针对fcrn的抗体及其用途的制作方法

专利名称：针对fcrn的抗体及其用途的制作方法
针对FCRN的抗体及其用途相关申请本申请根据35U. S.C. § 119(e)要求2008年4月25日提交的第61/048，152号美 国临时申请，和2008年4月观日提交的第61/048，500号美国临时申请的权益，其全部内 容通过引用整体并入本文。
背景技术：
血清中最丰富的抗体同种型为IgG并且其在介导抗病原体的保护作用和在介 导促进免疫系统组分募集到组织、粘膜和皮肤表面的过敏和炎症反应中起到关键作用 (Junghans, Immunologic Research 16(1) :29(1997)) 此外，其也为多种自身免疫性疾 病的关键组分。在正常情况下，血清中IgG的半衰期在小鼠中在5-7天的范围内并且在人 中在22-23天的范围内，其相对其他血浆蛋白的血清半衰期为较长时间的周期。这个较长 的周期的发生一部分是由于新生儿的Fcfoi受体(Fcfoi)将胞饮的IgG从降解溶酶体中解 救出来并将其回收到细胞外区室(Junghans和Anderson，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93 5512(1996)，Roopenian 等 J. Immunology 170 :3528 (2003))。FcRn与IgG的Fc部分结合。IgG Fc区和Fcfoi之间的相互作用为pH依赖型。当 通过液相内吞作用进入细胞的时候，IgG被隔绝到内体(endosome)内并以高亲和性在酸 性pH(6 6. 5)下与Fcfoi结合；当该IgG-Fcfoi复合物循环到质膜时，IgG在微碱性pH( 7. 4)下迅速从血流中的Fcfoi上解离下来。通过该受体介导的回收机制，Fcfoi有效地将IgG 从在溶酶体中的降解中解救出来，从而延长循环IgG的半衰期。Fcfoi为通常位于内皮细胞和表皮细胞的内体的非共价异源二聚体。其为一种具有 三个重链α (α 1、α 2和α幻以及一个单独的可溶轻链β 2_微球蛋白(β 2Μ)域的单通跨 膜的膜结合受体。结构上，其属于具有β 2Μ作为共同轻链的主要组织相容性复合物1类分 子家族。Fcfoia链为由包含α 、α 2和α 3重链域的胞外域，跨膜区，和相对短的胞质尾 区组成的 46kD 蛋白(Burmeister 等 Nature 372 :366(1994))。Fcfoi最先在新生大鼠肠中发现，其中其作用于介导从母鼠的乳汁中吸收IgG抗体 并协助其转运到循环系统中(Leach等J Immunol 157:3317(1996))。Fcfoi也已从人胎盘 中被分离出来，其中其也介导将母体IgG吸收和转运到胎儿的循环中。在成年人中，FcRn 在许多组织中表达，包括肺、肠、肾，以及鼻腔、阴道和胆道系统(biliary tress)表面的上 皮组织中(第 6，030，613 和 6，086，875 号美国专利；Israel 等，Immunology 92 :69 (1997)； Kobayashi 等 AmJ Physiol(2002) ；Renal Physiol 282 :F358 (2002))。为了研究Fcfoi对IgG动态平衡的作用，工程化小鼠使得至少一部分编码β 2Μ和 FcRn重链的基因被“敲除”以致这些蛋白无法表达(W0 02/43658 Junghans和Anderson， Proc Natl Acad Sci US 93:5512(1996))。在这些小鼠中，IgG的血清半衰期和浓度被显 著降低，说明IgG的动态平衡的Fcfoi依赖型机制。也有人建议可在这些Fcfoi敲除小鼠中生成抗人Fcfoi抗体并且这些抗体可阻止 IgG与Fcfoi的结合。然而，还未生成或检测所述抗体(W0 02/43658)。
对IgG与Fcfoi的结合抑制通过阻止IgG回收而负向改变IgG的血清半衰期。该 原理在自身免疫性皮肤水泡病(cutaneous bullous disease)小鼠模型中被表明具有治疗 有效性(Li 等 J Clin Invest 115 =3440-3450 (2005)) 据此，阻止或拮抗 IgG 与 FcRn 的 结合的剂可被用于治疗或预防以存在不恰当调节的IgG抗体为特征的自身免疫和炎症疾 病或病症的方法。

发明内容
本发明尤其涉及结合Fcfoi的抗体，以及识别和使用所述抗体的方法。在一方面本发明提供了一种分离的抗体，该分离的抗体包含重链(HC)免疫球蛋 白可变域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变域序列，其中该重链免疫球蛋白可变域序列和轻链免疫球蛋白可变域序列形成与人Fcfoi 结合的抗原结合位点；并且其中该抗体包括一个或多个以下特征(a)人⑶R或人框架区；(b)该LC免疫球蛋白可变域序列包含与M0171-A03、M0171-A01、M0159-A07、 M0161-B04.M0090-F11或DX2500的LC可变域CDR至少85%相同的一个或多个CDR ；(c)该HC免疫球蛋白可变域序列包含与M0171-A03、M0171-A01、M0159-A07、 M0161-B04.M0090-F11或DX2500的HC可变域CDR至少85%相同的一个或多个CDR ；(d)该 LC 免疫球蛋白可变域序列与 M0171-A03、M0171-A01、M0159-A07、 M0161-B04、M0090-F11 或 DX2500 的 LC 可变域至少 85%相同；(e)该 HC 免疫球蛋白可变域序列与 M0171-A03、M0171-A01、M0159-A07、 M0161-B04.M0090-F11或DX2500的HC可变域至少85%相同；并且(f)该抗体结合与被 M0171-A03、M0171-A01、M0159-A07、M0161-B04、M0090-F11 或 DX2500结合的表位重叠的表位。在一方面本发明提供了一种分离的抗体，该分离的抗体与选自M0171-A03、 M0171-A01、M0159-A07、M0161-B04、M0090-F11 和 DX2500 组成的组的抗体至少 85%相同。在一方面本发明提供了一种分离的抗体，该分离的抗体选自M0171-A03、 M0171-A01、M0159-A07、M0161-B04、M0090-F11 和 DX2504 组成的组。在一方面本发明提供了一种包含M0161-B04的⑶R的分离的抗体。在一方面本发 明提供了一种与M0161-B04至少85%相同的分离的抗体。M0161-B04的CDR如表17A所示。在一方面本发明提供了一种包含M0171-A03的⑶R的分离的抗体。在一方面本发 明提供了一种与MO171-A03至少85 %相同的分离的抗体。MO171-A03的CDR如表17A所示。在一方面本发明提供了一种包含M0171-A01的⑶R的分离的抗体。在一方面本发 明提供了一种与MO171-AO1至少85 %相同的分离的抗体。MO171_A01的CDR如表17A所示。在一方面本发明提供了一种包含M0159-A07的⑶R的分离的抗体。在一方面本发 明提供了一种与M0159-A07至少85%相同的分离的抗体。M0159-A07的CDR如表17A所示。在一方面本发明提供了一种包含M0090-F11的⑶R的分离的抗体。在一方面本发 明提供了 一种与M0090-F11至少85 %相同的分离的抗体。M0090-F11的CDR如表17A所示。在一方面本发明提供了一种包含DX-2500的⑶R的分离的抗体。在一方面本发明 提供了一种与DX-2500至少85%相同的分离的抗体。DX-2500的⑶R如表17A所示。
在本文中提供的抗体的一些实施方案中，HC可变域序列包含M0161-B04的可变域 序列，并且LC可变域序列包含M0161-B04的可变域序列。在本文中提供的抗体的一些实施方案中，HC可变域序列包含M0171-A03的可变域 序列，并且LC可变域序列包含M0171-A03的可变域序列。在本文中提供的抗体的一些实施方案中，HC可变域序列包含M0171-A01的可变域 序列，并且LC可变域序列包含M0171-A01的可变域序列。在本文中提供的抗体的一些实施方案中，HC可变域序列包含M0159-A07的可变域 序列，并且LC可变域序列包含M0159-A07的可变域序列。在本文中提供的抗体的一些实施方案中，HC可变域序列包含M0090-F11的可变域 序列，并且LC可变域序列包含M0090-F11的可变域序列。在本文中提供的抗体的一些实施方案中，HC可变域序列包含DX2500的可变域序 列，并且LC可变域序列包含DX2500的可变域序列。在本文中提供的抗体的一些实施方案中，该抗体与被M0171-A03、M0171-A01、 M0159-A07, M0161-B04, M0090-F11 或 DX2500 结合的 FcRn 表位结合。在本文中提供的抗体的一些实施方案中，该抗体与M0171-A03、M0171A01、 M0159-A07, M0161-B04, M0090-F11 或 DX2500 竞争与 FcRn 的结合。本文中所用M0171-A03 也称为 M171-A03 和 M00171-A03。本文中所用 M0171-A01 也称为 M171-A01 和 M00171-A01。本文中所用 M0159-A07 也称为 M159-A07 和 M00159-A07。 本文中所用 M0161-B04 也称为 M161-B04、M00161-B04 和 DX-2504。本文中所用 M0090-F11 也称为 M090-F11 和 M90-F11。在一方面本发明提供了一种与人Fcfoi结合的分离的抗体或其片段，其中该抗体 针对人Fcfoi重链或其片段生成，其中该抗体功用为结合于人Fcfoi的IgG的非竞争性抑制 剂，并且其中该抗体不与β 2-微球蛋白结合。在一方面本发明提供了一种与人Fcfoi结合的分离的抗体或其片段，其中该抗体 针对人Fcfoi重链或其片段生成，其中当不与Fcfoi复合时，该抗体不与β 2-微球蛋白结合， 并且其中该抗体不产生自Fcfoi-/-敲除小鼠。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体选自由:3B3. 11,31. 1、4Β4. 12和 17D3组成的组。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体与人Fcfoi在大约ρΗ范围5-7. 4以 小于IOOnM的解离常数(Kd)结合。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗原结合位点与人Fcfoi特异性结合。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体与稳定表达Fcfoi的细胞系结合。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体调节(例如，抑制)Fcfoi与抗体/ 免疫球蛋白恒定区的结合。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体与Fcfoi的α亚基结合。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体与Fcfoi的α链的α 1、α 2、或者 α 3域结合。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体不与Fcfoi的β亚基结合，即，该蛋 白仅与α亚基结合。
在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体与Fcfoi的β亚基结合，其中该β 亚基与α亚基相关联。在本文中提供的抗体的一些实施方案中α和β亚基正确地组装为Fcfoi。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体与包括α亚基和β亚基并正确组 装的Fcfoi结合。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体在大约ρΗ 6下以大约800ηΜ、小于 600ηΜ、小于300ηΜ、小于ΙΟΟηΜ、小于50nM、小于25nM、小于ΙΟηΜ、或者小于5nM的IC5tl抑制 IgG-Fc的结合。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体为可溶性Fab。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体通过其抗原结合域以及其Fc区与 FcRn结合。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体与Fcfoi的结合在2-10的范围内大 致上独立于ρΗ。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体与Fcfoi的结合在6-8的范围内大 致上独立于ρΗ。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体在ρΗ 7. 5具有小于0. 01、0.001、 0. 0001、0. 00001s-1 的 Iiftffo在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体与Fcfoi的结合大致上依赖于ρΗ。在本文中提供的抗体的一些实施方案中相对于大鼠Fcfoi，该抗体以ρΗ-依赖性或 PH-独立性的方式优先与人Fcfoi结合。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体在内体中或在内体条件下与Fcfoi
