-N(Qa)C(O)-且Qa和它连接的氮原子以及基团R4b一起形成哌啶-4-亚基基团时，R4是下式的基团
类似地，当Q代表-C(O)N(Qb)-且Qb与它连接的氮原子和基团R4c一起形成哌啶-4-亚基时，R4是下式的基团
在一个特定实施方案中，R4c是(1-5C)亚烷基。R4的特定值的有代表性的例子是-CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-(CH2)5-；包括亚甲基、亚乙基和亚丙基。
在一个实施方案中，A2是任选地取代的(3-7C)亚环烷基基团；包括亚环己基基团，例如环己-1，4-亚基和环己-1，3-亚基；和亚环戊基基团，例如环戊1，3-亚基。
在另一个实施方案中，A2是任选地取代的(6-10C)亚芳基基团，包括亚苯基基团，例如苯-1，4-亚基、苯-1，3-亚基和苯-1，2-亚基；和亚萘基基团，例如萘-1，4-亚基和萘-1，5-亚基。
在另一个实施方案中，A2任选地是取代的(2-9C)亚杂芳基基团，包括亚吡啶基基团，例如吡啶-1，4-亚基；亚呋喃基基团，例如呋喃-2，5-亚基和呋喃-2，4-亚基；亚噻吩基基团，例如噻吩-2，5-亚基和噻吩-2，4-亚基；和亚吡咯基，例如吡咯-2，5-亚基和吡咯-2，4-亚基。
在还另一个实施方案中，A2是任选地取代的(3-6C)亚杂环基基团，包括亚哌啶基基团，例如哌啶-1，4-亚基；和亚吡咯烷基基团，例如吡咯烷-2，5-亚基。
在特定实施方案中，A2是任选地取代的亚苯基、亚噻吩基、亚环戊基、亚环己基或亚哌啶基。
经由说明，A1或A2每一个或两者可以是亚苯基，例如苯-1，4-亚基或苯-1，3-亚基，其中亚苯基基团是未取代的或被独立地选自卤素、(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基、-S-(1-4C)烷基、-S(O)-(1-4C)烷基、-S(O)2-(1-4C)烷基、-C(O)O(1-4C)烷基、羧基、氰基、羟基、硝基、三氟甲基和三氟甲氧基的1-4个取代基取代。有代表性的例子包括苯-1，3-亚基、苯-1，4-亚基、4-氯-苯-1，3-亚基、6-氯-苯-1，3-亚基、4-甲基-苯-1，3-亚基、2-氟-苯-1，4-亚基、2-氯-苯-1，4-亚基、2-溴-苯-1，4-亚基、2-碘-苯-1，4-亚基、2-甲基苯-1，4-亚基、2-甲氧基苯-1，4-亚基、2-三氟甲氧基苯-1，4-亚基、3-硝基苯-1，4-亚基、3-氯苯-1，4-亚基、2，5-二氟苯-1，4-亚基、2，6-二氯苯-1，4-亚基、2，6-二碘-苯1，4-亚基、2-氯-6-甲基苯-1，4-亚基、2-氯-5-甲氧基-苯1，4-亚基、2，3，5，6-四氟苯-1，4-亚基。
或者，A1或A2或两者可以是亚环戊基或亚环己基；其中亚环戊基或亚环己基基团是未取代的或被(1-4C)烷基取代。有代表性的例子包括顺-环戊-1，3-亚基、反-环戊-1，3-亚基、顺-环己-1，4-亚基和反-亚环己-1，4-基。A1或A2或两者也可以是任选地取代的亚噻吩基或亚哌啶基，例如，噻吩-2，5-亚基或哌啶-1，4-亚基。
在一个实施方案中，R4d选自(1-10C)亚烷基、(2-10C)亚烯基和(2-10C)亚炔基，其中亚烷基是未取代的或被独立地选自(1-4C)烷基、羟基和苯基的1或2个取代基取代。R4d的特定值的有代表性的例子是-(CH2)-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-(CH2)5-、-(CH2)6-、-(CH2)7-、-(CH2)8-、-(CH2)9-、-(CH2)10-和-(CH2)CH(CH3)-(CH2)-C(CH3)2-(CH2)2-。
在一个特定实施方案中，R4是下式的二价基团-(R4a)d-其中R4a是(4-10C)亚烷基。在这一实施方案的一个方面，R4是下式的二价基团-(CH2)j-，其中j是8、9或10。在这一实施方案中R4的特定值的例子是-(CH2)4-、-(CH2)5-、-(CH2)6-、-(CH2)7-、-(CH2)8-、-(CH2)9-和-(CH2)10-；包括--(CH2)8-、-(CH2)9-和-(CH2)10-。
在另一个特别的实施方案中，R4是下式的二价基团 -(R4a)d-(A2)h-(R4d)i- 其中R4a是(1-10C)亚烷基，例如-(CH2)-、-(CH2)2-、-(CH2)3-；A2是(6-10C)亚芳基，例如苯-1，4-亚基或苯-1，3-亚基，或(2-9C)亚杂芳基，例如噻吩-2，5-亚基或噻吩-2，4-亚基；和R4d是(1-10C)亚烷基，例如-(CH2)-、-(CH2)2-、-(CH2)3-。在这一实施方案中R4的特定值的例子是-(CH2)-(苯-1，4-亚基)-(CH2)-；-(CH2)-(苯-1，4-亚基)-(CH2)2-；-(CH2)-(苯-1，4-亚基)-(CH2)3-；-(CH2)2-(苯-1，4-亚基)-(CH2)-；-(CH2)2-(苯-1，4-亚基)-(CH2)2-；-(CH2)2-(苯-1，4-亚基)-(CH2)3-；-(CH2)3-(苯-1，4-亚基)-(CH2)-；-(CH2)3-(苯-1，4-亚基)-(CH2)2-；-(CH2)3-(苯-1，4-亚基)-(CH2)3-，-(CH2)4-(苯-1，4-亚基)-(CH2)-；-(CH2)4-(苯-1，4-亚基)-(CH2)2-和-(CH2)4-(苯-1，4-亚基)-(CH2)3-。
在还另一个特别的实施方案中，R4是下式的二价基团-(R4a)d-Q-(A2)h-(R4d)i- 其中Q是-O-或-N(Qk)-；Qk是氢或(1-3C)烷基，例如甲基或乙基；R4a是(1-10C)亚烷基，例如-(CH2)-、-(CH2)2-、-(CH2)3-；A2是(6-10C)亚芳基，例如苯-1，4-亚基或苯-1，3-亚基，或(2-9C)亚杂芳基，例如噻吩-2，5-亚基或噻吩-2，4-亚基；和R4d是(1-10C)亚烷基，例如-(CH2)-、-(CH2)2-、-(CH2)3-。在这一实施方案中R4的特定值的例子是-(CH2)2-O-(苯-1，4-亚基)-(CH2)-；-(CH2)2-O-(苯-1，4-亚基)-(CH2)2-；-(CH2)2-O-(苯-1，4-亚基)-(CH2)3-；-(CH2)3-O-(苯-1，4-亚基)-(CH2)-；-(CH2)3-O-(苯-1，4-亚基)-(CH2)2-；-(CH2)3-O-(苯-1，4-亚基)-(CH2)3-；-(CH2)2-NH-(苯-1，4-亚基)-(CH2)-；-(CH2)2-NH-(苯-1，4-亚基)-(CH2)2-；-(CH2)2-NH-(苯-1，4-亚基)-(CH2)3-；-(CH2)3-NH-(苯-1，4-亚基)-(CH2)-；-(CH2)3-NH-(苯-1，4-亚基)-(CH2)2-和-(CH2)3-NH-(苯-1，4-亚基)-(CH2)3-。
在还另一个特别的实施方案中，R4是下式的二价基团-(R4a)d-(A1)e(R4b)-Q-(R4c)g-(A2)h-(R4d)i- 其中Q是-N(Qa)C(O)-或-C(O)N(Qb)-。在这一实施方案中，R4的特别的值是下式
其中m是2-10的整数；且n是2-10的整数；条件是m+n是4-12的整数。在R4的这一式中，d和g是1且e、f、h和i是0；和R4a是-(CH2)m-，R4c是-(CH2)n-和Q是-C(O)NH-。m的特定值是2或3；和n的特定值是4、5或6。
R4的另一个特别的值是下式
其中o是2-7的整数；和p是1-6的整数；条件是o+p是3-8的整数。在R4的这一式中，d、h和i是1且e、f和g是0；和R4a是-(CH2)o-，A2是苯-1，4-亚基，R4d是-(CH2)p-和Q是-C(O)NH-。o的特定值是2或3；和p的特定值是1或2。在这一实施方案中，苯-1，4-亚基基团可以任选地如本文对A2定义的被取代。
R4的另一个特别的值是下式
其中q是2-6的整数；r是1-5的整数；和s是1-5的整数；条件是q+r+s是4-8的整数。在R4的这一式中，d、g、h和i是1且e和f是0；和R4a是-(CH2)q-，R4c是-(CH2)r-，A2是1，4-亚苯基，R4d是-(CH2)s-和Q是-C(O)NH-。q的特定值是2或3；r的特定值是1或2；且s的特定值是1或2。在这一实施方案中，苯-1，4-亚基基团可以任选地如本文对A2定义的被取代。
R4的另一个特别的值是下式
其中t是2-10的整数；和u是2-10的整数；条件是t+u是4-12的整数。在R4的这一式中，d和g是1且e、f、h和i是0；和R4a是-(CH2)t-，R4c是-(CH2)u-和Q是-NHC(O)-。t的特定值是2或3；和u的特定值是4、5或6。
R4的另一个特别的值是下式
其中v是2-7的整数；和w是1-6的整数；条件是v+w是3-8的整数。在R4的这一式中，d、h和i是1和e、f和g是0；和R4a是-(CH2)v-，A2是1，4-亚苯基，R4d是-(CH2)w-和Q是-NHC(O)-。v的特定值是2或3；和w的特定值是1或2。在这一实施方案中，苯-1，4-亚基基团可以任选地如本文对A2定义的被取代。
R4的另一个特别的值是下式
其中x是2-6的整数；y是1-5的整数；和z是1-5的整数；条件是x+y+z是4-8的整数。在R4的这一式中，d、g、h和i是1且e和f是0；和R4a是-(CH2)x-，R4c是-(CH2)y-，A2是1，4-亚苯基，R4d是-(CH2)z-且Q是-NHC(O)-。X的特定值是2或3；y的特定值是1或2；和z的特定值是1或2。在这一实施方案中，苯-1，4-亚基基团可以任选地如本文对A2定义的被取代。
经由进一步说明，R4可以选自 -(CH2)7-； -(CH2)8-； -(CH2)9-； -(CH2)10-； -(CH2)11-； -(CH2)2C(O)NH(CH2)5-； -(CH2)2N(CH3)C(O)(CH2)5-； -(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2NHC(O)(苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2NHC(O)NH(CH2)5-； -(CH2)3NRC(O)NH(CH2)5-； -(CH2)2C(O)NHCH2(环己-1，3-亚基)CH2-； -(CH2)2NHC(O)(环戊-1，3-亚基)-； -(CH2)2NHC(O)NH(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； 1-[-(CH2)2C(O)](哌啶-4-基)(CH2)2-； -(CH2)2NHC(O)(反-环己-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2NHC(O)(顺-环戊-1，3-亚基)-； -(CH2)NH(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； 1-[-(CH2)2NHC(O)](哌啶-4-基)(CH2)2-； -CH2(苯-1，4-亚基)NH(苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NHCH2(苯-1，3-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NHCH2(吡啶-2，6-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(顺-环己-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(反-环己-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2NHC(O)(顺-环戊-1，3-亚基)CH2-； -(CH2)2N(CH3)C(O)(苯-1，3-亚基)CH2-； -(CH2)2N(CH3)C(O)(反-环己-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亚基)C*H(CH3)-((S)-异构体)； -(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亚基)C*H(CH3)-((R)-异构体)； 2-[(S)-(-CH2-](吡咯烷-1-基)C(O)(CH2)4-； 2-[(S)-(-CH2-](吡咯烷-1-基)C(O)(苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(4-氯苯-1，3-亚基)CH2-； -CH2(2-氟苯-1，3-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(4-甲基苯-1，3-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(6-氯苯-1，3-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(2-氯苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(2，6-二氯苯-1，3-亚基)CH2-； -(CH2)2NHC(O)NHCH2(苯-1，3-亚基)CH2-； 4-[-CH2-](哌啶-1-基)C(O)(苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)N(CH2CH3)(苯-1，4-亚基)CH2-； 1-[-(CH2)2NHC(O)](哌啶-4-基)-； -(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； -(CH2)2NHC(O)(噻吩-2，5-亚基)CH2-； -(CH2)2N(CH3)C(O)(3-硝基苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2N(CH3)C(O)(反-环己-1，4-亚基)-； 1-[-CH2-(2-氟苯-1，3-亚基)CH2](哌啶-4-基)-； 5-[-(CH2)2NHC(O)](吡啶-2-基)CH2-； -(CH2)2(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； -(CH2)3(噻吩-2，5-亚基)(CH2)3-； -(CH2)2(苯-1，4-亚基)NH(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； -CH2(苯-1，2-亚基)NH(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； 1-[-CH2(2-氟苯-1，3-亚基)CH2](哌啶-4-基)(CH2)2-； 1-[-CH2(2-氟苯-1，3-亚基)CH2](哌啶-4-基)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(3-氯苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(2-(CF3O-)苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)3(苯-1，3-亚基)NH(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； -(CH2)2S(O)2NH(CH2)5-； -CH2(苯-1，3-亚基)NH(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； -(CH2)2C(O)NH(2-碘苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(2-氯-5-甲氧基苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(2-氯-6-甲基苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(CH2)5-； -(CH2)2N(CH3)S(O)2(苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(2-溴苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)3(苯-1，4-亚基)NH(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； -(CH2)3(苯-1，2-亚基)NH(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； 1-[-CH2(2-氟苯-1，3-亚基)CH2](哌啶-4-基)(CH2)3-； -(CH2)2C(O)NH(2-甲氧基苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)5NH(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； 4-[-(CH2)2-](哌啶-1-基)(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； -(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亚基)CH(CH3)CH2-； -(CH2)2-(反-环己-1，4-亚基)NH(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； -(CH2)2C(O)NH(2-氟苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2(苯-1，3-亚基)NH(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； -(CH2)2C(O)NH(2，5-二氟苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2NHC(O)(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； 1-[-CH2(吡啶-2，6-亚基)CH2](哌啶-4-基)CH2-； -(CH2)3NH(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； -(CH2)2NH(萘-1，4-亚基)(CH2)2-； -(CH2)3O(苯-1，4-亚基)CH2-； 1-[-(CH2)3](哌啶-4-基)CH2-； 4-[-(CH2)2-](哌啶-1-基)C(O)(苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)3(苯-1，4-亚基)NHC(O)(CH2)2-； -(CH2)3O(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； 2-[-(CH2)2](苯并咪唑-5-基)CH2-； -(CH2)2-(反-环己-1，4-亚基)NHC(O)(CH2)2-； -(CH2)2-(反-环己-1，4-亚基)NHC(O)(CH2)4-； -(CH2)2-(反-环己-1，4-亚基)NHC(O)(CH2)5-； 4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(CH2)2-； -(CH2)2NHC(O)NH(苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2N(CH3)(CH2)2(顺-环己-1，4-亚基)-； -(CH2)2C(O)NH(2，3，5，6-四氟苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(2，6-二碘苯-1，4-亚基)CH2-； 4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(CH2)3-； 4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(CH2)4-； 4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(CH2)5-； -(CH2)2C(O)NHCH2(苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2NHC(O)NHCH2(苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(2-甲基苯-1，4-亚基)CH2-； 1-[-(CH2)3O(苯-1，4-亚基)(CH2)2](哌啶-4-基)CH2-； -(CH2)2C(O)NHCH2(苯-1，3-亚基)(CH2)2-； -(CH2)2O(苯-1，3-亚基)CH2-； -(CH2)2N(CH3)C(O)CH2O(苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2N(CH3)C(O)CH2O(苯-1，3-亚基)CH2-； -(CH2)2N(CH3)C(O)(呋喃-2，5-亚基)CH2-； -(CH2)2N(CH3)C(O)(噻吩-2，5-亚基)CH2-； -(CH2)2O(苯-1，4-亚基)OCH2-； -(CH2)2(反-环己-1，4-亚基)NHC(O)(苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2(反-环己-1，4-亚基)NHC(O)CH2O(苯-1，2-亚基)CH2-； -(CH2)2(反-环己-1，4-亚基)NHC(O)CH2O(苯-1，3-亚基)CH2-； -(CH2)2(反-环己-1，4-亚基)NHC(O)CH2O(苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2(反-环己-1，4-亚基)NHC(O)(呋喃-2，5-亚基)CH2-； -(CH2)2(反-环己-1，4-亚基)NHC(O)(噻吩-2，5-亚基)CH2-； 4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)CH2O(苯-1，2-亚基)CH2-； 4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)CH2O(苯-1，3-亚基)CH2-； 4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)CH2O(苯-1，4-亚基)CH2-； 4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(呋喃-2，5-亚基)CH2-； 4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(噻吩-2，5-亚基)CH2-； -(CH2)2(苯-1，4-亚基)NHC(O)(苯-1，3-亚基)CH2-； -(CH2)2(苯-1，4-亚基)NHC(O)(苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2(苯-1，4-亚基)NHC(O)CH2O(苯-1，2-亚基)CH2-； -(CH2)2(苯-1，4-亚基)NHC(O)CH2O(苯-1，3-亚基)CH2-； -(CH2)2(苯-1，4-亚基)NHC(O)CH2O(苯-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2(苯-1，4-亚基)NHC(O)(呋喃-2，5-亚基)CH2-； -(CH2)2(苯-1，4-亚基)NHC(O)(噻吩-2，5-亚基)CH2-； -(CH2)2(反-环己-1，4-亚基)NHC(O)(苯-1，3-亚基)CH2-； -(CH2)3O(苯-1，3-亚基)CH2-； -CH2CH(OH)CH2NH(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； -(CH2)4NH(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； -(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亚基)CH2NHC(O)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亚基)(CH2)2NHC(O)CH2-； -(CH2)2C(O)NHCH2(反-环己-1，4-亚基)CH2-； -(CH2)2NH C(O)(CH2)5-； -(CH2)2O(苯-1，3-亚基)OCH2-； -(CH2)2O(苯-1，2-亚基)OCH2-； -CH2(苯-1，2-亚基)O(苯-1，2-亚基)CH2-； -(CH2)2C(O)NH(CH2)6-； -(CH2)3(苯-1，4-亚基)(CH2)3-； -(CH2)3(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； -(CH2)4(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； -(CH2)3(呋喃-2，5-亚基)(CH2)3-； -(CH2)2N(CH3)C(O)NH(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； 4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)NH(苯-1，4-亚基)(CH2)2-； -(CH2)3(苯-1，3-亚基)(CH2)3-； -(CH2)3(四氢呋喃-2，5-亚基)(CH2)3-；和 -(CH2)2O(苯-1，4-亚基)C(O)(CH2)2-。
有代表性的亚属基团 下述亚属式和基团是为了提供本发明的各方面和实施方案的有代表性的例子，并且除非另外指出，它们不排除其它实施方案或不限制本发明的范围。
一个特定组的式I化合物是在2003年2月14日提交的美国临时申请60/447,843中公开的那些。该组包括式I化合物；其中 a是0或1-3的整数； R1每个独立地选自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)环烷基、氰基、卤素、-OR1a、-C(O)OR1b、SR1c、-S(O)R1d、-S(O)2R1e和-NR1fR1g； R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g每个独立地是氢或(1-4C)烷基； b是0或1-3的整数； R2每个独立地选自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)环烷基、氰基、卤素、-OR2a、-C(O)OR2b、SR2c、-S(O)R2d、-S(O)2R2e和NR2fR2g； R2a、R2b、R2c、R2d、R23、R2f和R2g每个独立地是氢或(1-4C)烷基； W连接至相对于哌啶环上氮原子的3-或4-位，并且代表O或NWa； Wa是氢或(1-4C)烷基； c是0或1-4的整数； R3每一个是在碳上的取代基，独立地选自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)环烷基、氰基、卤素、-OR3a、-C(O)OR3b、SR3c、-S(O)R3d、-S(O)2R3e和NR3fR3g； R3a、R3b、R3c、R3d、R3e、R3f和R3g每个独立地是氢或(1-4C)烷基； R4是下式的二价基团 -(R4a)d-(A1)e-(R4b)f-Q-(R4c)g-(A2)h-(R4d)i- 其中 d、e、f、g、h和i各自独立地选自0和1； R4a、R4b、R4c和R4d各自独立地选自(1-10C)亚烷基、(2-10C)亚烯基和(2-10C)亚炔基，其中每个亚烷基、亚烯基或亚炔基基团是未取代的或被独立地选自(1-4C)烷基、氟、羟基、苯基和苯基(1-4C)-烷基的1-5个取代基取代； A1和A2各自独立地选自(3-7C)亚环烷基、(6-10C)亚芳基、(2-9C)亚杂芳基和(3-6C)亚杂环基；其中每个亚环烷基是未取代的或被独立地选自(1-4C)烷基的1-4个取代基取代且每个亚芳基、亚杂芳基或亚杂环基基团是未取代的或被独立地选自卤素、(1-4C)烷基和(1-4C)烷氧基的1-4个取代基取代； Q是选自键、-O-、-C(O)O、-OC(O)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-N(Qa)C(O)-、-C(O)N(Qb)-、-N(Qc)S(O)2-、-S(O)2N(Qd)-、-N(Qe)C(O)N(Qf)-、-N(Qg)S(O)2N(Qh)-、-OC(O)N(Qi)-和-N(Qj)C(O)O-； Qa、Qb、Qc、Qd、Qe、Qf、Qg、Qh、Qi和Qj各自独立地选自氢、(1-6C)烷基、A3和(1-4C)亚烷基-A4；其中烷基基团是未取代的或被独立地选自氟、羟基和(1-4C)烷氧基的1-3个取代基取代；或与它们连接的氮原子和基团R4b或R4c一起形成4-6元的亚氮杂环烷基基团； A3和A4各自独立地选自(3-6C)环烷基、(6-10C)芳基、(2-9C)杂芳基和(3-6C)杂环基；其中每个环烷基是未取代的或被独立地选自(1-4C)烷基的1-4个取代基取代和每个芳基、杂芳基或杂环基基团是未取代的或被独立地选自卤素、(1-4C)烷基和(1-4C)烷氧基的1-4个取代基取代； 条件是R4连接的两个氮原子之间最短链中邻接原子的数目在8-14范围内； R5代表氢或(1-4C)烷基； R6是-NR6aCR6b(O)且R7是氢，或者R6和R7一起形成-NR7aC(O)-CR7b＝CR7c-、-CR7d＝CR7e-C(O)-NR7f-、-NR7gC(O)-CR7hR7i-CR7jR7k-或-CR7lR7m-CR7nR7o-C(O)-NR7p-； R6a和R6b每一个独立地是氢或(1-4C)烷基；和 R7a、R7b、R7c、R7d、R7e、R7f、R7g、R7h、R7i、R7j、R7k、R7l、R7m、R7n、R7o和R7p每一个独立地是氢或(1-4C)烷基； 或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
另一特定组的式I化合物是在2003年5月1日提交的美国临时申请60/467,035中公开的那些。该组化合物包括式I化合物；其中 a是0或1-3的整数； R1每个独立地选自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)环烷基、氰基、卤素、-OR1a、-C(O)OR1b、SR1c、-S(O)R1d、-S(O)2R1e和-NR1fR1g； R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g每个独立地是氢或(1-4C)烷基； b是0或1-3的整数； R2每个独立地选自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)环烷基、氰基、卤素、-OR2a、-C(O)OR2b、SR2c、-S(O)R2d、-S(O)2R2e和NR2fR2g； R2a、R2b、R2c、R2d、R2e、R2f和R2g每个独立地是氢或(1-4C)烷基； W连接至相对于哌啶环上氮原子的3-或4-位，并且代表O或NWa； Wa是氢或(1-4C)烷基； C是0或1-4的整数； R3每一个是在碳上的取代基，独立地选自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)环烷基、氰基、卤素、-OR3a、-C(O)OR3b、SR3c、-S(O)R3d、-S(O)2R3e和NR3fR3g； R3a、R3b、R3c、R3d、R3e、R3f和R3g每个独立地是氢或(1-4C)烷基； R4是下式的二价基团 -(R4a)d-(A1)e-(R4b)f-Q-(R4c)g-(A2)h-(R4d)i- 其中 d、e、f、g、h和i各自独立地选自0和1； R4a、R4b、R4c和R4d各自独立地选自(1-10C)亚烷基、(2-10C)亚烯基和(2-10C)亚炔基，其中每个亚烷基、亚烯基或亚炔基基团是未取代的或被独立地选自(1-4C)烷基、氟、羟基、苯基和苯基(1-4C)-烷基的1-5个取代基取代； A1和A2各自独立地选自(3-7C)亚环烷基、(6-10C)亚芳基、(2-9C)亚杂芳基和(3-6C)亚杂环基；其中每个亚环烷基是未取代的或被独立地选自(1-4C)烷基的1-4个取代基取代且每个亚芳基、亚杂芳基或亚杂环基基团是未取代的或被独立地选自卤素、(1-4C)烷基和(1-4C)烷氧基的1-4个取代基取代； Q是选自键、-O-、-C(O)O、-OC(O)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-N(Qa)C(O)-、-C(O)N(Qb)-、-N(Qc)S(O)2-、-S(O)2N(Qd)-、-N(Qe)C(O)N(Qf)-、-N(Qg)S(O)2N(Qh)-、-OC(O)N(Qi)-和-N(Qj)C(O)O-； Qa、Qb、Qc、Qd、Qe、Qf、Qg、Qh、Qi和Qj各自独立地选自氢、(1-6C)烷基、A3和(1-4C)亚烷基-A4；其中烷基基团是未取代的或被独立地选自氟、羟基和(1-4C)烷氧基的1-3个取代基取代；或与它们连接的氮原子和基团R4b或R4c一起形成4-6元的亚氮杂环烷基基团； A3和A4各自独立地选自(3-6C)环烷基、(6-10C)芳基、(2-9C)杂芳基和(3-6C)杂环基；其中每个环烷基是未取代的或被独立地选自(1-4C)烷基的1-4个取代基取代和每个芳基、杂芳基或杂环基基团是未取代的或被独立地选自卤素、(1-4C)烷基和(1-4C)烷氧基的1-4个取代基取代； 条件是R4连接的两个氮原子之间最短链中邻接原子的数目在4-14范围内； R5代表氢或(1-4C)烷基； R6是-NR6aCR6b(O)或CR6cR6dOR6e且R7是氢，或者R6和R7一起形成-NR7aC(O)-CR7b＝CR7c-、-CR7d＝CR7e-C(O)-NR7f-、-NR7gC(O)-CR7hR7i-CR7jR7k-或-CR7lR7m-CR7nR7o-C(O)-NR7p-； R6a、R6b、R6c、R6d和R6e独立地是氢或(1-4C)烷基；和 R7a、R7b、R7c、R7d、R7e、R7f、R7g、R7h、R7i、R7j、R7k、R7l、R7m、R7n、R7o和R7p每一个独立地是氢或(1-4C)烷基； 或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
