专利名称：一种丹酚酸a的制备方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种丹酚酸A的制备方法。
背景技术：
丹参是我国传统医学中常用药物之一，有悠久的临床应用历史。丹参的化学成分主要可分为水溶性成分和脂溶性成分两大部分。20世纪早期的研究主要集中在以丹参酮为代表的脂溶性成分方面，经几十年努力，取得巨大成就。从20世纪80年代初，我国药物研究人员对丹参水溶性成分进行了研究，首先报道了丹参水溶性成分丹参素的结构，此后陆续发现了数十种水溶性成分，并明确其化学结构，证明丹参水溶性有效成分主要是酚酸类化合物。从丹参酚酸类化合物药理研究来看，丹酚酸具有多方面的作用，例如，丹酚酸A 对缺血再灌注引起的心肌细胞损伤有明显的保护作用，总丹酚酸表现出较强的抗缺血再灌注性心律失常作用；丹酚酸A、丹酚酸B以及总丹酚酸对小鼠脑缺血再灌注引起的脑损伤有保护作用，可以减少脑组织中MDA含量；丹酚酸抗血栓作用；丹酚酸对肝、肾的保护作用；丹酚酸具有很强的抗氧化作用，可以清除超氧阴离子和释基自由基，抑制脂质过氧化反应，等等。(杜冠华等，基础医学与临床，2000，20 (5) :10 14)丹酚酸A作为丹参的主要活性成分，近来研究较多，有关丹酚酸A制备方法的中国专利有200710070553 一种丹酚酸A的提取纯化方法200710001055 一种丹参丹酚酸A的制备方法200810120784 一种丹酚酸A的精制方法200610165779丹参丹酚酸A的制备方法200910169900 一种丹参丹酚酸A的制备方法200610052442丹参丹酚酸A的制备方法200610012615 一种丹酚酸A的提取方法200610114138 一种丹参酚酸A的制备方法200810000904制备富含丹酚酸A的丹参提取物的方法200610048130制备丹酚酸A的控制方法200710099618 一种丹参丹酚酸A的制备方法
发明内容
本发明在现有技术的基础上，对丹酚酸A制备方法进行了改进，通过本发明的方法，可以用工业化手段制备纯度高的丹酚酸A，降低了纯化成本，避免有毒有机试剂的使用， 生产上能适应，操作简单，重复性好，单体转移率高。本发明的丹酚酸A制备方法，包括以下步骤步骤一、提取丹参加乙醇提取；
步骤二、粗分离用填装有AB-8大孔吸附树脂的色谱柱对丹酚酸A进行粗分离；步骤三、脱色用聚酰胺柱脱色；步骤四、纯化用MCI-GEL反相精细分离柱和葡聚糖凝胶LH-20柱进一步纯化；步骤五、干燥冷冻干燥。本发明的丹酚酸A制备方法，优选的包括以下步骤步骤一、提取丹参加乙醇提取，滤过，滤液浓缩至无醇味，即得富含丹酚酸A的提取液；步骤二、粗分离将提取液加入填装有AB-8大孔吸附树脂的色谱柱上，用乙醇洗脱，同时用喷有三氯化铁的薄层层析板检测至无蓝色斑点，收集洗脱液，浓缩至浸膏；步骤三、脱色浓浸膏用乙醇溶解，加入聚酰胺柱中，乙醇洗脱，可见柱上有一个明显的黄色色带，用喷有三氯化铁的薄层层析板监测此色带，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点，浓
缩至浸膏；步骤四、纯化浸膏用乙醇溶解，上MCI-GEL反相精细分离柱，用乙醇洗脱，用喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，收集洗脱液，浓缩至浸膏后再用乙醇溶解，上葡聚糖凝胶LH-20柱，用乙醇洗脱，以喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，收集洗脱液，浓缩至无醇；步骤五、干燥冷冻干燥，即得。本发明的丹酚酸A制备方法，优选的包括以下步骤步骤一、提取丹参饮片加乙醇提取2小时，滤过，药渣中加入乙醇继续提取1小时，滤过，合并两次提取液，浓缩至无醇味，加水制成含0. 