专利名称：Bcr-复合体-特异性抗体和其使用方法
技术领域：
本发明涉及特异性结合BCR复合体的嵌合抗体和人源化抗体，并且尤其是BCR复 合体的嵌合抗体和人源化抗体。本发明还涉及抗体和包含它们的组合物用于下列疾病的诊 断、预后和治疗的方法例如，癌症、自身免疫疾病、炎性疾患和传染病。相关技术说明B细胞受体(BCR) &BCR复合体B细胞是负责产生抗体的免疫系统细胞。B细胞对抗原的反应是正常免疫系统的 基本组成。B细胞拥有特化的细胞表面受体(B细胞受体；“BCR”)。如果B细胞遇到能够 结合该细胞的BCR的抗原，则B细胞将被刺激而增殖并产生对所结合的抗原特异性的抗体。 为了产生对抗原的有效反应，还需要BCR相关蛋白和T辅助细胞。抗原/BCR复合体是内化 的，并且抗原被蛋白水解加工。一小部分的抗原保持与B细胞表面上的主要组织相容性复 合体-II( “MHCII”)分子复合，这时复合体可以被T细胞识别。被这种抗原呈递激活的T 细胞分泌诱导B细胞成熟的多种淋巴因子。通过BCR进行的信号传导在产生抗体、自身免疫性和免疫耐受的建立中起重要的 作用(Gauld等人(2002) Science 296(5573) 1641-1642)。仍在骨髓中的结合自身抗原的 未成熟的B细胞被凋亡清除。相反，结合在成熟B细胞上的抗原导致激活、增殖、无反应性 和凋亡。观察到的具体功能反应取决于B细胞是否接收到通过其它表面受体的共刺激信号 和激活的特定信号转导途径。BCR由膜免疫球蛋白与非共价缔合的⑶79的α和β亚基(分别为“⑶79a”和 “⑶79b”)一起形成BCR复合体而构成。⑶79a和⑶79b是信号转导亚基，它们含有信号转 导所需的保守的基于免疫受体酪氨酸的激活基序(“ITAM”)(Dylke等人(2007) Immunol. Lett. 112(1) 47-57 ；Cambier (1995) Immunol. Today 16:110)。多价抗原引起的 BCR 复合 体聚集启动⑶79a和⑶79b ITAM的转磷酸作用以及受体相关激酶的激活(DeFranco (1997) Curr. Opin. Immunol. 9 :296_308 ；Kurosaki (1997) Curr. Opin. Immunol. 9 :309_318 ；Kim 等 人(1993) Immun. Rev. 132 125-146)。磷酸化的ITAM募集其他的效应子，例如PI3K、PLC_ γ 和Ras/MAPK途径的成员。这些信号传导事件负责B细胞增殖和激活标记物(例如MHCII 和CD86)的表达增加，这些是初免B细胞以便它们随后与T-辅助(“Th”)细胞相互作用所 需的。
⑶79表达限制在B细胞中并且在非霍奇金淋巴瘤细胞(NHL)中表达(Olejniczak 等人(2006) Immunol. Invest. 35 93-114 ；D' Arena φ 人(2000) Am. J. Hematol. 64 275-281 ；Cabezudo 等人(1999) Haematologica84 :413_18)。CD79a 和 CD79b 以及可溶性免 疫球蛋白(“slg”)全部都是⑶79的表面表达所需要的。NHL上的⑶79b的平均表面表达与 在正常B细胞上所观察到的类似，但是具有更大的范围(Matsuuchi等人(2001)Curr. Opin. Immunol. 13(3) :270_277)。慢性淋巴细胞性白血病细胞中的⑶79b表达与免疫球蛋白重 链基因中的突变相关，但是似乎不充当临床严重程度的独立预测(Cajiao等人(2007)Am J. Hematol. 82(8) :712_720)。CD79a和CD79b均参与非抗原依赖性(强直的(tonic))和抗 原依赖性的 BCR信号传导(Fuentes-Pananci 等人(2006) J. Immunol. 177(11) :7913_7922)。已显示结合BCR复合体的抗体(“抗-BCR复合体抗体”)通过引起BCR解离或通过 阻抑(下调)BCR功能而破坏BCR信号传导(参见，例如美国专利第6，503，509号；Poison等 人(2007) Blood 110(2) :616_623 ；Zhang 等人(1995) Ther. Immunol. 2(4) 191-202)。阻抑 一般是更可取的，因为它避免了可能不期望的B细胞损耗和所引起的副作用。这种抗-BCR 复合体抗体在自身免疫疾病、癌症、炎性疾病和移植的治疗中具有治疗用途。然而，由于人 免疫系统攻击抗-BCR复合体鼠抗体，因此其使用引发减少的人抗-小鼠抗体(“HAMA”)反 应的改进的抗体是期望的。同样，表现出改善的结合亲和力或改变的效应子功能的抗-BCR 复合体抗体是期望的。Fc 受体抗体-抗原复合体与免疫系统的细胞的相互作用导致了广泛的一系列的反应，其 范围从效应子功能如抗体依赖性细胞毒性、肥大细胞脱颗粒和吞噬作用到免疫调节信号， 如调节淋巴细胞增殖和抗体分泌。