另一特定组的式I化合物是那些，其中a是0；b是0；c是0；W是O；W连接在哌啶环的4-位；R5是氢；和R4、R6和R7如本文所定义；或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
另一特定组的式I化合物是那些，其中a是0；b是0；c是0；W是NH；W连接在哌啶环的4-位；R5是氢；和R4、R6和R7如本文所定义；或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
还另一特定组的式I化合物是那些，其中a是0；b是0；c是0；W是O；W连接在哌啶环的4-位；R4是-(CH2)j-，其中j是8、9或10；R5是氢；且R6和R7如本文所定义；或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
另一特定组的式I化合物是那些，其中a是0；b是0；c是0；W是NH；W连接在哌啶环的4-位；R4是-(CH2)j-，其中j是8、9或10；R5是氢；且R6和R7如本文所定义；或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
还另一特定组的式I化合物是那些，其中a是0；b是0；c是0；W是O；W连接在哌啶环的4-位；R4是-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)5；R5是氢；且R6和R7如本文所定义；或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
另一特定组的式I化合物是那些，其中a是0；b是0；c是0；W是NH；W连接在哌啶环的4-位；R4是-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)5；R5是氢；且R6和R7如本文所定义；或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
式I化合物的另一特定组是如本文所定义的式II的那些；或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
式I化合物的另一特定组是如本文所定义的式III的那些；或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
式I化合物的另一特定组是如本文所定义的式IV的那些，或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
式I化合物的另一特定组是如本文所定义的式II、III或IV的那些，其中哌啶环在4-位被甲基基团取代；或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
另一特定组的式I化合物是式V化合物
其中W、R4、R6和R7是如表1中所定义；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
表1 1在表I-III中，“(外消旋的)”指化合物在式V、VI或VII中具有羟基基团的手性碳处是外消旋的。
2对于这一组，氮原子与R6连接，碳原子与R7连接。
另一特别组的式I化合物是式VI化合物
其中W、R1A、R1B、R1C、R2A、R2B、R4、R6和R7是如表II中所定义；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
表II 另一特定组的式I化合物是式VII化合物
其中W、R4、R6和R7是如表III中所定义的；或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
表III 定义 当描述本发明的化合物、组合物、方法和过程时，除非另外指出，下述术语具有下述含义。
术语“烷基”指可能是直链或支链的一价饱和烃基。除非另外定义，这种烷基基团通常包含1-10个碳原子。有代表性的烷基基团包括，通过举例，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等。
术语“亚烷基”指可能是直链或支链的二价饱和烃基。除非另外定义，这种亚烷基基团通常包含1-10个碳原子。有代表性的亚烷基基团包括，通过举例，亚甲基、乙烷-1、2-二基(“亚乙基”)、丙烷-1、2-二基、丙烷-1、3-二基、丁烷-1、4-二基、戊烷-1、5-二基等。
术语“烷氧基”指式(烷基)-O-的一价基团，其中烷基如本文所定义。有代表性的烷氧基基团包括，通过举例，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。
术语“烯基”指可能是直链或支链的一价不饱和烃基，其具有至少1个，通常有1、2或3个碳碳双键。除非另外定义，这种烯基基团通常包含2-10个碳原子。有代表性的烯基基团包括，通过举例，乙烯基，正丙烯基，异丙烯基，正丁-2-烯基，正己-3-烯基等.术语“亚烯基”指二价烯基基团。
术语“炔基”指可能是直链或支链的一价不饱和烃基，其具有至少1个，通常有1、2或3个碳碳三键。除非另外定义，这种炔基基团通常包含2-10个碳原子。有代表性的炔基基团包括，通过举例，乙炔基、正丙炔基、正丁-2-炔基、正己-3-炔基等。术语“亚炔基”指二价炔基基团。
术语“芳基”指具有单环(即苯基)或稠合环(即萘)的一价芳族烃。除非另外定义，这种芳基基团通常包含6-10个碳环原子。有代表性的芳基基团包括，通过举例，苯基和萘-1-基、萘-2-基等。术语“亚芳基”指二价芳基基团。
术语“氮杂环烷基”指包含一个氮原子的一价杂环，即其中一个碳原子被氮原子取代的环烷基基团。除非另外定义，这种氮杂环烷基基团通常包含2-9个碳原子。氮杂环烷基基团的有代表性的例子是吡咯烷基和哌啶基基团。术语“亚氮杂环烷基”指二价氮杂环烷基基团。亚氮杂环烷基基团的有代表性的例子是亚吡咯烷基和亚哌啶基基团。
术语“环烷基”指一价饱和的碳环烃基。除非另外定义，这种环烷基基团通常包含3-10个碳原子。有代表性的环烷基基团包括，通过举例、环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。术语“环亚烷基”指二价环烷基基团。
术语“卤素”指氟、氯、溴和碘。
术语“杂芳基”指具有单环或两个稠合环并且在环中包含至少一个(通常1-3个杂原子)选自氮、氧或硫的杂原子的一价芳基。除非另外定义，这种杂芳基基团通常包含5-10个总环原子。有代表性的杂芳基基团包括，通过举例，一价类的吡咯，咪唑，噻唑，唑，呋喃，噻吩，三唑，吡唑，异唑，异噻唑，吡啶，吡嗪，哒嗪，嘧啶，三嗪，吲哚，苯并呋喃，苯并噻吩，苯并咪唑，苯并噻唑，喹啉，异喹啉，喹唑啉，喹啉等，其中连接点是在任何可用的碳或氮环原子。术语“亚杂芳基”指二价杂芳基基团。
术语“杂环基”或“杂环”指具有单环或多稠合环且在环中包含至少一个选自氮、氧或硫的杂原子(通常1-3个杂原子)的一价饱和或不饱和(非芳香)基团。除非另外定义，这种杂环基团通常包含2-9个总环碳原子。有代表性的杂环基团包括，通过举例，一价类的吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、哌啶、1、4-二烷、吗啉、硫代吗啉、哌嗪、3-吡咯林等，其中连接点是在任何可用的碳或氮环原子。术语“亚杂环基”指二价杂环基或杂环基团。
关于本文采用的特定术语当意指碳原子的特定数目时，在术语前的括号中显示碳原子数目。例如，术语“(1-4C)烷基”指具有1-4个碳原子的烷基基团。
术语“药学上可接受的盐”指能被接受用来给予患者例如哺乳动物的盐(例如对于给定的剂量方案具有可接受的哺乳动物安全性的盐)。这种盐可以衍生自药学上可接受的无机或有机碱和衍生自药学上可接受的无机或有机酸。衍生自药学上可接受的无机碱的盐包括铵、钙、铜、三价铁、二价铁、锂、镁、三价锰、二价锰、钾、钠、锌等。特别优选的是铵、钙、镁、钾和钠盐。衍生自药学上可接受的有机碱的盐包括伯胺盐、仲胺盐何叔胺盐，包括取代的胺、环胺、天然形成的胺等，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N、N′-二苄基亚乙基二胺、二乙基胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、亚乙基二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、组氨酸、海巴明、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌啶(piperadine)、哌嗪、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙基胺、三甲基胺、三丙基胺、氨丁三醇等。来自药学上可接受的酸的盐包括醋酸盐、抗坏血酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、乙磺酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、龙胆酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、谷氨酸盐、马尿酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、粘液酸盐、萘磺酸盐、萘-1，5-二磺酸盐、萘-2，6-二磺酸盐、烟碱酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、对-甲苯磺酸盐、昔萘酸盐等。特别优选的是柠檬酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、羟乙磺酸盐、马来酸盐、萘-1，5-二磺酸盐、磷酸盐、硫酸盐和酒石酸盐。
术语“其盐”指当一种酸的氢被阳离子例如金属阳离子或有机阳离子等取代形成的化合物。优选地，该盐是药学上可接受的盐，但是对于不是给予患者的中间体化合物的盐来说不需要这样。
术语“溶剂化物”指通过一种溶质即式I化合物或其药学上可接受的盐的一个或多个分子与一种溶剂的一个或多个分子形成的复合物或聚集体。这种“溶剂化物”通常是具有实质上固定摩尔比的溶质和溶剂的结晶固体。有代表性的溶剂包括，通过举例，水、甲醇、乙醇、异丙醇、醋酸等。当溶剂是水时，形成的溶剂化物是水合物。
将理解，术语“或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体”指包括盐、溶剂化物和立体异构体的所有置换，例如式I化合物的立体异构体的药学上可接受的盐的溶剂化物。
术语“治疗有效量”指当给予需要治疗的患者时足以实现治疗的量。
本文采用的术语“治疗(动名词)”或“治疗(名词)”指治疗患者例如哺乳动物(尤其是人)的疾病或医学状况(例如COPD)，这包括 (a)预防疾病或医学状况发生，即预防性治疗患者； (b)改善疾病或医学状况，即在患者中消除或使疾病或医学状况消退； (c)遏制疾病或医学状况，即在患者中延缓或阻止疾病或医学状况的发展；或者 (d)在患者中减轻疾病或医学状况的症状。
术语“离去基团”指在取代反应例如亲核取代反应中能够被另一官能团或原子取代的一个官能团或原子。通过举例，有代表性的离去基团包括氯、溴和碘基团；磺酸酯基团，例如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对硝基苯磺酸酯等；和酰氧基基团，例如乙酰氧基，三氟乙酰氧基等。
术语“其受保护的衍生物”指其中化合物的一个或多个官能团被用保护或封端基团保护免于参与不需要的反应的特定化合物的衍生物。可以被保护的官能团包括，通过举例，羧酸基团、氨基基团、羟基基团、硫羟基团、羰基基团等。羧酸的有代表性的保护基团包括酯类(例如对甲氧基苄基酯)、酰胺类和酰肼类；对于氨基基团，氨基甲酸酯类(例如叔-丁氧基羰基)和酰胺类；对于羟基基团，醚类和酯类；对于硫羟基团，硫醚类和硫酯类；对于羰基基团，缩醛类和缩酮类；等等。这些保护基团对于本领域技术人员是公知的，并且例如在T.W.Greene和G.M.Wuts，Protecting groups in OrganicSynthesis，Third Edition，Wiley，New York，1999及其中引用的参考文献中有描述。
术语“氨基-保护基团”指适于在氨基基团防止不需要的反应的保护基团。有代表性的氨基-保护基团包括，但不限于，叔丁氧基羰基(BOC)、三苯甲基(Tr)、苄氧基羰基(Cbz)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、甲酰基、三甲基甲硅烷基(TMS)、叔-丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等。
术语“羧基-保护基团”指适于在羧基基团防止不需要的反应的保护基团。有代表性的羧基-保护基团包括，但不限于，酯，例如甲基、乙基、叔丁基、苄基(Bn)、对甲氧基苄基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)、三甲基甲硅烷基(TMS)、叔-丁基二甲基甲硅烷基(TBS)、二苯基甲基(二苯甲基、DPM)等。
术语“羟基-保护基团”指适于在羟基基团防止不需要的反应的保护基团。有代表性的羟基-保护基团包括，但不限于，甲硅烷基基团，包括三(1-6C)烷基甲硅烷基基团，例如三甲基甲硅烷基(TMS)、三乙基甲硅烷基(TES)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等；酯类(酰基基团)包括(1-6C)烷酰基基团，例如甲酰基，乙酰基等；芳基甲基基团，例如苄基(Bn)、对甲氧基苄基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)、二苯基甲基(二苯甲基，DPM)等。此外，两个羟基基团也可以作为一个亚烷基被保护，例如丙-2-亚基(ylidine)，例如通过与酮例如丙酮反应形成的。
一般合成方法 本发明的联苯衍生物可以从容易获得的原料利用下述一般方法和步骤或通过应用对于本领域普通技术人员来说容易获得的其它信息制备。虽然本文会显示或描述本发明的特定实施方案，但是本领域那些技术人员将会认识到本发明的所有实施方案或方面利用本文描述的方法可以制备或者通过应用对于本领域技术人员已知的其它方法、试剂和原料也能制备。也将会理解，除非另外陈述，当给出一般或优选的方法条件(即反应温度、时间、反应物的摩尔比、溶剂、压力等)时，也能使用其它方法条件。虽然最佳反应条件可以随着采用的特定反应物或溶剂变化，但是通过常规优化程序本领域技术人员能够容易地决定这些条件。
此外，对于本领域普通技术人员将显而易见的是，常规保护基团可以是必需或需要的来防止特定官能团进行不合需要的反应。对于特定官能团的合适保护基团以及这种官能团的保护和脱保护的合适条件的选择在本领域中是公知的。如果需要可以采用除在本文描述的步骤中说明的那些之外的保护基团。例如，大量保护基团，和它们的引入和除去，在T.W.Greene和G.M.Wuts，Protecting groups in OrganicSynthesis，Third Edition，Wiley，New York，1999及其中引用的参考文献中有描述。
通过说明，本发明的联苯衍生物可以通过一种方法制备，该方法包括 (a)使式1化合物
或其盐；与式2化合物反应
其中X1代表离去基团，P1和P2各自独立地代表氢原子或羟基-保护基团； (b)使式3化合物
或其盐；与式4化合物反应
其中X2代表离去基团，P3和P4各自独立地代表氢原子或羟基-保护基团； (c)使式5化合物
与式6化合物偶联
其中XQa和XQb各自独立地代表偶联以形成基团Q的官能团，p5a代表氢原子或氨基-保护基团；且p5b和p6各自独立地代表氢原子或羟基-保护基团； (d)对于其中R5代表氢原子的式I化合物，在还原剂存在下使式3化合物与式7化合物
或其水合物(例如乙二醛)反应，其中P7代表氢原子或羟基-保护基团； (e)在还原剂存在下，使式1化合物与式8化合物
或其水合物反应，其中p8和P9各自独立地代表氢原子或羟基-保护基团，p10代表氢原子或氨基-保护基团，且R4’代表残基，该残基与其连接的碳一起，在反应完成时提供基团R4； (f)使式9化合物
其中X3代表离去基团，与式10化合物反应
其中P11和p12各自独立地代表氢原子或羟基-保护基团，且p13代表氢原子或氨基-保护基团；或 (g)在还原剂存在下，使式11化合物
或其水合物；其中R4′代表残基，该残基与其连接的碳一起，在反应完成时提供基团R4；与式10化合物反应；并且然后 除去任何保护基团P1、p2、P3、P4、P5a、P5b、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12或P13以提供式I化合物；和任选地，形成其药学上可接受的盐。
通常，如果原料之一的盐被用于上述方法中，例如酸加成盐，则该盐通常在反应前或过程中被中和。这一中和反应通常是通过将所述盐与对于每摩尔当量酸加成盐的一摩尔当量的碱接触来完成。
在方法(a)中，即式1和2化合物之间的反应，由X1代表的离去基团例如可以是卤素，例如氯、溴或碘，或磺酸酯基团，例如甲磺酸酯或甲苯磺酸酯。基团P1和P2例如分别可以是三甲基甲硅烷基和苄基。该反应通常在惰性稀释剂中进行，例如乙腈，在碱存在下。例如，该反应可以在叔胺，例如二异丙基乙胺存在下进行。通常，该反应在0℃-100℃的温度范围内进行直到反应实质上完成。然后利用常规方法分离反应产物，例如提取、重结晶、色谱法等。
式I化合物在本领域中通常是已知的或可以利用公知步骤从商业上可购得的原料制备。例如，式1化合物可以通过脱保护式12化合物来制备
其中P14代表氨基-保护基团，例如苄基基团。通过说明，苄基基团可以通过还原被容易地除去，使用例如氢或甲酸铵和族VIII金属催化剂，例如在碳载钯。当W代表NWa时，利用Pearlman’s催化剂(即Pd(OH)2)方便地进行氢化反应。
式12的化合物可以通过使式13的异氰酸盐化合物
与式14的化合物反应进行制备
式2化合物可以通过本文描述的各种方法或通过对于本领域技术人员公知的方法来制备。例如，利用公知的试剂和方法下述式23化合物的羟基基团可以容易地被转化为离去基团。通过说明，利用无机酸卤化物例如亚硫酰氯、三氯化磷、三溴化磷、氯氧化磷等，或氢卤酸例如氢溴酸，羟基基团可以被转化成卤素基团。
在方法(b)中，即式3化合物与式4化合物的反应，X2表示的离去基团例如可以是卤素，例如氯、溴或碘，或磺酸酯基团，例如甲磺酸酯或甲苯磺酸酯。基团P3和P4例如分别可以是叔丁基二甲基甲硅烷基和苄基。该反应通常是在碱的存在下进行的，例如碳酸氢钠和碱金属碘化物，例如碘化钠。通常，该反应在惰性稀释剂中进行，例如四氢呋喃，在25℃-100℃的温度下，直到反应实质上完成。然后利用常规方法分离反应产物，例如提取、重结晶、色谱法等。
通过脱保护式15化合物制备式3化合物
其中P15和P16一个或两者独立地代表保护基团，例如叔丁氧基羰基，且任何剩余的代表氢原子。例如可以通过用三氟乙酸处理被保护的化合物来除去叔丁氧基羰基基团。
式15化合物可以通过使式1化合物与式16化合物反应来制备 X3-R4-NP15P16 16 其中X3代表离去基团例如卤素，例如氯、溴或碘，或磺酸酯基团，例如甲磺酸酯或甲苯磺酸酯。该反应通常通过在惰性稀释剂中使式1化合物与式16化合物反应来进行，例如乙腈、DMF或它们的混合物，在约O℃至约100℃的温度范围，直到反应实质上完成。
或者，式3化合物可以通过式11化合物的还原性胺化作用来获得。该还原性胺化作用可以通过在碳载钯存在下使式11化合物与例如苄基胺和氢反应来进行。
式11化合物可以通过利用合适的氧化剂，例如三氧化硫吡啶络合物和二甲基亚砜，通过氧化式17的相应的醇来制备。

该氧化反应通常在惰性溶剂中进行，例如二氯甲烷，存在叔胺，例如二异丙基乙胺，在约-20℃至约25℃的温度。
式17化合物可以通过使式1化合物与式18化合物反应来制备 X4-R4-OH 18 其中X4代表离去基团例如卤素，例如氯、溴或碘，或磺酸酯基团，例如甲磺酸酯或甲苯磺酸酯。
式4化合物可以通过将式19化合物
与还原剂例如甲硼烷反应进行制备。如果需要，这种还原可以在手性催化剂存在下进行，以提供手性形式的式4化合物。例如，式19化合物可以在从(R)-(+)-α，α-联苯-2-吡咯烷甲醇和三甲基硼氧六环形成的；或者从(S)-(-)-α，α-联苯-2-吡咯烷甲醇和三甲基硼氧六环形成的手性催化剂存在下被还原。然后可以用羟基保护基团-P3来保护得到的羟基基团，例如通过与叔丁基二甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯反应。
其中X2代表溴原子的式19化合物可以通过在路易斯酸例如三氟化硼二乙基醚合物存在下令式20化合物
与溴反应进行制备。式20的化合物在本领域中是公知的并且可以利用商业上可购得的原料和试剂通过公知的方法制备。
谈及方法(c)，即式5化合物与式6化合物的反应，将理解，应该选择基团XQa和XQb以便在反应完成时提供需要的基团Q。例如，当需要的基团Q是酰胺基团即-N(Qa)C(O)-或-C(O)N(Qb)时，XQa和XQb中的一个可以是氨基基团(即，-NHQa或-NHQb)和另一个可以是羧基基团(即，-COOH)或它们的反应衍生物(例如酰卤，例如酰氯或酰溴)。基团P5a、P5b和P6例如分别可以是苄基、三甲基甲硅烷基和苄基。当Q是酰胺基团时，反应可以在常规酰胺偶联条件下进行。相似的基团Q是磺酰胺即-N(Qc)S(O)2-或-S(O)2N(Qd)-时，XQa和XQb中的一个可以是氨基基团，-NHQc或NHQd并且另一个可以是磺酰基卤化物基团(例如磺酰氯或磺酰溴)。
式5化合物可以通过使式1化合物与式21化合物反应来制备 X5-(R4a)d-(A1)e-(R4b)f-XQa′ 21 其中X5表示包括卤素例如氯、溴或碘和磺酸酯例如甲磺酸酯或甲苯磺酸酯在内的离去基团；且XQa′代表XQa，例如羧基基团或氨基基团NHQa，或它们的受保护的衍生物，例如(1-6C)烷氧基羰基氨基基团或叔丁氧基羰基氨基基团。该反应通常是通过与用来制备式3化合物的类似方法来进行的，然后除去XQa′中的任何保护基团。
式6化合物可以通过使式4化合物与式22化合物反应来制备 XQb′-(R4c)g-(A2)h-(R4d)i-X6 22 其中X6代表包括卤素例如氯、溴或碘和磺酸酯例如甲磺酸酯或甲苯磺酸酯在内的离去基团；且XQb′代表XQb，例如羧基基团或氨基基团NHQb，或它们的受保护的衍生物，例如(1-6C)烷氧基羰基氨基基团或叔丁氧基羰基氨基基团。该反应通常是通过与用来制备式3化合物的类似方法来进行的，然后除去XQb′中的任何保护基团。
谈及方法(d)，即式3化合物与式7化合物的反应，在该反应中可以采用任何合适的还原剂。例如，还原剂可以使在第VIII族金属催化剂，例如碳载钯存在下的氢；或金属氢化物试剂，例如三乙酰氧基氢硼化钠。基团P7例如可以是苄基。该反应通常是在惰性稀释剂和质子溶剂例如二氯乙烷和甲醇的混合物中，在0℃-100℃的温度范围下进行的，直到反应实质上完成。
水合物形式的式7化合物可以通过常规方法制备，例如通过二溴化式19的化合物(其中在此情况下X2也可以是氢)，然后水解得到的二溴化物，形成它的乙二醛或水合物。例如，式19化合物可以与溴化氢反应，然后用水水解，形成相应的乙二醛水合物。
谈及方法(e)，即式1化合物与式8化合物的反应，在该反应中可以采用任何合适的还原剂。例如，还原剂可以是在第VIII族金属催化剂，例如碳载钯存在下的氢；或金属氢化物试剂，例如三乙酰氧基氢硼化钠。基团P8、P9和P10例如分别可以是三甲基甲硅烷基、苄基和苄基。该反应通常是在惰性稀释剂和质子溶剂例如二氯乙烷和甲醇中，在0℃-100℃的温度范围下进行的，直到反应实质上完成。
式8化合物可以通过利用任何合适的氧化剂例如三氧化硫吡啶络合物和二甲基亚砜氧化式23的化合物来制备。

该反应通常在叔胺例如二异丙基乙胺存在下，在约-20℃至约25℃的温度范围下进行，直到氧化实质上完成。
式23的化合物可以通过使式10化合物与式24的化合物反应来制备HO-R4-X7 24 其中X7代表包括卤素例如氯、溴或碘和磺酸酯例如甲磺酸酯或甲苯磺酸酯在内的离去基团。
谈及方法(f)，即式9化合物与式10化合物的反应，由X3代表的离去基团例如可以是卤素例如氯、溴或碘，或者磺酸酯基团例如甲磺酸酯或甲苯磺酸酯。基团P11、P12和P13例如分别可以是三甲基甲硅烷基、苄基和苄基。该反应通常是在惰性稀释剂例如乙腈中，在合适的碱的存在下进行。例如该反应通常在叔胺例如二异丙基乙胺存在下进行。通常，该反应在0℃-100℃的温度范围下进行的，直到反应实质上完成。
式9的化合物可以从式1化合物起始通过与本文方法(a)-(e)类似的步骤来制备。此外，式10化合物可以从式4化合物通过与式P13NH2的胺反应来制备。
谈及方法(g)，即式11化合物与式10化合物的反应，在该反应中可以采用任何合适的还原剂。例如，还原剂可以是在第VIII族金属催化剂，例如碳载钯存在下的氢；或金属氢化物试剂，例如三乙酰氧基氢硼化钠。基团P11、P12和P13例如分别可以是叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基和苄基。该反应通常是在惰性稀释剂和质子溶剂例如二氯乙烷和甲醇中，在0℃-100℃的温度范围下进行的，直到反应实质上完成。
通过氧化相应的醇或水解相应的缩醛容易地制备式11化合物。在该反应中可以使用任何合适的氧化剂来提供醛，例如三氧化硫吡啶络合物和二甲基亚砜。该缩醛可以在常规条件下利用含水酸水解以提供醛。
在特定实施方案中，式I的某些特定化合物通过如下方法来制备，该方法包括 (h)脱保护式25的化合物
其中P17代表氢原子或氨基-保护基团；P18、P19和P20各自独立地代表氢原子或羟基-保护基团；条件是P17、P18、P19或P20中的至少一个是保护基团； (i)脱保护式26的化合物
其中P21代表氢原子或氨基-保护基团；且P22和P23各自独立地代表氢原子或羟基-保护基团；条件是P21、P22或p23中的至少一个是保护基团；或 (j)脱保护式27的化合物
其中P24代表氢原子或氨基-保护基团；且P25和P26各自独立地代表氢原子或羟基-保护基团；条件是P24、P25或p26中的至少一个是保护基团。
提供式I化合物，和任选地形成式I化合物药学上可接受的盐。
谈及方法(h)，P17、P18、P19和P20的特定值的例子是P17是氢或苄基；P18是氢或叔丁基二甲基甲硅烷基；P19和P20是氢或苄基，或一起为亚丙基(propylidine)。在该方法中，苄基保护基团通过在第VIII族金属催化剂例如碳载钯存在下被催化氢化方便地除去；叔丁基二甲基甲硅烷基基团通过用氢氟化物例如三乙胺三氢氟化物处理被方便地除去；亚丙基基团通过用酸例如三氟乙酸处理被方便地除去。
式25的化合物可以通过本文描述的方法，例如通过方法(a)-(g)制备。或者，式25的化合物可以通过使式28的化合物
其中R8代表-CH2OP19、-CHO、-COOH或-C(O)O(1-6C)烷氧基，例如甲酯基，R9代表-OP18和R10代表氢原子，或R9和R10一起代表＝O，与还原剂反应来制备。该反应可以采用任何合适的还原剂，包括，通过举例，金属氢化物还原剂，例如氢硼化钠、氢化铝锂等。
其中R9和R10一起代表＝O基团的式28的化合物能够容易地通过使式29的化合物
或其盐与式30的化合物反应进行制备
其中X8代表离去基团，例如溴。
谈及方法(i)，P21、P22和P23的特定值的例子是P21是氢或苄基；P22是氢或叔丁基二甲基甲硅烷基；P23是氢或苄基。在该方法中，苄基保护基团通过在第VIII族金属催化剂例如碳载钯存在下被催化氢化方便地除去；叔丁基二甲基甲硅烷基基团通过用氢氟化物例如三乙胺三氢氟化物处理被方便地除去。式26的化合物可以通过本文描述的方法被制备，例如通过方法(a)-(g)。
谈及方法(j)，P24、P25和P26的特定值的例子是P24是氢或苄基；P25是氢或叔丁基二甲基甲硅烷基；P26是氢或苄基。在该方法中，苄基保护基团通过在第VIII族金属催化剂例如碳载钯存在下被催化氢化方便地除去；叔丁基二甲基甲硅烷基基团通过用氢氟化物例如三乙胺三氢氟化物处理被方便地除去。式27的化合物可以通过本文描述的方法被制备，例如通过方法(a)-(g)。
此外，其中R6和R7一起构成-NR7gC(O)-CR7hR7i-CR7jR7k-或-CR7lR7m-CR7nR7o-C(O)-NR7p-的式I化合物可以通过还原其中R6和R7一起构成-NR7aC(O)-CR7b＝CR7c-或-CR7d＝CR7e-C(O)-NR7f-的相应的式I化合物来制备，例如通过在下文实施例6中描述的催化氢化。
关于具体反应条件和用于制备本发明有代表性化合物或其中间体的其它方法的进一步细节在下述实施例中描述。
药物组合物和制剂 本发明的联苯衍生物通常是以药物组合物或制剂形式被给予患者。这类药物组合物可以通过任何可接受的给药途径被给予患者，包括但不限于，吸入的、口服、鼻用、局部(包括透皮)和肠胃外给药方式。应该理解，适于特定给药模式的本发明化合物的任何形式(即游离碱、药学上可接受的盐、溶剂化物等等)可以被用在本文讨论的药物组合物中。
因此，在本发明组合物方面之一，本发明涉及包含药学上可接受的载体或赋形剂和治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。任选地，如果需要，这种药物组合物可以包含其它治疗剂和/或制剂用物质。
本发明的药物组合物通常包含治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。通常，这种药物组合物将包含约0.01至约95％重量的活性剂；包括约0.01至约30％重量；例如约0.01至约10％重量的活性剂。
任何常规载体或赋形剂可以被用在本发明组合物中。特定载体或赋形剂或载体或赋形剂的组合物的选择将取决于被用于治疗特定患者的给药模式或医学状况或疾病状态的类型。在这点上，用于特定给药模式的合适的药物组合物的制备完全在药物领域技术人员的范围内。此外，用于这种组合物的成分是商业上可购得的，例如购自Sigma，P.O.Box 14508，St.Louis，MO 63178。通过进一步说明，常规制剂技术在RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，第20版，Lippincott Williams & White，Baltimore，Maryland(2000)；和H.C.Ansel et al.，Pharmaceutical Dosage Forms and DrugDelivery Systems，第7版，Lippincott Williams & White，Baltimore，Maryland(1999)中有所描述。
可以作为药学上可接受的载体的有代表性的例子包括，但不限于，下述(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)西黄蓍胶粉；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石粉；(8)赋形剂，例如可可豆脂和栓剂蜡类；(9)油，例如花生油、棉籽油、红花油、麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原的水；(17)等渗盐水；(18)林格溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲液；(21)压缩推进气体，例如氯氟碳和氢氟碳；和(22)其它用在药物组合物中的无毒相容性物质。
本发明组合物通常是通过彻底地和密切地混合或掺合本发明的化合物和药学上可接受的载体和一种或多种任选的成分制备的。如果必需或需要，得到的均匀混合的混合物可以利用常规方法和设备被塑形或加载到片剂、胶囊、丸剂、罐、药筒等中。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物适于吸入给药。用于吸入给药的适合药物组合物通常是气雾剂或粉末形式。这种组合物通常利用公知的给药装置给药，例如雾化器吸入器、定量吸入器(MDI)、干粉吸入器(DPI)或类似的给药装置。