纟口口。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体在pH7. 5不释放Fcfoi。在本文中提供的抗体的一些实施方案中当施用于受治疗者时，该抗体引起与自身 免疫性病症相关联的症状的改善。在本文中提供的抗体的一些实施方案中HC和LC可变域序列为同一多肽链的组 分。在本文中提供的抗体的一些实施方案中HC和LC可变域序列为不同多肽链的组 分。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体为全长抗体。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体为人抗体或人源化抗体或者在人 中具有非免疫原性。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体包含人抗体框架区。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体包含Fc域。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体为鼠抗体。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体为单克隆抗体。在本文中提供的抗体的一些实施方案中该抗体为嵌合的或人源化的。在本文中提供的抗体的一些实施方案该抗体选自由i^b、F(ab) ‘ 2,Fv和kFv组 成的组。
在本文中提供的抗体的一些实施方案该抗体与Fcfoi的结合在pH 6. 0到8. 0的范 围内独立于pH。在一方面本发明提供了一种包含本文提供的任何一种抗体和药学上可接受的载 体的药物组合物。在一方面本发明提供了一种分离的核酸，该分离的核酸包含编码多肽的序列，该 多肽包括与M0171-A03、M0171-A01、M0159-A07或M0161-B04的可变域序列至少80%相同 的序列。在一方面本发明提供了一种分离的核酸，该分离的核酸包含编码多肽的序列，该 多肽包括本文中提供的任何一种抗体的第一和/或第二免疫球蛋白可变域。在一方面本发明提供了包含本文提供的核酸序列的载体或宿主细胞。在一方面本发明提供了在样品中检测Fcfoi的方法，该方法包括使用本文提供的 任何一种抗体与样品相接触并且在抗体和Fcfoi之间存在相互作用的情况下，检测该相互 作用。在一些实施方案中该抗体还包含可检测标记。在一方面本发明提供了一种在受治疗者中检测Fcfoi的方法，该方法包括向受治 疗者施用还包含可检测标记的本文提供的任何一种抗体；并且在受治疗者中检测该标记。 在一些实施方案中检测包括对受治疗者成像。在一方面本发明提供了一种调节Fcfoi活性的方法，该方法包括使用本文提供的 任何一种抗体与Fcfoi相接触，由此调节Fcfoi的活性。在一些实施方案中该Fcfoi位于人受 治疗者中。在一些实施方案中该抗体阻止Fcfoi与内源性Ig的结合。在一些实施方案中该 抗体阻止Fcfoi与治疗性抗体结合。在一些实施方案中该Fcfoi位于上皮细胞的内体。在一 些实施方案中该Fcfoi位于内皮细胞的内体。在一些实施方案中该Fcfoi位于细胞表面。在一方面本发明提供了一种治疗自身免疫性病症和/或调节自身免疫性病症症 状的方法，该方法包括施用足以调节症状的量的本文所提供的任何一种抗体。在一些实 施方案中该自身免疫性病症是选自以下组成的组的病症类风湿关节炎(RA)、系统性红斑 狼疮(SLE)、重症肌无力(MG)、格雷夫斯病、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、格林-巴利 综合征、自身免疫性心肌炎、膜性肾小球肾炎、糖尿病、I型或II型糖尿病、多发性硬化症、 雷诺氏综合征、自身免疫性甲状腺炎、胃炎、乳糜泻、白癜风、肝炎、原发性胆汁性肝硬化、 炎症性肠病、脊椎关节病、实验性自身免疫性脑脊髓炎、免疫性嗜中性粒细胞减少症、青少 年发病型糖尿病、和与细胞因子、结核病中常见的T淋巴细胞介导的迟发型超敏反应相关 的免疫反应、结节病和多肌炎、多动脉炎、皮肤血管炎、天疱疮、类天疱疮、肺出血肾炎综合 征(Goodpasture' s syndrome)、川崎氏病、系统性硬化症、抗磷脂综合征和干燥综合征 (Sjogren' s syndrome)。在一些实施方案该抗体缩短内源性IgG的半衰期。在一方面本发明提供了一种调节循环IgG的半衰期/水平的方法，该方法包括 确认需要调节循环IgG的半衰期/水平的受治疗者；并且向受治疗者施用有效调节受治疗 者体内的循环IgG的半衰期/水平的量的本文所提供的任何一种抗体。在一些实施方案中 该方法降低循环IgG的半衰期/水平。在一些实施方案中该受治疗者为人。在一些实施方 案中施用该抗体并联合非本文提供的任何一种抗体的抗自身免疫性病症的剂或疗法以降 低循环IgG的半衰期/水平。在一些实施方案中非本文所提供的任何一种抗体的该抗自身 免疫性病症的剂或疗法包括静脉内Ig疗法；非类固醇抗炎药物(NSAID)；皮质类固醇；环孢菌素、雷帕霉素、子囊霉素，或其免疫抑制类似物，例如，环孢菌素A、环孢菌素G、FK-506, 雷帕霉素、40-0-(2-羟基)乙基-雷帕霉素；环磷酰胺；硫唑嘌呤；甲氨蝶呤；布喹那；FTY 720 ；来氟米特；咪唑立宾，霉酚酸，霉酚酸酯(mycophenolate mofetil)，15-脱氧精胍菌素 (deoxyspergualine)；免疫抑制性单克隆抗体，例如，白细胞受体的单克隆抗体，例如，MHC、 CD2、CD3、CD4、CD7、⑶25、⑶28、B7、CD45、或CD58或其配体；其他免疫调节化合物，例如 CTLA4Ig ；或其他粘附分子抑制剂，如mAb或低分子量抑制剂，包括选择蛋白拮抗剂和VLA-4 拮抗剂。在一方面本发明提供了一种治疗或预防自身免疫性病症的方法，该方法包括向 患有该病症或有发展该病症的风险的受治疗者施用本文所提供的任何一种抗体。在一些实 施方案中该自身免疫性病症以不需要的循环IgG为特征。在一些实施方案中该抗体缩短内 源性IgG的半衰期。在一些实施方案中该自身免疫性病症为选自以下的病症类风湿关节 炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、重症肌无力(MG)、格雷夫斯病、特发性血小板减少性紫癜 (ITP)、格林-巴利综合征、自身免疫性心肌炎、膜性肾小球肾炎、糖尿病、I型或II型糖尿 病、多发性硬化症、雷诺氏综合征、自身免疫性甲状腺炎、胃炎、乳糜泻、白癜风、肝炎、原发 性胆汁性肝硬化、炎症性肠病、脊椎关节病、实验性自身免疫性脑脊髓炎、免疫性嗜中性粒 细胞减少症、青少年发病型糖尿病、和与细胞因子、结核病中常见的T淋巴细胞介导的迟发 型超敏反应相关的免疫反应、结节病和多肌炎、多动脉炎、皮肤血管炎、天疱疮、类天疱疮、 肺出血肾炎综合征、川崎氏病、系统性硬化症、抗磷脂综合征和干燥综合征。在一些实施方 案中该天疱疮为寻常性天疱疮、落叶性天疱疮或副肿瘤性天疱疮。在一方面本发明提供了一种治疗或预防自身免疫性病症的方法，该方法包括向 患有该病症或有发展该病症的风险的受治疗者联合治疗或预防该病症的第二疗法施用本 文所提供的任何一种抗体。在一些实施方案中该第二疗法包括静脉内Ig疗法；非类固醇抗 炎药物(NSAID)；皮质类固醇；环孢菌素、雷帕霉素、子囊霉素、或其免疫抑制类似物，例如， 环孢菌素A、环孢菌素GJK-506、雷帕霉素、40-0-(2-羟基)乙基-雷帕霉素；环磷酰胺；硫 唑嘌呤；甲氨蝶呤；布喹那；FTY 720 ；来氟米特；咪唑立宾，霉酚酸，霉酚酸酯，15-脱氧精 胍菌素；免疫抑制性单克隆抗体，例如，白细胞受体的单克隆抗体，例如，MHC、CD2、CD3、CD4、 ⑶7、⑶25、⑶^、B7、⑶45、或⑶58或其配体；其他免疫调节化合物，例如CTLA4Ig ；或其他 粘附分子抑制剂，如mAb或低分子量抑制剂，包括选择蛋白拮抗剂和VLA-4拮抗剂。在一方面本发明提供了一种在个体内降低不需要的抗体的浓度的方法，该方法包 括向个体施用治疗有效剂量的本文提供的任何一种抗体或抗体片段的步骤。在一些实施方 案中该抗体或其片段在药学上可接受的载体中施用。在一些实施方案中该个体为人。在一 些实施方案中该抗体或其片段与佐剂一起施用。在一些实施方案中该不需要的抗体为那他 珠单抗。在一些实施方案中该不需要的抗体为非自身人类白细胞抗原。在一些实施方案中 所施用的抗体或其片段与器官移植联合施用。在一方面本发明提供了一种在个体内减少IgG与Fcfoi结合的方法，该方法包括以 下步骤提供与人Fcfoi结合、针对抗人Fcfoi重链或其片段而生成、为IgG与人Fcfoi结合的 非竞争性抑制剂并且不与β 2-微球蛋白结合的抗体或其片段；并且以足够降低在个体内 IgG与Fcfoi结合的量向个体施用该抗体或其片段。在一些实施方案中该个体患有自身免 疫性或同种免疫疾病。在一些实施方案中该个体为器官移植接受者。在一些实施方案中已向该个体施用治疗性抗体。在一些实施方案中该自身免疫性病症为免疫性血小板减少症。 在一些实施方案中该自身免疫性病症为免疫性天疱疮。在一些实施方案中该个体为人。在 一些实施方案中以lmg/kg到2g/kg的剂量施用该抗体。在一些实施方案中以lmg/kg到 200mg/kg的剂量施用该抗体。在一方面本发明提供了一种在个体内抑制IgG抗体水平的方法，该方法包括以下 步骤提供与人Fcfoi结合、针对抗人Fcfoi重链或其片段而生成、为IgG与人Fcfoi结合的非 竞争性抑制剂并且不与β 2-微球蛋白结合的抗体或其片段；并且以足够抑制在个体内IgG 抗体水平的量向个体施用该抗体或其片段。在一些实施方案中该IgG抗体为治疗性IgG抗 体。在一些实施方案中该治疗性IgG抗体为那他珠单抗。在一些实施方案中该IgG抗体为 非自身人类白细胞抗原。在一些实施方案中该方法还包括血浆置换步骤。在一方面本发明涉及抑制IgG分子恒定区与Fcfoi结合的抗体。本发明因此涉及 包含特异性结合于Fcfoi分子表位的至少一个可变区的抗体。在一些实施方案中，本发明的 抗体与人Fcfoi结合。在其他实施方案中，该抗体与啮齿类或猴Fcfoi结合。本发明的一些 示例性抗体包括，例如，4Β4. 12.3Β3. 11,31. 1、和17D3。在一方面本公开以包括重链(HC)免疫球蛋白可变域序列和轻链(LC)免疫球蛋白 可变域序列的抗体(例如，分离的抗体)为特征。第一和第二免疫球蛋白可变域序列形成 与Fcfoi (例如，人Fcfoi)结合的抗原结合位点。在一个实施方案中，该抗体具有一个或多个 以下特征(a)其 LC 免疫球蛋白可变域序列与;3Β3· 11,31. 1、532A-M0090_F09、Μ0084-Β03、 M0056-G05、M0084-B11、M0092-D02、M0055-G12、M0057-F02、M0062-C09、M0064-H04、 M0073-E10、或M0090-F11的LC可变域，或其一个或多个CDR至少85%相同；(b)其 HC 免疫球蛋白可变域序列与:3Β3· 11,31. 1、532A-M0090_F09、M0084-B03、 M0056-G05、M0084-B11、M0092-D02、M0055-G12、M0057-F02、M0062-C09、M0064-H04、 M0073-E10、或M0090-F11的HC可变域，或其一个或多个CDR至少85%相同；并且(c)该抗体结合与被 3B3. 11,31. 1、532A-M0090_F09、M0084-B03、M0056-G05、 M0084-B11、M0092-D02、M0055-G12、M0057-F02、M0062-C09、M0064-H04、M0073-E10、或 M0090-F11结合的表位相重叠的表位。在一个实施方案中，该抗体与Fcfoi(例如，人Fcfoi)结合，例如，在pH范围5-8，例 如，具有小于100、50、10、5、1、或0.1碰的解离常数(Kd)。在一个实施方案中，该抗原结合 位点与人Fcto特异性结合。本文中，“特异性结合”或“特异性结合于”指Fcto结合抗体优 先与人Fcfoi结合的能力，具有比其对不同于Fcfoi的非特异性抗原(例如，肌动蛋白，酪蛋 白)结合的亲和性强至少2倍、10倍、50倍、100倍或更强的亲和性(更小的Kd)。在一个 实施方案中，该抗体以小于0. 01、0. 001、0. 0001,0. 00001s"1的k离解与人Fcfoi结合。在一个实施方案中，该抗体与Fcfoi的胞外域结合；例如，Fcfoi的一个α亚基，即， FcRna链的a 1、a 2、或a 3域。在一个实施方案中，该抗体不与Fcfoi的β ( β 2M)亚基 结合，例如，该抗体只与α亚基结合。在一个实施方案中，该抗体确实与Fcfoi的β亚基结 合，但是，只有在当β2Μ与α亚基相关联的时候。例如，除非α亚基和β亚基两者都存 在并正确地组装为Fcfoi，否则该抗体不与α或β亚基结合。在一个实施方案中，该抗体与 包括α亚基和β亚基并正确地组装的Fcfoi结合。
