专利名称：小八角莲中提取纯化鬼臼毒素的工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种从天然植物小八角莲中提取纯化鬼白毒素的工艺。
背景技术：
鬼臼毒素属于木脂素类，主要存在于小檗科足叶草属、鲜黄莲属、山荷叶属和八角 莲属植物中，1820年美国药典收载，被用于治疗尖锐湿疣。0.5%鬼白毒素酊剂是世界卫生 组织(WHO)推荐的治疗性病尖锐湿疣的首选药物。鬼白毒素几乎能治疗所有的疣，而且比 其他的方法疗程短、疗效显著、副作用少。鬼白毒素和其类似化合物还具有对抗麻疹、单纯 疱疹和抗细胞巨化病毒等作用，还被用作生物农药。但抗肿瘤和抗病毒是其最重要的作用， 鬼臼毒素衍生物依托泊苷、替尼泊苷已被成功用于临床治疗各种肿瘤。通常，鬼白毒素是从 足叶草属根茎中提取分离，然而，从此单一植物资源中提取鬼白毒素作为药物和合成依托 泊苷和新衍生物的半合成物的原料药是十分有限的。目前，鬼白毒素获得主要有两条途径，一条途径是化学全合成，另一条途径是从天 然植物中提取分离。化学全合成技术难度高，合成成本高，很不经济。从植物中直接提取鬼 臼毒素，在目前看来还是最有效、最经济、最迅速的办法，但也有许多亟待解决的问题，如资 源持续供给、分离纯化步骤繁多、复杂，也是最难解决的问题之一。由于鬼臼毒素主要存在于小檗科多年生草本类群鬼臼亚科八角莲属(Dysosma Woodson)、桃儿七属(Sinopodophyllum Ying)、山荷叶属(Diphylleia Michx)及足叶草属 (Podophyllum)植物中。这些植物由于都具有盾状着生的叶，茎中具有多数散生微管束，花 不具蜜腺，浆果含鬼白毒素等一些共同特征而被看作一个自然而相对独立的类群，习惯上 称为鬼白类植物。由于，鬼白类植物不仅具有药用价值，而且具有良好的花卉观赏价值。所 以，受到多年来人类采挖的影响，作为提取鬼臼毒素的八角莲、六角莲、中华山荷叶、东北山 荷叶、桃儿七等原植物已濒临灭绝。目前，八角莲已被列为国家二级保护植物。发明人通过专利检索和文献查阅表明，目前鬼白毒素提纯化工艺是甲醇、乙醇等 有机溶剂回流或超声加热提取八角莲、六角莲、桃儿七等植物中的鬼臼毒素，得鬼臼毒素浸 膏，然后采用溶剂萃取，重结晶工艺分离得鬼白毒素，如200710018473. 4发明专利关于鬼 臼毒素分离纯化工艺采用苯为溶剂对鬼白毒素浸膏回流进一步提取，回收溶剂后，对析出 的晶体采用苯_乙醇重结晶，得鬼白毒素_苯加合物，再加热分解加合物，得鬼白毒素白色 粉未；200410052833. 9发明专利关于鬼白毒素分离工艺改进采用石油醚萃取，再用硅胶柱 层析分离纯化，以醇类或酮类与氯仿的混合液进行洗脱，得到鬼白毒素；200910047696. 2 发明专利关于鬼白毒素分离纯化工艺采用二氯甲烷萃取，再以硅胶柱层析分离纯化，以丙 酮+ 二氯甲烷混合洗脱剂洗脱，得到鬼白毒素。但以上工艺也存在着不够环保，分离纯化步 骤繁多、复杂的问题。
发明内容
本发明的目的是为了提供一种可避开现有已濒临灭绝的可提取鬼臼毒素植物，开辟一个新原料供应渠道，并提供一种可有效的从该原料中提取并纯化鬼白毒素的新工艺， 整个工艺具有绿色环保，且操作简单，易于工业化，工艺所得鬼白毒素纯度高的特点。本发明的目的可以通过如下措施来实现本发明包括如下步骤取小八角莲根茎粉碎成粗粉，通过有机溶剂对小八角莲粗粉进行预处理；加5 15倍量浓度为60% 90%的热回流提取有机溶剂在温度为70°C 95°C的热水中回流提取 60 120分钟并过滤，滤渣在70°C 95°C的温度下加10 25倍量浓度为60% 90%相同 的热回流提取有机溶剂继续热回流提取80 150分钟后再次过滤，合并两次滤液，回收有 机溶剂后用适量水定容，得到鬼白毒素提取液；用鬼白毒素提取液制备含生药量为0. 12g/ mL 0. 