在本发明的特定实施方案中，包含活性剂的药物组合物是利用雾化器吸入器通过吸入给药的。这种雾化器装置通常产生高速气流，它使得包含活性剂的药物组合物作为雾被喷入患者的呼吸道。因此，当被制备用于雾化器吸入器中时，活性剂通常被溶解在合适的载体中以形成溶液。或者，活性剂可以被微粉化且与合适的载体组合以形成可吸入大小的微粉化颗粒的混悬液，微粉化通常被定义为大约90％或更多的颗粒具有小于约10μm的直径。合适的雾化器装置被商业上提供，例如由PARI GmbH(Starnberg，Germany)。其它的雾化顺装置包括Respimat(Boehringer Ingelheim)和那些例如在美国专利No.6,123,068和WO 97/12687中公开的。
用于雾化器吸入器的有代表性的药物组合物包括包含约0.05μg/mL至约10mg/mL式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或其立体异构体的等渗水溶液。
在本发明的另一个特定实施方案中，包含活性剂的药物组合物是利用干粉吸入器通过吸入给药的。这种干粉吸入器通常给药在吸入期间分散在患者气流中的自由流动粉末形式的活性剂。为了获得自由流动粉末，活性剂通常与合适的赋形剂例如乳糖或淀粉一起配制。
用于干粉吸入器的有代表性的药物组合物的例子包括颗粒大小在约1μm和约100μm之间的干乳糖，和式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体的微粉化颗粒。
这种干粉制剂可以，例如通过将乳糖和活性剂混合，然后干混合组分来制备。或者，如果需要，活性剂可以不用赋形剂来配制。然后通常将药物组合物装入干粉分配器中，或装入与干粉给药装置一起使用的吸入药筒或胶囊。
干粉吸入器给药装置的例子包括Diskhaler(GlaxoSmithKline，Research Triangle Park，NC)(例如见美国专利No.5,035,237)；Diskus(GlaxoSmithKline)(例如见美国专利No.6,378,519；Turbuhaler(AstraZeneca，Wilmington，DE)(例如见美国专利No.4,524,769)；Rotahaler(GlaxoSmithKline)(例如见美国专利No.4,353,365)和Handihaler(Boehringer Ingelheim)。合适的DPI装置的另外的例子在美国专利Nos.5,415,162、5,239,993和5,715,810及其中引用的参考文献中有描述。
在本发明的还另一个特定实施方案中，包含活性剂的药物组合物是利用定量吸入器通过吸入给药的。这种定量吸入器通常利用压缩推进气体放出测定量的活性剂或其药学上可接受的盐。因此，利用定量吸入器给药的药物组合物通常包含在液化推进剂中的溶液或混悬液。可以采用任何合适的液化推进剂，包括含氯氟烃，例如CCl3F和氢氟烷类(HFAs)，例如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134a)和1，1，1，2，3，3，3-庚氟-正-丙烷，(HFA 227)。由于涉及影响臭氧层的含氯氟烃，通常优选包含HFAs的制剂。HFA制剂的另外任选的成分包括共溶剂，例如乙醇或戊烷和表面活性剂，例如三油酸山梨坦、油酸、卵磷脂和甘油。例如见美国专利No.5,225,183、EP 0717987 A2和WO92/22286。
用于定量吸入器的有代表性的药物组合物包含约0.01％-约5％重量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体；约0％-约2％重量的乙醇；和约0％-约5％重量的表面活性剂；余下的是HFA推进剂。
这种组合物通常通过向包含活性剂、乙醇(如果存在)和表面活性剂(如果存在)的合适的容器中加入冰冷的或加压的氢氟烷类进行制备。为制备混悬液，将活性剂微粉化然后与推进剂混合。然后将该制剂装入气雾剂罐，其形成定量吸入器装置的一部分。特别为与HFA推进剂一起使用而开发的定量吸入器装置的例子在美国专利Nos.6,006,745和6,143,277中提供。或这混悬制剂可以通过喷雾干燥在活性剂微粉化颗粒上的表面活性剂包衣来制备。例如见WO99/53901和WO 00/61108。
至于制备可吸入颗粒的方法和制剂以及适用于吸入给药的装置的其它例子见美国专利Nos.6,268,533、5,983,956、5,874,063和6,221,398和WO 99/55319和WO 00/30614。
在另一个实施方案中，本发明的药物组合物适于口服给药。用于口服给药的合适的药物组合物可以是胶囊、片剂、丸剂、锭剂、扁胶囊、糖衣丸、粉剂、颗粒剂形式；或作为在含水或无水液体中的溶液或混悬液；或作为水包油或油包水乳剂；或作为酏剂或糖浆等；每个包含预定量的作为活性成分的本发明的化合物。
当用于呈固体剂型(即作为胶囊、片剂、丸剂等)口服给药时，本发明的药物组合物将通常包含作为活性成分的本发明的化合物和一种或多种药学上可接受的载体，例如柠檬酸钠或磷酸二钙。任选地或可选择地，这种固体剂型也可以包含(1)填充剂或增充剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合剂，例如羧甲基纤维素、褐藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)湿润剂，例如甘油；(4)崩解剂，例如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、特定硅酸盐和/或碳酸钠；(5)溶液阻滞剂，例如石蜡；(6)吸收加速剂，例如季铵化合物；(7)润湿剂，例如十六醇和/或单硬脂酸甘油酯；(8)吸收剂，例如高岭土和/或膨润土；(9)润滑剂，例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和/或它们的混合物；(10)着色剂；和(11)缓冲剂。
释放剂、湿润剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和香味剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存在于本发明的药物组合物中。药学上可接受的抗氧化剂的例子包括(1)水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、偏硫酸氢钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸棕榈酸盐、丁基化的羟基苯甲醚(BHA)、丁基化的羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、丙基没食子酸酯、α-生育酚等；和(3)金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。用于片剂、胶囊、丸剂等的包衣剂包括那些用于肠溶衣的，例如醋肽纤维素(CAP)、聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯(PVAP)、羟丙甲基纤维素邻苯二甲酸酯、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物、乙酸-1，2，4-苯三酸纤维素(CAT)、羧甲基乙基纤维素(CMEC)、羟丙甲基纤维素乙酸琥珀酸酯(HPMCAS)等。
如果需要，本发明的药物组合物也可以被制剂以提供活性成分的缓慢或控制释放，通过举例，利用不同比例的羟丙甲基纤维素；或其它聚合物基质、脂质体和/或微球。
此外，本发明的药物组合物可以任选地包含遮光剂和可以被制剂，使得它们仅仅或优先地在胃肠道的特定部分释放活性成分，任选地，以延迟的方式。可以被采用的包埋组合物的例子包括聚合的物质和蜡。活性成分也可以是微囊化形式，如果合适，与一种或多种上述赋性剂一起。
用于口服给药的合适的液体剂型包括，通过举例，药学上可接受的乳剂、微乳、溶液、混悬液、糖浆和酏剂。这种液体剂型通常包含活性成分和惰性稀释剂，例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油类(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯和它们的混合物。除活性成分以外，混悬液可以包含混悬剂例如乙氧基化的异硬酯醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂-琼脂和西黄蓍胶和它们的混合物。
当想用于口服给药时，本发明的药物组合物优选地被包装为单元剂量形式。术语“单元剂量形式”指适于给药患者的物理上离散的单元，即每个单元包含被计算单独或与一个或多个另外的单元结合产生需要的治疗效果的预定量的活性剂。例如，这种单元剂型可以是胶囊、片剂、丸剂等。
本发明的化合物也可以利用已知的透皮给药系统和赋形剂透皮给药。例如，本发明的化合物能够与渗透促进剂混合，例如丙二醇、聚乙二醇单月桂酸酯、氮杂环烷-2-酮等，并被加入贴片或相似的给药系统。如果需要，可以在这种透皮组合物中使用另外的赋形剂包括胶凝剂、乳化剂和缓冲剂。
本发明的药物组合物也可以包含其它与式I化合物，或其可药用盐或溶剂化物或立体异构体共同给药的其它治疗剂。例如，本发明的药物组合物可以进一步包含一种或多种选自其它支气管扩张剂(例如PDE3抑制剂、腺苷2b调质和β2肾上腺素受体激动剂)；抗炎剂(例如甾体抗炎剂，例如皮质类固醇类；非甾体抗炎剂(NSAIDs)和PDE4抑制剂)；其它毒蕈碱受体拮抗剂(即抗胆碱能剂)；抗感染剂(例如革兰氏阳性和革兰氏阴性抗生素或抗病毒药)；抗组胺药；蛋白酶抑制剂；和传入阻滞剂(例如D2激动剂和神经激肽调质)的治疗剂。其它治疗剂可以以药物上可接受的盐或溶剂化物的形式应用。此外，如果合适，其它治疗剂可以作为光学纯立体异构体使用。
能够与本发明化合物组合使用的(除本发明化合物以外)有代表性的β2肾上腺素受体激动剂包括，但不限于沙美特罗、沙丁胺醇、福莫特罗、沙甲胺醇、非诺特罗、特布他林、沙丁胺醇、异他林、奥西那林、比托特罗、吡布特罗、左沙丁胺醇等，或它们的药学上可接受的盐。可以与本发明化合物组合使用的其它β2肾上腺素受体激动剂包括但不限于3-(4-{[6-({(2R)-2-羟基-2-[4-羟基-3-(羟基甲基)-苯基]乙基}氨基)-己基]氧}丁基)苯磺酰胺和3-(3-{[7-({(2R)-2-羟基-2-[4-羟基-3-(羟基甲基)苯基]乙基}-氨基)庚基]氧}-丙基)苯磺酰胺和在2002年8月29日公布的WO02/066422中公开的相关化合物；3-[3-(4-{[6-([(2R)-2-羟基-2-[4-羟基-3-(羟基甲基)苯基]乙基]氨基)己基]氧}丁基)-苯基]咪唑烷-2，4-二酮和在2002年9月12日公布的WO 02/070490中公开的相关化合物；3-(4-{[6-({(2R)-2-[3-(甲酰基氨基)-4-羟基苯基]-2-羟基乙基}氨基)己基]氧}丁基)-苯磺酰胺；3-(4-{[6-({(2S)-2-[3-(甲酰基氨基)-4-羟基苯基]-2-羟基乙基}氨基)己基]氧}丁基)-苯磺酰胺，3-(4-{[6-({(2R/S)-2-[3-(甲酰基氨基)-4-羟基苯基]-2-羟基乙基}氨基)己基]氧}丁基)-苯磺酰胺，N-(叔丁基)-3-(4-{[6-({(2R)-2-[3-(甲酰基氨基)-4-羟基苯基]-2-羟基乙基}氨基)己基]-氧}丁基)苯磺酰胺，N-(叔丁基)-3-(4-{[6-({(2S)-2-[3-(甲酰基氨基)-4-羟基苯基]-2-羟基乙基}氨基)-己基]氧}丁基)-苯磺酰胺，N-(叔-丁基)-3-(4-{[6-({(2R/S)-2-[3-(甲酰基氨基)-4-羟基苯基]-2-羟基乙基}氨基)己基]-氧}丁基)苯磺酰胺和在2002年10月3号公布的WO02/076933中公开的相关化合物；4-{(1R)-2-[(6-{2-[(2，6-二氯苄基)氧]乙氧基}己基)氨基]-1-羟乙基}-2-(羟甲基)苯酚和在2003年3月27日公布的WO03/024439中公开的相关化合物；和它们的药学上可接受的盐。当使用时，β2-肾上腺受体激动剂将以治疗有效量存在于药物组合物中。通常，β2-肾上腺素受体激动剂以足以提供每剂量约0.05μg-约500μg的量存在。
能够与本发明化合物组合使用的有代表性的甾体抗炎剂包括，但不限于，甲基泼尼松龙、泼尼松龙、地塞米松、丙酸氟替卡松、6，9-二氟-17-[(2-呋喃基羰基)氧]-11-羟基-16-甲基-3-氧雄甾-1，4-二烯-17-硫代羟酸S-氟甲基酯、6，9-二氟-11-羟基-16-甲基-3-氧-17-丙酰氧基-雄甾-1，4-二烯-17-硫代羟酸S-(2-氧-四氢呋喃-3S-基)酯、倍氯米松酯(例如17-丙酸酯或17，21-二丙酸酯)、布地奈德、氟尼缩松、莫米松酯(例如糠酸酯)、曲安西龙、罗氟奈德、环索奈德、布替可特丙酸酯、RPR-106541、ST-126等，或它们的药学上可接受的盐。当使用时，甾体抗炎剂将以治疗有效量存在于药物组合物中。通常，甾体抗炎剂将以足以提供每剂量约0.05μg-约500μg的量存在。
其它合适的组合包括，例如其它抗炎剂，例如NSAIDs(例如色甘酸钠；奈多罗米钠；磷酸二酯酶(PDE)抑制剂(例如茶碱、PDE4抑制剂或混合的PDE3/PDE4抑制剂)；白细胞三烯拮抗剂(例如孟鲁司特)；白细胞三烯合成的抑制剂；iNOS抑制剂；蛋白酶抑制剂，例如类胰蛋白酶和弹性酶抑制剂；β-2整联蛋白拮抗剂和腺苷受体激动剂或拮抗剂(例如腺苷2a激动剂)；细胞因子拮抗剂(例如趋化因子拮抗剂例如白细胞介素抗体(IL抗体)，特别地，IL-4疗法，IL-13疗法或它们的组合)；或细胞因子合成的抑制剂。
例如，能够与本发明化合物组合使用的有代表性的磷酸二酯酶-4(PDE4)抑制剂或混合的PDE3/PDE4抑制剂包括，但不限于顺式4-氰基-4-(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)环己烷-1-羧酸、2-甲酯基-4-氰基-4-(3-环丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)环己烷-1-酮；顺-[4-氰基-4-(3-环丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)环己烷-1-醇]；顺-4-氰基-4-[3-(环戊氧基)-4-甲氧基苯基]环己烷-1-羧酸等，或它们的药学上可接受的盐。其它有代表性的PDE4或混合的PDE4/PDE3抑制剂包括AWD-12-281(elbion)；NCS-613(INSERM)；D-4418(Chiroscience和Schering-Plough)；CI-1018或PD-168787(Pfizer)；在WO99/16766(Kyowa Hakko)中公开的苯并间二氧杂环戊烯化合物；K-34(Kyowa Hakko)；V-11294A(Napp)；罗氟司特(Byk-Gulden)；在WO99/47505(Byk-Gulden)中公开的pthalazinone化合物；普马芬群(Byk-Gulden，now Altana)；阿罗茶碱(Almirall-Prodesfarma)；VM554/UM565(Vernalis)；T-440(Tanabe Seiyaku)；和T2585(Tanabe Seiyaku)。
可以与本发明化合物组合使用的(除了本发明的化合物以外)有代表性的毒蕈碱拮抗剂(即抗胆碱能剂)包括，但不限于阿托品、硫酸阿托品、氧阿托品、甲基硝酸阿托品、氢溴酸后马托品、氢溴酸莨菪碱(d，l)、氢溴酸东莨菪碱、异丙托溴铵、氧托溴铵、噻托溴铵、溴甲胺太林、丙胺太林溴化物、辛托品甲基溴化物、克利溴铵、copyrrolate(甘罗溴铵)、异丙碘铵、溴美喷酯、氯化三乙己苯铵(Pathilone)、甲硫己环铵、盐酸环戊通、托吡卡胺、盐酸苯海索、哌仑西平、替仑西平、AF-DX 116和美索曲明等，或它们的药学上可接受的盐；或者，列出的那些化合物作为盐，它们的可替换的药学上可接受的盐。
可以与本发明化合物组合使用的有代表性的抗组胺药(即H1-受体拮抗剂)包括，但不限于，乙醇胺类，例如马来酸卡比沙明、富马酸氯马斯汀、盐酸苯海拉明和茶苯海明；乙二胺类，例如马来酸(amleate)美吡拉敏、盐酸苄吡二胺和柠檬酸苄吡二胺；烷基胺类，例如氯苯那敏和阿伐斯汀；哌嗪类，例如盐酸羟嗪、双羟萘酸羟嗪、盐酸苯甲嗪、乳酸赛克利嗪、盐酸美克洛嗪和盐酸西替立嗪；哌啶类，例如阿司咪唑、左卡巴斯汀盐酸盐、氯雷他定或它的descarbo乙氧基类似物、特非那定和盐酸非索那定；盐酸氮卓斯丁等，或它们的药学上可接受的盐；或者，列出的那些化合物作为盐，它们的可替换的药学上可接受的盐。
与本发明化合物组合给药的其它治疗剂的适合剂量在大约每天0.05g至大约每天100mg范围内。
下述制剂举例说明本发明的有代表性的药物组合物 制剂实施例A 如下制备通过吸入给药的干粉 成分 量 本发明化合物 0.2mg 乳糖 25mg 有代表性的方法将本发明化合物微粉化，然后与乳糖混合。将该混合的混合物装入明胶吸入药筒。利用粉末吸入器给药药筒内容物。
制剂实施例B 如下制备用在干粉吸入装置中的干粉制剂 有代表性的方法制备本发明微粉化化合物与乳糖混合制剂的比为1∶200的药物组合物。将该组合物装入每剂量能够传递约10μg至100μg本发明化合物的干粉吸入装置。
制剂实施例C 如下制备在定量吸入器中通过吸入给药的干粉 有代表性的方法通过将10g平均粒径小于10μm的呈微粉化颗粒形式的本发明化合物分散在由溶解在200mL软化水中0.2g卵磷脂形成的溶液中来制备包含5wt％本发明化合物和0.1wt％卵磷脂的混悬液。将该混悬液喷雾干燥并将得到的物质微粉化成平均直径小于1.5μm的颗粒。将颗粒装入有加压的1，1，1，2-四氟乙烷的药筒中。制剂实施例D 如下制备用于定量吸入器的药物组合物 有代表性的方法通过将5g平均粒径小于10μm的呈微粉化颗粒形式的活性成分分散在由0.5g海藻糖和0.5g卵磷脂溶解在100mL软化水中形成的胶体溶液中来制备包含5％本发明化合物、0.5％卵磷脂和0.5％海藻糖的混悬液。将该混悬液喷雾干燥并将得到的物质微粉化成平均直径小于1.5μm的颗粒。将颗粒装入有加压的1，1，1，2-四氟乙烷的灌中。
制剂实施例E 如下制备用于雾化器吸入器的药物组合物 有代表性的方法用于雾化器的水性气溶胶制剂是通过将0.1mg本发明化合物溶解在用柠檬酸酸化的1mL 0.9％的氯化钠溶液中进行制备的。搅拌并超声混合物直到活性成分溶解。通过缓慢滴加NaOH将溶液的pH调整至3-8范围内的值。
制剂实施例F 如下制备用于口服给药的硬明胶胶囊 成分 量 本发明化合物 250mg 乳糖(喷雾干燥) 200mg 硬脂酸镁 10mg 有代表性的方法将成分彻底混合，然后装入硬明胶胶囊(每个胶囊460mg组合物)。
制剂实施例G 如下制备用于口服给药的混悬液 成分 量 本发明化合物 1.0g 富马酸 0.5g 氯化钠 2.0g 对羟基苯甲酸甲酯 0.15g 对羟基苯甲酸丙酯 0.05g 粒状糖 25.5g 山梨醇(70％溶液) 12.85g Veegum k(Vanderbilt Co.) 1.0g 调味剂 0.035mL 着色剂 0.5mg 蒸馏水 适量至100mL 有代表性的方法将成分混合以形成每10mL混悬液包含100mg活性成分的混悬液。
制剂实施例H 如下制备可注射制剂 成分 量 本发明化合物 0.2g 醋酸钠缓冲溶液(0.4M) 2.0mL HCl(0.5N)或NaOH(0.5N) 适量至pH4 水(蒸馏的，无菌) 适量至20mL 有代表性的方法混合上述成分，用0.5N HCl或0.5N NaOH将pH调整至4±0.5。
实用性 本发明的联苯衍生物具有β2肾上腺素能受体激动剂和毒蕈碱受体拮抗剂两种活性，因此，这种化合物适用于治疗由β2肾上腺素能受体或毒蕈碱受体介导的医疗状况，即通过用β2肾上腺素能受体激动剂或毒蕈碱受体拮抗剂能缓解的医学状况。这种医学状况包括，通过举例，与可逆的气道阻塞有关的肺病症或疾病，例如慢性阻塞性肺病(例如慢性和喘鸣的支气管炎和肺气肿)、哮喘、肺纤维化等。其它可以被治疗的状况包括早产、抑郁、充血性心力衰竭、皮肤病(例如，炎性、过敏性、牛皮癣和增生性皮肤病)，降低消化酸度的状况是合乎需要的(例如消化和胃溃疡)和肌肉萎缩性疾病。
因此，在一个实施方案中，本发明涉及治疗肺病的方法，该方法包括给予需要治疗的患者有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。当用于治疗肺病时，本发明化合物通常通过以每天多剂量、每日单次剂量或每周单次剂量吸入被给药。通常，用于治疗肺病的剂量为约10μg/天至约200μg/天。
当通过吸入给药时，本发明化合物通常具有提供支气管扩张的作用。因此，在它的方法方面的另一方面，本发明涉及在患者中提供支气管扩张的方法，该方法包括给予需要支气管扩张的患者治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。通常，提供支气管扩张的剂量将在约10μg/天至约200μg/天的范围内。
在一个实施方案中，本发明涉及治疗慢性阻塞性肺病或哮喘的方法，该方法包括给予需要治疗的患者治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。当用来治疗COPD或哮喘时，本发明化合物将通常通过以每日多剂量或每日单剂量吸入给药。通常，治疗COPD或哮喘的剂量将在10μg/天至200μg/天的范围内。
当在本文使用时，COPD包括慢性阻塞性支气管炎和肺气肿(例如见Barnes，Chronic Obstructive Pulmonary disease，N Engl J Med2000343269-78)。
当用于治疗肺病时，本发明化合物任选地与其它治疗剂组合给药。尤其是组合本发明化合物和甾体抗炎剂(例如皮质类固醇)，本发明的药物组合物仅用两种活性成分就可以提供三重治疗，即β2肾上腺素能受体激动剂、毒蕈碱受体拮抗剂和抗炎活性。由于与包含三种活性成分的组合物相比，包含两种活性成分的药物组合物通常更容易被制备，所以这种双组分组合物显著优于包含三种活性组分的组合物。因此，在特定实施方案中，本发明的药物组合物和方法进一步包含治疗有效量的甾体抗炎剂。
本发明的化合物显示毒蕈碱受体拮抗剂和β2肾上腺素能受体激动剂两种活性。因此，除了其它性质以外，特别感兴趣的化合物是证明在M3毒蕈碱受体结合的抑制常数Ki值和β2肾上腺素能受体激动剂活性的EC50值小于约100nM；尤其是小于10nM的那些。除了这些化合物以外，特别感兴趣的化合物包括当以本文描述的体外试验或以相似试验测定时，用在M3毒蕈碱受体结合的抑制常数Ki表达的毒蕈碱活性大约等于用半数最大有效浓度EC50表达的化合物的β2肾上腺素能激动剂活性的那些。例如，特别感兴趣的化合物是在M3毒蕈碱受体结合的抑制常数Ki与β2肾上腺素能受体的EC50的比为约30∶1至约1∶30；包括约20∶1至约1∶20；例如约10∶1至约1∶10的那些。
在它的方法方面的一个方面，本发明也提供治疗肺病的方法，该方法包括给予需要治疗的患者治疗有效量的具有毒蕈碱受体拮抗剂和β2肾上腺素能受体激动剂两种活性的化合物。在该方法的特定实施方案中，给药的化合物的M3毒蕈碱受体的抑制常数Ki小于约100nM，β2肾上腺素能受体激动的半数最大有效浓度EC50小于约100nM。在另一实施方案中，治疗肺病的方法包括给药治疗有效量的化合物，其对M3毒蕈碱受体的抑制常数Ki与β2肾上腺素能受体激动的EC50的比为约30∶1至约1∶30。
由于本发明的化合物既具有β2肾上腺素能激动剂活性也具有毒蕈碱受体拮抗剂活性，这种化合物也被适用作调查或研究具有β2肾上腺素能受体或毒蕈碱受体的生物系统或样本的研究工具，或用作发现既具有β2肾上腺素能受体激动剂活性也具有毒蕈碱受体拮抗剂活性的新化合物的研究工具。这种生物系统或样本可以包含β2肾上腺素能受体和/或毒蕈碱受体。任何合适的具有β2肾上腺素能和/或毒蕈碱受体的生物系统或样本都可以被用在这种研究中，其可以在体外或体内进行。适用于这种研究的有代表性的生物系统或样本包括，但不限于细胞、细胞提取物、质膜、组织样本、哺乳动物(例如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、猪等)等。
在这一实施方案中，使包含β2肾上腺素能受体或毒蕈碱受体的生物系统或样本与β2肾上腺素能受体激动量或毒蕈碱受体拮抗量的本发明的化合物相接触。然后利用常规方法和设备测定效果，例如放射配基结合试验和功能试验。这种功能试验包括配基介导的细胞内环磷腺苷(cAMP)的变化，配基介导的酶腺苷酸环化酶(其合成cAMP)活性的变化，配基介导的经由受体催化的[35S]GTP S对GDP的交换将鸟苷5′-O-(-硫代)三磷酸酯([35S]GTP S)引入分离的膜变化，配基介导的游离细胞内钙离子变化(例如用来自Molecular Devices，Inc.的荧光联合成像板读出器或FLIPR测量)。本发明化合物将激动或引起β2肾上腺素能受体的活化并在上述列出的任何功能试验或类似性质的试验中拮抗或减少毒蕈碱受体的活化。在这些研究中采用的化合物的量将通常在约0.1纳摩尔至约100纳摩尔的范围内。
此外，本发明的化合物可以被用作发现具有β2肾上腺素能受体激动剂和毒蕈碱受体拮抗剂两种活性的新化合物的研究工具。在这一实施方案中，将试验化合物或试验化合物组的β2肾上腺素能受体和毒蕈碱受体结合数据(例如，通过体外放射性配基置换试验测定的)与本发明化合物的β2肾上腺素能受体和毒蕈碱受体结合数据相比较，来鉴别那些具有大约相同的或更好的β2肾上腺素能受体和/或毒蕈碱受体结合的那些试验化合物，如果有的话。本发明的这一方面包括，作为单独的实施方案，产生比较数据(利用合适的试验)和试验数据的分析来鉴定感兴趣的试验化合物。
在某些情况下，本发明的化合物可能拥有弱的毒蕈碱受体拮抗剂活性或弱的β2肾上腺素能受体激动剂活性。在这些情况下，本领域普通技术人员将会认识到分别主要作为β2肾上腺素能受体激动剂或毒蕈碱受体拮抗剂，这样的化合物仍然具有实用性。
本发明化合物的性质和实用性可以利用对于本领域技术人员公知的各种体外和体内试验来证明。例如，在下述实施例中进一步详细描述了有代表性的试验。
实施例 提供下述制备和实施例来举例说明本发明的特定实施方案。然而，除非特别指出，这些特定实施方案不以任何方式限制本发明的范围。
除非另外指出，下述缩写具有下述含义，未定义的本文采用的任何其它缩写具有它们的标准含义 AC 腺苷酸环化酶 Ach 乙酰胆碱 ATCC 美国典型培养物保藏中心 BSA 牛血清白蛋白 cAMP3′-5′环腺苷一磷酸 CHO 中国仓鼠卵巢 cM5 克隆的黑猩猩M5受体 DCM 二氯甲烷(即氯化亚甲) DIPEAN，N-二异丙基乙胺 dPBS Dulbecco磷酸盐缓冲盐水 DMEM Dulbecco改良伊格尔(氏)培养基 DMSO 二甲基亚砜 EDTA 乙二胺四乙酸 Emax 最大效能 EtOAc 乙酸乙酯 EtOH 乙醇 FBS 胎牛血清 FLIPR 荧光测定成像板读出器 Gly 甘氨酸 HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐 HBSS Hank′s缓冲盐溶液 HEK 人胚肾细胞 HEPES4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸 hM1 克隆的人M1受体 hM2 克隆的人M2受体 hM3 克隆的人M3受体 hM4 克隆的人M4受体 hM5 克隆的人M5受体 HPLC 高效液相色谱法 IBMX 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤 ％Eff 百分率功效 PBS 磷酸盐缓冲盐水 PyBOP 苯并三唑-1-基氧三吡咯烷磷六氟磷酸盐 rpm 每分钟转数 TFA 三氟醋酸 THF 四氢呋喃 Tris 三(羟甲基)氨基甲烷 除非另外指出，试剂、原料和溶剂购自商品提供商(例如Aldrich，Fluka，Sigma等)并且使用无需进一步纯化。
在下述实施例中，利用具有3.5微米颗粒尺寸由Agilent提供的有Zorbax Bonus RP 2.1×50mm柱(C14柱)的Agilent(Palo Alto，CA)Series 1100仪器进行HPLC分析。检测是通过在214nm处的UV吸收。经6分钟用0.5mL/分钟10％-70％B的流速获得HPLC 10-70数据。流动相A是2％-98％-0.1％ACN-水-TFA；流动相B是90％-10％-0.1％CAN-水-TFA。应用上述流动相A和B，用5分钟梯度获得HPLC 5-35数据和HPLC 10-90数据。
用Applied Biosystems(Foster City，CA)型API-150EX仪器获得液相色谱质谱(LCMS)数据。用10％-90％流动相B经5分钟梯度获得LCMS 10-90数据。
利用来自Applied Biosystems的API 150EX Prep工作站系统进行小规模纯化。流动相是A水+0.05％v/v TFA；和B乙腈+0.05％v/vTFA。至于排列(通常约3-50mg回收的样本大小)采用下述条件20mL/分钟流速；15分钟梯度和有5微米颗粒的20mm×50mm Prism RP柱(Thermo Hypersil-Keystone，Bellefonte，PA)。至于更大规模纯化(通常大于100mg粗制样本)，采用下述条件60ml/分钟流速；30分钟梯度和有10微米颗粒的41.4mm×250mm Microsorb BDS柱(Varian，Palo Alto，CA)。
在20℃利用有钨卤素光源和589nm过滤器的Jasco旋光仪(型号P-1010)测定手性化合物的比旋度(称作[α]20D)。
制备1 N-1，1′-联苯基-2-基-N′-4-(1-苄基)哌啶基脲 在室温将联苯基-2-异氰酸盐(50g，256mmol)溶解在乙腈(400mL)中。在冷却至0℃后，经5分钟加入4-氨基-N-苄基哌啶(48.8g，256mmol)在乙腈(400mL)中的溶液。立即观察到沉淀。15分钟后，加入乙腈(600mL)，在35℃搅拌得到的粘稠混合物12h。然后过滤出固体并用冷乙腈洗涤，然后真空干燥，得到标题化合物(100g，产率98％)。C25H27N3O的MS m/z[M+H+]计算值是386.22；实测值是386.3。
制备2 N-1，1′-联苯基-2-基-N′-4-哌啶基脲 将制备1的产物(20g，52mmol)溶解在无水甲醇和无水DMF(3∶1，800mL)的混合物中。向溶液中加入含水盐酸(0.75mL 37％浓溶液，7.6mmol)并剧烈通入氮气20分钟。在氢气氛(气球)下放置反应混合物之前，在氮气流下加入Pearlman氏催化剂(Pd(OH)2，5g)。搅拌反应混合物4天，然后使其两次通过硅藻土垫以除去催化剂。然后在减压下除去溶剂得到标题化合物(13g，产率85％)。C18H21N3O的MS m/z[M+H+]计算值是296.17；实测值是296.0。
或者，通过在70℃一起加热联苯基-2-异氰酸盐(50g，256mmol)和4-氨基-N-苄基哌啶(51.1g，269mmol)12h来合成N-1，1′-联苯基-2-基-N’-4-哌啶基脲(通过LCMS监测反应)。将反应混合物冷却至50℃，并加入乙醇(500mL)，然后缓慢加入6M盐酸(95mL)。
将反应混合物冷却至室温。在加入钯(10wt.％(干基)在活性炭上)(10g)前将甲酸铵(48.4g，768mmol)加入反应混合物，并向溶液中剧烈通入氮气20分钟。在40℃加热该反应混合物12h，然后经硅藻土垫过滤，并在减压下除去溶剂。向粗制残留物中加入1M盐酸(20mL)和10N氢氧化钠以调节pH至12。用乙酸乙酯(2×80mL)提取含水层，干燥(硫酸镁)和在减压下除去溶剂，得到呈固体的标题化合物(71.7g，产率95％)。C18H21N3O的MS m/z[M+H+]计算值是296.17；实测值是296.0。
制备3 N-1，1′-联苯基-2-基-N′-4-[1-(9-羟基壬基)]哌啶基脲 在50℃将9-溴-1-壬醇(4.84g，21.7mmol)加入到制备2的产物(5.8g，19.7mmol)和二异丙基乙胺(10.29mL，59.1mmol)在乙腈(99mL)中的经搅拌的溶液中。在50℃加热反应混合物8h。然后使反应混合物冷却并在减压下除去溶剂。将残留物溶解在二氯甲烷(100mL)中，用饱和的含水碳酸氢钠(2×50ml)洗涤并干燥(硫酸镁)。在减压下除去溶剂。通过急骤色谱法(二氯甲烷∶甲醇∶氨系统)纯化粗产物，得到标题化合物(7.1g，16.2mmol，产率82％)。
制备4 N-1，1′-联苯基-2-基-N′-4-[1-(9-氧壬基)]哌啶基脲 在氮气氛下在-10℃将二甲基亚砜(490μL，6.9mmol)，随后是二异丙基乙胺(324μL，3.45mmol)加入到制备3的产物(500mg，1.15mmol)在二氯甲烷(11.5mL)中的溶液中。在-15℃搅拌反应混合物15分钟，然后分批加入三氧化硫吡啶络合物(549mg，3.45mmol)。在-15℃搅拌反应混合物1h，然后加入水(10mL)。然后分离有机相，用水(10mL)洗涤，并干燥(硫酸钠)。在减压下除去溶剂，得到标题化合物(475mg，1.09mmol，产率95％)。HPLC(10-70)Rt＝3.39。