在一个实施方案中，该抗体调节(例如，抑制)Fcfoi与抗体/免疫球蛋白恒定区 的结合。例如，该抗体可具有优于(例如，数值上小于)5ηΜ、500ρΜ、200ρΜ、150ρΜ、ΙΟΟρΜ、或 75pM的Ki，例如，介于50nM和IpM,或200pM和5pM之间的Ki0在一个实施方案中，该抗体与Fcfoi结合并且降低或防止Fcfoi与抗体/免疫球蛋 白恒定区的结合。例如，该抗体可与Fcfoi (例如，人Fcfoi)以强于(即，数值上小于)1x10_8M 的亲和性(Kd)结合。在一个实施方案中，该抗体为以大致上独立于pH或大致上依赖于pH的 方式Fcfoi结合并在pH 6具有大约3.0-82nM范围的Kd的Fab。在一个实施方案中，该抗体 为以大致上独立于pH或大致上依赖于pH的方式与Fcfoi结合并在pH7. 5具有大约9. 7到大 约39. 7nM范围的Kd的Fab。在一个实施方案中，该抗体为以大致上独立于pH或大致上依赖 于PH的方式与Fcfoi结合并在pH6具有大约0. 409-大约29. 5nM、大约2. 44-大约29. 5nM、 大约0. 13-大约1. 03nM、大约6. 43-大约30. 2nM、大约0. 2-大约2. 87nM、大约0. 34-大约 2. 87nM、或大约0. 2-大约30. 2nM范围的Kd的IgG。在一个实施方案中，该抗体为以大致 上独立于PH或大致上依赖于pH的方式与Fcfoi结合并在pH7. 5具有大约0. 675-24. 2nM、 2. 1-24. 2nM、0. 158-lOnM、或大约 2. 04-大约 80nM 范围的 Kd 的 IgG。在一个实施方案中，该抗体抑制Fcfoi与IgG-Fc的结合，并在大约pH 6具有小于 80011]\1、60011]\1、或30011]\1、20011]\1、10011]\1、111]\1、50 ]\1的 IC5tl。在一个实施方案中，该抗体该抗体 为以大致上独立于pH或大致上依赖于pH的方式抑制Fcfoi与IgG-Fc结合并在pH6具有大 约13-7MnM或大约13-80nM范围的IC5tl的Fab。在一个实施方案中，该抗体为以大致上独 立于PH或大致上依赖于pH的方式抑制Fcfoi的结合并在pH6具有大约1. 2-36nM、36_120nM、 120-562nM、l. 5-5. 4nM、5. 4-50nM、51_161nM 范围的 IC5tl 的 IgG。在一个实施方案中，该抗体为，例如，单链抗体、Fab、sFab片段、F(ab' )2、Fd片 段、Fv片段、scFv、或dAb片段。在一些实施方案中，该抗体为单特异性，例如，单克隆抗体或重组抗体。术语“单特 异性抗体”指对特定靶标，例如，表位，表现出单独的结合特异性和亲和性的抗体。该术语包 括“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”，如本文所用，其指具有单分子组成的抗体的制品。在一个实施方案中，该抗体为重组或修饰的抗-Fcfoi抗体，例如，嵌合、人源化、去 免疫化或体外生成抗体。如本文所用，术语“重组”或“修饰的”人抗体意为包括通过重组 方法制备、表达、生成或分离的所有抗体，比如使用重组表达载体转染进入宿主细胞表达的 抗体，从重组组合抗体库中分离的抗体，从人免疫球蛋白基因转基因动物(例如，小鼠)中 分离的抗体或者通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列的任何其他方法 制备、表达、生成或分离的抗体。所述重组抗体包括人源化、CDR嫁接、嵌合、去免疫化、体外 生成抗体，并可任选地包括由人种系免疫球蛋白序列衍生的恒定区。在一个实施方案中，该 抗体不在人体内弓丨起抗球蛋白反应。还公开了与本文所公开的抗Fcfoi抗体的重叠表位结合、或竞争性抑制其与Fcfoi 的结合的抗体(包括全长抗体或其抗原结合片段)，例如，与sFab 532A-M0090-F09、 M0084-B03、M0056-G05、M0084-B11、M0092-D02、M0055-G12、M0057-F02、M0062-C09、 M0064-H04、M0073-E10、或M0090-F11的重叠表位结合，或竞争性抑制其与Fcfoi结合的抗 体。也有可能使用抗Fcfoi抗体的组合，例如，与Fcfoi不同区结合的两个或多个抗体，例如， 与Fcfoi胞外域上的两个不同表位性结合的抗体。可选择地，可使用双特异性抗体。双特异性抗体为具有两个可变重域和两个可变轻域以使得该单分子具有两种特异性结合能力的 分子；该可变域或特异性中的一个或多个可为本文所述抗体的并与Fcfoi结合。在一个实施方案中，抗Fcfoi抗体(例如，全长抗体或其抗原结合片段)包括至 少一个轻链或重链可变域序列(例如，至少一个轻链免疫球蛋白和至少一个重链免疫球 蛋白)。在一些实施方案中，每个免疫球蛋白包括具有至少一个，两个或三个互补决定区 (CDR)的轻链或重链可变域序列，该互补决定区大致上与同Fcfoi相互作用的抗体的轻链 或重链可变域序列的⑶R相同该抗体例如，本文中所述的sFab，例如，532A-M0090-F09、 M0084-B03、M0056-G05、M0084-B11、M0092-D02、M0055-G12、M0057-F02、M0062-C09、 M0064-H04、M0073-E10、或 MOO90-F11。在一个实施方案中，该抗体使用其抗原结合域并通过其Fc区与Fcfoi结合。在一 个实施方案中，该抗体仅使用其抗原结合域与Fcfoi结合。例如，该抗体不包括Fc区或包括 不与Fcfoi相互作用的修饰的Fc区。在一个实施方案中，该抗体通过其抗原结合域与Fcfoi 结合比通过其Fc域更加紧密至少1000倍。在一个实施方案中，在2-10、4-9、5-8、6-8、或6-7. 5的范围内，抗体与Fcfoi的结 合大致上是PH独立的。术语“pH独立”指抗体在2-10、4-9、5-8、6-8，或6-7. 5范围的pH 下与Fcfoi结合/和或保持结合的能力。该亲和性可在不同pH值下变化。在一些实施方案 中，Kd在该范围内的任何值下不高于200nM、50nM、10nM、lnMor IOOpM0例如，该抗体在pH 6与Fcfoi结合并在pH 7. 5保持结合。在一个实施方案中，抗体与Fcfoi的结合大致上依赖 于pH。术语“pH独立”指在第一 pH下抗体与Fcfoi结合/和或保持结合的能力以及在第二 PH下与Fcfoi结合或保持结合的能力，其中第二 pH在第一 pH的给定数量的pH单位内(例 如，6、5、4、3、2、1. 5个单位)。例如，该抗体可在pH6与FcRn结合并可在ρΗ7· 5仍与FcRn 结合或保持结合。术语“ΡΗ依赖”指抗体在第一 pH下与Fcfoi结合/和或保持结合的能力 以及在第二 PH下缺乏与Fcfoi结合或保持结合的能力，其中第二 pH在第一个pH的给定数 量的PH单位内(例如，6、5、4、3、2、1.5个单位)。例如，该抗体可在ρΗ6与Fcfoi结合并且 在ΡΗ7. 5不能与Fcfoi结合或保持结合。在一个实施方案中，相对于大鼠或猴Fcfoi该抗体以pH依赖或pH独立的方式优先 与人Fcfoi结合。在一个实施方案中，该抗体以相差不超过2倍、5倍或10倍的亲和性与人 Fcfoi以及合适的实验动物(例如，大鼠或猴)的Fcfoi 二者结合。在一个实施方案中，该抗 体在pH范围6. 0-7. 5以Kd彡5ηΜ与人Fcfoi和合适的实验动物的Fcfoi结合。在一个实施 方案中，该抗体在内体内或在内体条件下与Fcfoi结合。例如，该抗体在酸性条件例如pH 6 下与Fcfoi结合。在一个实施方案中，该抗体在ρΗ6与Fcfoi结合，例如，比在ρΗ7. 5更优至 少1. 5、2、5、8、10、20、或50倍。在一个实施方案中，该抗体在pH 7. 5释放Fcfoi，例如，比在 口116更迅速至少1.5、2、5、8、10、20、或50倍。在一个实施方案中，该抗体在pH 7. 5与Fcfoi 结合，例如，比在PH 6更优至少1.5、2、5、8、10、20、或50倍。在一个实施方案中，该抗体在 PH 6释放Fcfoi，例如，比在ρΗ7. 5更迅速至少1. 5、2、5、8、10、20、或50倍。在一个实施方案 中，该抗体在PH 7. 5不释放Fcfoi。在一个实施方案中，该抗体在pH 6不释放Fcfoi。在一个实施方案中，与Fcfoi的相互作用延长该抗体的半衰期。在一个实施方案 中，该抗体弓I起其他IgG分子的半衰期缩短，例如，至少5、10、20、40、50、60、70、80、或90 %。 例如，90%缩短将使抗体的半衰期由20天改变到2天。
在一个实施方案中，当施用于受治疗者时，该抗体引起与自身免疫性病症相关联 的症状的改善。例如，该抗体可减轻或降低诸如以下的症状的严重性关节肿胀，疼痛，或僵 硬；循环抗体水平比如自身性抗体水平；关节疼痛(关节痛)；发烧；极度疲劳；皮肤疹；贫 血；胸部疼痛或深呼吸疼痛；脸颊和鼻部的蝴蝶形皮疹；光敏性；脱发；抽搐；口或鼻溃疡； 雷诺氏现象；轻度红斑；神经精神表现；血小板减少；和胸腔积液等。在一个实施方案中，HC和LC可变域序列为同一多肽链的组分，也就是说其为单链 抗体的部分。在一个实施方案中，HC和LC可变域序列为不同多肽链的组分。在一个实施方案中，该抗体为全长抗体。例如，该抗体可为人抗体或人源化抗体和 /或可在人中具有非免疫原性。在一个实施方案中，该抗体包含人抗体框架区。在一个实施 方案中，该抗体包含Fc域。在一个实施方案中，HC可变域序列包含;3B3. 11,31. 1、532A-M0090_F09、 M0084-B03、M0056-G05、M0084-B11、M0092-D02、M0055-G12、M0057-F02、M0062-C09、 M0064-H04、M0073-E10、或M0090-F11的可变域序列，并且LC可变域序列包含!3B3. 11、31. 1、 532A-M0090-F09, M0084-B03, M0056-G05、M0084-B1U M0092-D02、M0055-G12、M0057-F02、 M0062-C09、M0064-H04、M0073-E10、或M0090-F11的可变域序列。在一个实施方案中，该 抗体与被 3B3. 11,31. 1、532A-M0090-F09、M0084-B03、M0056-G05、M0084-B11、M0092-D02、 M0055-G12、M0057-F02、M0062-C09、M0064-H04、M0073-E10、或 M0090-F11 结合的 FcRn 表位 结合。在一个实施方案中，该抗体与 532A-M0090-F09、M0084-B03、M0056-G05、M0084-B11、 M0092-D02、M0055-G12、M0057-F02、M0062-C09、M0064-H04、M0073-E10、或 M0090-F11 竞争 与Fcfoi的结合。在一方面，本发明涉及一种制备单克隆抗体的方法，其包括用Fcfoi蛋白或其至 少一个片段或用编码Fcfoi分子或其片段的多核苷酸序列免疫啮齿类动物；从所述啮齿类 动物中获得B细胞；将所述B细胞与骨髓瘤细胞系相融合以获得杂交瘤细胞；在使其分泌 单克隆抗体的条件下培养所述杂交瘤细胞，其中所述抗体包含至少一个可变区，其特异性 结合于Fcfoi分子，其中所述Fcfoi分子包含可以结合至少IgG恒定区的一部分的域，其中所 述抗体与所述Fcfoi分子的结合抑制IgG恒定区的部分与所述Fcfoi分子的结合；并分离该 抗体。在一方面，本公开以一种识别与Fcfoi例如人Fcfoi结合的抗体的方法为特征，并且 包括提供Fcfoi抗原或其片段；提供抗体库，例如，展示库；并且识别该库中存在的与Fcfoi 抗原结合的成员，其中该库的每个成员均在其表面展示异源性抗体组分并且每个成员包括 编码该异源性抗体组分的核酸，该异源性抗体组分为一组多样化的抗体组分的成员。该方 法可包括从已识别的成员中分离核酸分子，并且该核酸分子编码特异性结合于Fcfoi抗原 的多肽。在一个实施方案中，该抗体与人Fcto特异性结合。在一个实施方案中，该库为噬菌体库，例如，噬菌体展示库。在一个实施方案中，使 用竞争配体将被识别的噬菌体洗脱，例如，与FcfoI和/或竞争性抗人Fcfoi抗体结合的IgG Fe。在另一方面，本公开以一种在样品中检测Fcfoi的方法为特征，该方法包括将样 品与Fcfoi结合抗体(例如，本文所述抗体)相接触并且如果存在抗体和Fcfoi的相互作用， 检测该相互作用。在一个实施方案中，该抗体包含可检测标记比如荧光标签(例如，在存在显色或化学发光底物下进行检测的氟硼荧(bodipy)、荧光素-5-异硫氰酸酯、罗丹明、和过 氧化物酶或碱性磷酸酶和过氧化物酶)。在一方面，本公开以一种调节Fcfoi活性的方法为特征，该方法包括将Fcfoi与 FcRn结合抗体(例如，本文所述抗体)相接触，从而调节Fcfoi的活性(例如，与IgG Fc的 结合)。在一个实施方案中，该Fcfoi位于人受治疗者内；该Fcfoi可位于人受治疗者的上皮 或内皮细胞内或在血液内(例如，在血液中可溶或在血液中循环的细胞内)。在一个实施方 案中，该抗体阻止Fcfoi与底物结合，例如，内源性底物比如IgG Fc和/或血清白蛋白。在 一个实施方案中，该Fcfoi位于上皮或内皮细胞内体内。在一方面，本公开以一种治疗、预防和/或调节病症的症状的方法为特征，该病症 例如自身免疫性病症或与非正常Fcfoi活性相关的病症。该方法包括向受治疗者施用Fcfoi 结合抗体(例如，本文所述抗体)，例如，患有该病症或有发展该病症的风险的受治疗者。在 一个实施方案中，以足够调节病症症状的量和/或时间施用该配体。