18g/mL的溶液作为上样液，选择净化好的大孔吸附树脂作为上柱树脂，以lBV/h 3BV/h的流速进行上样并充分吸附后，分别用水、8 12%乙醇依次洗去杂质，再用浓度为 30% 70%的解吸剂以3BV/h 6BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱部分，回收解吸剂后用适 量水定容，得到鬼白毒素纯化液；对于小八角莲粗粉进行预处理的有机溶剂是乙醇、丙酮、正丁醇、异丙醇、丙二醇、 丙三醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯中的一种或几种混合；用于热回流提取的有机溶剂是乙醇、丙酮、正丁醇、异丙醇、丙二醇、丙三醇、乙酸 乙酯或乙酸丁酯；用于纯化的解吸剂是乙醇、丙酮、正丁醇、异丙醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯、乙酸 丁酯中的一种或几种混合。上述方案中用于纯化的大孔吸附树脂是LSA5B、HPD100, HPD400、HPD600、HPD800、 DlOl 或 AB-8。将得到鬼白毒素纯化液回收有机溶剂，放置，干燥，得鬼白毒素。本发明所述新工艺具有如下优点本发明采用的原料为小八角莲，为小檗科八角 莲属植物，在我国湖南等地有广泛分布，是八角莲属植物在湖南省分布最普遍的一种。其根 及根茎入药，具有清热解毒、散结祛瘀的功效。但目前对小八角莲化学成分的研究在国内外 均未见报道。因而，发明人对从小八角莲中提取分离鬼白毒素进行研究，并获取从小八角 莲中提取并纯化鬼白毒素的新工艺，可为医药工业生产依托泊干等抗肿瘤药物创造新的条 件。另外，本发明采用的是乙醇、丙酮、正丁醇、异丙醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯 等无毒有机溶剂及其混合有机溶剂对小八角莲粗粉进行预处理，使小八角莲粗粉处于强渗 促溶环境下。本发明工艺简便可行，所需设备简单，成本低。本发明利用木质素类物质的溶 解特性，将原料中的鬼白毒素能够比较完全地提取并纯化。本发明所采用的溶剂均是无毒 有机溶剂，且有机溶剂还可回收，再利用；所采用的大孔吸附树脂无毒、安全、价廉、可重复 利用。无污染环境的“三废”产物产生。整个工艺绿色环保，且操作简单，易于工业化，工艺 所得鬼白毒素纯度可达98%以上。
图1为本发明的工艺流程图。
具体实施例方式本发明还将结合实施例做进一步详述，但本发明不仅限于所述实施例。实施例一取小八角莲根茎粉碎成粗粉，以乙醇为有机溶剂，对小八角莲粗粉进行预处理，使 小八角莲粗粉处于强渗促溶环境，再加9倍量浓度为80%的乙醇在90°C的热水中热回流提 取60分钟并过滤，滤渣加7倍量浓度为80%的乙醇继续在100°C的热水中热回流提取45分 钟后再次过滤，合并两次滤液，回收乙醇后用适量水定容，得到鬼白毒素提取液。取鬼臼毒 素提取液制备成含小八角莲生药量为0. 121g/mL的溶液作为上样液，选择净化好的LSA5B 大孔吸附树脂作为上柱树脂，以2BV/hr流速进行上样并充分吸附后，分别用水、10%乙醇 各5BV依次洗去杂质，再用5BV的浓度为70%乙醇作为解吸剂进行洗脱，流速控制在4BV/ h，接取70%乙醇的洗脱液，回收乙醇后用适量水定容，得到鬼白毒素纯化液。回收有机溶 剂，放置，干燥，得鬼白毒素。鬼白毒素纯度在98. 2%以上。实施例二 取小八角莲根茎粉碎成粗粉，以乙醇和丙酮7 3比例混合有机溶剂，对小八角 莲粗粉进行预处理，使小八角莲粗粉处于强渗促溶环境，再加12倍量浓度为70%的乙醇在 950C的热水中热回流提取80分钟并过滤，滤渣加15倍量浓度为70%的乙醇继续在95°C的 热水中热回流提取120分钟后再次过滤，合并两次滤液，回收乙醇后用适量水定容，得到鬼 臼毒素提取液。取鬼白毒素提取液制备成含小八角莲生药量为0. 152g/mL的溶液作为上样 液，选择净化好的HPD100大孔吸附树脂作为上柱树脂，以2BV/h流速进行上样并充分吸附 后，分别用水、10%乙醇各5BV依次洗去杂质，再用5BV的浓度为50%乙醇作为解吸剂进行 洗脱，流速控制在4BV/h，接取50%乙醇的洗脱液，回收乙醇后用适量水定容，得到鬼臼毒 素纯化液。