制备5 N-1，1′-联苯基-2-基-N’-4-[1-(9-氨基壬基)]哌啶基脲 将钯(10wt.％(干基)在活性炭上)(1.5g)加入到制备4的产物(1.58g，3.63mmol)和苄基胺(516μL，4.72mmol)在甲醇(36.3mL)中的经搅拌的溶液中。在氢气氛下放置反应混合物。在搅拌12h后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤并用甲醇(10mL)洗涤。在减压下除去溶剂，得到标题化合物(1.50g，3.45mmol，产率95％)。HPLC(10-70)Rt＝2.35；C27H40N4O1的MS m/z[M+H+]计算值是437.06；实测值是437.5。
制备6 8-苄氧基-5-(2，2-二羟基乙酰基)-1H-喹啉-2-酮 (a)8-乙酰氧基-1H-喹啉-2-酮 将可商业购自Aldrich，Milwaukee，WI的8-羟基喹啉-N-氧化物(160.0g，1.0mol)和醋酸酐(800mL，8.4mol)在100℃加热3h，然后在冰中冷却。在布氏漏斗上收集产物，用醋酸酐(2×100mL)洗涤并减压干燥得到呈固体的8-乙酰氧基-1H-喹啉-2-酮(144g)。
(b)5-乙酰基-8-羟基-1H-喹啉-2-酮 在冰中冷却氯化铝(85.7g，640mmol)在1，2-二氯乙烷(280mL)中的浆液，并加入步骤(a)的产物(56.8g，280mmol)。将该混合物暖至室温，然后在85℃加热。30分钟后，加入乙酰氯(1.5mL，21mmol)并再加热该混合物60分钟。然后冷却反应混合物，并随良好搅拌在0℃将其加入1N盐酸(3L)。搅拌2h后，在布氏漏斗上收集固体，用水洗涤(3×250mL)并减压干燥。合并从多个批次分离的粗产物(135g)，并用二氯甲烷(4L)研磨6h。在布氏漏斗上收集产物并在减压下干燥得到5-乙酰基-8-羟基-2(1H)-喹啉酮(121g)。
(c)5-乙酰基-8-苄氧基-1H-喹啉-2-酮 向步骤(b)的产物(37.7g，186mmol)中加入N，N-二甲基甲酰胺(200mL)和碳酸钾(34.5g，250mmol)，随后加入苄基溴(31.8g，186mmol)。在室温搅拌该混合物2.25小时，然后在0℃将其倒入饱和的氯化钠(3.5L)并搅拌1小时。收集产物并在布氏漏斗上干燥1小时，将得到的固体溶解在二氯甲烷(2L)中，并经硫酸钠干燥该混合物。经硅藻土垫过滤该溶液，然后用二氯甲烷(5×200mL)洗涤。然后浓缩合并的滤液至干，然后用乙醚(500mL)研磨得到的固体2h。在布氏漏斗上收集产物，用乙醚(2×250mL)洗涤并减压干燥得到呈粉末的5-乙酰基-8-苄氧基-1H-喹啉-2-酮(44g)。
(d)8-苄氧基-5-(2，2-二羟基乙酰基)-1H-喹啉-2-酮 向步骤(c)(10.0g，34.1mmol)的产物在DMSO(60mL)中的浆液中加入48％w/w氢溴酸溶液(11.8mL，102.3mmol)。将该混合物暖至60℃16h，然后使之冷却至室温。在冷却至0℃前，加入水(100mL)并在室温搅拌得到的浆液0.5h。在布氏漏斗上收集产物，然后减压干燥得到呈固体的8-苄氧基-5-(2，2-二羟基乙酰基)-1H-喹啉-2-酮(12.2g)。
制备7 1-(1-{9-[2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-羟基乙基氨基]壬基}哌啶-4-基)-3-联苯基-2-基脲 在室温将制备5的产物(183mg，0.42mmol)和制备6的产物(149mg，0.46mmol)在二氯乙烷(4.2mL)中搅拌2h。然后加入三乙酰氧基氢硼化钠(267mg，1.26mmol)，并再搅拌反应混合物12h。
用二氯甲烷(10mL)稀释反应混合物，用饱和的含水碳酸氢钠(10mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，在减压下除去溶剂。用急骤色谱法纯化粗反应混合物(在二氯甲烷中的5-10％甲醇，0.5％氢氧化铵)得到标题化合物(144mg，0.20mmol，产率48％)。HPLC(10-70)Rt＝3.48；C45H55N5O4的MS m/z[M+H+]计算值是730.4；实测值是730.7。
实施例1 1-联苯基-2-基-3-(1-{9-[2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]壬基}哌啶-4-基)脲 将钯(10wt.％(干基)在活性炭上)(63mg)加入制备7的产物(144mg，0.20mmol)在甲醇(2mL)中的经搅拌的溶液中，并在氢气氛下放置该反应混合物。搅拌12h后，经硅藻土垫过滤该反应混合物，用甲醇(2mL)洗涤，然后减压除去溶剂。用制备性HPLC纯化得到的残留物，得到标题化合物(10mg)。HPLC(10-70)Rt＝2.8；C38H49N5O4的MS m/z[M+H+]计算值是640.3；实测值是640.5。
制备8 联苯基-2-基氨基甲酸哌啶-4-基酯 将均是从Aldrich，Milwaukee，WI购得的联苯基-2-异氰酸盐(97.5g，521mmol)和4-羟基-1-苄基哌啶(105g，549mmol)一起在70℃加热12h，通过LCMS监测在这期间的联苯基-2-基氨基甲酸-1-苄基哌啶-4-基酯的形成。然后将反应混合物冷却至50℃并加入乙醇(1L)，然后缓慢加入6M盐酸(191mL)。然后将反应混合物冷却至室温，加入甲酸铵(98.5g，1.56mol)，并向溶液中剧烈通入氮气20分钟。然后加入钯(10wt.％(干基)在活性炭上)(20g)。在40℃加热反应混合物12h，然后经硅藻土垫过滤。然后减压除去溶剂并向粗制残留物中加入1M盐酸(40mL)。然后加入氢氧化钠(10N)来调节pH至12。用乙酸乙酯(2×150mL)提取水层并干燥(硫酸镁)，然后减压除去溶剂得到标题化合物(155g，100％)。HPLC(10-70)Rt＝2.52；C18H20N2O2的MS m/z[M+H+]计算值是297.15；实测值是297.3。
制备9 N，N-(二-叔丁氧基羰基)-9-溴壬基胺 将二-叔丁氧基羰基胺(3.15g，14.5mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(0.28mL)中的溶液冷却至0℃约10min。加入60％在矿物油中的氢化钠(0.58g，14.5mmol)并在0℃搅拌反应混合物10min。从冰浴取出反应混合物并使之暖至室温约30min。然后将反应混合物冷却回0℃，加入1，9-二溴壬烷(2.46mL，12.1mmol)在二甲基甲酰胺(100mL)中的溶液。在室温搅拌反应混合物过夜。24h后，MS分析显示反应完成。将反应混合物浓缩至干并用乙酸乙酯(100mL)稀释。用饱和的碳酸氢钠(2×100mL)、盐水(100mL)洗涤有机层，干燥(硫酸镁)并减压浓缩得到粗产物，通过利用在己烷中的5％乙酸乙酯的硅胶色谱法纯化粗产物，得到标题化合物。C19H36N1O4Br的MS m/z[M+H+]计算值是423.18；实测值是423。
制备10 联苯基-2-基氨基甲酸1-(9-二-叔丁氧基羰基氨基)壬基]哌啶-4-基酯 将乙腈和N，N二甲基甲酰胺(50mL)的混合物加入制备8的产物(3.0g，10.1mmol)和制备9的产物(5.1g，12.2mmol)和三乙胺(1.42mL，10.1mmol)中。在室温搅拌反应混合物24h并通过LCMS分析监测。然后浓缩反应混合物并用乙酸乙酯(50mL)稀释。用饱和的碳酸氢钠(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤有机层。然后经硫酸镁干燥有机相并浓缩得到6.5g粗制油。通过利用1∶1己烷/乙酸乙酯在硅胶上的色谱法纯化油得到标题化合物(3g)。C37H55N3O6的MS m/z[M+H+]计算值是638.41；实测值是639。
制备11 联苯基-2-基氨基甲酸1-(9-氨基壬基)哌啶-4-基酯 将三氟醋酸(11mL)加入制备10的产物(7.2g，11.3mmol)在二氯甲烷(56mL)中的溶液中。12h后，LCMS分析显示反应完成。然后浓缩反应混合物至干并用乙酸乙酯(75mL)稀释。然后加入氢氧化钠(1N)直到混合物的pH达到14。然后收集有机相，用饱和的碳酸氢钠(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤。然后经硫酸镁干燥有机相并浓缩，得到标题化合物(5.5g)。C27H39N3O2的MS m/z[M+H+]计算值是438.30；实测值是439。
制备12 联苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-羟基乙基氨基]壬基}哌啶-4-基酯 将制备11的产物(196mg，0.43mmol)溶解在二氯乙烷(4mL)中并加入三乙酰氧基氢硼化钠(101mg，0.48mmol)。在室温搅拌反应混合物约10min然后加入8-苄氧基-5-(2，2-二羟基乙酰基)-1H-喹啉-2-酮(制备6)(141mg，0.43mmol)。LCMS分析显示反应在2h后完成。将甲醇(1mL)加入反应混合物，然后缓慢加入氢硼化钠(18mg，0.48mmol)。1小时后，LCMS分析显示反应完成。然后用含水氯化铵猝灭反应混合物，并用二氯甲烷萃取该混合物。用饱和的碳酸氢钠(2×50mL)和盐水(10mL)洗涤有机相。然后经硫酸镁干燥有机相并浓缩得到315mg黄色固体。通过利用在二氯甲烷中的10％甲醇的硅胶色谱法纯化固体得到标题化合物(64mg)。C43H55N4O5的MS m/z[M+H+]计算值是730.40；实测值是731。
实施例2 联苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]壬基}哌啶-4-基酯二三氟乙酸酯 在制备12的产物(64mg，0.09mmol)在甲醇(450mL)中的溶液中充入氮气。然后加入碳载钯(10％，10mg)，在包含氢的气球下放置反应混合物并搅拌。LCMS分析显示反应在9h后完成。然后过滤反应混合物，浓缩滤液得到黄色易碎固体。通过制备性HPLC纯化固体(5-35经60min)得到标题化合物(19mg)。C38H48N4O5的MS m/z[M+H+]计算值是641.36；实测值是641。
制备13 8-苄氧基-5-[(R)-2-溴-1-(叔-丁基二甲基硅烷氧基)乙基]-1H-喹啉-2-酮 (a)8-苄氧基-5-(2-溴乙酰基)-1H-喹啉-2-酮 将5-乙酰基-8-苄氧基-1H-喹啉-2-酮(制备6)(20.0g，68.2mmol)溶解在二氯甲烷(200mL)中并冷却至0℃。经由注射器加入三氟化硼二乙基醚合物(10.4mL，82.0mmol)并将该混合物暖至室温得到稠混悬液。在45℃加热该混悬液(油浴)并经40分钟加入溴(11.5g，72.0mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液。再保持该混合物在45℃15min，然后冷却至室温。减压浓缩该混合物，然后用10％的含水碳酸钠(200mL)研磨1小时。在布氏漏斗上收集固体，用水洗涤(4×100mL)并减压干燥。合并两次产品来纯化。用在氯仿(500mL)中的50％甲醇研磨粗产物(52g)1小时。在布氏漏斗上收集产物，用在氯仿(2×50mL)中的50％甲醇和甲醇(2×50mL)洗涤。减压干燥固体得到呈粉末的标题化合物(34.1g)。
(b)8-苄氧基-5-((R)-2-溴-1-羟基乙基)-1H-喹啉-2-酮 将(R)-(+)-α，α-二苯基prolinol(30.0g，117mmol)和三甲基硼氧六环(11.1mL，78mmol)在甲苯(300mL)中合并并在室温搅拌30min。将该混合物置于150℃油浴中并蒸馏出液体。以20mL等分量加入甲苯并持续蒸馏4h。总共加入300mL甲苯。然后将混合物冷却至室温。500μL等分量被蒸发至干并称重(246mg)以确定催化剂的浓度是1.8M。
将8-苄氧基5-(2-溴乙酰基)-1H-喹啉-2-酮(90.0g，243mmol)放置在氮气下，加入四氢呋喃(900mL)，随后加入上述催化剂(1.8M在甲苯中，15mL，27mmol)。在冰/异丙醇浴中将该混悬液冷却至-10±5℃。经4h加入甲硼烷(1.0M在THF中，294mL，294mmol)。然后在-10℃再搅拌反应物45分钟，然后缓慢加入甲醇(250mL)。真空浓缩该混合物并将残留物溶解在沸腾的乙腈(1.3L)中，趁热过滤，然后冷却至室温。过滤结晶，用乙腈洗涤并真空干燥得到标题化合物(72.5g，196mmol，产率81％，95％对映体过量，通过HPLC纯度95％)。
(c)8-苄氧基-5-[(R)-2-溴-1-(叔-丁基二甲基硅烷氧基)乙基]-1H-喹啉-2-酮 向步骤(b)的产物(70.2g，189mmol)中加入N，N二甲基甲酰胺(260mL)并在氮气下将该混合物在冰浴中冷却。经5分钟加入2，6-二甲基吡啶(40.3g，376mmol)，然后缓慢加入叔丁基二甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯(99.8g，378mmol)，同时维持温度在20℃以下。使该混合物暖至室温45分钟。经10分钟将甲醇(45mL)滴加入该混合物，并在乙酸乙酯/环己烷(1∶1，500mL)和水/盐水(1∶1，500mL)之间分配混合物。再用水/盐水(1∶1，各500mL)洗涤有机物两次。减压蒸发合并的有机物得到淡黄色油。将两个单独份的环己烷(400mL)加入油中，持续蒸馏直到形成稠的白色浆液。将环己烷(300mL)加入浆液，过滤得到的白色晶体，用环己烷(300mL)洗涤，减压干燥得到标题化合物(75.4g，151mmol，产率80％，98.6％对映体过量)。
制备14 联苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基氨基]壬基}哌啶-4-基酯 将制备13的产物(3.9g，8.17mmol)加入制备11的产物(5.0g，11.4mmol)在THF(20mL)中的溶液中，然后加入碳酸氢钠(2.0g，24.5mmol)和碘化钠(1.8g，12.2mmol)。将反应混合物加热至80℃72h。然后冷却该反应混合物，用二氯甲烷(20mL)稀释并用饱和的碳酸氢钠(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤有机相。然后干燥(硫酸镁)有机相，浓缩得到6.5g粗产物。通过在硅胶上的色谱法用在二氯甲烷中的3％甲醇洗脱得到标题化合物(1.4g，产率21％)。
制备15 联苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-羟基乙基氨基]壬基}哌啶-4-基酯 将三乙基胺氢氟化物(376pL，2.3mmol)加入制备14的产物(1.3g，1.5mmol)在THF(8mL)中的溶液中，并在室温搅拌反应混合物。5h后，用LCMS分析来测定反应的完成。用1N NaOH猝灭反应混合物，直到pH为14，然后用乙酸乙酯(20mL)稀释，用1N NaOH(20mL)和盐水(20mL)洗涤。然后分离有机相，经硫酸镁干燥，浓缩得到标题化合物(1.1g)。
实施例3 联苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢-喹啉-5-基)乙基氨基]壬基}哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 制备15的产品(1.1g，1.5mmol)的溶液充以氮气并加入碳载钯(10％，110mg)。在气球压力氢下搅拌反应混合物。LCMS分析显示9h后反应完成。然后过滤反应混合物，并浓缩得到黄色固体。通过制备性HPLC(5-30经60min)纯化该固体得到标题化合物(510mg)。C38H48N4O5的MS m/z[M+H+]计算值是641.36；实测值是641。HPLC方法10-703.207。[α]20D＝-23.6(c＝1.0mg/mL，水)。
实施例3A 联苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢-喹啉-5-基)乙基氨基]壬基}哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 或者，如下制备标题化合物 (a)9-溴壬醛 在氮气下，向装配有磁性搅拌器、填加漏斗和温度控制器的100-mL圆底烧瓶中加入9-溴壬醇(8.92g，40mmol)和二氯甲烷(30mL)。将得到的混合物冷却至5℃并加入在水(10mL)中的碳酸氢钠(0.47g，5.6mmol)和溴化钾(0.48g，4mmol)溶液。加入2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基游离基(TEMPO)(63mg，0.4mmol)，然后通过填加漏斗以一定的速率滴加10-13％的漂白液(27mL)，以便用冰冷浴将温度维持在大约8℃(+/-2℃)(经大约40min)。在漂白液添加完成后，搅拌该混合物30分钟。同时维持温度在大约0℃。加入亚硫酸氢钠(1.54g)在水(10mL)中的溶液，在室温搅拌得到的混合物30分钟。然后分离混合物层，用二氯甲烷(1×20mL)萃取乳白色的水层。然后用水(1×30mL)洗涤合并的二氯甲烷层，干燥(MgSO4)，过滤，减压浓缩得到标题中间体(8.3g，94％产率)，在下一步骤中其被使用无需进一步纯化。
(b)9-溴-1，1-二甲氧基壬烷 向100mL圆底烧瓶中加入9-溴壬醛(7.2g，32.5mmol)、甲醇(30mL)和三甲基正甲酸酯(4mL，36.5mmol)。加入4N盐酸在二烷(0.2mL，0.8mmol)中的溶液，回流得到的混合物3h。然后将反应混合物冷却至室温并加入固体碳酸氢钠(100mg，1.2mmol)。减压浓缩得到的混合物至其原始体积的四分之一，然后加入乙酸乙酯(50mL)。用水(2×40mL)洗涤有机层，干燥(MgSO4)，过滤，减压浓缩得到呈液体的标题中间体(8.44g，(产率97％))，其被用于下一步骤而无需进一步纯化。
(c)联苯基-2-基氨基甲酸1-(9，9-二甲氧基壬基)哌啶-4-基酯 向50mL三颈圆底烧瓶中加入联苯基-2-基氨基甲酸哌啶-4-基酯(1g，3.38mmol)和乙腈(10mL)以形成浆液。向该浆液中加入9-溴-1，1-二甲氧基壬烷(1.1g，1.3mmol)和三乙基胺(0.57g，4.1mmol)并在65℃加热得到的混合物6h(通过HPLC监测反应直到原料＜5％)。然后将反应混合物冷却至室温，这时该混合物形成粘稠的浆液。加入水(5mL)，过滤混合物，在粗糙多孔玻璃滤器上收集固体。用乙腈(10mL)和水(5mL)的预混合溶液洗涤固体，然后用乙腈(10mL)和水(2mL)的另一预混合溶液洗涤固体。空气干燥得到的固体，提供呈白色固体的标题中间体(1.37g，84％，纯度＞96％通过LC，1HNMR)。
(d)联苯基-2-基氨基甲酸1-(9-氧壬基)哌啶-4-基酯 向带有磁力搅拌器的500mL圆底烧瓶中加入联苯基-2基氨基甲酸1-(9，9-二甲氧基壬基)哌啶-4-基酯(7.7g，15.9mmol)，然后加入乙腈(70mL)和含水1M盐酸(70mL)。在室温搅拌得到的混合物1h，然后加入二氯甲烷(200mL)。搅拌该混合物15min，然后分离层。干燥(MgSO4)有机层，过滤和减压浓缩得到标题中间体(6.8g)，其被用于下一步骤而无需进一步纯化。
(e)联苯基-2-基氨基甲酸1-(9-{苄基-[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基]氨基}壬基)-哌啶-4-基酯 向300mL圆底烧瓶中加入5-[(R)-2-苄基氨基-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基]-8-苄氧基-1H-喹啉-2-酮(5g，9.73mmol)、二氯甲烷(100mL)和冰醋酸(0.6mL，10mmol)。利用冰浴将该混合物冷却至0℃，随搅拌加入联苯基-2-基氨基甲酸1-(9-氧壬基)哌啶-4-基酯(4.6g，9.73mmol)。在0℃搅拌该混合物30分钟，然后经15分钟分次加入三乙酰氧基氢硼化钠(6.15g，29mmol)。在0℃-10℃搅拌反应混合物2小时，然后加入饱和的碳酸氢钠水溶液(50mL)并搅拌该混合物15分钟。然后分离层，用5％氯化钠水溶液(50mL)洗涤有机层，干燥(MgSO4)，过滤和减压浓缩得到标题中间体(8.5g，80％纯度，通过HPLC)，其被使用而无需进一步纯化。
(f)联苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[(R)-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]壬基}哌啶-4-基酯 向200mL圆底烧瓶中加入来自步骤E的中间体(8.5g，9mmol)、乙醇(100mL)和冰醋酸(0.54mL，18mmol)，搅拌该混合物直到固体溶解。用氢净化反应混合物5min，然后加入10％碳载钯(1.7g)。在室温搅拌该混合物，同时缓慢地向反应混合物通入氢，直到用HPLC观察到＞95％的转化(约8-9h)。然后经硅藻土垫过滤该混合物，减压除去溶剂。通过硅胶色谱法(15g硅胶/1g粗产物)利用在DCM中的5％MeOH/0.5％NH4OH(10×150mL)、在DCM中的8％MeOH/0.5％NH4OH(10×150mL)和在DCM中的10％MeOH/0.5％NH4OH(10×150mL)纯化残留物。合并合适的级分，减压除去溶剂，同时维持温度＜35℃，得到标题中间体(4.05g，97％纯度)。
(g)联苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]壬基}哌啶-4-基酯 向200mL圆底烧瓶中加入来自步骤F的中间体(4.05g，5.36mmol)和二氯甲烷(80mL)并搅拌得到的混合物直到固体溶解。加入三乙胺三氢氟化物(2.6mL，16mmol)并在氮气下持续搅拌18-20h。加入甲醇(20mL)，然后缓慢加入饱和的含水碳酸氢钠(50mL)并搅拌混合物15分钟。然后分离各层，用饱和的氯化钠水溶液(20mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和减压浓缩得到呈黄色固体的标题化合物(3.5g，由HPLC测得纯度为98％)。
实施例3B 联苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]壬基}哌啶-4-基酯萘-1，5-二磺酸盐 将联苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]壬基}哌啶-4-基酯(1.0g，1.56mmol，游离碱)溶解在甲醇(10mL；低水含量)中。加入萘-1，5-二磺酸(0.45g，1.56mmol)在甲醇(5mL；低水含量)中的溶液，在30℃搅拌反应混合物两小时，然后在室温过夜(18h)。过滤得到的稠浆液，用甲醇(5mL)洗涤滤饼，然后干燥得到呈灰白色结晶固体的标题化合物(1.16g，80％产率)。
制备16 N-{2-苄氧基-5-[(R)-2-溴-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基]苯基}-甲酰胺 将(R)-2-溴-1-(3-甲酰胺基-4-苄氧基苯基)乙醇(9.9g，28mmol)溶解在二甲基甲酰胺(36mL)中。加入咪唑(2.3g，34mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(4.7g，31mmol)。在氮气氛下搅拌该溶液72h。加入另外的咪唑(0.39g，5.7mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(0.64g，4.3mmol)并再搅拌该反应物20h。然后用醋酸异丙酯(53mL)和己烷(27mL)的混合物稀释反应混合物并转移入分液漏斗。将有机层用水(27mL)和饱和的氯化钠水溶液(27mL)的混合物洗涤两次，随后用饱和的氯化钠水溶液(27mL)最终洗涤。经硫酸钠干燥有机层。加入硅胶(23.6g)和己烷(27mL)并搅拌该混悬液10分钟。通过过滤除去固体并真空浓缩滤液。从己烷(45mL)结晶残留物得到8.85g呈固体的标题化合物(19mmol，68％)。C22H30NO3SiBr的MS m/z[M+H+]计算值是464.1；实测值是464.2。
可以如在美国专利No.6,268,533 B1；或R.Hett等，OrganicProcess Research and Development，1998，296-99中的描述；或利用与在Hong等，Tetrahedron Lett.，1994，356631中描述的相似方法；或利用与在美国专利No.5,495,054中描述的相似方法制备原料-(R)-2-溴-1-(3-甲酰胺基-4-苄氧基苯基)乙醇。
制备17 联苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[(R)-2-(4-苄氧基-3-甲酰基氨基苯基)-2-(叔-丁基二甲基硅烷氧基)乙基氨基]壬基}哌啶-4-基酯 在室温将制备16的产物(500mg，1.008mmol)和碘化钠(243mg，1.62mmol)在四氢呋喃(0.5mL)中搅拌15min。然后加入制备11的产物(564mg，1.29mmol)和碳酸氢钠(272mg，3.24mmol)，并在80℃加热反应混合物24h。然后使反应混合物冷却。然后加入水(2mL)，并用二氯甲烷(2×2mL)萃取该混合物。用1M盐酸(2×1mL)洗涤合并的有机提取物，干燥(硫酸镁)和减压除去溶剂。通过急骤色谱法纯化粗制残留物(5-10％甲醇/二氯甲烷)得到标题化合物(360mg，0.44mmol，41％产率)。HPLC(10-70)Rt＝4.96；C49H68N4O5的MS m/z[M+H+]计算值是821.51；实测值是821.9。
制备18 联苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[(R)-2-(4-苄氧基-3-甲酰基氨基苯基)-2-羟基乙基氨基]壬基}哌啶-4-基酯 在室温向制备17的产物(360mg，0.44mmol)在四氢呋喃(2.2mL)中的经搅拌的溶液中加入三乙胺三氢氟化物(108μL，0.66mmol)。搅拌该反应混合物24h，然后用二氯甲烷(5mL)稀释和用1M盐酸(2mL)和饱和的碳酸氢钠水溶液(2mL)洗涤。干燥有机相(硫酸镁)且减压除去溶剂。粗制标题化合物被直接用于下一步骤而无需进一步纯化。HPLC(10-70)Rt＝4.6；C43H54N4O5的MS m/z[M+H+]计算值是707.43；实测值是707.8。
实施例4 联苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[(R)-2-(3-甲酰基氨基-4-羟基苯基)-2-羟基乙基氨基]壬基}哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 将钯(10wt.％(干基)在活性炭上)(124mg)加入制备18的产物(311mg，0.44mmol)在乙醇(4mL)中的经搅拌的溶液中并在氢气氛下放置反应混合物。搅拌12h后，通过硅藻土垫过滤反应混合物，用甲醇(2mL)洗涤并减压除去溶剂。通过制备性HPLC纯化得到的残留物得到标题化合物(41mg)。HPLC(10-70)Rt＝3.0；C36H48N4O5的MS m/z[M+H+]计算值是617.39；实测值是617.5。
实施例5 联苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2，3，4-四氢喹啉-5-基)乙基氨基]壬基}哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 将钯(10wt.％(干基)在活性炭上)(80mg)加入实施例3的产物(80mg，0.11mmol)在乙醇(1.1mL)中的经搅拌的溶液中并在氢气氛下放置反应混合物。将反应混合物搅拌12h，然后通过硅藻土垫过滤，用甲醇(2mL)洗涤和减压除去溶剂。使粗制物质再经受上述条件以确保完成反应。用制备性HPLC纯化得到的粗制残留物得到标题化合物(6mg)。HPLC(10-70)Rt＝3.23；C38H50N4O5的MS m/z[M+H+]计算值是643.39；实测值是643.7。
制备19 3-[4-(联苯基-2-基氨甲酰氧基)哌啶-1-基]丙酸甲基酯 在50℃将3-溴丙酸甲酯(553μL，5.07mmol)加入制备8的产物(1.00g，3.38mmol)和DIPEA(1.76mL，10.1mmol)在乙腈(34mL)中的经搅拌的溶液中，并在50℃加热反应混合物过夜。然后在减压下除去溶剂，并将残留物溶解在二氯甲烷(30mL)中。用饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤得到的溶液，干燥(硫酸镁)和减压除去溶剂。通过柱色谱法(5-10％MeOH/DCM)纯化粗制残留物得到标题化合物(905mg，70％)。
制备20 3-[4-(联苯基-2-基氨甲酰氧基)哌啶-1-基]丙酸 将制备19的产物(902mg，2.37mmol)和氢氧化锂(171mg，7.11mmol)在50％THF/水(24mL)中的搅拌溶液在30℃加热过夜，然后用浓盐酸酸化并冻干得到标题化合物(～100％产率，也包含LiCl盐)。
制备21 {5-[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-(叔丁基二甲基-硅烷氧基)乙基氨基]戊基}氨基甲酸叔丁基酯 将制备13的产物(600mg，1.23mmol)和N-叔丁氧基羰基-1，5-二氨基戊烷(622mg，3.07mmol)溶解在二甲基亚砜(1.23mL)中并加热至105℃6h。然后冷却反应混合物，并用乙酸乙酯(10mL)稀释和用饱和的碳酸氢钠水溶液(4mL)洗涤。干燥有机相(硫酸镁)和减压除去溶剂。通过柱色谱法(5-10％甲醇/二氯甲烷)纯化粗制残留物得到标题化合物(-100％产率)。
制备22 5-[(R)-2-(5-氨基戊基氨基)-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基]-8-苄氧基-1H-喹啉-2-酮 将制备21的产物(800mg，1.31mmol)在三氟醋酸/二氯甲烷(25％，12mL)中的溶液在室温搅拌1小时。然后减压除去溶剂，并将粗制残留物溶解在二氯甲烷(15mL)中，用1N氢氧化钠(8mL)洗涤。分离有机相，干燥(硫酸镁)和减压除去溶剂得到标题化合物(509mg，经过2个步骤，产率81％)。
制备23 联苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{5-[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基氨基]戊基氨甲酰基}乙基)哌啶-4-基酯 向制备20的产物(417mg，1.13mmol)和HATU(430mg，1.13mmol)中加入在DMF(1.8mL)中的制备22的产物(458mg，0.90mmol)，然后加入DIPEA(204μL，1.17mmol)。在50℃搅拌反应混合物12h，然后减压除去溶剂。将粗制残留物溶解在二氯甲烷(10mL)中。用饱和的碳酸氢钠水溶液(4mL)洗涤得到的溶液，干燥(硫酸镁)和减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗制残留物(5-10％甲醇/二氯甲烷和0.5％NH4OH)得到标题化合物(240mg，31％产率)。
制备24 联苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{5-[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-羟基乙基氨基]戊基氨甲酰基}乙基)哌啶-4-基酯 向制备23的产物(240mg，0.28mmol)在二氯甲烷(2.8mL)中的经搅拌的溶液中加入三乙胺三氢氟化物(91μL，0.56mmol)。搅拌反应混合物10h，然后用二氯甲烷(10mL)稀释。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液(5mL)洗涤得到的溶液，然后干燥有机相(硫酸镁)，减压除去溶剂得到标题化合物(209mg，产率100％)。
实施例6 联苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{5-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]戊基氨甲酰基}乙基)哌啶-4-基酯，二三氟醋酸酯 向制备24的产物(209mg，0.28mmol)在乙醇(2.8mL)中的经搅拌的溶液中加入钯(10wt.％(干基)在活性炭上)(81mg)，将反应混合物放置在氢气氛下并搅拌过夜。然后过滤反应混合物，减压除去溶剂。通过制备性HPLC纯化粗制残留物得到标题化合物(58mg)。HPLC(10-70)Rt＝2.30；C37H45N5O6的MS m/z[M+H+]计算值是656.34；实测值是656.6；[α]20D＝-6.5(c＝1.0mg/mL，水)。
实施例6A 联苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{5-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]戊基氨甲酰基}乙基)哌啶-4-基酯 或者，标题化合物可以如下制备 (a)5-氯戊醛 在氮气下向装配有磁力搅拌器、添加漏斗和温度控制器的2L三颈圆底烧瓶中加入5-氯戊醇(53g，0.433mol)和二氯甲烷(300mL)。