在一个实施方案中，该自身免疫性病症为选自以下组成的组的病症类风湿关节 炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、重症肌无力(MG)、格雷夫斯病、特发性血小板减少性紫癜 (ITP)、格林-巴利综合征、自身免疫性心肌炎、膜性肾小球肾炎、糖尿病、I型或II型糖尿 病、多发性硬化症、雷诺氏综合征、自身免疫性甲状腺炎、胃炎、乳糜泻、白癜风、肝炎、原发 性胆汁性肝硬化、炎症性肠病、免疫性嗜中性粒细胞减少症、脊椎关节病、实验性自身免疫 性脑脊髓炎、青少年发病型糖尿病、和与细胞因子、结核病中常见的T淋巴细胞介导的迟发 型超敏反应相关的免疫反应、结节病和多肌炎、多动脉炎、皮肤血管炎、天疱疮、类天疱疮、 肺出血肾炎综合征、川崎氏病、系统性硬化症、抗磷脂综合征和干燥综合征。在一个实施方案中，本发明的抗体可被用于抑制IgG穿越血脑屏障的转运。在另 一实施方案中，本发明的抗体可被用于治疗脑瘤或阿尔茨海默氏病。在一个实施方案中，该抗体缩短内源性IgG的半衰期。在一个实施方案中，该自身 免疫性病症以不需要的循环IgG为特征，例如，不需要的循环病原性IgG。在一方面，本公开以一种在受治疗者中检测i^cfoi的方法为特征，该方法包括向 受治疗者施用包括可检测标记的Fcfoi结合抗体(例如，本文中所述抗体)；并在该受治疗 者中检测该标记。该方法可包括对受治疗者成像，例如，使用断层摄影术，例如，MRL·在一方面，本公开以一种调节循环IgG的半衰期/水平的方法为特征，该方法包 括确定需要调节循环IgG半衰期/水平的受治疗者，例如，人；并以足够调节循环IgG半衰 期/水平的量向该受治疗者施用Fcfoi结合抗体(例如，本文中所述抗体)。在一个实施方 案中，该方法降低循环IgG的半衰期/水平。在一个实施方案中，施用该抗体并联合另一种 抗自身免疫性病症的剂或疗法以降低循环IgG的半衰期/水平。联合施用Fcfoi抗体和其 他抗自身免疫性病症的剂或疗法可导致调节或降低循环IgG的半衰期/水平所需的其他抗 自身免疫性病症的剂或疗法的水平的降低。在另一方面，本公开以一种分离的核酸为特征，该分离的核酸包括编码第一多肽 的第一序列，包括与 3B3. 11,31. 1、532A-M0090-F09、M0084-B03、M0056-G05、M0084-B11、 M0092-D02、M0055-G12、M0057-F02、M0062-C09、M0064-H04、M0073-E10、或 M0090-F11 的 第一可变域序列的序列至少80、85、90、92、94、95、96、97、98、99、或100 %相同的序列，或 与编码 3B3. 11,31. 1、532A-M0090-F09、M0084-B03、M0056-G05、M0084-B11、M0092-D02、M0055-G12、M0057-F02、M0062-C09、M0064-H04、M0073-E10、或 M0090-F11 的可变域的序 列的核酸杂交(例如，在严格条件下)的序列。在一个实施方案中，该核酸还包括编码 包括(相应可变域的)第二可变域序列的第二多肽的第二序列，例如，与3B3. 11、31. 1、 532A-M0090-F09, M0084-B03、M0056-G05、M0084-B1U M0092-D02、M0055-G12、M0057-F02、 M0062-C09、M0064-H04、M0073-E10、或 M0090-F11 的第二可变域序列的序列至少 80、85、90、 92、94、95、96、97、98、99、或 100% 相同的序列，或与编码 3B3. 11,31. 1、532A-M0090_F09、 M0084-B03、M0056-G05、M0084-B11、M0092-D02、M0055-G12、M0057-F02、M0062-C09、 M0064-H04、M0073-E10、或M0090-F11的可变域的序列的核酸杂交(例如，在严格条件下) 的序列。在一个实施方案中，该核酸还包括调控序列(例如，启动子序列，非翻译的5’区和 非翻译的3’区)和/或载体序列。例如，该核酸构成载体。在另外一个方面，本公开以一种可表达抗体的宿主细胞为特征。该宿主细胞包括 一种或多种核酸，其集合包括(1)编码第一可变域序列的第一序列，包括与3B3. 11,31. 1、 532A-M0090-F09, M0084-B03, M0056-G05、M0084-B1U M0092-D02、M0055-G12、M0057-F02、 M0062-C09、M0064-H04、M0073-E10、或 M0090-F11 的第一可变域序列的序列至少 80、85、90、 92、94、95、96、97、98、99、或 100% 相同的序列，或与编码 3B3. 11,31. 1、532A-M0090_F09、 M0084-B03、M0056-G05、M0084-B11、M0092-D02、M0055-G12、M0057-F02、M0062-C09、 M0064-H04、M0073-E10、或M0090-F11的第一可变域的序列的核酸杂交(例如，在严格条 件下)的序列，以及( 编码包括(相应可变域的)第二可变域序列的第二可变域序列 的第二序列，例如，与 3B3. 11,31. 1、532A-M0090-F09、M0084-B03、M0056-G05、M0084-B11、 M0092-D02、M0055-G12、M0057-F02、M0062-C09、M0064-H04、M0073-E10、或 M0090-F11 的第 二可变域序列的序列至少80、85、90、92、94、95、96、97、98、99、或100%相同的序列，或与编 码 532A-M0090-F09、M0084-B03、M0056-G05、M0084-B11、M0092-D02、M0055-G12、M0057-F02、 M0062-C09、M0064-H04、M0073-E10、或M0090-F11的可变域的序列的核酸杂交(例如，在严 格条件下)的序列。在一方面，本公开以一种治疗或预防自身免疫性病症的方法为特征，该方法包括 施用Fcfoi结合抗体(例如，本文中所述抗体)，例如，联合施用第二疗法，给患有自身免疫性 病症或有发展该病症的风险的受治疗者。例如，该第二疗法可为适合治疗或预防病症的疗 法。在一个实施方案中，该第二疗法可包括静脉内Ig疗法；非类固醇抗炎药物(NSAID)； 皮质类固醇；环孢菌素、雷帕霉素、子囊霉素、或其免疫抑制类似物，例如，环孢菌素A、环孢 菌素G、Π(-506、雷帕霉素、40-0-(2-羟基)乙基-雷帕霉素；环磷酰胺；硫唑嘌呤；甲氨 蝶呤；布喹那；FTY 720 ；来氟米特；咪唑立宾、霉酚酸、霉酚酸酯、15-脱氧精胍菌素；免疫 抑制性单克隆抗体，例如，白细胞受体的单克隆抗体，例如，MHC、⑶2、⑶3、⑶4、⑶7、⑶25、 ⑶^、B7、⑶45、或⑶58或其配体；其他免疫调节化合物，例如CTLA4Ig ；或其他粘附分子抑 制剂，如mAb或低分子量抑制剂，包括选择蛋白拮抗剂。在另一方面，本公开以一种治疗胎儿的方法为特征，该方法包括将小分子或大分 子药物，例如，抗生素或疫苗(例如，病毒疫苗)，轭合于Fcfoi结合抗体；并且在子宫内向怀 有胎儿的孕妇施用该轭合物。在一个实施方案中，该胎儿患有病症或有患病症的风险。示 例性病症包括免疫系统病症(例如，自身性免疫病症)，代谢紊乱，或感染性病症，例如，细 菌或病毒感染，例如，肠道感染(例如，幽门螺杆菌(Helibacter pylori)感染)。
在另一方面，本公开以一种治疗婴儿的方法为特征，该方法包括将小分子或大分 子药物轭合于与Fcfoi结合的抗体，例如，本文中所述抗体；并将该轭合抗体加入母乳内。可 将该母乳施用于婴儿。在一个实施方案中，将该轭合抗体施用于妇女并且该妇女直接，例 如，哺乳，或间接地向婴儿提供母乳。尽管本发明主要以抗体的最优实施方案进行讨论，本领域普通技术人员将易于理 解非抗体的结合蛋白或配体在本公开范围内。


图1描绘了关于与hFcfoi或人β2Μ反应性的，来自使用编码hFcfoi或GPI连接的 hFcRn的DNA ；以及使用编码人β 2Μ的DNA进行免疫的动物的，在免疫56天以后所得小鼠血 清中的抗体的ELISA分析结果。小鼠#180-184使用编码hFcfoi的质粒免疫；小鼠#185-189 使用编码hFcfoi的质粒和编码hi3 2M的质粒免疫；小鼠#190-194使用编码GPI-连接的 hFcRN的质粒免疫；小鼠#195-199使用编码GPI-连接的hFcRN的质粒和编码h β 2M的质 粒免疫。图2描绘了关于与hFcfoi或人β2Μ反应性的，来自使用编码hFcfoi或GPI连接的 hFcRn的DNA ；以及使用编码人β 2Μ的DNA进行免疫的动物的，在免疫94天以后所得小鼠 血清中的抗体的ELISA分析结果。图3描绘了 FACS分析的结果，该FACS分析用于确定#182小鼠所衍生的克隆的上 清是否能够阻止细胞(工程化以过表达Fcfoi的HEK 293细胞)上的hFcfoi的hlgG 结合。将细胞与杂交瘤上清一起培养60-90分钟，然后使用PBS清洗，随后与Alexa fluor-488标记的hlgG—起培养。所得结果以㈧总体平均荧光强度(TMFI)或⑶人IgG 与Fcfoi结合改变(抑制或加强)的百分比的方式表现。图4描绘了 FACS分析的结果，该FACS分析使用实施例6中所述方法确定#187小 鼠所衍生的杂交瘤上清的阻止活性的。所得结果以(A)总体平均荧光强度(TMFI)或(B) 人IgG与Fcfoi结合改变(抑制或加强)的百分比的方式表现。图5描绘了 FACS分析的结果，该FACS分析用于确定在(A)mAb 31. 1、mAb 4. 13、 和hlgGl ；或(B)mAb 3B3. IUmAb 4B4. 12 JPhIgGl的各种浓度下的Fcfoi阻止活性的效价， 所述确定是通过检测在Alexa-488-标记的hlgG和抗Fcfoi阻止单克隆抗体或hlgGl存在 下培养的四3(11细胞(工程化用以过表达Fcfoi的HEK 293细胞)的表面染色进行。所得 结果以结合于细胞的hlgG的百分比表示，其定义为各浓度下的TMFI除以不加竞争 剂的样品的TMFI乘以100%。图6描绘了 FACS分析的直方图，该FACS分析用于确定mAb 3B3. IUmAb 31. UmAb 4. 13, mAb 4B4.12、和mAb 15B6. 1与表达hFcfoi的细胞(工程化用以过表达Fcfoi 的HEK 293细胞)的细胞表面的结合。图7描绘了 FACS分析的直方图，该FACS分析用于确定mAb 3B3. IUmAb 31. UmAb 4. 13和mAb4B4. 12与表达Fcfoi的大鼠细胞(工程化用以过表达大鼠Fcfoi的大鼠成纤维细 胞)的细胞表面的结合。图8描绘了 FACS分析的直方图，该FACS分析用于确定mAb 3B3. IUmAb 4. 13、mAb 31. 1、mAb 4B4. 12、和mAb 15B6. 1与表达Fcfoi的小鼠3T3细胞(工程化用以过表达小鼠FcRn的NIH 3T3细胞)的细胞表面的结合。图9描绘了 FACS分析的直方图，该FACS分析用于确定mAb 3B3. IUmAb 4. 13、mAb 31. 1、mAb 4B4. 12、和mAb 15B6. 1与THP细胞(人单核细胞系)细胞内表达的hFcfoi的结口。图10描绘了 FACS分析的直方图，该FACS分析用于确定mAb 3B3. 11、mAb 4. 13、 mAb 31. 1、mAb 4B4. 12 JPmAb 15B6. 1与Caco_2细胞(人肠上皮细胞系)细胞内表达的 hFcRn的结合。图11描绘了与mAb 4B4. 12或同种型对照mlgG^i(1813)在表面或细胞内反应的 (A)小鼠脾脏的巨噬细胞群和⑶小鼠脾脏总细胞群的百分比。图12描绘了使用OVA加CFA免疫和经过mAb 4B4. 12、同种型对照mlgG^i(1813) 或PBS处理的小鼠的(A)脾脏和(B)腹股沟淋巴结的平均重量。使用OVA加CFA将小鼠免 疫并以Img的4B4. 12或同种型对照1813的10次注射进行IP处理。图13描绘了对Balb/c小鼠的抗卵清蛋白(OVA)的IgG的血清水平的影响，该小 鼠已使用OVA免疫，并随后使用mAb 4B4. 12、阳性对照mIgG^i(1813)或PBS处理。抗体处 理由三次每日腹膜内(IP)注射抗体，随后10次每隔一日的IP注射抗体组成。所示结果在 抗体处理9天后(5次注射)得到。图14描绘了对⑶-1小鼠的人IgG血清水平的影响，该小鼠已使用lmg/kg的人 IgG(Synagis)进行腹膜内(IP)注射，并随后在72小时后使用20mg/kg mAb 4B4. 12，20mg/ kg同种型对照mIgG^i(18i;3)，或PBS的单次IP注射进行处理。血清样品在mAB注射前 (Synagis注射后72小时)，mAB注射后72，和168小时获得。所示结果由抗体处理后M小 时的血清中得到。图15描绘了与图14所述的同样的实验，并有两个另外的血清取样点(72和168 小时)。该结果表示为与mAB注射前的Synagis的水平相比保留的Synagis的百分比。图16描绘了使用mAb 4B4. 12、同种型对照mIgG2a (1813)、或PBS处理对实验性自 身免疫性重症肌无力(EAMG)的严重性的影响的时程。通过如下对愈加严重的症状分配零 到四的等级评估该病症的严重性0，无症状；1，弱握力、易疲劳和时喘；2，一般性虚弱，休 息时驼背(hunched posture at rest)，体重降低，发抖；3，严重虚弱，濒死；以及4，死亡。图17描绘了使用mAb 4B4. 12、同种型对照mlgG^i (1813)，或PBS处理对实验性自 身免疫性重症肌无力(EAMG)造成的体重降低的影响，体重降低以克报告(如y轴所示)。图18 描绘 了 Tg32B 小鼠(hFcfoi+/+，h β 2Μ+/+，mFcRn-/", m β 2Μ_/_)中生物素化 的人IgG(生物素-hlgG)与未标记的人IgG(hlgG)的清除动力学的比较。使用5mg/kg生物 素化的人IgG(Synagis)和495mg/kg未标记的hlgG对动物进行静脉内(IV)注射。在图中 所示的时间点收集血清并使用亲和素平板(Pierce Chemicals)确定血清中生物素-hlgG 浓度并使用ELISA测量未标记的hlgG。图19描绘了将动物经过mAb 3B3. 11处理后的Tg32B小鼠(hFcI n+/+，h β 2Μ+/+， mFcRn-/-,m^ 2Μ-/-)中生物素化的人IgG(生物素-hlgG)的清除动力学。使用5mg/kg生 物素化的人IgG(Synagis)和495mg/kg未标记的hlgG对动物进行静脉内(IV)注射。对小 时以后，开始每日一次的IV注射50mg/kg的mAb !3B3. 11并持续5天的时间。在图中所示 的时间点收集血清并使用亲和素平板(Pierce Chemicals)确定血清中生物素-hlgG浓度。