所有这些相互作用均是通过抗体或免疫复合体的Fc结 构域与Fc受体的结合启动的，Fc受体是造血细胞上的特化的细胞表面受体。由抗体和免 疫复合体所触发的细胞反应的多样性是由Fc受体的结构不均一性产生的。Fc受体共同拥 有结构上相关的配体结合结构域，该结构域大概介导细胞内信号传导。 免疫球蛋白基因超家族的蛋白成员Fc受体是可以结合免疫球蛋白分子的Fc部 分的表面糖蛋白。该家族的每个成员通过Fc受体的α链上的识别结构域识别一种或多 种同种型的免疫球蛋白。Fc受体是由他们对免疫球蛋白亚型的特异性定义的。IgG的Fc 受体称为"Fe y R”，IgE的Fc受体称为"F ε R”并且IgA的Fc受体称为"Fe α R”。不同的 佐细胞拥有不同同种型抗体的Fc受体，并且抗体的同种型决定了哪些佐细胞将参与给定 的反应(Billadeau 等人(2002) J. Clin. Investigat. 2 (109) :161_81 ；Gerber 等人(2001) Microbes Infection 3 :131_139 ；Ravetch 等人(2001)Annu. Rev. Immunol. 19 :275_90 ； Ravetch 等人(2000) Science 290 :84_89 ；Ravetch (1994) Cell78(4) 553-560 ；Ravetch 等 人(1991) Annu. Rev. Immunol. 9 :457_492 ；还参见，Immunobiology :The Immune System in Health and Disease(免疫生物学健康与疾病中的免疫系统)(第4版，1999年)，Elsevier Science Ltd/GarlandPublishing, New York)。各种受体的总括呈现在表 1 中。
权利要求
1.一种多肽，所述多肽结合人BCR复合体，其中所述多肽包含免疫球蛋白轻链可变区 (Vl)的氨基酸序列，所述免疫球蛋白轻链可变区为包含下列的BCC \的人源化变体(A)在Kabat残基37处的修饰；(B)在Kabat残基45处的修饰；或(C)(A)和⑶两者。
2.如权利要求1所述的多肽，其中所述BCCVl的人源化变体具有(A)在Kabat残基37处的亮氨酸取代；(B)在Kabat残基45处的赖氨酸或天冬酰胺取代；或(C)(A)和⑶两者。
3.如权利要求1所述的多肽，其中所述\具有在Kabat残基37处的亮氨酸和在Kabat 残基45处的赖氨酸。
4.如权利要求1所述的多肽，其中所述\具有在Kabat残基37处的亮氨酸和在Kabat 残基45处的天冬酰胺。
5.如权利要求1所述的多肽，其中所述多肽包含选自由下列组成的组的氨基酸序列 SEQ ID NO 10,SEQ ID NO 12,SEQ ID NO 14、SEQ IDNO 16、SEQ ID N0:18 禾口 SEQ ID NO: 20。
6.一种多肽，所述多肽结合人BCR复合体，其中所述多肽包含免疫球蛋白重链可变区 (Vh)的氨基酸序列，所述免疫球蛋白重链可变区是BCC Vh的人源化变体，所述变体包含在 Kabat残基48、62、66、67、68、69、70、71和73的一处或多处的修饰。
7.如权利要求6所述的多肽，其中所述BCCVh的人源化变体包含选自由下列组成的组 的一种或多种修饰(A)在Kabat残基48处的异亮氨酸取代；(B)在Kabat残基62处的赖氨酸取代；(C)在Kabat残基66处的赖氨酸取代；(D)在Kabat残基67处的丙氨酸取代；(E)在Kabat残基69处的亮氨酸取代；(F)在Kabat残基71处的缬氨酸取代；和(G)在Kabat残基73处的赖氨酸取代。
8.如权利要求7所述的多肽，其中所述多肽包含选自由下列组成的组的氨基酸序列 SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :26、SEQ IDNO :28、SEQ ID NO :30、SEQ ID NO 32、SEQ ID N0:34 禾口 SEQ ID NO :36。
9.如权利要求1-8任一项所述的多肽，其中所述多肽是单链抗体或双体。
10.一种多肽，所述多肽包含至少两个抗体可变结构域(I)其中所述抗体可变结构域的第一个是轻链可变结构域(VJ，所述轻链可变结构域 是包含下列的BCC Vl的人源化变体(A)在Kabat残基37处的修饰；(B)在Kabat残基45处的修饰；或(C)(A)和⑶两者；并且(II)其中所述抗体可变结构域的第二个是重链可变结构域(Vh)，所述重链可变结构域是包含在Kabat残基48、62、66、67、68、69、70、71和73的一处或多处的修饰的BCC Vh的人 源化变体。