将该混合物冷却至5℃和加入碳酸氢钠(5g，0.059mol)和溴化钾(5.1g，0.043mol)在水(225mL)中的溶液。加入2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基游离基(TEMPO)(63mg，0.4mmol)，然后以一定速度通过添加漏斗滴加10-13％漂白溶液(275mL)，以便用冰冷浴维持温度在约8℃(+/-2℃)(经约45min.)。在漂白液添加完成后，搅拌该混合物30min。通过维持温度在大约5℃。加入亚硫酸氢钠(4g)在水(30mL)中的溶液并在室温搅拌得到的混合物30min。然后分离混合物的各层，并用二氯甲烷(1×50mL)萃取水层。然后用水(1×50mL)洗涤合并的二氯甲烷层，干燥(MgSO4)，过滤和减压浓缩得到标题化合物(53g)。在65℃/8托蒸馏该产物得到呈橙色油的标题化合物(31.16g)(GC纯度是70-80％)。
通过将粗制物质(4g)加入乙醇(920mL)、乙酸乙酯(12mL)和水(4mL)的混合物来进一步纯化该产物。加入亚硫酸氢钠(4g)，加热该混合物至回流4h，然后冷却至室温并在室温搅拌14h来形成非常稠的浆液。将该固体在粗玻璃滤器上过滤，用溶剂混合物(5mL)洗涤，并在滤器上干燥该固体得到8.4g亚硫酸氢盐加合物。然后将该物质加入MTBE(20mL)，并随剧烈搅拌加入1N氢氧化钠水溶液(45mL)。剧烈搅拌得到的双相混合物直到所有固体都溶解(约15min)，然后分离各层。用MTBE(20mL)提取水层并干燥合并的MTBE层(MgSO4)，过滤和浓缩得到3.46g呈元色液体的标题化合物(GC纯度＞90％)。
(b)5-[(R)-2-[苄基-(5-氯戊基)氨基]-1-(叔-丁基二甲基硅烷氧基)乙基]-8-苄氧基-1H-喹啉-2-酮 向1L三颈圆底烧瓶中加入制备28的产物(48.4g，94mmol)、二氯甲烷(400mL)和冰醋酸(11.3mL)。在0℃(冰浴)搅拌该混合物，加入来自步骤(a)的产物(12.5g，103.6mmol)并持续搅拌15分钟。然后经15分钟分次加入三乙酰氧基氢硼化钠(59.8g，282mmol)，在0℃-10℃搅拌得到的混合物2h。然后缓慢地加入饱和的碳酸氢钠溶液(200mL)(气体放出)并持续搅拌15min。然后用固体碳酸钠调节pH为大约9，并分离各层。用5％氯化钠水溶液(200mL)洗涤有机层，干燥(MgSO4)，过滤和减压浓缩得到标题化合物(53g)。
(c)5-[(R)-2-[(5-N，N-二甲酰基氨基戊基)苄基氨基]-1-(叔丁基二甲基-硅烷氧基)乙基]-8-苄氧基-1H-喹啉-2-酮 向步骤(b)的产物(26.5g，42.8mmol)在1-甲基-2-吡咯烷酮(175mL)中的经搅拌的溶液中加入二甲酰基酰胺钠(6.1g，64.2mmol)和碘化钠(2.13g，14.3mmol)。用氮气冲反应烧瓶，然后在65℃加热该混合物8h。然后将该混合物冷却至室温，加入水(300mL)和乙酸乙酯(100mL)。搅拌该混合物10分钟。用乙酸乙酯(150mL)萃取水层，用水(300mL)、50％盐水溶液(300mL)、水(300mL)洗涤合并的有机层，干燥(MgSO4)过滤和浓缩得到标题化合物(23.3g)。
(d)5-[(R)-2-[(5-氨基戊基)苄基氨基]-1-(叔-丁基二甲基硅烷氧基)乙基]-8-苄氧基-1H-喹啉-2-酮 将来自步骤(c)的产品(10.5g，16mmol)在甲醇(75mL)中的经搅拌的溶液中加入对-甲苯磺酸(7.42g.39mmol)。在40℃加热得到的混合物15h，然后减压浓缩至其体积的约一半。加入甲醇(70mL)，在50℃加热该混合物2h，然后减压浓缩。加入水(100mL)、甲醇(50mL)和MTBE(100mL)，搅拌该混合物15分钟，然后分离各层。向水层中加入1N氢氧化钠水溶液(45mL)和MTBE(100mL)，搅拌该混合物15min。然后分离各层，用MTBE(100mL)萃取水层。干燥(MgSO4)合并的MTBE层，过滤和浓缩得到呈黄色油的标题化合物(7.3g)。该物质包含大约13％(HPLC)的相应的脱-叔丁基二甲基甲硅烷基化合物。
(e)3-[4-(联苯基-2-基氨甲酰氧基)哌啶-1-基]丙酸 向制备8的产物(50g，67.6mmol)在二氯甲烷(500mL)中的溶液中加入丙烯酸(15.05mL，100mmol)。在50℃回流加热得到的混合物18h，然后除去溶剂。加入甲醇(600mL)，并在75℃加热该混合物2h，然后冷却至室温以形成稠浆液。通过过滤收集固体，用甲醇(50mL)洗涤，空气干燥得到呈白色粉末的标题化合物(61g，纯度＞96％)。
(f)联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(5-{苄基-[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基]氨基}-戊基氨甲酰基)乙基]哌啶-4-基酯 在60℃加热步骤(e)的产物(3.68g，10mmol)和N，N二甲基甲酰胺(50mL)的混合物直到固体彻底溶解，然后冷却至室温。加入步骤(d)的产物(6g，10mmol)和二异丙基乙胺(3.5mL)，冷却该反应混合物至0℃。加入一份PyBOP(6.25g，12mmol)并在0℃至室温搅拌反应混合物2小时。然后随搅拌将反应混合物倒入冷水(500mL)并利用含水1M盐酸调节得到的混合物的pH值大约2。搅拌该混合物15分钟，然后过滤来收集固体，将其用水(100mL)洗涤和干燥得到呈灰白色固体的标题化合物(8.7g，HPLC纯度＞95％)。
(g)联苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{5-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]戊基氨甲酰基}乙基)哌啶-4-基酯 可以利用如在制备24和实施例6种描述的那些本质上相同的步骤脱保护步骤(f)的产物来得到标题化合物。
制备25 2-(N-苄氧基羰基-N-甲基氨基)乙醛 (a)2-(N-苄氧基羰基-N-甲基氨基)乙醇 在0℃经15分钟将在THF(20mL)中的苄基氯甲酸酯(19g，111.1mmol)滴加入2-(甲基氨基)乙醇(10g，133.3mmol)在THF(100mL)和碳酸钠水溶液(100mL)中的经搅拌的溶液中。在0℃搅拌该反应混合物12h，然后用EtOAc(2×200mL)萃取。用碳酸钠水溶液(200mL)洗涤有机层，干燥(碳酸钾)，减压除去溶剂得到标题化合物(22.5g，产率97％)。
(b)2-(N-苄氧基羰基-N-甲基氨基)乙醛 在-10℃将DMSO(71mL，1mol)和DIPEA(87.1mL，0.5mol)加入步骤(a)的产物(20.9g，0.1mol)在二氯甲烷(200mL)中的经搅拌的溶液中。在-10℃搅拌该反应混合物15min，然后加入三氧化硫吡啶络合物(79.6g，0.5mol)，并搅拌得到的混合物1小时。滴加1M盐酸(200mL)猝灭反应混合物。分离有机层，并用饱和的碳酸氢钠水溶液(100mL)、盐水(100mL)洗涤，干燥(碳酸钾)和减压除去溶剂得到标题化合物(20。7g，产率～100％)。
制备26 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(甲基氨基)乙基]哌啶-4-基酯 向制备25的产物(20.7g，100mmol)和制备8的产物(25g，84.7mmol)在MeOH(200mL)中的经搅拌的溶液中加入三乙酰氧基氢硼化钠(21.2g，100mmol)。在室温搅拌该反应混合物12h，然后用2M盐酸猝灭和减压除去溶剂。将残留物溶解在乙酸乙酯(200mL)中，用饱和的碳酸氢钠水溶液(100mL)和盐水(50mL)洗涤，然后干燥(硫酸镁)和减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗制残留物(50-90％EtOAc/己烷)得到呈油状的联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(苄氧基羰基-甲基氨基)乙基]哌啶-4-基酯。
将该油溶解在甲醇(100mL)中，加入钯(10wt.％(干基)在活性炭上)(5g)。在氢气(30psi)下搅拌反应混合物12h，然后经硅藻土过滤，用甲醇洗涤，蒸发溶剂得到标题化合物(13.2g，44％产率)。
制备27 联苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[(6-溴己酰基)甲基氨基]乙基}哌啶-4-基酯 将6-溴己酰基氯化物(3.23mL，21.1mmol)加入制备26的产物(6.2g，17.6mmol)和DIPEA(6.13mL，35.2mmol)在二氯乙烷(170mL)中的经搅拌的溶液中。搅拌该反应混合物1小时，然后用EtOAc(250mL)稀释，和用饱和的碳酸氢钠水溶液(2×200mL)和盐水(200mL)洗涤，然后干燥(硫酸镁)。减压除去溶剂得到标题化合物(6.6g，产率73％)。
制备28 8-苄氧基-5-[(R)-2-(N-苄基氨基)-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基]-1H-喹啉-2-酮 将制备13的产物(1.00g，2.05mmol)和苄基胺(493μL，4.51mmol)在DMSO(1.7mL)中的经搅拌的溶液在105℃加热4h。使反应混合物冷却，然后用EtOAc(10mL)稀释，用饱和的氯化铵水溶液(5mL)和1N氢氧化钠(5mL)洗涤，干燥(MgSO4)和减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗制残留物(50％BtOAc/己烷)得到标题化合物(700mg，67％)。C31H38N2O3Si的MS m/z[M+H+]计算值是515.27；实测值是515.5。
制备29 联苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[(6-{苄基-[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基]氨基}己酰基)-甲基氨基]乙基}哌啶-4-基酯 向制备28的产物(807mg，1.57mmol)和DIPEA(819μL，4.7mmol)在乙腈(3.14mL)中的经搅拌的溶液中加入制备27的产物(995mg，1.88mmol)。将反应混合物加热至80℃24h。减压除去溶剂，将残留物溶解在EtOAc(10mL)中，然后用饱和的碳酸氢钠水溶液(5mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗制物质(4-6％MeOH/DCM)得到标题化合物(452mg，产率30％)。
制备30 联苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[(6-{苄基-[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-羟基乙基]氨基}己酰基)甲基氨基]乙基}哌啶-4-基酯 向制备29的产物(452mg，0.47mmol)在二氯甲烷(4.7mL)中的经搅拌的溶液中加入三乙胺三氢氟化物(116μL，0.71mmol)。搅拌该反应混合物10h。然后用二氯甲烷(10mL)稀释和用饱和的碳酸氢钠水溶液(5mL)洗涤。然后干燥(MgSO4)有机相和减压除去溶剂得到标题化合物(产率100％)。
实施例7 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-({6-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]己酰基}甲基氨基)乙基]哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 向制备30的产物(400mg，0.47mmol)在乙醇(4.7mL)中的经搅拌的溶液中加入钯(10wt.％(干基)在活性炭上)(160mg)，并将反应混合物放置在氢气氛下并搅拌过夜。然后过滤反应混合物，减压除去溶剂。通过制备性HPLC纯化粗制残留物得到标题化合物(73mg)。HPLC(10-70)Rt＝2.33；C38H47N5O6的MS m/z[M+H+]计算值是670.36；实测值是670。[α]20D＝-9.4(c＝1.0mg/mL，水)。
制备31 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-(氨基甲基)苯基氨甲酰基)-乙基]哌啶-4-基酯 向4-(N-叔丁氧基羰基氨基甲基)苯胺(756mg，3.4mmol)、制备20的产物(1.5g，4.08mmol)和HATU(1.55g，4.08mmol)在DMF(6.8mL)中的经搅拌的溶液中加入DIPEA(770μL，4.42mmol)。在50℃搅拌反应混合物过夜，然后减压除去溶剂。将得到的残留物溶解在二氯甲烷(20mL)中，用饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤。然后干燥(硫酸镁)有机相和减压除去溶剂。通过急骤色谱法纯化粗产物(5-10％MeOH/DCM)得到固体，将其溶解在TFA/DCM(25％，30mL)中并在室温搅拌2h。然后减压除去溶剂，并将粗制残留物溶解在二氯甲烷(30mL)中，和用1N氢氧化钠(15mL)洗涤。分离有机相，干燥(硫酸镁)和减压除去溶剂得到标题化合物(1.5g，经2个步骤94％)。
制备32 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-{[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基氨基]甲基}苯基氨甲酰基)乙基]-哌啶-4-基酯 将制备31的产物(489mg，1.04mmol)、制备13的产物(610mg，1.25mmol)、碳酸氢钠(262mg，3.12mmol)和碘化钠(203mg，1.35mmol)在THF(0.52mL)中的溶液在80℃加热12h。用二氯甲烷(10mL)稀释反应混合物，用饱和的碳酸氢钠水溶液(5mL)洗涤。干燥(MgSO4)有机相和减压除去溶剂。通过急骤色谱法纯化粗制残留物(10％MeOH/DCM)得到呈固体的标题化合物(687mg，产率77％)。
制备33 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-{[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-羟基乙基氨基]甲基}苯基氨甲酰基)乙基]哌啶-4-基酯 向制备32的产物(687mg，0.8mmol)在二氯甲烷(8mL)中的经搅拌的溶液中加入三乙胺三氢氟化物(261μL，1.6mmol)。搅拌反应混合物10h，然后用二氯甲烷(20mL)稀释和用饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤。然后干燥(硫酸镁)有机相和减压除去溶剂得到标题化合物(500mg，产率81％)。
实施例8 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-{[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]甲基}苯基氨甲酰基)乙基]哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 向制备33的产物(500mg，0.65mmol)在乙醇(6.5mL)中的经搅拌的溶液中加入钯(10wt.％(干基)在活性炭上)(200mg)，并将该反应混合物放置在氢气氛下并搅拌过夜。然后过滤反应混合物，减压除去溶剂。通过制备性HPLC纯化粗制残留物得到标题化合物(81mg，2TFA盐)。HPLC(10-70)Rt＝2.41；C39H41N5O6的MS m/z[M+H+]计算值是676.32；实测值是676.5。
制备34 联苯基-2-基氨基甲酸1-(2-叔-丁氧基羰基氨基乙基)哌啶-4-基酯 在50℃向制备8的产物(2.00g，6.76mmol)和DIPEA(3.54mL，20.3mmol)在乙腈(67.6mL)中的搅拌溶液中加入2-叔丁氧基羰基氨基乙基溴化物(1.82g，8.11mmol)，并在50℃加热反应混合物过夜。
然后减压除去溶剂，并将残留物溶解在二氯甲烷(60mL)中和用饱和的碳酸氢钠水溶液(30mL)洗涤。干燥(硫酸镁)有机相和减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗制残留物(5％MeOH/DCM)得到呈固体的标题化合物(2.32g，产率78％)。
制备35 联苯基-2-基氨基甲酸1-(2-氨基乙基)哌啶-4-基酯 将制备34的产物溶解在TFA/DCM(25％，52mL)中，且在室温搅拌2h。然后减压除去溶剂，将粗制残留物溶解在二氯甲烷(30mL)中，用1N氢氧化钠(15mL)洗涤。分离有机相，干燥(硫酸镁)和减压除去溶剂得到标题化合物(1.61g，产率90％)。
制备36 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-氨基甲基苯甲酰基氨基)乙基]哌啶-4-基酯 向制备35的产物(339mg，1mmol)、4-(叔丁氧基羰基氨基甲基)苯甲酸(301mg，1.2mmol)和HATU(456mg，1.2mmol)在DMF(2mL)中的经搅拌的溶液中加入DIPEA(226μL，1.3mmol)。在室温搅拌该反应混合物过夜，然后减压除去溶剂。将得到的残留物溶解在二氯甲烷(20mL)中和用饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤。干燥(硫酸镁)有机相和减压除去溶剂。将粗产物溶解在TFA/DCM(25％，10mL)中，在室温搅拌该混合物2h。减压除去溶剂和将粗制残留物溶解在二氯甲烷(15mL)中和用1N氢氧化钠(5mL)洗涤。分离有机相，干燥(硫酸镁)和减压除去溶剂得到标题化合物(472mg，～100％经2个步骤)。
制备37 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-{[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-(叔-丁基二甲基硅烷氧基)乙基氨基]甲基}苯甲酰基氨基)乙基]-哌啶-4-基酯 将制备36的产物(520mg，1.1mmol)、制备13的产物(634mg，1.3mmol)、碳酸氢钠(277mg，3.3mmol)和碘化钠(215mg，1.43mmol)在THF(0.55mL)中的溶液在80℃加热12h。然后用二氯甲烷(10mL)稀释反应混合物和用饱和的碳酸氢钠水溶液(5mL)洗涤。然后干燥(硫酸镁)有机相和减压除去溶剂。通过急骤色谱法纯化粗制残留物(5-10％MeOH/DCM)得到呈固体的标题化合物(316mg，产率33％)。
制备38 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-{[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-羟基乙基氨基]甲基}苯甲酰基氨基)乙基]哌啶-4-基酯 向制备37的产物(316mg，0.36mmol)在二氯甲烷(3.6mL)中的经搅拌的溶液中加入三乙胺三氢氟化物(117μL，0.72mmol)。搅拌反应混合物10h，然后用二氯甲烷(10mL)稀释和用饱和的碳酸氢钠水溶液(5mL)洗涤。干燥(MgSO4)有机相和减压除去溶剂得到标题化合物，其被直接用于下一步骤(产率100％)。
实施例9 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-{[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]甲基}苯甲酰基氨基)乙基]哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 向制备38的产物(275mg，0.36mmol)在乙醇(3.6mL)中的经搅拌的溶液中加入钯(10wt.％(干基)在活性炭上)(275mg)并将反应混合物放置在氢气氛下并搅拌过夜。然后过滤反应混合物和减压除去溶剂。通过制备性HPLC纯化粗制残留物得到标题化合物(6mg，2TFA盐)。HPLC(10-70)Rt＝2.26；C39H41N5O6的MS m/z[M+H+]计算值是676.32；实测值是676.5。
制备39 联苯基-2-基氨基甲酸1-(2-氨基乙基)哌啶-4-基酯 将2-叔丁氧基羰基氨基乙基溴化物(1.22g，5.44mmol)加入制备8的产物(1.46g，4.95mmol)和二异丙基乙基胺(1.03mL，5.94mmol)在乙腈(24mL)中的溶液中。在65℃搅拌反应混合物12小时，这时MS分析显示反应完成。浓缩反应混合物至干，然后加入二氯甲烷(10mL)。将三氟醋酸加入该混合物并在室温搅拌该混合物4小时，这时MS分析显示反应完成。然后将该混合物浓缩至其体积的一半，向该溶液中加入1N氢氧化钠直到将pH调节至14。用盐水洗涤有机层，然后经硫酸镁干燥和过滤。浓缩滤液得到呈固体的1.6g标题化合物。C20H25N3O2的MS m/z[M+H+]计算值是340.2；实测值是340。
制备40 5-[(R)-2-(5-氨基戊基氨基)-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基]-8-苄氧基-1H-喹啉-2-酮 将N-叔丁氧基羰基-1，5-二氨基戊烷(1.04g，5.12mmol)加入制备13的产物(1.00g，2.05mmol)在二甲基亚砜(2mL)中的溶液中。在75℃搅拌该溶液12小时，这时LCMS分析显示反应完成。然后真空浓缩反应混合物至干。向残留物中加入二氯甲烷(2mL)，然后加入三氟醋酸(1mL)。在室温搅拌该溶液约3小时，这时MS分析显示反应完成。然后将该混合物浓缩至其体积的一半，向该溶液中加入1N氢氧化钠直到将pH调节至14。收集有机层，用盐水洗涤，然后经硫酸镁干燥，然后浓缩得到782mg呈油状的标题化合物。C29H43N3O3Si的MS m/z[M+H+]计算值是510.8；实测值是510。
制备41 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(3-{5-[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基氨基]戊基}-脲基)乙基]哌啶-4-基酯 将羰基二咪唑(127mg，0.78mmol)加入制备39的产物(266mg，0.78mmol)在二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中，在室温搅拌得到的混合物3小时。3小时后，将制备40的产物(399mg，0.78mmol)加入该反应混合物，在室温搅拌该混合物12小时，这时LCMS分析测定反应完成。真空浓缩反应混合物和用乙酸乙酯(5mL)稀释残留物。用饱和的碳酸氢钠(5mL)洗涤两次，然后用盐水(5mL)洗涤。经硫酸镁干燥有机层，过滤，然后浓缩得到597mg呈固体的标题化合物，其被使用而无需进一步纯化。C50H66N6O6Si的MS m/z[M+H+]计算值是875.5；实测值是875。
制备42 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(3-{5-[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-羟基乙基氨基]戊基}脲基)乙基]哌啶-4-基酯 将三乙胺三氢氟化物(0.16mL，1.02mmol)加入制备41的产物(597mg，0.68mmol)在四氢呋喃(3.4mL)中的溶液中，在室温搅拌该混合物约12小时，这时通过MS分析测定反应完成。用乙酸乙酯(5mL)稀释反应混合物和用1N氢氧化钠(5mL)、盐水洗涤该混合物，经硫酸镁干燥，浓缩得到417mg呈固体的标题化合物。C44H51N6O6的MSm/z[M+H+]计算值是760.4；实测值是760。
实施例10 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(3-{5-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]戊基}脲基)乙基]哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 用氮气净化制备42的产物(417mg，0.55mmol)在乙醇(3mL)中的溶液约10分钟。加入钯(10wt.％(干基)在活性炭上)(200mg)，并再用氮气冲溶液约10分钟。真空净化烧瓶，然后用氮气充填三次，然后将充满氢气的气球放置在烧瓶上。在氢气下搅拌反应混合物12小时，这时通过MS分析测定反应完成。然后过滤反应混合物，浓缩有机滤液，通过HPLC纯化(10-35％经60分钟)得到146mg呈粉末的标题化合物。C37H46N6O6的MS m/z[M+H+]计算值是671.4；实测值是670。HPLC(10-70)Rt＝2.6分钟。
实施例11 联苯基-2-基氨基甲酸1-[3-(3-{5-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]戊基}脲基)丙基]哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 利用在制备39-42和实施例10中的上述方法，和用3-叔丁氧基羰基氨基丙-1-基溴化物替代制备39中的2-叔丁氧基羰基氨基乙基溴化物来制备标题化合物。C38H48N6O6的MS m/z[M+H+]计算值是685.4；实测值是684。HPLC(10 70)Rt＝2.6分钟。
制备43 6-(2-溴-(R)-1-叔-丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基-2，2-二甲基-1，3-苯并二烷 (a)6-溴-2，2-二甲基-4H-苯并[1，3]二烷 向在2.0L 2，2-二甲氧基丙烷中的5-溴-2-羟基苄基醇(93g，0.46mol，购自Sigma-Aldrich)中加入700mL丙酮，然后加入氯化锌(170g)。在搅拌18小时后，加入1.0M氢氧化钠水溶液直到水相为碱性。将二乙基醚加入浆液中，并将有机相滗析入分液漏斗。用盐水洗涤有机相，经Na2SO4干燥，过滤和减压浓缩得到呈油状的标题化合物。
(b)6-乙酰基-2，2-二甲基-4H-苯并[1，3]二烷 在-78℃将在1.0L THF中的步骤(a)的产品(110g，0.46mol)通过滴液漏斗加入236mL(0.51mol)在己烷中的2.14M正-丁基锂。30分钟后，加入N-甲基-N-甲氧基乙酰胺(71g，0.69mol，得自TCI)。两小时后，用水猝灭反应混合物，用2.0L 1.0M含水磷酸盐缓冲液(pH＝7.0)来稀释和用二乙基醚萃取一次。用盐水洗涤二乙基醚一次，经Na2SO4干燥，过滤和减压浓缩得到浅橙色油。将该油溶解在最小体积乙酸乙酯中，用己烷稀释，得到呈结晶固体的标题化合物。
(c)6-溴乙酰基-2，2-二甲基-4H-苯并[1，3]二烷 在-78℃向在600mL THF中的步骤(b)的产物(23.4g，0.113mol)中加入135mL在THF(Sigma-Aldrich)中的1.0M六甲基二硅氮烷钠。1小时后，加入三甲基甲硅烷基氯化物(15.8mL，0.124mol)。再30分钟后，加入溴(5.82mL，0.113mol)。10分钟后，通过用二乙基醚稀释反应混合物并将其倒入与500mL 5％NaHCO3水溶液预混合的500mL 5％Na2SO3水溶液来猝灭反应。分离各相，并用盐水洗涤有机相，经Na2SO4干燥，过滤和减压浓缩得到呈油状的标题化合物，其在冰箱中储藏时固化。
(d)(R)-2-溴-1-(2，2-二甲基-4H-苯并[1，3]二烷-6-基)乙醇 向在100mL THF中的步骤(c)的产物(10g，35.1mmol)中加入制备13的固体催化剂，步骤(c)(1)(0.97g，3.5mmol)。将该溶液冷却至-20℃至-10℃，并通过滴加漏斗滴加用50mL THF稀释的BH3-THF(35mL，35mmol)。在完成添加后，使反应混合物暖至室温。30分钟后，通过缓慢加入50mL甲醇来猝灭反应混合物，然后浓缩至稠油。通过硅胶色谱法用1∶2乙酸乙酯/己烷洗脱来纯化油。合并级分并浓缩得到呈灰白色固体的标题化合物。
(e)[(R)-2-溴-1-(2，2-二甲基-4H-苯并[1，3]二烷-6-基)乙氧基]-叔-丁基二甲基甲硅烷 向溶解在100mL DMF中的步骤(d)的产物(10g，34.8mmol)和咪唑(4.7g，69.7mmol)中加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(5.78g，38.3mmol)。搅拌反应混合物18小时。然后在200mL饱和的氯化钠和200mL二乙基醚之间分配反应混合物。用200mL二乙基醚萃取水层。然后合并有机层，用饱和的氯化钠(3×100mL)洗涤，经MgSO4干燥和浓缩。通过硅胶色谱法纯化该产物，用己烷洗脱，然后用在己烷中的5％乙酸乙酯洗脱。合并需要的级分并浓缩得到呈油状的标题化合物。
制备44 联苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)-2-(2，2-二甲基-4H-苯并[1，3]二烷-6-基)乙基氨基]壬基}哌啶-4-基酯 在环境温度将制备43的产物(802mg，2.00mmol)和碘化钠(300mg，2.00mmol)在四氢呋喃(0.77mL)中搅拌15min。加入制备11的产物(675mg，1.54mmol)和碳酸氢钠(388mg，4.62mmol)且在80℃加热反应混合物24h。然后冷却反应混合物并加入水(2mL)。然后用二氯甲烷(2×2mL)萃取该混合物。干燥合并的有机萃取物(硫酸镁)和减压除去溶剂。通过急骤色谱法纯化粗制残留物(5-10％甲醇/二氯甲烷)得到呈固体的标题化合物(798mg，1.05mmol，产率60％).C45H67N3O5Si的MS m/z[M+H+]计算值是758.5；实测值是758.6。
制备45 联苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[2-(2，2-二甲基-4H-苯并[1，3]二烷-6-基)-2-羟基乙基氨基]壬基}哌啶-4-基酯 在室温将三乙胺三氢氟化物(342μL，2.10mmol)加入到制备44的产物(798mg，1.05mmol)在二氯甲烷(10.5mL)中的经搅拌的溶液中。搅拌该反应混合物24h，然后用二氯甲烷(20mL)稀释和用饱和的碳酸氢钠水溶液(15mL)洗涤。干燥(硫酸镁)有机层和减压除去溶剂。分离呈油状的粗制标题化合物(659mg，1.02mmol)，其被用于下一步骤而无需进一步纯化。C39H53N3O5的MS m/z[M+H+]计算值是644.4；实测值是644.8。
实施例12 联苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[(R)-2-羟基-2-(4-羟基-3-羟基甲基苯基)乙基氨基]壬基}哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 将三氟醋酸(2.80mL)加入到制备45的产物(600mg，0.93mmol)在THF/水(14mL，1∶1)中的经搅拌的溶液中，并在室温搅拌反应混合物2h。减压浓缩该反应混合物，并溶解在20％MeCN/水中，然后通过制备性HPLC纯化得到标题化合物(200mg，2TFA盐)。HPLC(10-70)Rt＝2.76；C36H49N3O5的MS m/z[M+H+]计算值是604.4；实测值是604.8。
制备46 1-[1-(9-苄基氨基壬基)哌啶-4-基]-3-联苯基-2-基脲 将N-苄基胺(0.903ml，8.30mmol)加入制备4的产物(2.40g，5.52mmol)在甲醇(25mL)中的溶液中，并在室温搅拌得到的混合物。10分钟后，将三乙酰氧基氢硼化钠(1.75g，8.30mmol)加入该反应混合物。通过HPLC分析跟踪反应进程。在环境温度2h后，用水(5mL)猝灭反应混合物，然后真空浓缩至其体积的一半。用二氯甲烷(15mL)稀释反应混合物，并用1N氢氧化钠(2×10mL)洗涤，然后用盐水(5mL)洗涤。经硫酸镁干燥有机层和浓缩得到标题化合物。
制备47 2-苄氧基-5-(2-溴乙酰基)苯甲酸甲基酯 (a)2-苄氧基-5-乙酰基苯甲酸甲基酯 在回流条件和氮气氛下在2L烧瓶中将甲基5-乙酰基水杨酸酯(100g，0.515mol)溶解在乙腈(1L)中。经15分钟分批加入碳酸钾(213.5g，1.545mol)。经15分钟利用滴加漏斗加入苄基溴化物(67.4mL，0.566mol)。将反应加热至85℃9h，然后过滤和用乙腈(100mL)冲洗。将该溶液减压浓缩至约300mL体积，并在水(1L)和乙酸乙酯(1L)之间分配。用饱和的氯化钠(250mL)洗涤有机层，利用硫酸镁(75g)干燥，然后过滤和用乙酸乙酯(100mL)冲洗。浓缩有机层得到呈固体的2-苄氧基-5-乙酰基苯甲酸甲基酯(产率100％)。