图20描绘了 FACS分析的条形图，该FACS分析用来确定mAb 3B3. 11、mAb 4. 13、 mAb 31. UmAb 4B4. 12、和mAb 15B6. 1与转染了猴Fcfoi/β 2M的COSl细胞的结合。结果表 示为TMFI。图21描绘了用来确定mAB3B3. 11U5B6. 1、4· 13、和31. 1与hFcfoi α链的特异性结 合以及mAb 3B5. 4和5A4. 9与β 2M的特异性结合的蛋白质免疫印迹。图22描绘了用来确定这些mAB识别的表位的Biacore表位分析。图23描绘了 M90-F11，Μ84-Β11和M55-G12的四个连续的每日静脉内剂量对TG32B 小鼠的生物素IgG分解代谢的影响。图M描绘了 M90-F11对hFcfoi Tg小鼠中hlgG分解代谢的剂量反应(四个连续 的每日静脉内剂量)。图25描绘了 M90-F11对hFcfoi Tg小鼠中hlgG分解代谢的单次剂量反应。图沈描绘了用于使种系化M90-F11亲和成熟的方法。图27描绘了在20mg/kg静脉内剂量下亲和成熟的IgG和可溶性FAB对加速Tg32B 小鼠中hlgG分解代谢的影响(生物素IgG&总IgG)。图28描绘了在5mg/kg静脉内剂量亲和成熟IgG的和可溶性FAB对加速Tg32B小 鼠中hlgG分解代谢的影响(生物素IgG&总IgG)。图四描绘了加入轻链而非重链的M90-F11种系变化(以粗体突出显示)。图30描绘了 IgG的异型变化。图31描绘了静脉内施用的抗Fcfoi抗体对Tg32B小鼠中hlgG分解代谢的影响。图32描绘了皮下施用的Μ161-Β04ΦΧ2504)抗Fcfoi抗体对Tg32B小鼠中hlgG分 解代谢的影响。图33描绘了抗Fcfoi抗体对食蟹猴中hlgG分解代谢的影响。图33A描绘了取得血 液样品的时间。图3 描绘了没有施用抗体Fcfoi抗体M161-B04时的总体血清IgG水平。图34描绘了以静脉内(图34A)和皮下(图34B)施用的5mg/kg M161-B04抗-Fcfoi 抗体在猴中的效果。所示为猴的个体数据。图35描绘了以静脉内(图34A)和皮下(图34B)施用的20mg/kg M161-B04 抗-Fcfoi抗体在猴中的效果。所示为猴的个体数据。图36描绘了以静脉内和皮下施用的各种浓度的M161-B04抗Fcfoi抗体在猴中的 效果(根据给药前数据标准化数据)。图37描绘了以静脉内和皮下施用的M161-B04抗Fcfoi抗体对猴中血清IgA(图 37A)、血清IgM(图37B)和血清白蛋白(图37C)的浓度的影响(根据给药前数据标准化数 据)。图38描绘了 DX-2504序列及其比对。
具体实施例方式在正常情况下，Fcfoi可延长循环IgG的半衰期。与Fcfoi结合的抗体可用于例如， 通过阻止与IgG的相互作用调节Fcfoi的功能。特别的，阻止Fcfoi与IgG的相互作用的抗 体可用于缩短IgG分子的半衰期。这些抗体及相关策略可用于治疗甚至预防抗体介导的自身免疫性病症，比如，多发性硬化症，发炎性肠道病症，类风湿关节炎(RA)和系统性红斑狼疮(SLE)，或本文中所述 的其他自身免疫性病症。在大鼠被动模型中，30mg/kg的剂量的拮抗性抗大鼠Fcfoi单克隆 抗体(mAb)lG3成功地预防了实验性自身免疫重症肌无力(EAMG)；该剂量比在MG、SLE和 ITP的治疗中使用的静脉内IgG(IVIG)低大约100倍。此外，遗传上易染自身免疫性病症比 如狼疮或关节炎的Fcfoi缺陷小鼠在病症的严重性上有明显减缓。因此，抗人Fcfoi的性抗 体在人类自身免疫性病症的治疗上具有治疗潜力。本公开进一步提供，尤其是，可用于治疗自身免疫性病症和降低IgG的循环水平 的人拮抗性抗人Fcfoi抗体。另外公开的为对具有通过抗原结合域结合并阻止IgG-Fc和人 FcRn或大鼠Fcfoi相互作用的能力的高亲和性可溶性Fab (sFab)(如在可溶蛋白测定和使用 工程化以过表达人Fcfoi或大鼠Fcfoi的细胞系的活细胞结合测定中所评估的)的识别。该 sFab可以pH独立的方式或以pH依赖的方式结合并阻止IgG-Fc和人Fcfoi或大鼠Fcfoi相 互作用，例如，在酸性PH比如pH 6。该sFab可转化为IgG抗体。定义术语“结合蛋白”可指可与靶标分子相互作用的蛋白。该术语与“配体”可交换使 用。“Fcfoi结合蛋白，，或“Fcfoi结合配体”指可以与Fcfoi相互作用的蛋白，并且，特别包括 优先与Fcfoi相互作用的蛋白，例如，IgG。如本文所用，术语“抗体”指包括至少一个免疫球蛋白可变域或免疫球蛋白可变域 序列的蛋白。例如，抗体可包括一个重(H)链可变区(在本文中缩写为VH)，和一个轻(L) 链可变区(在本文中缩写为VL)。在另一个实例中，抗体包括两个重(H)链可变区和两个轻 (L)链可变区。术语“抗体”包括抗体的抗原结合片段(例如，单链抗体、Fab和sFab片段、 F(ab' )2、Fd片段、Fv片段、scFv、和dAb片段)以及完全抗体。VH和VL区可进一步细分成高变区，其命名为“互补决定区”(“⑶R”)，散布在更 加保守的区内，其命名为“框架区”(“FR”)。框架区和CDR的范围已被准确的定义(参 见，Kabat, Ε· A.,等(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest (免疫学 上重要的蛋白序列)，第 5 版，U. S. D印artment of Health and Human Services，NIH 出版 号 91-3242，和 Chothia，C.等(1987) J. Mol. Biol. 196 :901_917，另参见 http://www. hgmp. mrc.ac.uk)。本文中使用Kabat定义。每个VH和VL通常包括三个⑶R和四个FR，根据以 下顺序从氨基末端向羧基末端排列FR1、⑶Rl、FR2、⑶R2、FR3、⑶R3、FR4。术语全长抗体的“抗原结合片段”(或简单称为”抗体部分”或“片段”)，如本文所 用，指全长抗体的一个或多个保留了特异性结合于所感兴趣的靶标的能力的片段。术语全 长抗体的“抗原结合片段”中包括的结合片段的实例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CHl 域组成的单价片段；(ii)F(ab' )2片段，包括在铰链区由二硫桥连接的两个Fab片段的二 价片段；(iii)Fd片段，由VH和CHl域组成；(iv)Fv片段，由抗体单臂的VL和VH域组成； (v) dAb 片段(Ward 等，(1989)Nature 341 :544-546)，其由 VH 域组成；以及(vi)保留了功 能的分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个域，VL和VH，由不同的基因编码， 但可使用重组方法，通过使其制备为单独的蛋白链的合成连接体将其连接在一起，其中VL 和VH区配对形成被称为单链Fv(scFV)的单价分子。参见，例如，Bird等(1988)Science 242 :423-426 ；和 Huston 等(1988)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 :5879_5883。抗体片段可使用包括为本领域技术人员已知的常规技术的任何合适的技术获得。术语“单特异性抗体”指对特定靶标，例如，表位，表现出单独的结合特异性和亲和性的抗 体。该术语包括“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”，如本文所用，指具有单分子组成的 抗体或其片段的制品。如本文所用，“同种型”指由重链恒定区基因编码的抗体类别(例如， IgM 或 IgGl)。如本文所用，“结合亲和性”指表观结合常数或Ka。Ka为解离常数(Kd)的倒数。结 合蛋白可能，例如，对特定靶标分子具有至少10_5、10_6、10_7、10_8、KT9UO,和10_"M的结合 亲和性。结合配体对第一靶标相对于第二靶标更高的结合亲和性可由比与第二靶标结合的 Ka(或数值Kd)，更高的与第一靶标结合的Ka(或更小的数值Kd)表示。在所述情况下，相对 于第二靶标(例如，同一蛋白的第二构型或其模拟物；或第二蛋白)，结合蛋白对第一靶标 (例如，蛋白的第一构型或其模拟物)具有特异性。结合亲和性的区别(例如，特异性或其 他比较)可为至少 1. 5、2、3、4、5、10、15、20、50、70、80、100、500、1000、或 IO5 倍。结合亲和性可通过包括平衡透析、平衡结合、凝胶过滤、ELISA、表面等离子体共 振、或光谱法(例如，使用荧光测定)的各种方法确定。示例性的测量结合亲和性的条件为 30°C和pH 7. 2下的PBS (磷酸盐缓冲液)。这些技术可用于测量已结合的和游离的结合蛋 白的浓度作为结合蛋白(或靶标)浓度的函数。已结合的结合蛋白([已结合])的浓度通 过以下方程与游离的结合蛋白的浓度([游离])以及在靶标上对结合蛋白的结合位点的浓 度相关，其中(N)为每个靶标分子的结合位点的数目[已结合]=N.[游离]/((1/Ka)+[游离])。但是并不是总是需要准确地确定Ka，因为有时获得亲和性的量化测量已经足够， 例如，使用比如ELISA或FACS分析的方法确定的结果与Ka成比例，并因此可用于比较，比 如确定是否较高亲和性是，例如，2倍高，以获得亲和性的量化测量，或获得亲和性的推导， 例如，通过功能性测定中的活性，例如，体外或体内测定。术语“同源配体”指Fcfoi的天然生成的配体，包括其天然生成的变异体(例如，剪 接变异体、天然生成的突变体、和同等型(isoform))。“保守氨基酸替代”为使用具有相似侧链的氨基酸残基替代氨基酸残基的一种替 代。本领域内已定义具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链(例 如，赖氨酸，精氨酸，组氨酸)、酸性侧链(例如，天门冬氨酸，谷氨酸)、不带电荷的极性侧链 (例如，甘氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，丝氨酸，苏氨酸，酪氨酸，半胱氨酸)、非极性侧链(例 如，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，苯丙氨酸，蛋氨酸，色氨酸)，β -分支侧链 (例如，苏氨酸，缬氨酸，异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸，苯丙氨酸，色氨酸，组氨 酸)的氨基酸。很多的框架和CDR氨基酸残基包括一个或多个保守性替代是可能的。生物高分子的共有序列可包括在不同氨基酸间变化的位点。例如，在所述上下文 中的符号“X” 一般指任何氨基酸(例如，二十种天然氨基酸中的任何一种或十九种非半胱 氨酸氨基酸中的任何一种)。其它被可允许的氨基酸还可例如使用括号和斜线标明。例如， “ (A/W/F/N/Q)，，意为在特定位点上允许丙氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。“人效(effectively human) ”免疫球蛋白可变区为包括足够数量的人框架氨基 酸位置以致该免疫球蛋白可变区在正常人体内不引起免疫原性反应的免疫球蛋白可变区。 “人效”抗体为包括足够数量的人氨基酸位置以致该抗体在正常人体内不引起免疫原性反 应的抗体。
“表位”指被结合蛋白(例如，抗体比如Fab或全长抗体)结合的靶标化合物上的 位点。在该靶标化合物为蛋白的情况下，该位点可完全由氨基酸组分组成，完全由该蛋白的 氨基酸的化学修饰(例如，糖基部分)组成，或由其组合组成。重叠表位包括至少一个共同