11.如权利要求10所述的多肽，其中(I)所述第一抗体可变结构域包含(A)在Kabat残基37处的亮氨酸取代；(B)在Kabat残基45处的赖氨酸或天冬酰胺取代；或(C)(A)和⑶两者；并且(II)所述第二抗体可变结构域包含选自由下列组成的组的一种或多种修饰(A)在Kabat残基48处的异亮氨酸取代；(B)在Kabat残基62处的赖氨酸取代；(C)在Kabat残基66处的赖氨酸取代；(D)在Kabat残基67处的丙氨酸取代；(E)在Kabat残基69处的亮氨酸取代；(F)在Kabat残基71处的缬氨酸取代；和(G)在Kabat残基73处的赖氨酸取代。
12.如权利要求10所述的多肽，其中(I)所述第一抗体可变结构域包含选自由下列组成的组的氨基酸序列SEQID NO 10, SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 16、SEQ IDNO : 18 和 SEQ ID NO 20 ；(II)所述第二抗体可变结构域包含选自由下列组成的组的氨基酸序列SEQID NO 22、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :30、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :34 禾口 SEQ ID NO :36。
13.如权利要求12所述的多肽，其中所述第一抗体可变结构域包含SEQID NO :16的 氨基酸序列，并且所述第二抗体可变结构域包含SEQ IDNO 34的氨基酸序列。
14.如权利要求10-13任一项所述的多肽，其中所述多肽是抗体。
15.如权利要求14所述的抗体，其中所述抗体包含变体Fc结构域，所述变体Fc结构域 与野生型Fc结构域相比在Fc结构域中具有至少一种修饰。
16.如权利要求15所述的抗体，其中所述修饰包括(A)选自由下列组成的组的至少一个取代F243L、D270E、R292P、S298N、Y300L、V305I、 A330V 和 P396L ；(B)选自由下列组成的组的至少两个取代F243L和P396L；F243L和R292P ；以及R292P 和 V305I ；(C)选自由下列组成的组的至少三个取代F243L、R292P和Y300L；F243L、R292P和 V305I ；F243L、R292P 和 P396L ；以及 R292P、V305I 知 P396L ；(D)选自由下列组成的组的至少四个取代F243L、R292P、Y300L和P396L；以及F243L、 R292P、V305I 和 P396L ；或(E)至少F243L、R292P、Y300L、V305I 和 P396 取代。
17.如权利要求16所述的抗体，其中所述变体Fc结构域与野生型Fc结构域相比表现 出改变的效应子功能，其中所述改变的效应子功能选自由下列组成的组(A)增强的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)功能；(B)增强的补体依赖性细胞毒性(CDC)功能；(C)与野生型Fc结构域相比增加的与激活性Fcγ R的结合；(D)与野生型Fc结构域相比降低的与FcYRIIB的结合；或者(E)与野生型Fc结构域相比增加的与Fcy RIIB的结合。
18.如权利要求14-17任一项所述的抗体，其中所述抗体是F(ab')2片段、单克隆抗 体、F(ab)片段、单链抗体或双体。
19.如权利要求14-18任一项所述的抗体，其中所述抗体与异源多肽可操作地连接。
20.一种编码权利要求1-19任一项所述的多肽的多核苷酸。
21.如权利要求1-19任一项所述的多肽在制备用于治疗癌症或自身免疫疾病或免疫 介导的炎性疾病的药物中的用途。
22.如权利要求21所述的用途，其中所述药物用于治疗造血性癌症。
23.如权利要求22所述的用途，其中所述治疗包括与所述抗体同时或顺序施用第二治 疗剂的步骤。
24.如权利要求21所述的用途，其中所述药物用于治疗自身免疫疾病或免疫介导的炎 性疾病。
25.如权利要求24所述的用途，其中所述自身免疫疾病或免疫介导的炎性疾病选自由 下列组成的组克罗恩病、多发性硬化、银屑病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、1型糖 尿病、血管炎；哮喘、湿疹和特发性皮炎、纤维化、移植排斥、移植物抗宿主病和炎性肠病。
全文摘要
本发明涉及特异性结合BCR复合体的嵌合抗体和人源化抗体，并且尤其是BCR复合体的嵌合抗体和人源化抗体。本发明还涉及抗体和包含它们的组合物用于下列疾病的诊断、预后和治疗的方法例如，癌症、自身免疫疾病、炎性疾患和传染病。
文档编号C07K16/00GK102046655SQ200980119622
公开日2011年5月4日 申请日期2009年3月25日 优先权日2008年4月2日
发明者莱斯利·S·约翰逊, 菱·黄 申请人:宏观基因有限公司