(b)2-苄氧基-5-(2-溴乙酰基)苯甲酸甲酯 在氮气氛下，在500mL烧瓶中，将步骤(a)的产物(10.0g，35.2mmol)溶解在氯仿(250mL)中。经30分钟利用滴液漏斗加入溶解在氯仿(50mL)中的溴(1.63mL，31.7mmol)。将反应混合物搅拌2.5h，然后浓缩得到固体。微热将该固体溶解在甲苯(150mL)中，然后加入乙醚(150mL)得到呈结晶固体的标题化合物(产率55％)。
制备48 5-[2-(苄基-{9-[4-(3-联苯基-2-基脲基)哌啶-1-基]壬基}氨基)乙酰基]-2-苄氧基苯甲酸甲酯 将制备47的产物(371mg，1.00mmol)加入制备46(448mg，0.85mmol)的产物在二甲基亚砜(4.5mL)中的溶液中，然后加入碳酸钾(234mg，1.7mmol)。在40℃搅拌该反应混合物6h，此时通过HPLC分析不再观察到制备46的产物。将反应混合物冷却至环境温度并过滤，然后用乙醇(4mL)稀释。将氢硼化钠(63mg，1.7mmol)加入该反应混合物，在室温搅拌该反应物24h。用0.5M氯化铵(5mL)猝灭反应混合物，用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。用饱和的碳酸氢钠(10mL)，然后用盐水(5mL)洗涤合并的有机层。经硫酸镁干燥有机层，和减压除去溶剂。通过色谱法在硅胶(3％甲醇在氯仿中)上纯化粗制残留物得到标题化合物。
制备49 1-[1-(9-{苄基-[2-(4-苄氧基-3-羟基甲基苯基)-2-羟基乙基]氨基}壬基)哌啶-4-基]-3-联苯基-2-基脲 将制备48的产物(163mg，0.20mmol)在四氢呋喃(1.00mL)中的溶液冷却至0℃。向该混合物滴加氢化铝锂(1.0M在THF中；0.50mL，0.50mmol)。1h后，用水(1mL)猝灭反应混合物和用乙酸乙酯(2mL)稀释。用盐水洗涤有机层，经硫酸镁干燥，合并有机萃取物，浓缩得到标题化合物。
实施例13 1-联苯基-2-基-3-(1-{9-[2-羟基-2-(4-羟基-3-羟基甲基苯基)乙基氨基]壬基}哌啶-4-基)脲二氢氯化物 用氮气冲制备49的产物(130mg，0.16mmol)在异丙醇(0.80ml)中的溶液10分钟，然后加入钯(10wt.％(干基)在活性炭上(60mg)。用氮气净化反应烧瓶，然后将充满氢气的气球与烧瓶连接，并在氢气氛下搅拌反应混合物。72h后，过滤反应混合物并浓缩，和用制备性HPLC纯化残留物。将得到的标题化合物的二三氟醋酸盐溶解在1N盐酸(5mL)中和冻干得到呈它的二盐酸盐的标题化合物。
制备50 5-[(R)-2-[(3-氨基甲基环己基甲基)氨基]-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基]-8-苄氧基-1H-喹啉-2-酮 将制备13的产物(1.46g，3mmol)和1，3-环己烷二(甲基胺)(426mg，3mmol)在DMSO(3mL)中的经搅拌的溶液在100℃加热6h。让反应混合物冷却，然后用二氯甲烷(20mL)稀释和用饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤。干燥(MgSO4)有机层和减压除去溶剂。通过急骤色谱法纯化粗制残留物(10％MeOH/DCM和0.5％NH4OH)得到呈固体的标题化合物(775mg，产率50％)。C32H47N3O3Si的MS m/z[M+H+]计算值是550.3；实测值是550.6。
制备51 联苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[(3-{[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢-喹啉-5-基)-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基氨基]甲基}-环己基甲基)氨甲酰基]乙基}哌啶-4-基酯 向制备50的产物(552mg，1.01mmol)、制备20的产物(309mg，0.84mmol)和HATU(384mg，1.01mmol)在DMF(1.68mL)的经搅拌的溶液中加入DIPEA(190μL，1.09mmol)。将该反应混合物在50℃搅拌过夜，然后减压除去溶剂。将得到的残留物溶解在二氯甲烷(20mL)中，并用饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤。干燥(硫酸镁)有机相和减压除去溶剂。通过急骤色谱法纯化粗产物(5-10％MeOH/DCM)得到呈固体的标题化合物(267mg，36％产率)。LCMS(10-70)Rt＝5.04。C53H69N5O6Si的MS m/z[M+H+]计算值是900.5；实测值是900.6。
制备52 联苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[(3-{[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-羟基乙基氨基]甲基}环己基甲基)氨甲酰基]乙基}哌啶-4-基酯 向制备51的产物(267mg，0.30mmol)在二氯甲烷(3mL)中的经搅拌的溶液中加入三乙胺三氢氟化物(98μL，0.6mmol)。搅拌该反应混合物10h，然后用二氯甲烷(10mL)稀释它和用饱和的碳酸氢钠水溶液(5mL)洗涤。干燥有机相(硫酸镁)和减压除去溶剂得到呈固体的标题化合物(236mg，产率100％)。C47H55N5O6的MS m/z[M+H+]计算值是786.4；实测值是786.5。
实施例14 联苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[(3-{[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]甲基}-环己基甲基)氨甲酰基]乙基}-哌啶-4-基酯 将钯(10wt.％(干基)在活性炭上)(120mg)加入制备52的产物(236mg，0.30mmol)在乙醇(3mL)中的经搅拌的溶液中。在氢气氛下放置反应混合物并搅拌过夜。然后过滤反应混合物和减压除去溶剂。通过制备性HPLC纯化粗制残留物得到标题化合物(27mg，2TFA盐)。HPLC(10-70)Rt＝2.76。C40H49N5O6的MS m/z[M+H+]计算值是696.4；实测值是696.6。
制备53 联苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[((1R，3S)-3-氨基环戊烷羰基)氨基]-乙基}哌啶-4-基酯 向制备39的产物(318mg，0.94mmol)、(1R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基环戊烷羧酸(258mg，1.1mmol)和HATU(428mg，1.1mmol)在DMF(5mL)中的经搅拌的溶液中加入DIPEA(245μL，1.09mmol)。在室温搅拌反应混合物过夜，然后减压除去溶剂。将得到的残留物溶解在二氯甲烷(20mL)中和用饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤。干燥(硫酸镁)有机层和减压除去溶剂。通过急骤色谱法纯化粗产物(5-10％MeOH/DCM)和然后溶解在三氟醋酸/DCM混合物(1mL/5mL)中并在室温搅拌1h。减压除去溶剂。将残留物溶解在二氯甲烷(20mL)中和用1M氢氧化钠(10mL)洗涤，干燥(硫酸镁)和减少溶剂得到标题化合物(167mg，39％产率)。
制备54 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-({(1R，3S)-3-[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基氨基]-环戊烷羰基}氨基)乙基]哌啶-4-基酯 将制备53的产物(167mg，0.38mmol)和制备13的产物(92mg，0.19mmol)在DMSO(0.38mL)中的经搅拌的溶液在90℃加热5h。冷却该溶液，并用乙酸乙酯(10mL)稀释，然后用饱和的碳酸氢钠水溶液(5mL)洗涤。干燥(硫酸镁)有机相和减压除去溶剂。通过急骤色谱法纯化粗产物(5-10％MeOH/DCM)得到标题化合物(343mg，100％产率)。LCMS(10-70)Rt＝4.97。C50H63N5O6Si的MS m/z[M+H+]计算值是858.5；实测值是858.8。
制备55 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-({(IR，3S)-3-[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-羟基乙基氨基]环戊烷羰基}氨基)乙基]-哌啶-4-基酯 向制备54的产物(343mg，0.4mmol)在THF(2mL)中的经搅拌的溶液中加入三乙胺三氢氟化物(130μL，0.8mmol)。将该反应混合物搅拌10h，然后用EtOAc(10mL)稀释。用饱和的碳酸氢钠水溶液(5mL)洗涤该反应混合物，然后干燥(硫酸镁)有机相和减压除去溶剂得到呈固体的标题化合物(298mg，产率100％)。HPLC(10-70)Rt＝2.8。C44H49N5O6的MS m/z[M+H+]计算值是744.4；实测值是744.4。
实施例15 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-({(1R，3S)-3-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2，3，4-四氢喹啉-5-基)乙基氨基]-环戊烷羰基}氨基)乙基]-哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 向制备55的产物(236mg，0.40mmol)在乙醇(3mL)中的经搅拌的溶液中加入钯(10wt.％(干基)在活性炭上(120mg)。在氢气氛下放置反应混合物并搅拌过夜。过滤该反应混合物和减压除去溶剂。通过制备性HPLC纯化粗制残留物得到标题化合物(3mg，2TFA盐)。HPLC(5-75)Rt＝2.18.C37H45N5O6的MS m/z[M+H+]计算值是656.3；实测值是656.2。
制备56 4-(叔丁氧基羰基氨基甲基)-2-氯苯基胺 将4-氨基甲基-2-氯苯基胺(940mg，6mmol)和二-叔丁基二碳酸酯(1.44g，6.6mmol)在二氯甲烷(30mL)中的经搅拌的溶液在室温搅拌4h，此时通过LCMS测定反应完成。然后用饱和的碳酸氢钠水溶液(15mL)洗涤反应混合物和经硫酸钠干燥有机层和减压除去溶剂。从乙酸乙酯重结晶得到的橙色固体得到呈白色固体的标题中间体(产率～100％)。
制备57 N-[4-(叔丁氧基羰基氨基甲基)-2-氯苯基]丙烯酰胺 向制备56的产物(1.54g，6.0mmol)在二乙基醚(35mL)和1M氢氧化钠(35mL)的混合物中的经搅拌的溶液中滴加丙烯酰氯化物(687μL，8.45mmol)。1h后，分离有机层，干燥(Na2SO4)和减压除去溶剂得到呈白色固体的标题中间体(1.8g，产率96％)。
制备58 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-(叔丁氧基羰基氨基甲基)-2-氯苯基氨甲酰基)乙基]哌啶-4-基酯 将制备8的产物(1.04g，3.5mmol)和制备57的产物(1.19g，3.85mmol)在二氯甲烷和甲醇(12mL，1∶1)的混合物中的溶液在60℃加热12h。让反应混合物冷却和减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗制物质(5-10％MeOH/DCM)得到呈白色固体的标题中间体(2.00g，产率94％)。
制备59 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-氨基甲基-2-氯苯基氨甲酰基)乙基]-哌啶-4-基酯 将制备58的产物(2.00g，3.3mmol)的溶液在二氯甲烷(24mL)和TFA(8mL)中搅拌1h，然后减压除去溶剂。将粗制反应混合物溶解在二氯甲烷(30mL)中并用1M氢氧化钠(2×30mL)洗涤。干燥(Na2SO4)有机层和减压除去溶剂得到呈油状白色固体的标题中间体(1.46g，产率88％)。
制备60 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-{[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-叔-丁基二甲基硅烷氧基)乙基氨基]甲基}-2-氯苯基氨甲酰基)-乙基]哌啶-4-基酯 将制备59的产物(1.41g，2.79mmol)和制备13的产物(680mg，1.39mmol)在DMSO(1.39mL)中的经搅拌的溶液在90℃加热8h，然后冷却至室温。用乙酸乙酯/氯仿(20mL，1/1)稀释反应混合物，和用饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤有机层，干燥(Na2SO4)和减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化得到的粗制残留物(5-10％MeOH/DCM)得到呈白色固体的标题中间体(1.12g，产率88％)。MS m/z M+H+＝914.9。
制备61 联苯基-2-基-氨基甲酸1-[2-(4-{[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-羟基乙基氨基]甲基}-2-氯-苯基氨甲酰基)乙基]哌啶-4-基酯 向制备60的产物(1.12g，1.23mmol)在二氯甲烷(12mL)中的经搅拌的溶液中加入Et3N.3HF(401μL，0.6mmol)。将该反应混合物搅拌10h，然后用二氯甲烷(10mL)稀释。用饱和的碳酸氢钠水溶液(5mL)洗涤该混合物和干燥(Na2SO4)有机层和减压除去溶剂得到呈白色固体的标题中间体(959mg，产率100％).MS m/z M+H+＝800.5。
实施例16 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(2-氯-4-{[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]甲基}苯基氨甲酰基)乙基]哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 向制备61的产物(959mg，1.2mmol)在乙醇(12mL)中的经搅拌的溶液中加入Pd/C(290mg)，并将该反应混合物放置在氢气氛下并搅拌过夜。然后过滤该反应混合物和减压除去溶剂。通过制备性HPLC纯化粗制残留物得到标题化合物(67mg，2TFA盐)。HPLC(10-70)Rt＝2.76；MS m/z M+H+＝710.6。
制备62 2-氯乙烷磺酸(5-叔丁氧基羰基氨基戊基)酰胺 在0℃向5-(叔丁氧基羰基氨基)戊基胺(1.00g，4.94mmol)和三乙基胺(689μLg，4.94mmol)在二氯甲烷(22mL)中的经搅拌的溶液中加入2-氯-1-乙磺酰氯(470μL，4.50mmol)。在室温搅拌该反应混合物2h，然后用饱和的碳酸氢钠水溶液(15mL)洗涤。干燥(Na2SO4)有机层和减压除去溶剂得到标题化合物(产率100％)，其被用于下一步骤而无需进一步纯化。
制备63 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(5-叔-丁氧基羰基氨基戊基氨磺酰基)-乙基]哌啶-4-基酯 将制备8的产物(1.33g，3.5mmol)和制备62的产物(1.62g，4.94mmol)在二氯甲烷和甲醇(22mL，1∶1)中的溶液在60℃加热5h。让反应混合物冷却至室温和减压除去溶剂。将粗制残留物溶解在二氯甲烷(20mL)中并用饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤。然后干燥(Na2SO4)有机层和减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗制残留物(5-10％MeOH/DCM)得到呈白色固体的标题中间体(1.6g，55％)。MSm/z M+H+＝589.6。
制备64 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(5-氨基戊基氨磺酰基)乙基]哌啶-4-基酯 将制备63的产物(1.6g，2.72mmol)的溶液在二氯甲烷(21mL)和TFA(7mL)中搅拌1h，然后减压除去溶剂。将粗制反应混合物溶解在二氯甲烷(30mL)中并用1M氢氧化钠(2×30mL)洗涤。干燥(Na2SO4)有机层，然后减压除去溶剂得到呈油状白色固体的标题中间体(1.19g，产率90％)。
制备65 联苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{5-[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-(叔-丁基二甲基硅烷氧基)乙基氨基]戊基氨磺酰基}乙基)哌啶-4-基酯 将制备64的产物(917mg，1.88mmol)和制备13的产物(460mg，0.94mmol)在DMSO(0.92mL)中的经搅拌的溶液在90℃加热8h，然后冷却至室温。用乙酸乙酯/氯仿(20mL，1/1)稀释反应混合物，干燥(Na2SO4)和减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化得到的粗制残留物(3-6％MeOH/DCM)得到呈白色固体的标题中间体(500mg，产率60％)。MS m/z M+H+＝896.9。
制备66 联苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{5-[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-羟基乙基氨基]戊基氨磺酰基}乙基)哌啶-4-基酯 向制备65的产物(500mg，0.56mmol)在二氯甲烷(5.6mL)中的经搅拌的溶液中加入三乙胺三氢氟化物(183μL，1.12mmol)。搅拌该反应混合物10h和加入二氯甲烷(10mL)。用饱和的碳酸氢钠水溶液(5mL)洗涤得到的混合物。干燥(Na2SO4)有机层和减压除去溶剂得到呈黄色固体的标题中间体(437mg，产率100％。MS m/z M+H+＝782.8。
实施例17 联苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{5-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]戊基氨磺酰基}乙基)哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 向制备66的产物(437mg，0.56mmol)在乙醇/甲醇(5.6mL，1/1)中的经搅拌的溶液中加入Pd/C(131mg)，并将反应混合物放置在氢气氛下和搅拌过夜。然后过滤反应混合物和减压除去溶剂。通过制备性HPLC纯化粗制残留物得到呈二三氟醋酸盐形式的标题化合物(71mg)。HPLC(10-70)Rt＝2.59；MS m/z M+H+＝692.6。
制备67 联苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[(4-甲酰基苯磺酰基)甲基氨基]-乙基}哌啶-4-基酯 向制备26的产物(350mg，1mmol)和三乙基胺(167μL，1.2mmol)在二氯甲烷(5mL)中的经搅拌的溶液中加入4-甲酰基苯磺酰基氯化物(225mg，1.1mmol)。在室温1h后，通过MS监测反应完成，然后用饱和的碳酸氢钠水溶液(5mL)洗涤反应混合物。然后干燥(Na2SO4)有机层和减压除去溶剂得到标题中间体(323mg，产率62％)。MS m/z M+H+＝522.4。
制备68 联苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[(4-{[(R)-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]甲基}苯磺酰基)-甲基氨基]乙基}哌啶-4-基酯 将5-[(R)-2-氨基-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(293mg，0.74mmol)和制备67的产物在二氯甲烷和甲醇(6.2mL，1/1)中的溶液在室温搅拌1h，然后加入三乙酰氧基氢硼化钠(394mg，1.86mmol)。搅拌该反应混合物4h，通过MS测定反应完成。然后用浓盐酸酸化该反应混合物和减压除去溶剂得到标题化合物，其被用于下一步骤而无需进一步纯化。MS m/z M+H+＝840.8。
实施例18 联苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[(4-{[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]甲基}苯磺酰基)甲基氨基]乙基}-哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 将制备68的产物在(520mg，0.62mmol)在1M盐酸(5mL)和乙腈(5mL)中的经搅拌的溶液在60℃加热8h。将该反应混合物冷却至室温和减压除去溶剂。通过制备性HPLC纯化粗制残留物得到呈二三氟醋酸盐形式的标题化合物(220mg)。HPLC(10-70)Rt＝2.77；MS m/z M+H+＝726.7。
制备69 (3-氨基甲基苯基)甲醇盐酸盐 (a)(3-叔丁氧基羰基甲基苯基)甲醇 将硼烷二甲基硫化物(2.05mL，21.6mmol)加入3-(叔丁氧基羰基氨基甲基)苯甲酸(1.81g，7.20mmol)在四氢呋喃(24mL)中的溶液中，并在室温搅拌得到的混合物3小时。然后用乙酸乙酯(20mL)稀释得到的混合物并分离层。用饱和的碳酸氢钠、饱和的氯化钠洗涤有机层，经硫酸镁干燥，浓缩得到呈黄色油的标题化合物(1.71g)。
(b)(3-氨基甲基苯基)甲醇盐酸盐 向步骤(a)的产物(1.71g，7.2mmol)中加入4M盐酸在二烷中的溶液(9mL，36mmol)，并在室温搅拌得到的混合物1h。然后浓缩反应混合物，并用二乙基醚(50mL)稀释该残留物和过滤得到呈白色固体的标题化合物(1.09g)。
制备70 联苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[3-(3-羟基甲基苄基)脲基]乙基}哌啶-4-基酯 将制备35的产物(760mg，2.24mmol)在N，N-二甲基甲酰胺中的0.2M溶液滴加入1，1′-羰基二咪唑(364mg，2.24mmol)和二异丙基乙基胺(0.31mL，2.24mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(11mL)中的溶液中，并在室温搅拌得到的混合物2h。加入二异丙基乙基胺(0.31mL，2.24mmol)和制备69的产物(578mg，3.4mmol)并在50℃搅拌该混合物12小时。然后浓缩该反应混合物至干，并用二氯甲烷(20mL)稀释该残留物和用饱和的碳酸氢钠(2x)，饱和的氯化钠洗涤该溶液，经硫酸镁干燥，和浓缩得到标题化合物(1.12g)。LCMS(2-90)Rt＝4.01min.；MSm/z M+H＝503.5。
制备71 联苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[3-(3-甲酰基苄基)脲基]乙基}哌啶-4-基酯 将制备70的产物(1.12g，2.23mmol)在二氯甲烷(11.1mL)中的溶液冷却至0℃并加入二异丙基乙基胺(1.17mL，6.70mmol)和二甲基亚砜(0.949mL，13.4mmol)。约10分钟后，加入吡啶三氧化硫络合物(1.06g，6.70mmol)，并在0℃搅拌得到的混合物2h。然后用水(15mL)猝灭反应和用冷水(3x)洗涤有机层，经硫酸镁干燥和浓缩得到呈黄色易碎物的标题化合物(609mg)。LCMS(2-90)Rt＝4.13min；MS m/z M+H＝501.3。
制备72 联苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[3-(3-{[(R)-2-(叔-丁基二甲基硅烷氧基)-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]甲基}苄基)脲基]乙基}-哌啶-4-基酯 将5-[(R)-2-氨基-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(575mg，1.40mmol)加入制备71的产物(609mg，1.2mmol)和二异丙基胺(0.25mL，1.40mmol)在二氯甲烷(6mL)中的溶液中，在室温搅拌得到的混合物45min。然后加入三乙酰氧基氢硼化钠(385mg，1.80mmol)，在室温搅拌该混合物12h。然后用10％含水盐酸(5mL)猝灭反应，分离各层。用饱和的碳酸氢钠、饱和的氯化钠洗涤有机层，经硫酸镁干燥和浓缩得到标题化合物(1.1g)。HPLC(10-70)Rt＝3.55min；MS m/z M+H＝819.7。
实施例19 联苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[3-(3-{[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]甲基}苄基)脲基]乙基}哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 将三乙胺三氢氟化物(2.4mL，13.6mmol)加入制备72的产物(1.1g，1.36mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中，并在室温搅拌得到的混合物15h。然后真空浓缩反应混合物至干，并将该残留物溶解在有0.1％TFA的水和乙腈的1∶1混合物中，通过HPLC(5-35经60min)纯化该混合物得到呈二三氟醋酸盐形式的标题化合物(296mg，纯度99％)。MS m/z M+H＝705.6。
制备73 联苯基-2-基氨基甲酸1-[(E)-3-(4-硝基苯基)烯丙基]哌啶-4-基酯 将制备8的产物(2.96g，0.01mol)和对-硝基肉桂醛(1.77g，0.01mol)在50mL二氯甲烷中搅拌2h。加入三乙酰氧基氢硼化钠(6.33g，0.03mol)和搅拌得到的混合物2h。然后用10mL水猝灭反应并用二氯甲烷(100mL)稀释该混合物。用饱和的碳酸氢钠(2x)、盐水洗涤有机层，经Na2SO4干燥，过滤和浓缩得到呈黄色泡沫的标题化合物(3.8g，产率80％)。
制备74 联苯基-2-基氨基甲酸1-[3-(4-氨基苯基)丙基]哌啶-4-基酯 将制备73的产物(2.5g，5.4mmol)溶解在100mL乙醇中，用氮气净化得到的溶液30分钟。然后，加入碳载钯(2.5g；50％w/w水；10％Pd；1.1mmol Pd)，同时用氮气脱气。然后将该混合物放置在氢气下(50psi)，直到不再消耗氢(～30分钟)。然后用氮气净化混合物，经硅藻土过滤和浓缩。将该残留物溶解在乙酸乙酯中和用饱和的碳酸氢钠(2x)、盐水洗涤该混合物，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩得到标题化合物(2.08g，产率90％)。MS m/z M+H＝430.5。
制备75 联苯基-2-基氨基甲酸1-{3-[4-(4-{2-[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢-喹啉-5-基)-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基氨基]乙基}苯基氨基)-苯基]丙基}哌啶-4-基酯 向25mL圆底烧瓶中加入制备74的产物(400mg，0.8mmol)；8-苄氧基-5-[(R)-2-[2-(4-溴苯基)乙基氨基]-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基]-1H-喹啉-2-酮(769mg，1.2mmol)；三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(73mg，0.08mmol，20％Pd)；和2-(二环己基膦)联苯基(84mg，0.24mmol)。用氮气净化该混合物，然后干燥，添加脱气的甲苯(8mL，0.1M)和在70℃加热得到的混合物30min。
然后加入叔丁醇钠(382mg，4.0mmol)，将温度升高至95℃4h，此时LCMS显示制备74的产物完全耗尽和大的产物峰(M+H＝956.7)。然后将反应混合物冷却至室温和用乙酸乙酯稀释。用饱和的碳酸氢钠(2x)、盐水洗涤该混合物，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩得到标题化合物(1.5g)，其被使用而无需进一步纯化。
制备76 联苯基-2-基氨基甲酸1-{3-[4-(4-{2-[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢-喹啉-5-基)-2-羟基乙基氨基]乙基}苯基氨基)苯基]丙基}哌啶-4-基酯 将制备75的产物溶解在二氯甲烷(10mL)中，和加入三乙胺三氢氟化物(10当量)。搅拌反应混合物过夜，然后用二氯甲烷稀释，和用饱和的碳酸氢钠(2x)、盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩得到1.3g粗产物。通过硅胶色谱法纯化这一物质(DCM，增加至50％甲醇)得到标题化合物(300mg，纯度约75％)，其被使用而无需进一步纯化。
实施例20 联苯基-2-基氨基甲酸1-{3-[4-(4-{2-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]乙基}苯基氨基)苯基]丙基}哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 将制备76的产物(300mg)溶解在10mL乙醇中和用氮气净化该混合物15分钟。在脱气同时加入碳载钯(10％Pd，50％w/w水，0.2当量Pd)。然后将得到的混合物放置在1大气压氢下2h，这时通过LCMS测定反应完成。然后用氮气净化该溶液15min，然后经硅藻土过滤和浓缩。通过制备性HPLC纯化得到呈二三氟醋酸盐形式的标题化合物(59mg，纯度＞95％)。MS m/z M+H＝752.8。
制备77 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-氟-3-(4-羟基甲基哌啶-1-基甲基)-苄基]哌啶-4-基酯 将制备8的产物(500mg，1.69mmol)、2，6-双(溴甲基)-1-氟苯(476mg，1.69mmol、哌啶-4-基甲醇(195mg，1.69mmol)和碳酸钾(466mg，3.37mmol)混悬在乙腈(5mL)中并在室温搅拌18h。然后浓缩该反应混合物，并将该残留物溶解在二氯甲烷/水中。分离各层，用水(2x)、盐水洗涤有机层，干燥(MgSO4)和浓缩。通过硅胶柱色谱法用3％甲醇/氯仿洗脱纯化粗制物质得到呈白色泡沫的标题化合物(282mg)。MS m/z M+H＝532.3。
制备78 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-氟-3-(4-甲酰基哌啶-1-基甲基)苄基]-哌啶-4-基酯 将制备77的产物(282mg，0.53mmol)溶解在二氯甲烷中，并向该混合物中加入二异丙基乙基胺(280μL，1.6mmol)和二甲基亚砜(115μL，1.6mmol)。在氮气下将该反应混合物冷却在-15℃，并加入吡啶三氧化硫络合物(255mg，1.6mmol)，并搅拌得到的混合物40min。然后用水猝灭反应，并分离各层。用含水NaH2PO4(1M×3)、盐水洗涤有机层，干燥(MgSO4)和浓缩得到呈泡沫的标题化合物(253mg)。MS m/z M+H＝530.4。
实施例21 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-氟-3-(4-{[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)苄基]哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 将制备78的产物(253mg，0.48mmol)溶解在二氯甲烷和甲醇的1∶1混合物(6mL)中，并向该混合物中加入5-[(R)-2-氨基-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮醋酸酯(228mg，0.58mmol)和三乙酰氧基氢硼化钠(317mg，1.5mmol)。在氮气下在室温搅拌该反应混合物18h，然后浓缩。将该残留物溶解在乙腈和含水6N盐酸的2∶3混合物中，将该混合物在55℃加热4小时。然后浓缩该反应混合物，并将该残留物溶解在水/乙腈/三氟醋酸(1∶1∶0.005)中和通过反相柱色谱法纯化得到呈白色固体的标题化合物(175mg)。MS m/z M+H＝734.5。