氨基酸残基。对两种序列之间“同源性”或“序列同一性”(在本文中以上术语可交换使用)进 行的计算如下所示。将序列比对以用于最佳比较目的(例如，为了最佳比对，可在第一和第 二氨基酸或核酸序列中的一个或两个序列中引入缺口，并且为了比较目的可以忽略非同源 性序列)。最佳比对确定为以Blosum 62评分矩阵并以缺口罚分为12、缺口延长罚分为4、 以及移码缺口罚分为5使用GCG软件包中的GAP程序确定的最佳评分。然后比较位于相应 氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置与第二序列中的 相应位置被相同的氨基酸残基或核苷酸占据时，则所述分子在该位置为相同的(如本文所 用，氨基酸或核酸“同一性”等同于氨基酸或核酸”同源性”)。该两种序列之间的同一性百 分比为所述序列共有的相同位置的数量的函数。在一个实施方案中，用于比较的参考序列的长度为该参考序列的长度的至少 30%、至少 40%、至少 50%、至少 60%、至少 70%、80%、90%、92%、95%、97%、98% 或 100%。例如，该参考序列可为免疫球蛋白可变域序列的长度。“人源化”免疫球蛋白可变区为被修饰以包括足够数量的人框架氨基酸位置以至 于免疫球蛋白可变区在正常人体内不引起免疫原性反应的免疫球蛋白可变区。对“人源化” 免疫球蛋白的描述包括，例如，US6, 407，213和US 5，693，762。如在本文中所用，术语“在低严谨性、中严谨性、高严谨性或非常高严谨 性的条件下杂交”描述了杂交和清洗的条件。进行杂交反应的指南可在Current Protocols inMolecular Biology (现代分子生物学实验指南)，John Wiley & Sons， N. Y. (1989)6. 3. 1-6. 3. 6中发现，其通过引用并入本文。水相和非水相方法已在该参考文献 中描述并可使用其中任何一种。本文中所指特异性杂交条件如下(1)低严谨性杂交条件 为在大约45°C下在6X氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中，随后在至少50°C下在0. 2X SSC、0. 1% SDS中清洗两次(对于低严谨性条件清洗的温度可以增高到55°C) ； (2)中严谨性杂交条件 为在大约45°C下在6X SSC中，随后在60°C下在0. 2X SSC、0. 1 % SDS中清洗一次或多次； (3)高严谨性杂交条件为在大约45°C下在6X SSC中，随后在65°C下在0. 2X SSC.0. 1%SDS 中清洗一次或多次；并且(4)非常高严谨性条件为在65°C下在0. 5M磷酸钠、7% SDS，随后 在65°C下在0. 2X SSC、0. 1% SDS中清洗一次或多次。非常高严谨性条件(4)为优选条件， 并且除非另外说明，否则应使用该条件。本公开包括在低、中、高、非常高严谨性条件下与本 文所述核酸或其互补序列的杂交的核酸，例如，本文中所述的编码结合蛋白的核酸。该核酸 可为参考核酸的同样长度或在其长度的30 %、20 %、或10 %之内。该核酸可对应于编码免 疫球蛋白可变域序列的区。FcRn结合蛋白可具有相对本文中所述的结合蛋白的突变(例如，至少一个\两个 或四个，和/或少于15、10、5、或3个)(例如，保守或非必须氨基酸替代)，其对蛋白功能上 没有显著影响。可预测特定替代是否可以耐受，即，将不会负面影响生物特性，比如结合活 性，例如使用 Bowie，等(1990) Science 247 :1306-1310 的方法。“免疫球蛋白域”指源自免疫球蛋白分子的可变或恒定域的结构域。免疫球蛋白域通常包括两个由大约七个链形成的折叠，以及一个保守二硫键(参见，例如， A.F.Williams 禾口 A.N.Barclay 1988 Ann. Rev Immunol. 6 :381-40 。如在本文中所用，“免疫球蛋白可变域序列”指可形成免疫球蛋白可变域的结构以 致一个或多个CDR区位于合适于抗原结合位点的构型的氨基酸序列。例如，该序列可包括 天然生成的可变域的全部或部分氨基酸序列。例如，该序列可能省略一个、两个或更多个 N-或C-末端氨基酸、内部氨基酸，可包括一个或更多个插入或额外末端氨基酸，或可包括 其他改变。在一个实施方案中，包括免疫球蛋白可变域序列的多肽可与另一免疫球蛋白可 变域序列缔合形成靶标结合结构(或“抗原结合位点”)，例如，优先与Fcfoi结构相互作用 的结构。抗体的VH或VL链还可包括重链或轻链恒定区的全部或部分，以由此分别形成重 或轻免疫球蛋白链。在一个实施方案中，该抗体为两个重免疫球蛋白链和两个轻免疫球蛋 白链的四聚体，其中重和轻免疫球蛋白链通过例如二硫键相互连接。重链恒定区包括三个 结构域，CH1，CH2和CH3。轻链恒定区包括一个CL域。重链和轻链的可变区包含与抗原相 互作用的结合域。抗体的恒定区通常介导抗体与宿主细胞或因子的结合，所述宿主细胞或 因子包括多种免疫系统细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq)。术语 “抗体”包括IgA、IgG、IgE、IgD、IgM型(以及其亚型)的完整免疫球蛋白。免疫球蛋白轻 链可为以下类型κ或λ。在一个实施方案中，抗体为糖基化的。抗体可在抗体依赖型细 胞毒性和/或补体介导的细胞毒性中具有功能。抗体的一个或多个区可为人或人效区。例如，一个或多个可变区可为人的或人效 的。例如，一个或多个 CDR 可为人的，例如，HC CDRUHC CDR2、HC CDR3、LC CDRULC CDR2、 和LC CDR3。每个轻链CDR均可为人的。HC CDR3可为人的。一个或多个框架区可为人的， 例如，HC或LC的FR1、FR2、FR3、和FR4。在一个实施方案中，所有的框架区均为人的，例如， 源自人体细胞，例如，产生免疫球蛋白的造血细胞或非造血细胞。在一个实施方案中，人序 列为种系序列，例如，由种系核酸编码。一个或多个恒定区可为人的或人效的。在一个实施 方案中，抗体的至少70、75、80、85、90、92、95、或98%、或全部可为人的或人效的。抗体全部或者部分可由免疫球蛋白基因或其区段编码。示例性人免疫球蛋白基因 包括 κ、λ、α (IgAl 和 IgA2)、y (IgGl、IgG2、IgG3、IgG4)、δ、ε 和 μ 恒定区基因，以及 无数免疫球蛋白可变区基因。全长免疫球蛋白“轻链”(大约25KDa或214个氨基酸)由可 变区基因在NH2-末端(大约110个氨基酸)以及κ或λ恒定区基因在COOH-末端编码。 全长免疫球蛋白“重链”(大约50KDa或446个氨基酸)，相似地由可变区基因(大约116个 氨基酸)和一个前述的其他恒定区基因编码，例如，Y (编码大约330个氨基酸)。“分离的组合物”指从可以获得该分离的组合物的天然样品的至少一种组分的至 少90%中提取出来的组合物。如果所感兴趣的物类(species)或群体在重量-重量基础上 为至少5、10、25、50、75、80、90、92、95、98、或99%纯，则合成或天然生成的组合物可为“至 少某一纯度的组合物”。在Fcfoi或其部分的构型的模拟物的上下文里，术语“模拟物”指相对天然生成的 FcRn或其部分具有对至少一种特定构型的偏好的修饰的Fcfoi。“非必需”氨基酸残基为可在结合剂(例如，抗体)的野生型序列中改变而不消除 或不显著改变其生物活性的残基，而“必需”氨基酸残基将导致所述改变。
本文所用措辞“肠胃外施用”和“肠胃外地施用”意为有别于肠内施用和外用 (topical administration)的施用模式，通常通过注射，并非限制性地包括静脉内、肌肉 内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮、关节内、包膜下、蛛网 膜下腔、椎管内、硬膜外和胸骨内注射以及输注。术语“多肽”或“肽”(其可交替使用)指由肽键连接的三个或多个氨基酸的聚合 物，例如，在长度上介于3和30个氨基酸之间，12和60个氨基酸之间，或30和300个氨基 酸之间，或超过300个氨基酸。多肽可包括一个或多个非天然氨基酸。通常，多肽仅包括天 然氨基酸。“蛋白”可包括一个或多个多肽链。相应的，术语“蛋白”包含多肽。蛋白或多肽 也可包括一种或多种修饰，例如，糖基化，酰胺化，磷酸化，亚硝基化，等等。术语“小肽”可 用于描述在长度上介于3个和30个氨基酸之间的多肽，例如，在长度上介于8个和M个氨 基酸之间。“预防有效量”指在必要的剂量和时间段内有效地达到所期预防结果的量。通常， 因为预防剂量在受治疗者患病前或在病的早期阶段使用，所以预防有效剂量将比治疗有效 剂量小。如本文所用，术语“大致上相同”(或“大致上同源”)在本文中用于指第一氨基 酸或核酸序列包含足够数量的与第二氨基酸或核酸序列相同或等同(例如，具有相似的侧 链，例如，保守氨基酸替代)的氨基酸残基或核苷酸，以至于该第一和第二氨基酸或核酸序 列具有相似活性(或编码具有相似活性的蛋白)，所述活性例如，结合活性、结合偏好、或生 物活性。对于抗体，第二抗体对于相同的抗原具有相同的特异性和至少50%的亲和性。与本文中所公开的序列相似或同源(例如，至少大约85%序列同一性)的序列也 是本申请的一部分。在一些实施方案中，序列同一性可为大约85^^90^^91^^92^^93%, 94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高。另外，当核酸区段在选择性杂交条件(例如，高 严谨性杂交条件)下与该链的互补序列杂交时存在大致同一性。核酸可存在于完整细胞 中、细胞溶解产物中，或以部分纯化或大致上纯化的形式存在。可使用本领域内任何已知的方法确定统计显著性。示例性统计检验包括学生T 检验、曼惠特尼U非参数检验(Mann Whitney U non-parametric test)和魏氏非参数统计 检验(ffilcoxon non-parametric statistical test)。一些统计显著关系具有小于 0· 05 或0. 02的P值。特定结合蛋白可显示统计显著的(例如，P值< 0. 05或0. 02)例如特异 性或结合的差异。术语“诱导”、“抑制”、“加强”、“升高”、“增加”、“降低”或类似术语，例如， 其指明在两种状态之间可分辨的质量或数量区别，并可指两种状态之间的区别，例如统计 显著的区别。“治疗有效剂量”调节可测量的参数，例如，循环IgG抗体水平，达相对未处理的受 治疗者统计显著程度或至少大约20%、至少大约40%、至少大约60%、或至少大约80%。化 合物调节可测量的参数例如自身免疫性的能力可在预测人类自身免疫性病症的动物模型 系统中进行评估。另外，可通过检查该化合物在体外调节参数的能力来评估组合物的这个 特性，例如，通过本领域技术人员已知的测定。本发明的其他特征和优势将在以下详细描述和权利要求中更加清楚。本发明的实 施方案可包括本文所述的特征的任何组合。在任何情况下，术语“实施方案”都不排除本文 所公开的一个或多个其它特征。
FcRn 序列以下序列比对为人Fcfoi α链氨基酸序列与大鼠Fcfoi α链氨基酸序列的比对。示 例性Fcfoi蛋白可包括该两种序列中的一种，或其片段，例如，不包括信号序列的片段信号序列 α工域
α _人MGVPRPQPffALGLLLFLLPGSLG AESHLSLLYHLTAVSSPAPGTPAFWVSGWLGPQQYLS
α _大鼠=MGMSQPGV-LLSLLLVLLPQTffG AEPRLPLMYHLAAVSDLSTGLPSFWATGWLGAQQYLT
α丄域 α 2域
人类:YNSLRGEAEPCGAWVWENQVSffYffEKETTDLRIKEKLFLEAFKALGGK—GP YTLQGLLG
α _大鼠:YNNLRQEADPCGAWIWENQVSffYffEKETTDLKSKEQLFLEAIRTLENQINGT FTLQGLLG
α 2域
人类CELGPDNTSVPTAKFALNGEEFMNFDLKQGTWG⑶WPEALAISQRWQQQDKAANKELTFL
大鼠:CELAPDNSSLPTAVFALNGEEFMRFNPRTGNWSGEWPETDIVGNLWMKQPEAARKESEFL
α 2域 α 3域
人类LFSCPHRLREHLERGRGNLEffK EPPSMRLKARPSSPGFSVLTCSAFSFYPPELQLRFLRN
α _大鼠=LTSCPERLLGHLERGRQNLEffK EPPSMRLKARPGNSGSSVLTCAAFSFYPPELKFRFLRN
α 3域
人类:GLAAGTGQ⑶FGPNSDGSFHASSSLTVKSGDEHHYCCIVQHAGLAQPLRVELE
大鼠:GLASGSGNCSTGPNGDGSFHAWSLLEVKRGDEHHYQCQVEHEGLAQPLTVDLD
跨膜 胞质域
人类:SPAKSSVLVVGIVIGVLLLTAAAVGGALLff RRMRSGLPAPffISLRGDDTGVLLPTPGEAQ
α _大鼠:SPARSSVPVVGIILGLLLVVVAIAGGVLLff NRMRSGLPAPWLSLSGDDSGDLLPGGNLPP
人类:DADLKDVNVIPATA(SEQ ID NO :1)
大鼠:EAEPQGVNAFPATS(SEQ ID NO :2)
以下序列比对为人β2微球蛋白链氨基酸序列与大鼠β2微球蛋白链氨基酸序列的
比对。示例性i^cRn蛋白可包括该两种序列中的一种，或其片段，例如，不包括信号序列的片段信号序列β 2微球蛋白β 2m_ 人类:MSRSVALAVLALLSLSGLEA IQRTPKIQVYSRHPAENGKSNFLNCYVSGFHPSDIEVDLLβ 2m_ 大鼠MARSVTVIFLVLVSLAWLA IQKTPQIQVYSRHPPENGKPNFLNCYVSQFHPPQIEIELLβ 2微球蛋白β 2m_ 人类KNGERIEKVEHSDLSFSKDWSFYLLYYTEFTPTEKDEYACRVNHVTLSQPKIVKWDRD