回收有机溶剂，放置，干燥，得鬼白毒素。鬼白毒素纯度在98. 9%以上。实施例三取小八角莲根茎粉碎成粗粉，以乙醇和乙酸乙酯9 1比例混合有机溶剂，对小八 角莲粗粉进行预处理，使小八角莲粗粉处于强渗促溶环境，再加15倍量浓度为90%的乙醇 在90°C的热水中热回流提取60分钟并过滤，滤渣加20倍量浓度为90%的乙醇继续在90°C 的热水中热回流提取100分钟后再次过滤，合并两次滤液，回收乙醇后用适量水定容，得到 鬼臼毒素提取液。取鬼白毒素提取液制备成含小八角莲生药量为0. 152g/mL的溶液作为上 样液，选择净化好的HPD400大孔吸附树脂作为上柱树脂，以3BV/h流速进行上样并充分吸 附后，分别用水、10%乙醇各5BV依次洗去杂质，再用6BV的浓度为30%乙醇作为解吸剂进 行洗脱，流速控制在3BV/h，接取30%乙醇的洗脱液，回收乙醇后用适量水定容，得到鬼臼 毒素纯化液。回收有机溶剂，放置，干燥，得鬼白毒素。鬼白毒素纯度在99. 3%以上。
权利要求
小八角莲中提取纯化鬼臼毒素的工艺，取小八角莲根茎粉碎成粗粉，通过有机溶剂对小八角莲粗粉进行预处理；加5～15倍量浓度为60％～90％的热回流提取有机溶剂在温度为70℃～95℃的热水中回流提取60～120分钟并过滤，滤渣在70℃～95℃的温度下加10～25倍量浓度为60％～90％的相同的热回流提取有机溶剂继续热回流提取80～150分钟后再次过滤，合并两次滤液，回收有机溶剂后用适量水定容，得到鬼臼毒素提取液；用鬼臼毒素提取液制备含生药量为0.12g/mL～0.18g/mL的溶液作为上样液，选择净化好的大孔吸附树脂作为上柱树脂，以1BV/h～3BV/h的流速进行上样并充分吸附后，分别用水、8～12％乙醇依次洗去杂质，再用浓度为30％～70％的解吸剂以3BV/h～6BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱部分，回收解吸剂后用适量水定容，得到鬼臼毒素纯化液；对于小八角莲粗粉进行预处理的有机溶剂是乙醇、丙酮、正丁醇、异丙醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯中的一种或几种混合；用于热回流提取的有机溶剂是乙醇、丙酮、正丁醇、异丙醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯或乙酸丁酯；用于纯化的解吸剂是乙醇、丙酮、正丁醇、异丙醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯中的一种或几种混合。
2.根据权利要求1所述的工艺，用于纯化的大孔吸附树脂是LSA5B、HPD100、HPD400、 HPD600、HPD800、D101 或 AB-8。
3.根据权利要求1或2所述的工艺，将得到鬼白毒素纯化液回收有机溶剂，放置，干燥， 得鬼白毒素。
全文摘要
小八角莲中提取纯化鬼臼毒素的工艺。该工艺是取小八角莲根茎粉碎成粗粉，通过有机溶剂对小八角莲粗粉进行预处理，经热水中回流提取，滤渣继续热回流提取再次过滤，合并两次滤液，回收有机溶剂后用适量水定容，得到鬼臼毒素提取液。用鬼臼毒素提取液制备含生药量为0.12g/mL～0.18g/mL的溶液作为上样液，选择净化好的大孔吸附树脂作为上柱树脂，充分吸附后，分别用水、10％乙醇依次洗去杂质，再用解吸剂进行洗脱，收集洗脱部分，回收解吸剂后用适量水定容，得到鬼臼毒素纯化液。本发明工艺使用的均是无毒有机溶剂，且有机溶剂还可回收，再利用，无污染环境的“三废”产物产生。整个工艺绿色环保，且操作简单，易于工业化，工艺所得鬼臼毒素纯度在98％以上。
文档编号C07D493/04GK101974008SQ201010522960
公开日2011年2月16日 申请日期2010年10月28日 优先权日2010年10月28日
发明者周春山, 张 杰 申请人:中南大学