制备79 2-[4-(3-溴丙氧基)苯基]乙醇 向4-羟基苯乙醇(4.37g，31.0mmol)和碳酸钾(6.55g，47.0mmol)在乙腈(62.0mL)中的溶液中加入1，3二溴丙烷(31.0mL，316mmol)。将该反应混合物加热至70℃12小时，然后冷却至室温，过滤和真空浓缩。通过利用4∶1己烷和乙酸乙酯的混合物的硅胶色谱法纯化得到的油得到呈白色固体的标题化合物(6.21g)。
制备80 联苯基-2-基氨基甲酸1-{3-[4-(2-羟基乙基)苯氧基]丙基}哌啶-4-基酯 向制备79的产物(1.11g，4.30mmol)和二异丙基乙基胺(0.90mL，5.10mmol)在乙腈(21.5mL)中的溶液中加入制备8的产物(1.27g，4.30mmol)和在60℃搅拌得到的混合物12h。然后将该反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释和用饱和的碳酸氢钠(25mL)、饱和的氯化钠(25mL)洗涤，经硫酸镁干燥和浓缩得到标题化合物(1.98g，纯度85％)。MS m/z M+H＝475.5。
制备81 联苯基-2-基氨基甲酸1-{3-[4-(2-氧乙基)苯氧基]丙基}哌啶-4-基酯 将制备80的产物(723mg，1.53mmol)和二氯甲烷(75mL)的溶液冷却至大约5℃，并加入二异丙基乙基胺(798mL，4.58mmol)和二甲基亚砜(649mL，9.15mmol)。然后加入吡啶三氧化硫(728mg，4.58mmol)，并在5℃搅拌得到的混合物45min。然后用二氯甲烷(20mL)稀释该反应混合物，和用饱和的碳酸氢钠(25mL)、饱和的氯化钠(25mL)洗涤，经硫酸镁干燥和浓缩得到标题化合物(604mg)。MS m/zM+H＝473.4。
制备82 联苯基-2-基氨基甲酸1-[3-(4-{2-[(R)-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]乙基}-苯氧基)丙基]哌啶-4-基酯 将制备81的产物(604mg，1.28mmol)溶解在甲醇(6.4mL)中且加入5-[(R)-2-氨基-1-(叔-丁基二甲基硅烷氧基)乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮(605mg，1.53mmol)和二异丙基乙基胺(0.27mL，1.53mmol)。然后加入三乙酰氧基氢硼化钠(405mg，1.91mmol)，并在室温搅拌反应混合物3h。然后浓缩反应混合物至干，和用乙酸乙酯(20mL)稀释残留物和用饱和的碳酸氢钠(25mL)、饱和的氯化钠(25mL)洗涤该溶液，经硫酸镁干燥和浓缩得到标题化合物(704mg)。MSm/z M+H＝791.8。
实施例22 联苯基-2-基氨基甲酸1-[3-(4-{2-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]乙基}苯氧基)丙基]哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 将三乙胺三氢氟化物(1.5mL，8.87mmol)加入制备82的产物(702mg，0.89mmol)在二氯甲烷(4.5mL)中的溶液中和在室温搅拌得到的混合物24h。然后真空浓缩该混合物和通过HPLC纯化(2-35经90min)得到呈白色粉末的标题化合物(92mg)。MS m/z M+H＝677.4。
制备83 甲基4-碘苯基醋酸酯 向4-碘苯基醋酸(5.0g，19.1mmol)在MeOH(200mL)中的经搅拌的溶液中加入在二烷(10mL)中的4N盐酸。在室温搅拌该反应混合物24h，然后减压除去溶剂得到标题化合物(5.17g，产率98％)，其被使用而无需进一步纯化。
制备84 甲基[4-(4-羟基丁-1-炔基)苯基]醋酸酯 向制备83的产物(4.5g，16.3mmol)在二乙基胺(100mL)中的经搅拌的溶液中加入丁-3-炔-1-醇(1.9mL，32.6mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(500mg，1.63mmol)和CuI(154mg，0.815mmol)并在室温搅拌得到的混合物17h。然后除去减压除去溶剂并将该残留物溶解在二乙基醚(200mL)中和过滤该溶液来除去盐。然后减压除去溶剂和通过硅胶色谱法纯化粗产物(60％EtOAc/己烷)得到标题中间体(3.03g，产率91％)。
制备85 甲基[4-(4-羟基丁基)苯基]醋酸酯 用氮气冲制备84的产物(2.8g，12.8mmol)在甲醇(50mL)中的经搅拌的溶液，然后加入10％碳载钯(400mg，20％wt/wt)。然后交替地将反应烧瓶放置在真空下和用氮气冲达几个循环，然后在氢气下搅拌14h。用氮气冲反应混合物，然后过滤和减压除去溶剂得到标题化合物(2.75g，产率97％)，其被使用而无需进一步纯化。
制备86 甲基(4-{4-[4-(联苯基-2-基氨甲酰氧基)哌啶-1-基]丁基}苯基)醋酸酯 (a)甲基{4-[4-(甲苯-4-磺酰氧基)丁基]苯基}醋酸酯 向制备85的产物(2.6g，12.5mmol)在THF(100mL)中的经搅拌的溶液中加入DABCO(2.6g，25.0mmol)，然后加入对-甲苯磺酰氯(2.44g，13.75mmol)。在室温搅拌该反应混合物23h，然后减压除去溶剂，并将残留物溶解在二氯甲烷(200mL)中。然后用水洗涤(2×100mL)、1N盐酸(100mL)和饱和的氯化钠水溶液(100mL)洗涤有机层，干燥(MgSO4)，过滤和减压除去溶剂得到标题化合物，其被使用而无需进一步纯化。
(b)甲基(4-{4-[4-(联苯基-2-基氨甲酰氧基)哌啶-1-基]丁基}苯基)醋酸酯 向来自步骤(a)的粗产物加入DMF(50mL)、二异丙基乙基胺(3.0mL，17.3mmol)和制备8的产物(2.4g，8.1mmol)。在室温搅拌反应混合物18h，然后减压除去溶剂得到标题化合物(3.5g，86.3％产率)。MS m/z 501.6(MH+)，Rf4.89min(10-70％ ACN∶水，反相HPLC)。
制备87 联苯基-2-基氨基甲酸1-{4-[4-(2-羟基乙基)苯基]丁基}哌啶-4-基酯 向制备86的产物(2.0g，4.0mmol)在THF(100mL)中的经搅拌的溶液中滴加DIBAL(24mL，24mmol，1.0M在THF中)。在添加完成后，搅拌反应混合物3h，然后通过缓慢加入甲醇来猝灭反应混合物(直到放气停止)。然后搅拌该混合物30min，然后加入乙酸乙酯(200mL)和1N氢氧化钠水溶液(200mL)。分离有机层和用饱和的氯化钠水溶液(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和减压除去溶剂得到标题化合物(1.3g，69％产率)，其被使用而不需进一步纯化。MS m/z473.4(MH+)，Rf4。53min(10-70％ ACN∶H2O，反相HPLC)。
实施例23 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-{2-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]乙基}苯基)乙基]哌啶-4-基酯 向制备87的产物(500mg，1.06mmol)在二氯甲烷(25mL)中的经搅拌的溶液中加入二甲基亚砜(0.60mL，10.6mmol)和二异丙基乙基胺(0.921mL，5.3mmol)。然后将反应混合物冷却至-10℃和加入吡啶三氧化硫(842mg，5.3mmol)。搅拌反应混合物1h，然后通过加入水(100mL)来猝灭反应。搅拌该混合物10分钟，然后除去有机层，和用饱和的氯化钠水溶液(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，然后过滤。
向该滤液中加入甲醇(25mL)、5-[(R)-2-氨基-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮醋酸酯(419mg，1.06mmol)和三乙酰氧基氢硼化钠(468mg，2.12mmol)。搅拌该混合物16h，然后浓缩，并向得到的混合物中加入乙腈和含水4N盐酸的1∶1混合物(20mL)。将该混合物在50℃加热17h，然后减压除去溶剂。向该残留物中加入醋酸和水的1∶1混合物(8.0mL)，和将该混合物在反相硅胶上进行色谱法(梯度洗脱，10-50％ACN/水)得到标题化合物(67mg，产率7％经3个步骤)。MS m/z(MH+)675.5；Rf3.07(10-70％ACN∶水，反相HPLC)。
制备88 乙基3-[5-(2-乙氧基羰基乙烯基)苯硫-2-基]丙烯酸酯 向氢化钠(2.1g，53mmol，60％在矿物油中)在THF(200mL)中的经搅拌的溶液中加入三乙基膦酰基醋酸酯(10mL，50mmol)，观察到氢气放出，并搅拌反应直到停止放气(约30min)。向这一反应混合物中加入2，5-噻吩二羧醛(3g，21mmol)和搅拌反应混合物1h。减压除去溶剂和在二氯甲烷(200mL)中溶解该残留物。用水(100mL)、含水1N盐酸(100mL)、饱和的氯化钠水溶液(100mL)洗涤有机层，干燥(MgSO4)，过滤和减压除去溶剂得到标题化合物(5.8g，产率98％)，其被使用而无需进一步纯化。
制备89 3-[5-(2-乙氧基羰基乙基)苯硫-2-基]丙酸乙酯 用氮冲制备88的产物(5.8g，21mmol)在甲醇(200mL)中的经搅拌的溶液，并加入10％碳载钯(576mg，10％wt/wt)。将反应烧瓶交替放在真空下和冲入氢气3个循环，然后在氢气下搅拌反应混合物1h。然后将混合物冲以氮气，过滤和减压除去溶剂得到标题化合物(5.8g，产率99％)，其被使用而无需进一步纯化。
制备90 3-[5-(3-羟基丙基)苯硫-2-基]丙-1-醇 在-78℃向DIBAL(88mL，88mmol，1.0M在环己烷中)在THF(300mL)中的经搅拌的溶液中滴加制备89的产物(5.0g，17.6mmol)。在添加完成后，经30min将反应混合物暖至室温，通过缓慢加入含水1N盐酸(200mL)来猝灭反应混合物。加入二氯甲烷(400mL)并分离各层。用二氯甲烷(4×100mL)洗涤水层和用饱和的氯化钠水溶液(100mL)洗涤合并的有机层，干燥(MgSO4)，过滤和减压除去溶剂得到标题化合物(3.0g，产率85％)，其被使用而无需进一步纯化。
制备91 联苯基-2-基氨基甲酸1-{3-[5-(3-羟基丙基)苯硫-2-基]丙基}哌啶-4-基酯 (a)甲苯-4-磺酸3-[5-(3-羟基丙基)苯硫-2-基]丙基酯 向制备90的产物(423mg，2.1mmol)在THF(20mL)中的经搅拌的溶液中加入DABCO(420mg，4.2mmol)，然后加入对-甲苯磺酰氯(442mg，2.3mmol)。在室温搅拌该反应混合物2h，然后减压除去溶剂，和将残留物溶解在二氯甲烷(200mL)中。用水(2×100mL)、饱和的氯化钠水溶液(100mL)洗涤有机层，干燥MgSO4)，过滤和减压除去溶剂得到标题化合物，其被使用而无需进一步纯化。
(b)联苯基-2-基氨基甲酸1-{3-[5-(3-羟基丙基)苯硫-2-基]丙基}哌啶-4-基酯 向来自步骤(a)的产物中加入乙腈(20mL)、二异丙基乙基胺(0.5mL，2.8mmol)和制备8的产物(626mg，2.11mmol)。加热该反应混合物至50℃20h，然后冷却至室温和减压除去溶剂。通过硅胶色谱法纯化残留物(含0.6％NH3(含水)的5％MeOH/DCM)得到标题化合物(450mg，产率44％)。MS m/z(MH+)479.6；Rf4.15min(10-70％ACN∶水，反相HPLC)。
制备92 联苯基-2-基氨基甲酸1-[3-(5-{3-[(R)-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]丙基}苯硫-2-基)丙基-哌啶-4-基酯 向制备91的产物(450mg，0.94mmol)在二氯甲烷(20mL)中的经搅拌的溶液中加入二甲基亚砜(0.21mL，3.7mmol)和二异丙基乙基胺(0.65mL，3.7mmol)。将该混合物冷却至-10℃和加入吡啶三氧化硫(444mg，2.8mmol)。搅拌该反应混合物3h，然后通过加入水(100mL)来猝灭反应。搅拌该混合物10分钟，然后除去有机层并用饱和的氯化钠水溶液(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)和过滤。
向滤液中加入甲醇(20mL)、5-[(R)-2-氨基-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮醋酸酯(368mg，0.93mmol)，然后加入三乙酰氧基氢硼化钠(412mg，1.86mmol)。搅拌该混合物19h，然后浓缩该混合物得到标题化合物，其被使用而无需进一步纯化。MS m/z(MH+)795.8；Rf4.93min(10-70％ ACN∶水，反相HPLC)。
实施例24 联苯基-2-基氨基甲酸1-[3-(5-{3-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]丙基}苯硫-2-基)丙基]哌啶-4-基酯 向来自制备92的粗产物中加入乙腈和含水4N盐酸的1∶1混合物(25mL)。在50℃加热该混合物17h，然后减压除去溶剂。向该残留物中加入醋酸和水的1∶1混合物(8.0mL)和将混合物在反相硅胶上进行色谱法(洗脱梯度，10-50％ACN/水)得到标题化合物(135mg，3个步骤产率16％)。MS m/z(MH+)681.5；Rf3.03(10-70％ ACN∶水，反相HPLC)。
制备93 甲基4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸酯 在0℃向4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸(1.008g，5.0mmol)在甲苯(9mL)和甲醇(1mL)混合物中的溶液中滴加(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(2.0M在己烷中，3.0mL，6.0mmol)。然后将该反应混合物暖至室温并搅拌16h。通过加入醋酸猝灭过量的(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷，直到反应混合物的明黄色消失。然后真空浓缩该混合物得到呈灰白色固体到的标题化合物，其被使用而无需进一步纯化。
制备94 4-丙烯酰氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸甲酯 向制备93的粗产物中加入二氯甲烷(10mL，0.5M)和三乙基胺(2.1mL，15mmol)。将该混合物冷却至0℃，并随搅拌滴加丙烯酰氯(812μL，10mmol)。2h后，在0℃通过加入甲醇(约2mL)猝灭反应，在室温搅拌得到的混合物15min，然后真空浓缩。将二氯甲烷(30mL)和水(30mL)加入该残留物和彻底混合该混合物。分离各层，且用二氯甲烷(20mL)萃取水层。合并有机层，干燥(Na2SO4)，过滤和真空除去溶剂得到呈棕色泡沫状固体的标题化合物，其被使用而无需进一步纯化。
制备95 4-{3-[4-(联苯基-2-基氨甲酰氧基)哌啶-1-基]丙酰基氨基}-5-氯-2-甲氧基苯甲酸甲酯 向来自制备94的粗产物中加入制备8的产物(1.33g，4.5mmol)和THF(22.5mL)和甲醇(2.5mL)的混合物。随搅拌在50℃加热该混合物16小时，然后真空除去溶剂。将残留物进行色谱法(硅胶；EtOAc)得到呈灰白色泡沫状固体的标题化合物(0.82g；Rf＝0.4，产率29％经3个步骤)。MS m/z 566.4(M+H，C30H32ClN3O6的预期值是565.20)。
制备96 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(2-氯-4-羟基甲基-5-甲氧基-苯基氨甲酰基)乙基]哌啶-4-基酯 在0℃向制备95的产物(0.82mg，1.45mmol)在THF(4.5mL)和甲醇(0.5mL)的混合物中的溶液中加入氢硼化锂(32mg，1.45mmol)。使该反应混合物暖至室温并搅拌41h。然后在0℃通过加入1N含水盐酸来猝灭反应，直到不再观察到气泡，并搅拌该混合物10min。真空除去溶剂，并将残留物溶解在乙腈(约2mL)中。通过制备-RP-HPLC(梯度有0.05％TFA的在水中的2-50％乙腈)纯化该溶液。收集合适的部分，合并和冻干得到呈三氟醋酸盐形式的标题化合物。用异丙基醋酸酯(10mL)和1N含水氢氧化钠(10mL)处理该盐和收集有机层，干燥(Na2SO4)，过滤和真空除去溶剂得到呈白色泡沫状固体的标题化合物(161mg，21％产率)。MS m/z 538.4(M+H，C29H32ClN3O5的预期值是537.20)。
制备97 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(2-氯-4-甲酰基-5-甲氧基苯基氨甲酰基)-乙基]哌啶-4-基酯 向制备96的产物(161mg，0.3mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入二甲基亚砜(213μL，3.0mmol)和二异丙基乙基胺(261μL，1.5mmol)。将该混合物冷却至-20℃和缓慢加入三氧化硫吡啶络合物(238mg，1.5mmol)。30分钟后，通过加入水(约3mL)来猝灭反应混合物。分离各层和干燥有机层(Na2SO4)，过滤和真空除去溶剂得到呈淡黄色固体的标题化合物。MS m/z 536.3(M+H，C29H30ClN3O5的预期值是535.19)。
制备98 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-{[(R)-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]甲基}-2-氯-5-甲氧基-苯基氨甲酰基)乙基]哌啶-4-基酯 向在二氯甲烷(0.5mL)和甲醇(0.5mL)混合物中的制备97的产物中加入5-[(R)-2-氨基-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮醋酸酯(124.1mg，3.1mmol)，并在室温搅拌得到的混合物1.5h。加入三乙酰氧基氢硼化钠(190.7mg，0.9mmol)，并在室温搅拌反应混合物15h。通过加入水(约0.2mL)来猝灭反应并真空浓缩该混合物来得到标题化合物，其被使用而无需进一步纯化。MS m/z 854.5(M+H，C46H56ClN5O7Si的预期值是853.36)。
实施例25 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(2-氯-4-{[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]甲基}-5-甲氧基苯基氨甲酰基)乙基]哌啶-4-基酯二三氟醋酸酯 向制备98的产物在二氯甲烷(1.0mL，0.3M)中的混悬液中加入三乙胺三氢氟化物(245μL，1.5mmol)。在室温搅拌该混合物45h，然后真空浓缩该混合物。将残留物溶解在DMF(0.5mL)、乙腈/水(1∶1，具有0.1％TFA，0.6mL)、TFA(0.3mL)和乙腈(约1mL)混合物中，通过制备-RP-HPLC纯化该混合物(梯度有0.05％TFA在水中的2-50％乙腈)。收集合适的部分，合并和冻干得到呈灰白色固体的标题化合物(100mg，产率34％，纯度98.7％，通过HPLC)。MS m/z 740.5(M+H，C40H42ClN5O7的预期值是739.28)。
利用上述方法和合适的原料，制备了下述化合物。
制备99 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-[1，3]二氧杂环戊烷-2-基苯基氨甲酰基)-乙基]-4甲基哌啶-4-基酯 在50℃在氮气下将联苯基-2-基氨基甲酸4-甲基哌啶-4-基酯(2.73g，8.79mmol)和N(4-[1，3]二氧杂环戊烷-2-基-苯基)丙烯酰胺(2.05g，8.80mmol)的混合物在100mL 1∶1甲醇/二氯甲烷中加热1h。然后用乙酸乙酯稀释该溶液和用水、盐水洗涤有机层，干燥(MgSO4)和减压浓缩得到标题化合物。C31H35N3O5的MS m/z(M+H)+计算值是530.6；实测值是530.4。
制备100 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-甲酰基苯基氨甲酰基)乙基]-4甲基哌啶-4-基酯 将制备99的产物再溶解在40mL甲醇中并加入25mL含水1N盐酸。在室温搅拌得到的混合物过夜并减压除去有机溶剂。将残留物溶解在乙酸乙酯中，用水、盐水洗涤有机层，干燥(MgSO4)和减压除去溶剂。用二氯甲烷研磨产物得到呈白色粉末的标题化合物(2.47g)。LCMS(2-90)Rt＝4.27min；C29H31N3O4(M+H)+的MS m/z计算值是486.6，实测值是486.5。
制备101 联苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-{[(R)-2-(叔丁基二甲基硅烷氧基)-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]甲基}苯基氨甲酰基)乙基]-4-甲基-哌啶-4-基酯 在室温将制备100的产物(1.70g，3.51mmol)和5-[(R)-2-氨基-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮醋酸酯(1.65g，4.19mmol)的混合物在40mL 1∶1甲醇和二氯甲烷中搅拌过夜。然后加入一份三乙酰氧基氢硼化钠(2.23g，10.5mmol)，并在室温搅拌反应混合物6小时。然后用水猝灭反应并用乙酸乙酯稀释。分离各层，并用饱和的碳酸氢钠、盐水洗涤有机层，干燥(MgSO4)和减压除去溶剂得到标题化合物(2.9g)。C46H57N5O6Si(M+H)+的MS m/z计算值是805.0，实测值是804.6。
实施例170 联苯基-2-基氨基甲酸[1-2-(4-{[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)乙基氨基]甲基}-苯基氨甲酰基)乙基]-4-甲基哌啶-4-基酯 将制备101的产物(2.9g，3.6mmol)溶解在75mL二氯甲烷中并加入三乙胺三氢氟化物(0.85mL，5.2mmol)。在室温搅拌得到的混合物过夜，然后减压除去溶剂得到呈油状的粗产物。然后将该产物溶解在醋酸/水(1∶1)中并通过制备性HPLC纯化得到呈灰白色固体的标题化合物。LCMS(2-90)Rt＝3.67min.；C40H43N5O6(M+H)+的MS m/z计算值是690.8，实测值是690.3。
利用上述方法和合适的原料，可以制备下述化合物。
制备102 联苯基-2-基氨基甲酸(R)-(1-氮杂二环[3.2.1]辛-4-基)酯 将2-联苯基异氰酸盐(1.00g，5.12mmol)和(R)-(-)-3-羟基奎宁啶(quinuclidinol)盐酸盐(921mg，5.63mmol)一起在N，N二甲基甲酰胺(2.06mL)中在110℃加热12h。冷却该反应混合物并用乙酸乙酯(15mL)稀释，然后用饱和的碳酸氢钠水溶液(2×10mL)洗涤。用1M盐酸(3×20mL)萃取有机层，用碳酸钾使合并的含水提取物呈碱性至pH为8-9。用乙酸乙酯(3×20mL)萃取水层和干燥(硫酸镁)合并的有机层，减压除去溶剂得到呈黄色油的标题化合物(1.64g，99％产率)。
制备103 (R)-4-(联苯基-2-基氨甲酰氧基)-1-(9-溴壬基)-1-氮杂双环[3.2.1]辛烷溴化物 向制备102的产物(1.21g，3.76mmol)和三乙基胺(1.05mL，7.52mmol)在乙腈(18.8mL)中的经搅拌的溶液中加入1，9二溴壬烷(994μL，4.89mmol)并在50℃加热该反应混合物4h。然后冷却该反应混合物和减压除去溶剂。将残留物溶解在二氯甲烷(20mL)中和用饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤有机层，干燥(硫酸镁)和减压除去溶剂。通过急骤色谱法纯化粗产物(10％甲醇/二氯甲烷，0.5％氢氧化铵)得到标题化合物(1.04g，1.97mmol，产率52％)。
制备104 (R)-1-(9-N，N-二(叔-丁氧基羰基)氨基壬基)-4-(联苯基-2-基氨甲酰氧基)-1-氮杂双环[3.2.1]辛烷溴化物 在0℃在氮气氛下，向氢化钠(60％在矿物油中的分散体)(126mg，3.15mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中的经搅拌的溶液中加入在N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中的二-叔丁基亚氨基二羧酸酯(513mg，2.36mmol)。在室温搅拌该反应混合物15分钟，然后将它冷却至0℃并加入在N，N二甲基甲酰胺(5mL)中的制备103的产物(1.04g，1.97mmol)。经12小时将反应混合物暖至室温，然后减压除去溶剂得到标题化合物，其被应用而无需进一步纯化。
制备105 (R)-1-(9-氨基壬基)-4-(联苯基-2-基氨甲酰氧基)-1-氮杂双环[3.2.1]辛烷溴化物 将制备104的产物(1.31g，1.97mmol)溶解在二氯甲烷(15mL)中和缓慢加入三氟醋酸(5mL)。在室温搅拌反应混合物1h，然后减压除去溶剂。将残留物溶解在二氯甲烷(20mL)中并用1M氢氧化钠水溶液(20mL)洗涤。用1M盐酸(3×20mL)萃取有机层，用碳酸钾使合并的含水萃取物呈碱性并用二氯甲烷(3×20mL)萃取。干燥(硫酸镁)合并的有机层和减压除去溶剂得到标题化合物(210mg，产率23％，经2个步骤)。
制备106 (R)-1-{9-[(R)-2-(8-苄氧基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-2-羟基乙基氨基]-壬基}-4-(联苯基-2-基氨甲酰氧基)-1-氮杂双环[3.2.1]辛烷溴化物 将制备105的产物(210mg，0.45mmol)和三乙酰氧基氢硼化钠(286mg，1.35mmol)在二氯乙烷(4.5mL)中在室温搅拌2h，然后加入制备6的产物(163mg，0.50mmol)。搅拌该反应混合物12h，然后用二氯甲烷(10mL)稀释和用饱和的碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤，干燥(硫酸镁)和减压除去溶剂。通过急骤色谱法纯化粗反应产物(10-50％ 甲醇/二氯甲烷，0.5％氢氧化铵)得到标题化合物(131mg，产率38％)。
实施例183 4-(联苯基-2-基氨甲酰氧基)-1-{9-[(R)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧-1，2-二氢喹啉-5-基)-乙基氨基]壬基}-1-氮杂双环[2.2.2]辛烷溴化物二三氟醋酸酯 向制备105的产物(131mg，0.17mmol)在甲醇(1.8mL)中的经搅拌的溶液中加入钯(10wt.％干基在活性炭上；39mg)和将反应混合物放置在氢气氛下。搅拌12h后，经硅藻土垫过滤反应混合物，用甲醇(2mL)洗涤和减压除去溶剂。通过制备性HPLC纯化得到的残余物得到呈它的二三氟醋酸盐的标题化合物(8mg).MS m/z 667.5。
利用本文描述的方法和合适的原料，可以制备如下化合物。
制备A 细胞培养和从表达人β1、β2或β3肾上腺素能受体的细胞的膜制备 在500μg/mL遗传霉素存在下，使分别地稳定表达克隆的人β1、β2或β3肾上腺素能受体的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系在有10％FBS的Hams F-12培养基中生长至接近汇合。用在PBS中的2mM EDTA浮起细胞单层。通过在1000rpm离心来沉淀细胞，将细胞沉淀在-80℃冷冻储存或立即制备膜来使用。对于β1和β2受体表达性膜的制备，将细胞沉淀再混悬在溶解缓冲液(10mM HEPES/HCl，10mM EDTA，pH7.4，在4℃)中且利用紧密适合的Dounce玻璃匀浆器在冰上匀化(30冲程)。对于更蛋白酶敏感的β3受体表达性膜，使细胞沉淀物在每50mL缓冲液补充有一片“有2mM DETA的完全蛋白酶抑制剂鸡尾酒片”的溶解缓冲液(Roche Catalog No.1697498，Roche Molecular Biochemicals，Indianapolis，IN)中匀化。将该匀浆在20,000xg离心，并用溶解缓冲液通过如上所述再混悬和离心来洗涤一次得到的沉淀。然后将最终的沉淀再混悬在冰冷的结合试验缓冲液(75mM Tris/HCl pH7.4，12.5mM MgCl2，1mM EDTA)中。通过在Lowry等，1951，Journalof Biological Chemisty，193，265；和Bradford，AnalyticalBiochemistry，1976，72，248-54中描述的方法测定膜混悬液的蛋白质浓度。将所有膜以等分量在-80℃冷冻储存或立即使用。
制备B 细胞培养和从表达人M1、M2、M3和M4毒蕈碱受体的细胞的膜制备 使分别地稳定表达克隆的人hM1、hM2、hM3和hM4毒蕈碱受体亚型的CHO细胞系在补充有10％FBS和250μg/mL遗传霉素的HAM′s F-12培养基中生长至接近汇合。使细胞在5％CO2，37℃培养箱中生长并用在dPBS中的2mM EDTA浮起它。通过在650xg 5分钟离心收集细胞，将细胞沉淀在-80℃冷冻储存或立即制备膜来使用。至于膜制备，将细胞沉淀再混悬在溶解缓冲液中并用Polytron PT-2100组织破裂机(Kinematica AG；20秒×2次破裂)匀浆。在4℃在40,000xg离心粗制膜15分钟。然后将膜沉淀用再混悬缓冲液再混悬，并再次用Polytron组织破裂机匀浆。通过在Lowry等，1951，Journal ofBiochemistry，193，265中描述的方法来测定膜混悬液的蛋白质浓度。将所有膜以等分量在-80℃冷冻储藏或立即使用。等分量的制备的hM5受体膜直接购自Perkin Elmer且储存在-80℃直到使用。
试验检测方法A 人β1、β2和β3肾上腺素能受体的放射配体结合试验 在96孔微量滴定板中以100μl的总试验体积进行结合试验，试验缓冲液(75mM tris/HCl pH 7.4，在25℃，12.5mM MgCl2，1mMEDTA，0.2％BSA)中有10-15μg包含人β1、β2或β3肾上腺素能受体的膜蛋白质。测定放射配体Kd值的饱和结合研究是利用对于β1和β2受体的[3H]-二氢阿普洛尔(NET-720，100Ci/mmol，PerkinElmerLife Sciences Inc.，Boston，MA)和[125I]-(-)-碘氰基吲哚洛尔(NEX-189，220Ci/mmol，PerkinElmer Life Sciences Inc.，Boston，MA)，以0.01nM-20nM范围的10或11个不同浓度进行的。测定试验化合物Ki值的置换试验是用1nM[3H]-二氢阿普洛尔和0.5nM[125I]-(-)-碘氰基吲哚洛尔，用于在10pM-10μM范围的10或11个不同浓度的试验化合物进行的。在10μM普奈洛尔存在下测定非特异性结合。将试验物在37℃培养1小时，然后通过经预先浸在0.3％聚乙烯亚胺中的对于β1和β2受体的GF/B或对于β3受体的GF/C玻璃纤维滤板(PaekardBioScience Co.，Meriden，CT)快速过滤来终止结合反应。用过滤缓冲液(75mM tris/HCl pH 7.4在4℃，12.5mM MgCl2，1mM EDTA)洗涤滤板三次来除去未结合放射性。然后干燥该板，加入50μlMicroscint-20液体闪烁液(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)并在Packard Topcount液体闪烁计数仪(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)中计数该板。利用一位点竞争的3-参数模型用GraphPadPrism软件包(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)通过非线性回归分析来分析结合数据。当在10μM普奈洛尔存在下测定时，将曲线最小值固定在非特异性结合的值。利用Cheng-Prusoff方程式从观察到的IC50值和放射配体的Kd值计算试验化合物的Ki值(Cheng Y，和Prusoff WH.，Biochemical Pharmacology，1973，22，23，3099-108)。
在这一试验中，更低的Ki值表明试验化合物对受试的受体具有更高的结合亲和性。在这一试验中受试的本发明的例证化合物通常被发现对β2肾上腺素能受体具有小于约300nM的Ki值。例如，实施例3和6的化合物被发现具有小于10nM的Ki值。