M(SEQID NO 3)β 2m_ 大鼠KNGKKIPNIEMSDLSFSKDWSFYILAHTEFTPTETDVYACRVKHVTLKEPKTVTWDRD M(SEQID NO 4)编码Fcfoi蛋白α链的示例性核酸序列可包括以下序列FcRNa 核酸序列，人(Homo sapiens)GTTCTTCAGGTAOGAGGAGGGCATTGTTGTCAGTCTGGACCGAGCCCGCAGAGCCCCTCCTOGGCGTCCTGGTCCCGGCCGTGCCCGCGGTGTCCCGGGAGGMGGGGCGGGCOGGGGGTCGGGAGGAGTCACGTGCCCCCTCCOGCCCCAGGTOGTCCTCTCAGCATGGGGGTCCCGCGGCCTCAGCCCTGGGCGCTGGGGCTCCTGCTCTTTCTCCTTCCTGGGAGCCTGGGOGCAGMAGCCACCTCTCCCTCCTGTACCACCTTACCGCGGTGTCC
TCGCCTGCCCOGGGGACTCCTGCCTTCTGGGTGTCCGGCTGGCTGGGCCOGCAGCAGTACCTGAGCTACAATAGCCTGOGGGGCGAGGOGGAGCCCTGTGGAGCTTGGGTCTGGGMMCCAGGTGTCCTGGTATTGGGAGMAGAGACCACAGATCTGAGGATCMGGAGMGCTCTTTCTGGMGCTTTCMAGCTTTGGGGGGAMAGGTCCCTACACTCTGCAGGGCCTGCTGGGCTGTGMCTGGGCCCTGACMCACCTOGGTGCCCACOGCCA
AGTTOGCCCTGMCGGOGAGGAGTTCATGMTTTOGACCTCMGCAGGGCACCTGGGGTGGGGACTGGCCOGAGGCCCTGGCTATCAGTCAGOGGTGGCAGCAGCAGGACMGGCGGCCMCMGGAGCTCACCTTCCTGCTATTCTCCTGCCCGCACOGCCTGOGGGAGCACCTGGAGAGGGGCOGOGGMACCTGGAGTGGMGGAGCCCCCCTCCATGCGCCTGMGGCCCGACCCAGCAGCCCTGGCTTTTCCGTGCTTACCTGCAGOGCCTTCTCCTTCTACCCTCCGGAGCTGCMCTTCGGTTCCTGOGGMTGGGCTGGCCGCTGGCACOGGCCAGGGTGACTTOGGCCCCMCAGTGACGGATCCTTCCACGCCTOGTOGTCACTMCAGTCMMGTGGOGATGAGCACCACTACTGCTGCATTGTGCAGCAOGOGGGGCTGGCGCAGCCCCTCAGGGTGGAGCTGGMTCTCCAGCCMGTCCTCOGTGCTOGTGGTGGGMTOGTCATOGGTGTCTTGCTACTCAOGGCAGOGGCTGTAGGAGGAGCTCTGTTGTGGAGMGGATGAGGAGTGGGCTGCCAGCCCCTTGGATCTCCCTTOGTGGAGAOGACACOGGGGTCCTCCTGCCCACCCCAGGGGAGGCCCAGGATGCTGATTTGMGGATGTMATGTGATTCCAGCCACOGC
CTGACCATCCGCCATTCCGACTGCTAMAGOGMTGTAGTCAGGCCCCTTTCATGCTGTGAGACCTCCTGGMCACTGGCATCTCTGAGCCTCCAGMGGGGTTCTGGGCCTAGTTGTCCTCCCTCTGGAGCCCCGTCCTGTGGTCTGCCTCAGTTTCCCCTCCTMTACATATGGCTGTTTTCCACCTOGATMTATMCACGAGTTTGGGCCCGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(SEQ ID NO 5)示例性的人Fcfoi (胞外域)加GPI DNA序列(小写加粗)的核酸序列如下所示。ATGGGGGTCCOGOGGCCTCAGCCCTGGGOGCTGGGGCTCCTGCTCTTTCTCCTTCCTGGGAGCCTGGGCGCAGMAGCCACCTCTCCCTCCTGTACCACCTTACOGCGGTGTCCTOGCCTGCCCCGGGGACTCCTGCCTTCTGGGTGTCCGGCTGGCTGGGCCCGCAGCAGTACCTGAGCTACMTAGCCTGCGGGGOGAGGCGGAGCCCTGTGGAGCTTGGGTCTGGGAMACCAGGTGTCCTGGTATTGGGAGMAGAGACCACAGATCTGAGGATCMGGAGMGCTCTTTCTGGMGCTTTCMAGCTTTGGGGGGMMGGTCCCTACACTCTGCAGGGCCTGCTGGGCTGTGMCTGGGCCCTGACMCACCTCGGTGCCCACOGCCMGTTCGCCCTGMOGGCGAGGAGTTCATGMTTTCGACCTCMGCAGGGCACCTGGGGTGGGGACTGGCCOGAGGCCCTGGCTATCAGTCAGOGGTGGCAGCAGCAGGACMGGOGGCCMCMGGAGCTCACCTTCCTGCTATTCTCCTGCCOGCACCGCCTGCGGGAGCACCTGGAGAGGGGCOGOGGMACCTGGAGTGGMGGAGCCCCCCTCCATGCGCCTGMGGCCCGACCCAGCAGCCCTGGCTTTTCOGTGCTTACCTGCAGCGCCTTCTCCTTCTACCCTCOGGAGCTGCMCTTOGGTTCCTGCGGMTGGGCTGGCCGCTGGCACOGGCCAGGGTGACTTOGGCCCCMCAGTGACGGATCCTTCCACGCCTOGTCGTCACTMCAGTCAMAGTGGCGATGAGCACCACTACTGCTGCATTGTGCAGCACGCGGGGCTGGOGCAGCCCCTCAGGGTGGAGCTGGMTCTCCAGCCMGTCCTCCcggccgctcgacgggctacgagcatcagtaacactactaggcgcaggcctactactatcactactaccagcactactacgatttgggccataa(SEQ ID NO 6)编码β 2-微球蛋白(β 2Μ)的示例性核酸序列可包括以下序列> β-2-微球蛋白(Β2Μ)核苷酸，人(Homo sapiens)MTATMGTGGAGGOGTCGCGCTGGCGGGCATTCCTGMGCTGACAGCATTOGGGCCGAGATGTCTCGCTCCGTGGCCTTAGCTGTGCTCGCGCTACTCTCTCTTTCTGGCCTGGAGGCTATCCAGCGTACTCCMAGATTCAGGTTTACTCACGTCATCCAGCAGAGMTGGMAGTCMATTTCCTGMTTGCTATGTGTCTGGGTTT
CATCCATCOGACATTGMGTTGACTTACTGMGMTGGAGAGAGMTTGMMAGTGGAGCATTCAGACTTGTCTTTCAGCMGGACTGGTCTTTCTATCTCTTGTACTACACTGMTTCACCCCCACTGAMMGATGAGTATGCCTGCOGTGTGMCCATGTGACTTTGTCACAGCCCMGATAGTTMGTGGGATCGAGACATGTMGCAGCATCATGGAGGTTTGMGATGCOGCATTTGGATTGGATGMTTCCMATTCTGCTTGCTTGCTTTTTMTATTGATATGCTTATACACTTACACTTTATGCACMMTGTAGGGTTATMTMTGTTMCATGGACATGATCTTCTTTATMTTCTACTTTGAGTGCTGTCTCCATGTTTGATGTATCTGAGCAGGTTGCTCCACAGGTAGCTCTAGGAGGGCTGGCMCTTAGAGGTGGGGAGCAGAGMTTCTCTTATCCMCATCMCATCTTGGTCAGATTTGMCTCTTCMTCTCTTGCACTCMAGCTTGTTMGATAGTTMGOGTGCATMGTTMCTTCCMTTTACATACTCTGCTTAGMTTTGGGGGMAATTTAGMATATMTTGACAGGATTATTGGMATTTGTTATAATGAATGAAACATTTTGTCATATAAGATTCATATTTACTTCTTATACATTTGATAAAGTAAGGCATGGTTGTGGTTMTCTGGTTTATTTTTGTTCCACMGTTMATMATCATAMACTTGATGTGTTATCTCTTA(SEQ ID NO 7)小鼠抗人Fcfoi抗体抗体结构和序列本发明涉及特异性结合于至少一个Fcfoi表位的抗体，其中该抗体与Fcfoi表位的 结合抑制IgG的Fc部分与Fcfoi结合。本发明因此涉及与Fcfoi阻断性抗体。该阻断性抗 体可为IgG、IgM、IgA、IgD或IgE。在一个实施方案中，该阻断性抗体为IgG。在一个实施 方案中，本发明的抗体将具有IOkT1的结合亲和性。在另一实施方案中，本发明的抗体将具 有IO11M-1的结合亲和性。在一个实施方案中，本发明涉及由:3B3. 11杂交瘤、31. 1杂交瘤、4B4. 12杂交瘤、或 17D3杂交瘤生成的单克隆抗体。在一个实施方案中，本发明涉及结合于Fcfoi线性表位的抗体。在另一个实施方案 中，本发明涉及结合于Fcfoi构象表位(conformational epitope)的抗体。在一个实施方 案中，本发明的抗体与包含EPPSMRLKAR(SEQ ID NO 105)或其片段的氨基酸序列结合。在 另一实施方案中，本发明的抗体与包含CSAFYPPELQLRFFLRNGL(SEQ IDNO :106)或其片段的
氨基酸序列结合。在某些实施方案中，本发明的抗体与被:3B3. 11和31. 1识别的相同的表位特异性 反应。可通过竞争性结合检测法确定所述抗体。本发明的抗Fcfoi抗体，包括其Vh和\域，以及⑶R，的说明性实施方案的氨基酸 (AA)序列均在表1中列举。抗体的两个特异性实施方案被鉴别为:3B3. 11和31. 1。表1 本发明的小鼠抗体的⑶R。
权利要求
1.一种分离的抗体，包含重链(HC)免疫球蛋白可变域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可 变域序列，其中所述重链免疫球蛋白可变域序列和所述轻链免疫球蛋白可变域序列形成与人 FcRn结合的抗原结合位点；并且其中该抗体包括一种或多种以下特征(a)人CDR或人框架区；(b)该LC免疫球蛋白可变域序列包含与M0171-A03、M0171-A01、M0159-A07、 M0161-B04.M0090-F11或DX2500的LC可变域CDR至少85%相同的一个或多个CDR ；(c)该HC免疫球蛋白可变域序列包含与M0171-A03、M0171-A01、M0159-A07、 M0161-B04.M0090-F11或DX2500的HC可变域CDR至少85%相同的一个或多个CDR ；(d)该LC 免疫球蛋白可变域序列与 M0171-A03、M0171-A01、M0159-A07、M0161-B04、 M0090-F11或DX2500的LC可变域至少85%相同；(e)该HC 免疫球蛋白可变域序列与 M0171-A03、M0171-A01、M0159-A07、M0161-B04、 M0090-F11或DX2500的HC可变域至少85%相同；并且(f)该抗体结合与被M0171-A03、M0171-A01、M0159-A07、M0161-B04、M0090-F11 或 DX2500结合的表位重叠的表位。
2.一种分离的抗体，所述抗体与选自 M0171-A03、M0171-A01、M0159-A07、M0161-B04、 M0090-F11和DX2500组成的组的抗体至少85%相同。
3.一种分离的抗体，其中该抗体选自 M0171-A03、M0171-A01、M0159-A07、M0161-B04、 M0090-F11 和 DX2504 组成的组。
4.一种分离的抗体，所述抗体包含M0161-B04的CDR。
5.一种分离的抗体，所述抗体与M0161-B04至少85%相同。
6.一种分离的抗体，所述抗体包含M0171-A03的CDR。
7.一种分离的抗体，所述抗体与M0171-A03至少85%相同。
8.一种分离的抗体，所述抗体包含M0171-A01的CDR。
9.一种分离的抗体，所述抗体与M0171-A01至少85%相同。
10.一种分离的抗体，所述抗体包含M0159-A07的CDR。
11.一种分离的抗体，所述抗体与M0159-A07至少85%相同。
12.—种分离的抗体，所述抗体包含M0090-F11的⑶R。
13.一种分离的抗体，所述抗体与M0090-F11至少85%相同。
14.一种分离的抗体，所述抗体包含DX-2500的CDR。
15.一种分离的抗体，所述抗体与DX-2500至少85%相同。
16.如权利要求1所述的抗体，其中该HC可变域序列包含M0161-B04的可变域序列，并 且该LC可变域序列包含M0161-B04的可变域序列。
17.如权利要求1所述的抗体，其中该HC可变域序列包含M0171-A03的可变域序列，并 且该LC可变域序列包含M0171-A03的可变域序列。
18.如权利要求1所述的抗体，其中该HC可变域序列包含M0171-A01的可变域序列，并 且该LC可变域序列包含M0171-A01的可变域序列。
19.如权利要求1所述的抗体，其中该HC可变域序列包含M0159-A07的可变域序列，并 且该LC可变域序列包含M0159-A07的可变域序列。
20.如权利要求1所述的抗体，其中该HC可变域序列包含M0090-F11的可变域序列，并 且该LC可变域序列包含M0090-F11的可变域序列。
21.如权利要求1所述的抗体，其中该HC可变域序列包含DX2500的可变域序列，并且 该LC可变域序列包含DX2500的可变域序列。
22.如权利要求1所述的抗体，其中该抗体与被M0171-A03、M0171-A01、M0159-A07、 M0161-B04.M0090-F11 或 DX2500 结合的 FcRn 表位结合。
23.如权利要求1所述的抗体，其中该抗体与M0171-A03、M0171-A01、M0159-A07、 M0161-B04.M0090-F11 或 DX2500 竞争与 FcRn 的结合。
24.一种分离的抗体或其片段，其与人Fcfoi结合，其中该抗体针对人Fcfoi重链或其片 段生成，其中该抗体功用为结合于人Fcfoi的IgG的非竞争性抑制剂，并且其中该抗体不与 β 2-微球蛋白结合。
25.一种分离的抗体或其片段，其与人Fcfoi结合，其中该抗体针对人Fcfoi重链或其片 段生成，其中当不与Fcfoi复合时，该抗体不与β 2-微球蛋白结合，并且其中该抗体不产生 自Fcfoi-/-敲除小鼠。
26.如权利要求25所述的抗体，其中该抗体选自由3Β3.11,31. 1、4Β4· 12和17D3组成的组。
27.如权利要求146中任一项所述的抗体，其中该抗体与人Fcfoi在约pH范围5-7.4 以小于IOOnM的解离常数(Kd)结合。
28.如权利要求146中任一项所述的抗体，其中该抗原结合位点与人Fcfoi特异性结合。
29.如权利要求1- 中任一项所述的抗体，其中该抗体与稳定表达1 ! 的细胞系结合。
30.如权利要求H6中任一项所述的抗体，其中该抗体调节Fcfoi与抗体/免疫球蛋白 恒定区的结合。
31.如权利要求H6中任一项所述的抗体，其中该抗体与!^cfoi的α亚基结合。
32.如权利要求146中任一项所述的抗体，其中该抗体与Fcfoia链的α 、α2或者 α 3域结合。
33.如权利要求146中任一项所述的抗体，其中该抗体不与Fcfoi的β亚基结合，即， 该蛋白仅与α亚基结合。
34.如权利要求146中任一项所述的抗体，其中该抗体与Fcfoi的β亚基结合，其中该 β亚基与α亚基相联。
35.如权利要求146中任一项所述的抗体，其中该α亚基和该β亚基正确地组装为 FcRn0
36.如权利要求146中任一项所述的抗体，其中该抗体与包括α亚基和β亚基并正 确组装的Fcfoi结合。
37.如权利要求146中任一项所述的抗体，其中该抗体在pH约6下以小于大约800nM、 小于大约600nM、小于大约300nM、小于大约ΙΟΟηΜ、小于大约50nM、小于大约25nM、小于大约 IOnM或者小于大约5nM的IC5tl抑制IgG-Fc的结合。
38.如权利要求146中任一项所述的抗体，其中该抗体为可溶性Fab。
39.如权利要求146中任一项所述的抗体，其中该抗体通过其抗原结合域以及其Fc区 与Fcfoi结合。
40.如权利要求146中任一项所述的抗体，其中该抗体与Fcfoi的结合在2-10的范围 内是大致上PH独立的。
41.如权利要求H6中任一项所述的抗体，其中该抗体与Fcfoi的结合在6-8的范围内 是大致上PH独立的。
42.如权利要求146中任一项所述的抗体，其中该抗体在pH7. 5具有小于0.01、0. 001、0· 0001、0. 00001s-1 的 k离解。
43.如权利要求146中任一项所述的抗体，其中该抗体与Fcfoi的结合是大致上pH依 赖的。
44.如权利要求146中任一项所述的抗体，其中相对于大鼠Fcfoi，该抗体以pH-依赖 性或pH-独立性的方式优先与人Fcfoi结合。
45.如权利要求116中任一项所述的抗体，其中该抗体在内体中或在内体条件下与 FcRn结合。
46.如权利要求H6中任一项所述的抗体，其中该抗体在pH7. 5不释放Fcfoi。
47.如权利要求116中任一项所述的抗体，其中当施用于受治疗者时，该抗体引起与 自身免疫性疾病相关联的症状的改善。
48.如权利要求H6中任一项所述的抗体，其中该HC可变域序列和该LC可变域序列 为同一多肽链的组分。
49.如权利要求H6中任一项所述的抗体，其中该HC可变域序列和该LC可变域序列 为不同多肽链的组分。
50.如权利要求116中任一项所述的抗体，其中该抗体为全长抗体。
51.如权利要求116中任一项所述的抗体，其中该抗体为人抗体或人源化抗体或者在 人中具有非免疫原性。
52.如权利要求116中任一项所述的抗体，其中该抗体包含人抗体框架区。
53.如权利要求146中任一项所述的抗体，其中该抗体包含Fc域。
54.如权利要求116中任一项所述的抗体，其中该抗体为鼠抗体。
55.如权利要求116中任一项所述的抗体，其中该抗体为单克隆抗体。
56.如权利要求116中任一项所述的抗体，其中该抗体为嵌合的或人源化的。
57.如权利要求146中任一项所述的抗体，其中该抗体选自由Fab、F(ab)‘ 2、Fv和 ScFv组成的组。
58.如权利要求H6中任一项所述的抗体，其中该抗体与Fcfoi的结合在pH6.0到8.0 的范围内独立于pH。
59.一种药物组合物，包含权利要求1-58中任一项所述的抗体和药学上可接受的载体。
60.一种分离的核酸，包含编码多肽的序列，所述多肽包括与M0171-A03、M0171-A01、 M0159-A07或M0161-B04的可变域序列至少80%相同的序列。
61.一种分离的核酸，包含编码多肽的序列，所述多肽包括权利要求1-58中任一项所 述的抗体的第一和/或第二免疫球蛋白可变域。
62 一种载体，包含权利要求61或62所述的核酸序列。
63.一种宿主细胞，包含权利要求61或62所述的核酸。
64.一种检测样品中的Fcfoi的方法，该方法包括将所述样品接触权利要求1-58中任一项所述的抗体；并且如果存在，检测在所述抗体和Fcfoi之间的相互作用。
65.如权利要求64所述的方法，其中该抗体还包含可检测标记。
66.一种检测受治疗者中的Fcfoi的方法，该方法包括向受治疗者施用还包含可检测标记的权利要求1-58中任一项所述的抗体；并且在受治疗者中检测该标记。
67.如权利要求66所述的方法，其中该检测包括对受治疗者成像。
68.一种调节Fcfoi活性的方法，该方法包括将Fcfoi接触权利要求1-58中任一项所述的抗体，由此调节Fcfoi的活性。
69.如权利要求68所述的方法，其中该Fcfoi位于人受治疗者中。
70.如权利要求68所述的方法，其中该抗体阻止Fcfoi与内源性Ig结合。
71.如权利要求68所述的方法，其中该抗体阻止Fcfoi与治疗性抗体结合。
72.如权利要求68所述的方法，其中该Fcfoi位于上皮细胞的内体。
73.如权利要求68所述的方法，其中该Fcfoi位于内皮细胞的内体。
74.如权利要求68所述的方法，其中该Fcfoi位于细胞表面。
75.一种治疗自身免疫性疾病和/或调节自身免疫性疾病的症状的方法，该方法包括 施用足以调节所述症状的量的权利要求1-58中任一项所述的抗体。
76.如权利要求75所述的方法，其中该自身免疫性疾病是选自以下组成的组的疾病 类风湿关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、重症肌无力(MG)、格雷夫斯病、特发性血小板 减少性紫癜(ITP)、格林-巴利综合征、自身免疫性心肌炎、膜性肾小球肾炎、糖尿病、I型或 II型糖尿病、多发性硬化症、雷诺氏综合征、自身免疫性甲状腺炎、胃炎、乳糜泻、白癜风、肝 炎、原发性胆汁性肝硬化、炎症性肠病、脊椎关节病、实验性自身免疫性脑脊髓炎、免疫性嗜 中性粒细胞减少症、青少年发病型糖尿病、和与细胞因子、结核病中常见的T淋巴细胞介导 的迟发型超敏反应相关的免疫反应、结节病和多肌炎、多动脉炎、皮肤血管炎、天疱疮、类天 疱疮、肺出血肾炎综合征、川崎氏病、系统性硬化症、抗磷脂综合征和干燥综合征。
77.如权利要求76所述的方法，其中该天疱疮为寻常性天疱疮、落叶性天疱疮或副肿 瘤性天疱疮。
78.如权利要求75所述的方法，其中该抗体缩短内源性IgG的半衰期。
79.—种调节循环IgG的半衰期/水平的方法，该方法包括确认需要调节循环IgG的半衰期/水平的受治疗者；并且向受治疗者施用有效调节受治疗者体内循环IgG的半衰期/水平的量的权利要求1-58 中任一项所述的抗体。
80.如权利要求79所述的方法，其中该方法降低循环IgG的半衰期/水平。
81.如权利要求79所述的方法，其中该受治疗者为人。
82.如权利要求79所述的方法，其中施用该抗体并联合非权利要求1-58中任一项所述 抗体的抗自身免疫性疾病的药剂或疗法以降低循环IgG的半衰期/水平。
83.一种治疗或预防自身免疫性疾病的方法，该方法包括将权利要求1-58中任一项 所述抗体施用于患有该疾病或有发展该疾病的风险的受治疗者。
84.如权利要求83所述的方法，其中该自身免疫性疾病以不需要的循环IgG为特征。
85.如权利要求83所述的方法，其中该抗体缩短内源性IgG的半衰期。
86.如权利要求83所述的方法，其中该自身免疫性疾病为选自以下的疾病类风湿关 节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、重症肌无力(MG)、格雷夫斯病、特发性血小板减少性紫 癜(ITP)、格林-巴利综合征、自身免疫性心肌炎、膜性肾小球肾炎、糖尿病、I型或II型 糖尿病、多发性硬化症、雷诺氏综合征、自身免疫性甲状腺炎、胃炎、乳糜泻、白癜风、肝炎、 原发性胆汁性肝硬化、炎症性肠病、脊椎关节病、实验性自身免疫性脑脊髓炎、免疫性嗜中 性粒细胞减少症、青少年发病型糖尿病、和与细胞因子、结核病中常见的T淋巴细胞介导的 迟发型超敏反应相关的免疫反应、结节病和多肌炎、多动脉炎、皮肤血管炎、天疱疮、类天疱 疮、肺出血肾炎综合征、川崎氏病、系统性硬化症、抗磷脂综合征和干燥综合征。
87.如权利要求86所述的方法，其中该天疱疮为寻常性天疱疮、落叶性天疱疮或副肿 瘤性天疱疮。
88.一种治疗或预防自身免疫性疾病的方法，该方法包括将权利要求1-58中任一项所述的抗体联合用于治疗或预防该疾病的第二疗法，施用 于患有该疾病或有发展该疾病的风险的受治疗者。
89.如权利要求88所述的方法，其中该第二疗法包括静脉内Ig疗法；非类固醇抗炎药 物(NSAID)；皮质类固醇；环孢菌素、雷帕霉素、子囊霉素，或其免疫抑制类似物，例如，环孢 菌素A、环孢菌素GJK-506、雷帕霉素、40-0-(2-羟基)乙基-雷帕霉素；环磷酰胺；硫唑嘌 呤；甲氨蝶呤；布喹那；FTY 720 ；来氟米特；咪唑立宾，霉酚酸，霉酚酸酯，15-脱氧精胍菌 素；免疫抑制性单克隆抗体，例如，白细胞受体的单克隆抗体，例如，MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、 ⑶25、⑶^、B7、⑶45或⑶58或其配体；其他免疫调节化合物，例如CTLA4Ig ；或其他粘附分 子抑制剂，如mAb或低分子量抑制剂，包括选择蛋白拮抗剂和VLA-4拮抗剂。
90.一种降低个体中不需要的抗体的浓度的方法，包括向该个体施用治疗有效剂量的 根据权利要求1-58中任一项所述的抗体或其片段的步骤。
91.如权利要求90所述的方法，其中在药学上可接受的载体中施用该抗体或其片段。
92.如权利要求90所述的方法，其中该个体为人。
93.如权利要求90所述的方法，其中与佐剂一起施用该抗体或其片段。
94.如权利要求90所述的方法，其中该不需要的抗体为那他珠单抗。
95.如权利要求90所述的方法，其中该不需要的抗体为非自身人类白细胞抗原。
96.如权利要求95所述的方法，其中所施用的抗体或其片段与器官移植联合施用。
97.一种减少个体内IgG与FcRn结合的方法，包括以下步骤提供与人FcRn结合、针对人FcRn重链或其片段而生成、为IgG与人Fcfoi结合的非竞 争性抑制剂并且不与β 2-微球蛋白结合的抗体或其片段；并且以足够降低个体内IgG与Fcfoi结合的量向个体施用该抗体或其片段。
98.如权利要求97所述的方法，其中该个体患有自身免疫性疾病或同种免疫疾病。
99.如权利要求97所述的方法，其中该个体为器官移植接受者。
100.如权利要求97所述的方法，其中已向该个体施用治疗性抗体。
101.如权利要求97所述的方法，其中该自身免疫性疾病为免疫性血小板减少症。
102.如权利要求97所述的方法，其中该自身免疫性疾病为免疫性天疱疮。
103.如权利要求97所述的方法，其中该个体为人。
104.如权利要求97所述的方法，其中以lmg/kg到2g/kg的剂量施用该抗体。
105.如权利要求97所述的方法，其中以lmg/kg到200mg/kg的剂量施用该抗体。
106.—种抑制个体内IgG抗体水平的方法，包括以下步骤提供与人Fcfoi结合、针对人Fcfoi重链或其片段而生成、为IgG与人Fcfoi结合的非竞 争性抑制剂并且不与β 2-微球蛋白结合的抗体或其片段；并且以足够抑制个体内IgG抗体的水平的量向个体施用该抗体或其片段。
107.如权利要求106所述的方法，其中该IgG抗体为治疗性IgG抗体。
108.如权利要求107所述的方法，其中该治疗性IgG抗体为那他珠单抗。
109.如权利要求106所述的方法，其中该IgG抗体为非自身人类白细胞抗原。
110.如权利要求106所述的方法，其中该方法还包括血浆置换步骤。
全文摘要
本公开提供，尤其是，与FcRn结合的蛋白，例如以高亲和性和选择性抑制FcRn的免疫球蛋白。FcRn结合蛋白可用于治疗多种疾病包括自身免疫性疾病。
文档编号C07K16/28GK102149729SQ200980124409
公开日2011年8月10日 申请日期2009年4月24日 优先权日2008年4月25日
发明者克莱夫·伍德, 克里斯托弗·滕霍尔, 凯文·麦克唐奈, 刘立明, 珍妮弗·杜蒙, 罗伯特·查尔斯·拉德纳, 艾伦·J·比通蒂, 詹姆斯·斯泰托, 阿鲁穆加姆·穆鲁加南达姆, 阿龙·萨托 申请人:戴埃克斯有限公司, 百健艾迪亨莫菲力奥公司