如果需要，受试化合物的受体亚型选择性可以被计算为Ki(β1)/Ki(β2)的比值或Ki(β3)/Ki(β2)的比。通常，本发明化合物被证明与β1或β3肾上腺素能受体相比在β2肾上腺素能受体上有更大的结合，即Ki(β1)或Ki(β3)通常大于Ki(β2)。通常，相对于β1或β3肾上腺素能受体对β2肾上腺素能受体具有选择性的化合物是优选的；特别是具有大于约5；并且尤其是大于约8的选择性的化合物。通过举例，实施例3和6的化合物具有大于8的Ki(β1)/Ki(β2)比例。
试验检测方法B 关于毒蕈碱受体的放射配体结合试验 在96孔微量滴定板中以100μl的总试验体积进行克隆的人毒蕈碱受体的放射配体结合试验。将稳定表达hM1、hM2、hM3、hM4或hm5毒蕈碱亚型的CHO细胞膜稀释在试验缓冲液中至下述特定的靶蛋白浓度(μg/孔)对于hM1 10μg，对于hM2 10μg-15μg，对于hM3 10μg-20μg，对于hM4 10μg-20μg，和对于hM5 10μg-12μg来得到相似的信号(cpm)。在试验板加入之前利用Polytron组织破裂机短暂地匀化该膜(10秒)。测定放射配体KD值的饱和结合研究是利用在0.001nM-20nM浓度的L-[N-甲基-3H]氯甲东莨菪碱([3H]-NMS)(TRK666，84.0Ci/mmol，Amersham Pharmacia Biotech，Buckinghamshire，England)进行的。测定试验化合物Ki值的置换试验是用1nM[3H]-NMS和11个不同试验化合物浓度进行的。首先将试验化合物溶解在稀释缓冲液中至浓度为400μM，然后用稀释缓冲液连续地稀释5×至最终浓度为10pM至100μM。添加至试验板的顺序和体积如下25μL放射配体，25μL稀释的试验化合物和50μL膜。在37℃培养试验板60分钟。通过经在1％BSA中预处理的GF/B玻璃纤维滤板(PerkinElmer Inc.，Wellesley，MA)快速过滤来终止结合反应。用洗涤缓冲液(10mM HEPES)冲洗滤板三次来除去未结合放射性。然后空气干燥该板，并向每个孔加入50μL Microscint-20液体闪烁液(Perkin Elmer Inc.，Wellesley，MA)。然后在PerkinElmer Topcount液体闪烁计数仪(PerkinElmer Inc.，Wellesley，MA)中计数该板。利用一位点竞争模型用GraphPad Prism软件包(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)通过非线性回归分析来分析结合数据。利用Cheng-Prusoff方程式从观察到的IC50值和放射配体的KD值计算试验化合物的Ki值(Cheng Y；Prusoff WH.(1973)BiochemicalPharmacology，22(23)3099-108)。将Ki值转化成pKi值来确定几何平均数和95％置信区间。然后将这些概括的统计数字再转化回Ki值用于数据报告。
在这一试验中，更低的Ki值表明试验化合物对受试的受体具有更高的结合亲和性。在这一试验中受试的本发明的举例化合物通常被发现对于M3毒蕈碱受体具有小于约300nM的Ki值。例如，实施例3和6的化合物被发现具有小于10nM的Ki值。
试验检测方法C 在异源性表达人β1、β2或β3肾上腺素能受体的CHO细胞系中的全细胞cAMP闪光板试验 按照生产商的说明利用有[125I]-cAMP的闪光板腺苷酸环化酶激活试验系统以放射免疫测定格式进行cAMP试验(NEN SMP004，PerkinElmer Life Sciences Inc.，Boston，MA)。对于β受体激动剂效能(EC50)的测定，使稳定表达克隆的人β1、β2或β3肾上腺素能受体的CHO-K1细胞系在补充有10％FBS和遗传霉素(250μg/ml)的HAM’s F-12培养基中生长至接近汇合。用PBS冲洗细胞，并在包含2mM EDTA或胰蛋白酶-EDTA溶液(0.05％胰蛋白酶/0.53mM EDTA)的dPBS(Dulbecco′s磷酸盐缓冲盐水，无CaCl2和MgCl2)中分离细胞。在Coulter细胞计数器中计数细胞后，通过在1000rpm离心来沉淀细胞和再混悬在预先暖至室温的包含IBMX的刺激缓冲液(PerkinElmer试剂盒)中至浓度为每毫升1.6×106至2.8×106细胞。在这一试验中使用每孔大约60000-80000个细胞。将受试化合物(10mM在DMSO中)在Beckman Biomek-2000中稀释在包含0.1％BSA的PBS中，并在100μM-1pM的11个不同浓度下试验。将反应物在37℃培养10分钟，并通过加入包含[125I]-cAMP的100μL冰冷检测缓冲液(NEN SMP004，PerkinElmer Life Sciences，Boston，MA)来停止反应。基于观察到的样本的计数和在生产商用户手册中描述的cAMP标准来计算产生的cAMP的量(pmol/孔)。用反曲(sigmoidal)方程式用GraphPad Prism软件包(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)通过非线性回归分析来分析数据。使用Cheng-Prusoff方程式(Cheng Y，和PrusoffWH.，Biochemical Pharmacology，1973，22，23，3099-108)来计算EC50值。
在这一试验中，更低的EC50值表明受试化合物在受试的受体具有更高的功能活性。在这一试验中受试的本发明的举例化合物通常被发现对于β2肾上腺素能受体具有小于约300nM的EC50值。例如，实施例3和6的化合物被发现具有小于10nM的EC50值。
如果需要，受试化合物的受体亚型选择性可以被计算为EC50(β1)/EC50(β2)的比值或EC50(β3)/EC50(β2)的比。通常，本发明化合物证明与β1或β3肾上腺素能受体相比在β2肾上腺素能受体上有更大的功能活性，即EC50(β1)或EC50(β3)通常大于EC50(β2)。通常，相对于β1或β3肾上腺素能受体对β2肾上腺素能受体具有选择性的化合物是优选的；特别是具有大于约5；并且尤其是大于约8的选择性的化合物。通过举例，实施例3和6的化合物具有大于10的EC50(β1)/EC50(β2)比例。
试验检测方法D 对毒蕈碱受体亚型的拮抗作用的功能试验 A.cAMP累积的激动剂介导的抑制的阻滞 在这一试验中，通过测量试验化合物阻滞在表达hM2受体的CHO-K1细胞中毛喉素-介导的cAMP累积的氧化震颤素抑制的能力来测定受试化合物的功能效力。按照生产商的说明，利用有125I-cAMP的闪光板腺苷酸环化酶激活试验系统以放射免疫测定格式进行cAMP试验(NEN SMP004B，PerkinElmer Life Sciences Inc.，Boston，MA)。用dPBS冲洗细胞一次，并用如在上面细胞培养和膜制备部分中描述的胰蛋白酶-EDTA溶液(0.05％胰蛋白酶/0.53mM EDTA)浮起细胞。通过在50mL dPBS中在650xg离心五分钟来洗涤分离的细胞两次。然后将细胞沉淀再混悬在10mL dPBS中，并用Coulter Z1二元粒子计数器(Beckman Coulter，Fullerton，CA)来计数细胞。在650xg再次离心该细胞五分钟，并再混悬在刺激缓冲液中至分析浓度为每毫升1.6×106-2.8×106个细胞。
先将受试化合物溶解在稀释缓冲液(补充有1mg/mL BSA(0.1％)的dPBS)中至浓度为400μM，然后连续地用稀释缓冲液稀释至最终摩尔浓度为100μM至0.1nM。以相似的方式稀释氧化震颤素。
为测定腺苷酸环化酶(AC)活性的氧化震颤素抑制，将25μL毛喉素(稀释在dPBS中25μM最终浓度)、25μL稀释的氧化震颤素和50μL细胞加入激动剂试验孔。为测定受试化合物阻滞氧化震颤素抑制的AC活性的能力，将25μL毛喉素和氧化震颤素(分别为稀释在dPBS中的25μM和5μM最终浓度)、25μL稀释的受试化合物和50μL细胞加入剩余的试验孔。
将反应物在37℃培养10分钟并通过加入100μL冰冷的检测缓冲液来停止反应。密封板，在室温培养过夜并在次日早晨在PerkinElmerTopCount液体闪烁计数仪(PerkinElmer Inc.，Wellesley，MA)上计数。基于观察到的样本的计数和在生产商用户手册中描述的cAMP标准来计算产生的cAMP的量(pmol/孔)。利用非线性回归、一位点竞争方程式用GraphPad Prism软件包(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)通过非线性回归分析来分析数据。使用Cheng-Prusoff方程式来计算Ki，分别利用氧化震颤素浓度-响应曲线的EC50和氧化震颤素试验浓度作为KD和[L]。
在这一试验中，更低的Ki值表明受试化合物在受试的受体具有较高的结合亲和性。在这一试验中受试的本发明的举例化合物通常被发现对于阻滞在表达hM2受体的CHO-K1细胞中毛喉素-介导的cAMP累积的氧化震颤素抑制具有小于约300nM的Ki值。例如，实施例3的化合物被发现具有小于10nM的Ki值。
B.激动剂介导的[35S]GTPγS结合的阻滞 在第二功能试验中，通过测定化合物在表达hM2受体的CHO-K1细胞中阻滞氧化震颤素刺激的[35S]GTPγS的结合的能力来测定受试化合物的功能效力。
在使用时，解冻冷冻的膜，然后稀释在每孔有5-10μg蛋白质的最终靶组织浓度的试验缓冲液中。利用Polytron PT-2100组织断裂机短暂地匀化膜，然后加入试验板。
在每一试验中，测定激动剂氧化震颤素刺激[35S]GTPγS结合的EC90值(对于90％最大响应的有效浓度)。
为测定试验化合物抑制氧化震颤素-刺激的[35S]GTPγS结合的能力，将下述物质加入96孔板的每个孔中25μL有[35S]GTPγS(0.4nM)的试验缓冲液，25μL氧化震颤素(EC90)和GDP(3uM)，25μL稀释的受试化合物和25μL表达hM2受体的CHO细胞膜。然后在37℃培养试验板60分钟。利用PerkinElmer 96-孔收获仪经1％BSA预处理的GF/B滤器过滤试验板。用冰冷的冲洗缓冲液冲洗板3×3秒，然后空气或真空干燥。将Microscint-20闪烁液(50μL)加入每个孔中，密封每个板，并在Topcounter(PerkinElmer)上计数放射性。利用非线性回归、一位点竞争方程式用GraphPad Prism软件包(GraphPadSoftware，Inc.，San Diego，CA)通过非线性回归分析来分析数据。使用Cheng-Prusoff方程式来计算Ki，分别利用试验化合物的浓度-响应曲线的IC50值和试验中的氧化震颤素浓度作为KD和[L]，配体浓度。
在这一试验中，更低的Ki值表明受试化合物在受试的受体上具有更高的功能活性。在这一试验中受试的本发明的举例化合物通常被发现对于在表达hM2受体的CHO-K1细胞中氧化震颤素-刺激的[35S]GTPγS结合的阻滞具有小于约300nM的Ki值。例如，实施例3的化合物被发现具有小于10nM的Ki值。
C.经由FLIPR试验的激动剂-介导的钙释放的阻滞 与Gq蛋白偶联的毒蕈碱性受体亚型(M1、M3和M5受体)，在激动剂结合受体时激活磷脂酶C(PLC)通路。结果，活化的PLC水解磷脂酰肌醇二磷酸(PIP2)成二酰基甘油(DAG)和磷脂酰-1，4，5-三磷酸(IP3)，其又从细胞内存储处即内质网和肌质网产生钙释放。FLIPR(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)试验通过利用当游离钙结合时发荧光的钙敏感性染料(Fluo-4AM，Molecular Probes，Eugene，OR)来利用细胞内钙的这一增加。用FLIPR实时测定该荧光事件，其检测到用人M1和M3以及黑猩猩M5受体克隆的单层细胞的荧光变化。通过拮抗剂抑制激动剂介导的细胞内钙增加的能力能测定拮抗剂效能。
对于FLIPR钙刺激试验，在进行试验前的晚上，将稳定表达hM1、hM3和cM5受体的CHO细胞接种入96-孔FLIPR板。通过Cellwash(MTXLabsystems，Inc.)用FLIPR缓冲液(10mM HEPES，pH 7.4，2mM氯化钙，在无钙和镁的Hank′s缓冲盐溶液(HBSS)中的2.5mM丙璜舒)洗涤接种的细胞两次来除去生长培养基和残留的50μL/孔的FLIPR缓冲液。然后用50μL/孔的4μM FLUO-4AM(制成2X溶液)在37℃，5％二氧化碳下培养细胞40分钟。在染料培养期后，用FLIPR缓冲液洗涤细胞两次，留下50μL/孔的总体积。
为测定拮抗剂效力，首先测定氧化震颤素的细胞内Ca2+释放的剂量依赖性刺激，以使随后可以测量在EC90浓度抗氧化震颤素刺激的拮抗剂效力。首先用化合物稀释缓冲液培养细胞20分钟，随后加入激动剂，这是通过FLIPR进行的。按照在FLIPR测量中的详细方法和下面的数据归纳部分，结合公式ECF＝((F/100-F)^1/H)*EC50产生氧化震颤素的EC90值。在刺激板中制备3 x ECF的氧化震颤素浓度，将EC90浓度的氧化震颤素加入拮抗剂抑制试验板的每个孔中。
用于FLIPR的参数是曝光时长为0.4秒，激光强度为0.5瓦特，激发波长为488nm和发射波长为550nm。通过在添加激动剂前测量荧光变化10秒钟来确定基线。在激动剂刺激后，FLIPR每0.5-1秒连续地测量荧光变化1.5分钟来捕捉最大荧光变化。
荧光变化被表示为每孔最大荧光减去基线荧光。利用对反曲剂量响应的嵌入模型用GraphPad Prism(GraphPad Software，Inc.，SanDiego，CA)通过非线性回归对药物浓度的对数分析原始数据。按照Cheng-Prusoff方程式(Cheng & Prusoff，1973)，利用氧化震颤素EC50值作为KD和配体浓度的氧化震颤素EC90通过Prism确定拮抗剂Ki值。
在这一试验中，更低的Ki值表明受试化合物在受试的受体上具有更高的功能活性。在这一试验中受试的本发明的例证化合物通常被发现对于阻滞在稳定地表达hM1、hM3和cM5受体的CHO细胞中激动剂介导的钙释放具有小于约300nM的Ki值。例如，实施例3的化合物被发现对hM1、hM3和cM5受体具有小于10nM的Ki值。
试验检测方法E 用内源性表达人β2肾上腺素能受体的肺上皮细胞系的全细胞cAMP荧光板试验 为了测定在表达β2肾上腺素能受体内源性水平的细胞系中激动剂效力和功效(固有活性)，采用人肺上皮细胞系(BEAS-2B)(ATCCCRL-9609，美国典型培养物保藏中心，Manassas，VA)(January B，等British Journal of Pharmacology，1998，123，4，701-11)。使细胞在完全、无血清的培养基(包含肾上腺素和维A酸的LHC-9培养基，cat#181-500，Biosource International，Camarillo，CA)中生长至75％-90％汇合。在试验前一天，将培养基转换成LHC-8(无肾上腺素或维A酸cat # 141-500，Biosource International，Camarillo，CA)。按照生产商的说明利用有[125I]-cAMP的闪光板腺苷酸环化酶激活试验系统以放射免疫测定格式进行cAMP试验(NEN SMP004，PerkinElmer Life Sciences Inc.，Boston，MA)。在试验当天，用PBS冲洗细胞，通过用在PBS中的5mM EDTA刮而浮起细胞并计数。通过在1000rpm离心来沉淀细胞，并再混悬在预先暖至37℃的刺激缓冲液中，最终浓度为600,000细胞/mL。在这一试验中在100000-120000细胞/孔的最终浓度使用细胞。在Beckman Biomek-2000中，将受试化合物连续稀释入试验缓冲液(75mM Tris/HCl pH 7.4在25℃，12.5mM MgCl2，1mM EDTA，0.2％BSA)。在试验中在10μM-10pM的11个不同浓度下试验受试化合物。在37℃培养反应物10分钟，并通过添加100μL冰冷的检测缓冲液来停止反应。密封板，在4℃培养过夜并在次日早晨在Topcount闪烁计数器(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)中计数。基于观察到的样本的计数和在生产商用户手册中描述的cAMP标准来计算每毫升反应产生的cAMP的量。用反曲剂量响应的4-参数模型用GraphPad Prism软件包(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)通过非线性回归分析来分析数据。
在这一试验中，更低的EC50值表明受试化合物在受试的受体上具有更高的功能活性。在这一试验中受试的本发明的例证化合物通常被发现对于β2肾上腺素能受体具有小于约300nM的EC50值。例如，实施例3和6的化合物被发现具有小于10nM的EC50值。
如果需要，从观察到的Emax(拟合曲线的最高点)和对异丙肾上腺素剂量响应曲线获得的最大响应计算受试化合物功效(％功效)，并表示为相对于异丙肾上腺素的％功效。在这一试验中受试的本发明的举例化合物通常被证明有大于约40的％功效。
试验检测方法F 乙酰胆碱诱导的或组胺诱导的支气管收缩的豚鼠模型中支气管保护的持续时间 采用这些体内试验来评价显示毒蕈碱受体拮抗剂和β2肾上腺素能受体激动剂两种活性的受试化合物的支气管保护作用。为分离乙酰胆碱诱导的支气管收缩模型中的毒蕈碱拮抗剂活性，在给药乙酰胆碱前，给予动物心得安-一种阻断β受体活性的化合物。在组胺诱导的支气管收缩模型中支气管保护的持续时间反映了β2肾上腺素能受体激动剂的活性。
通过笼子卡片单个鉴定重250-350g的6只雄性豚鼠的组(Duncan-Hartley(HsdPocDH)Harlan，Madison，WI)。在整个研究中，允许动物随意接触食物及水。
在全身体暴露给药室(R & S Molds，San Carlos，CA)中经10分钟通过吸入给予试验化合物。安排给药室，以便从中央总管能同时给予6个单独的室气雾剂。将豚鼠暴露于受试化合物或载体(WFI)的气雾剂中。该气雾剂产生自水溶液，例用LC Star雾化器装置(Model22F51，PARI呼吸装置，Inc.Midlothian，VA)在22psi的压力由气体混合物(CO2＝5％，O2＝21％和N2＝74％)推进。在该操作压力通过雾化器的气体流量是大约3L/分钟。通过正压将产生的气雾剂驱赶入室。在给药雾化的溶液过程中不使用稀释空气。在10分钟雾化期间，大约1.8mL的溶液被雾化。通过比较填充的雾化器雾化前和雾化后的重量来重量分析地计算该值。
在给药后1.5、24、48和72小时，利用全身体积扫描术评价经由吸入给予的受试化合物的支气管保护作用。
在肺评价开始前四十五分钟，用氯胺酮(43.75mg/kg)，甲苯噻嗪(3.50mg/kg)和乙酰丙嗪(1.05mg/kg)肌内注射来麻醉每只豚鼠。在手术位置备皮和用70％乙醇清洁后，做颈腹面的2-3cm正中切口。然后分离颈静脉并插入充满盐水的聚乙烯导管(PE-50，BectonDickinson，Sparks，MD)以使得输注在盐水中的乙酰胆碱(Ach)或组胺。然后解剖使开气管游离并插入14G特氟隆管(#NE-014，SmallParts，Miami Lakes，FL)。如果需要，通过进一步肌内注射前面提及的麻醉混合物来维持麻醉。如果动物对掐它的爪响应或如果呼吸速度大于100次呼吸/分钟，监测和调节麻醉深度。
一旦插管完成，就将动物置于体积扫描器(#PLY 3114，BuxcoElectronics，Inc.，Sharon，CT)中和插入食管压力导管(PE-160，Becton Dickinson，Sparks，MD)来测量肺驱动压(压力)。将特氟隆气管导管连接至体积扫描器的开口以使豚鼠能从室外呼吸空气。然后密封室。使用加热灯维持体温，并利用10mL校准注射器(#5520Series，Hans Rudolph，Kansas City，MO)用4mL空气使豚鼠的肺膨胀3次以确保下气道不崩塌且该动物不会通气过度。
一旦测定顺应性基线值在0.3-0.9mL/cm水范围内，且阻力基线值在0.1-0.199cm水/mL/秒范围内，就开始肺评价。Buxco肺测量计算机程序使得能够收集和导出肺的值。
开始这一程序来启动试验方案和数据收集。通过Buxco压力传感器测量随每次呼吸在体积扫描器内发生的体积随时间的变化。通过随时间整合该信号，计算每次呼吸的流量测量值。通过Buxco(MAX 2270)前置放大器连接该信号和利用Sensym压力传感器(#TRD4100)收集的肺驱动压力变化至数据收集界面(#’s SFT3400和SFT3813)。从这两个输入导出所有其它肺参数。
收集基线值5分钟，之后用Ach或组胺攻击豚鼠。当评价毒蕈碱拮抗剂作用时，在用Ach攻击前15分钟给予心得安(5mg/Kg，iv)(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)。从试验开始以下述剂量和给定的时间从注射器泵(sp210iw，World Precision Instruments，Inc.，Sarasota，FL)静脉内输注Ach(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)(0.1mg/mL)1分钟在第5分钟1.9μg/分钟，在第10分钟3.8μg/分钟，在第15分钟7.5μg/分钟，在第20分钟15.0μg/分钟，在第25分钟30μg/分钟和在第30分钟60μg/分钟。或者，在不用β阻断化合物预处理的乙酰胆碱攻击模型中评价受试化合物的支气管保护作用。
在评价受试化合物的β2肾上腺素能受体激动剂作用时，从试验开始以下述剂量和给定的时间从注射器泵静脉内输注组胺(25μg/mL)(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)1分钟在第5分钟0.5μg/分钟，在第10分钟0.9μg/分钟，在第15分钟1.9μg/分钟，在第20分钟3.8μg/分钟，在第25分钟7.5μg/分钟和在第30分钟15μg/分钟。如果在每次Ach或组胺剂量后3分钟阻力或顺应性不返回基线值，则从10mL校正注射器用4mL空气膨胀豚鼠的肺3次。记录的肺参数包括呼吸频率(呼吸/分钟)、顺应性(mL/cm水)和肺阻力(cm水/mL/秒)。一旦在该方案的第35分钟完成肺功能测定，就从体积扫描器移去豚鼠和通过二氧化碳窒息来处死豚鼠。
以两种方式中的一种来评价数据 (a)从“压力变化”与“流量变化”的比值计算肺阻力(RL，cm水/mL/秒)。计算介质和受试化合物组对Ach(60μg/min，1H)的RL响应。计算在介质处理动物中在每个处理前时间的平均ACh响应，并用来在相应的处理前时间在每个受试化合物剂量下计算ACh响应的抑制百分率。利用GraphPad Prism，用于Windows的3.00版(GraphPadSoftware，San Diego，California)使‘RL’的抑制剂量响应曲线与四参数逻辑方程拟合来估计支气管保护ID50(抑制ACh(60μg/min)支气管收缩响应50％所需的剂量)。使用的方程式如下 Y＝Min+(Max-Min)/(1+10((log ID50-X)*希尔斜率)) 其中X是剂量的对数，Y是响应(ACh诱导的RL增加的抑制百分率)。Y在Min起始并用反曲形状渐进靠近Max。
(b)量PD2，其被定义为引起基线肺阻力加倍需要的量，利用下述方程式(衍生自临床中用于计算PC20值的方程式(见Am.ThoracicSoc，2000)利用一系列Ach或组胺攻击期间从流量和压力衍生的肺阻力值来计算 其中 C1＝C2前的Ach或组胺的浓度 C2＝导致肺阻力(RL)至少2倍增加的Ach或组胺的浓度。
R0＝基线RL值 R1＝C1后的RL值 R2＝C2后的RL值 利用双尾-学生t-检验进行该数据的统计学分析。P值＜0.05被认为显著。
在这一试验中试验的本发明的例证化合物通常产生抗MCh诱导的支气管收缩和His诱导的支气管收缩的剂量-依赖性支气管保护作用。通常，在本试验中，对ACh诱导的支气管收缩有低于约300μg/mL和对His诱导的支气管收缩有低于约300μg/mL的效力(在给药后1.5h的ID50)的受试化合物通常是优选的。例如，实施例3和6的化合物被发现在给药后1.5小时对于ACh诱导的支气管收缩有低于约100μg/mL的ID50，对于His诱导的支气管收缩有低于约100μg/mL的ID50。
此外，在这一试验中，具有至少约24小时的支气管保护活性的持续时间(PD T1/2)的受试化合物通常是优选的。通过举例，实施例3和6的化合物被发现具有给药后至少约24小时的PD T1/2。
试验检测方法G 测量豚鼠通气变化的Einthoven模型 在麻醉的豚鼠模型(Einthoven模型)中评价受试化合物的支气管扩张剂活性，其使用通气压力作为气道阻力的代用物量度。例如见Einthoven(1892)Pfugers Arch.51367-445；和Mohammed等(2000)Pulm Pharmacol Ther.13(6)287-92。在该模型中，通过测定抗乙酰甲胆碱(MCh)和组胺(His)诱导的支气管收缩的保护作用来评价毒蕈碱拮抗剂和β2激动剂活性。
利用重300-400g的Duncan-Hartley豚鼠(Harlan，Indianapolis，IN)进行该试验。
利用5mL给药溶液在全身体暴露给药室(R+S Molds，San Carlos，CA)中经10分钟时间通过吸入(IH)给予受试化合物或介质(即无菌水)。动物被暴露于气雾剂，其产生自LC Star Nebulizer Set(型号22F51，PARI呼吸装置，Inc.Midlothian，VA)，在22psi的压力下由Bioblend-一种气体混合物(5％CO2；21％O2；和74％N2)推进。在吸入给药后不同时间点评价肺功能。
在肺功能评价开始前四十五分钟，用氯胺酮(13.7mg/kg)/甲苯噻嗪(3.5mg/kg)/乙酰丙嗪(1.05mg/kg)的混合物肌内(IM)注射来麻醉豚鼠。在需要时给药补充剂量的该混合物(初始剂量的50％)。分离颈静脉和颈动脉，并插入充满盐水的聚乙烯导管(分别是micro-renathane和PE-50，Becton Dickinson，Sparks，MD)。将颈动脉与压力传感器连接使得能测量血压，颈静脉插管被用于MCh或His的IV注射。然后解剖游离气管并插入14G针(#NE-014，SmallParts，Miami Lakes，FL)。一旦插管完成，就利用设置在每100g体重1mL动体积但是不超过2.5mL体积的呼吸机(型号683，HarvardApparatus，Inc.，MA)，以每分钟100搏的速度给豚鼠通气。利用与Biopac(TSD 137C)前置放大器连接的Biopac传感器在气管套管中测量通气压力(VP)。利用加热垫将体温维持在37℃。在开始数据收集前，腹膜内(IP)给药戊巴比妥(25mg/kg)来抑制自发的呼吸和获得稳定的基线。将VP变化记录在Biopac Windows数据收集界面上。收集基线值至少5分钟，之后用2倍增加量的支气管收缩剂(MCh或His)非累积地IV攻击豚鼠。当MCh被用作支气管收缩剂时，用心得安(5mg/kg，IV)预处理动物以隔离受试化合物的抗毒蕈碱作用。利用Acknowledge Data Collection Software(Santa Barbara，CA)记录VP变化。在研究完成后，处死动物。
以水的cm测量VP变化。VP变化(cm水)＝峰压(支气管收缩剂攻击后)-峰基线压。利用GraphPad Prism，Windows 3.00版本(GraphPad Software，San Diego，California)，将MCh或His剂量响应曲线拟合线四参数逻辑方程。使用的方程式如下 Y＝Min+(Max-Min)/(1+10(log ID50-x)*希尔斜率)) 其中X是剂量的对数，Y是响应。Y在Min起始并用反曲形状逐渐靠近Max。
利用下述方程式在受试化合物的每个剂量下计算对MCh或His次最大剂量的支气管收缩剂响应的抑制百分率响应的抑制百分率＝100-((峰压(在支气管收缩剂攻击后，处理的)-峰基线压(给药组)*100％/(峰压(支气管扩张剂攻击后，水)-峰基线压(水))。利用GraphPad软件的四参数逻辑方程式拟合抑制曲线。当需要时，也估计ID50(产生支气管收缩剂响应50％抑制所需的剂量)和Emax(最大抑制)。
利用吸入受试化合物后不同时间点的支气管保护量值来估算药效半衰期(PD T1/2)。利用单相指数式衰减方程式(GraphPad Prism，4.00版)Y＝跨距*指数(-K*X)+坪值利用非线性回归拟合来确定PD T1/2；在跨距+坪值开始并以速度常数K衰减至坪值。PD T1/2＝0.69/K。强制坪值回0。
在该试验中试验的本发明的例证化合物通常产生抗MCh诱导的支气管收缩和His-诱导的支气管收缩的剂量依赖性支气管保护作用。通常，在该试验中在给药后1.5小时对于MCh诱导的支气管收缩具有小于约300μg/mL的ID50和对于His诱导的支气管收缩具有小于约300μg/mL的ID50的受试化合物是优选的。此外，在该试验中，具有至少约24小时的支气管保护活性的持续时间(PD T1/2)的受试化合物通常是优选的。
试验检测方法H 吸入豚鼠流涎试验 使重200-350g的豚鼠(Charles River，Wilmington，MA)在到达后适应屋内豚鼠居住地至少3天。在馅饼形状的给药室(R+S Molds，San Carlos，CA)中经10分钟时间段通过吸入(IH)给药试验化合物或介质。将试验溶液溶解在无菌水中并利用充满5.0mL给药溶液的雾化器给药。将豚鼠限制在吸入室中30分钟。在这一时间期间，将豚鼠限制在大约110平方厘米的区域内。这一空间对于动物自由转向，自己复位和允许理毛行为是足够的。在适应20分钟后，使动物暴露于在22psi压力下由屋空气推进的产生于LS Star Nebulizer Set(型号22F51，PARI呼吸装置，Inc.Midlothian，VA)的气雾剂。在雾化完成时，在处理后1.5、6、12、24、48或72小时评价豚鼠。
在试验前一小时以0.88mL/kg体积肌内(IM)注射氯胺酮43.75mg/kg、甲苯噻嗪3.5mg/kg和乙酰丙嗪1.05mg/kg的混合物来麻醉豚鼠。将动物的腹部朝上放在加热(37℃)的毯子上，它们的头在向下的斜坡上有20度的倾斜。将4-层2×2英寸纱布垫(Nu-沙布通用棉球，Johnson and Johnson，Arlington，TX)塞入豚鼠嘴中。五分钟后，给药毒蕈碱激动剂毛果芸香碱(3.0mg/kg，s.c.)并立即丢掉纱布垫并替换新的预先称重的纱布垫。收集唾液10分钟，在该点称重纱布垫并用记录的重量差来确定累积的唾液的量(mg)。计算对接受介质和每个剂量受试化合物的动物收集的唾液的平均量。介质组平均值被认为100％是流涎。结果是利用结果平均值计算的(n＝3或更多)。
利用双因素ANOVA对每个时间点每个剂量计算置信区间(95％)。该模型是在Rechter，″Estimation of anticholinergic drug effects inmice by antagonism against pilocarpine-induced salivation″AtaPharmacol Toxicol，1996，24243-254中描述的模型的改进版。
计算在每个治疗前时间，在介质处理的动物中唾液的平均重量，并用于在每个剂量在相应的治疗前时间计算流涎的抑制百分率。利用GraphPad Prism，Windows 3.00版(GraphPad Software，San Diego，California)将抑制量响应数据拟合成四参数逻辑方程式来估计抗催涎剂ID50(抑制50％的毛果芸香碱诱发的流涎所需的剂量)。采用的方程式如下Y＝Min+(Max-Min)/(1+10(log ID50-x*希尔斜率)) 其中X是剂量的对数，Y是响应(流涎的抑制百分率)。Y在Min开始且用反曲形状逐渐靠近Max。
抗-催涎剂ID50与支气管保护ID50的比值被用来计算受试化合物的表观肺选择性指数。通常，具有大于约5的表观肺选择性指数的化合物是优选的。在这一试验中，实施例3的化合物具有大于5的表观肺选择性指数。
虽然本发明用具体方面或它的实施方案作了描述，但是本领域普通技术人员应该理解在不偏离本发明真是精神和范围的情况下可以做各种改变或可以做等同替换。此外，在申请的专利状态和规则允许的范围，本文引用的专利和专利申请都被完全引入至相同的范围作为参考，似乎每篇文章都是被本文单独引入作为参考。
权利要求
1.一种化合物，它选自
或它们的盐。
2.权利要求1的化合物，其中该化合物是
或其盐。
3.权利要求1的化合物，其中该化合物是
或其盐。
4.权利要求1的化合物，其中该化合物是
或其盐。
5.权利要求1的化合物，其中该化合物是
或其盐。
6.权利要求1的化合物，其中该化合物是
或其盐。
全文摘要
本发明提供式I的联苯衍生物其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、W、a、b和c是如说明书中所定义的，或它们的药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。本发明的联苯衍生物既具有β2肾上腺素能受体激动剂活性又具有毒蕈碱受体拮抗剂活性，因此，这种联苯衍生物适用于治疗肺病，例如慢性阻塞性肺病和哮喘。
文档编号C07D211/48GK101239971SQ200810074160
公开日2008年8月13日 申请日期2004年2月13日 优先权日2003年2月14日
发明者M·玛曼, S·邓纳姆, A·休斯, 李泰源, C·休斯菲尔德, E·斯坦格兰德, 燕 陈 申请人:施万制药