5g生药/mL的溶液，100°C保温16小时。即得富含丹酚酸A的提取液。步骤二、粗分离将转化后的丹参提取液加入填装有AB-8大孔吸附树脂的色谱柱上，用水冲洗，流速控制在1. 5-2. OBV/h，下接8BV，弃去。换用乙醇洗脱，同时用喷有三氯化铁的薄层层析板检测至无蓝色斑点，下接约0. 8BV，浓缩至浸膏，经HPLC检测，主要是丹酚酸A及少量的丹酚酸B。步骤三、脱色填装生药-填料比为10 1的100-200目的聚酰胺柱，用乙醇处理好后将流动相，将步骤二中的浓浸膏用乙醇溶解，加入柱中，先用乙醇洗脱，流速为1. 0-1. 5BV/h,下接 10BV，弃去。再用乙醇洗脱，可见柱上有一个明显的色带，用喷有三氯化铁的薄层层析板检测此色带，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点，约5BV，浓缩至浸膏。步骤四、纯化浸膏用10倍量的乙醇溶解，上MCI-GEL反相精细分离柱(生药-填料比20 1)， 用乙醇洗脱，流速为lBV/h，用喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，约3BV。浓缩至浸膏后再用乙醇溶解，上葡聚糖凝胶LH-20柱(生药-填料比20 1)，用乙醇洗脱，以喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，约5BV。浓缩至无醇，即得。步骤五、干燥步骤四浓缩液冷冻干燥M小时，即得丹酚酸A。本发明的丹酚酸A制备方法，最优选的包括以下步骤步骤一、提取丹参饮片加6倍50%乙醇提取2小时，滤过，药渣中加入5倍50%乙醇继续提取1 小时，滤过，合并两次提取液，浓缩至无醇味，加水制成含0. 5g生药/mL的溶液，100°C保温 16小时。即得富含丹酚酸A的提取液。步骤二、粗分离将转化后的丹参提取液加入填装有AB-8大孔吸附树脂的色谱柱上，用水冲洗，流速控制在1. 5-2. OBV/h，下接8BV(8倍柱床体积)，弃去。换用95%乙醇洗脱，同时用喷有三氯化铁的薄层层析板检测至无蓝色斑点，下接约0. 8BV,浓缩至浸膏，经HPLC检测，主要是丹酚酸A及少量的丹酚酸B。步骤三、脱色填装生药-填料比为10 1的100-200目的聚酰胺柱，用乙醇处理好后将流动相调整为40%乙醇，将步骤二中的浓浸膏用40%乙醇溶解，加入柱中，先用40%乙醇洗脱，流速为1. 0-1. 5BV/h,下接10BV，弃去。再用60%乙醇洗脱，可见柱上有一个明显的色带，用喷有三氯化铁的薄层层析板检测此色带，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点，约5BV，浓缩
至浸膏。步骤四、纯化浸膏用10倍量的20%乙醇溶解，上MCI-GEL反相精细分离柱(生药-填料比 20 1)，用20%乙醇洗脱，流速为lBV/h，用喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，约3BV。浓缩至浸膏后再用20%乙醇溶解，上葡聚糖凝胶 LH-20柱(生药-填料比20 1)，用20%乙醇洗脱，以喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，约5BV。浓缩至无醇，即得。步骤五、干燥步骤四浓缩液经预冻4小时以上，_50°C干燥M小时，即得丹酚酸A。本发明的丹酚酸A制备方法，其中最优选的方法是经过筛选获得的，筛选过程如下(一)提取工艺采用水、0. 45% NaHCOjK溶液、50%乙醇、80%乙醇及95%乙醇五种溶剂进行提取对比试验，发现只有0. 45% NaHCO3水溶液可以提取得到丹酚酸A，但是含量较低，而其余四种溶剂提取液中均以丹酚酸B为主。
通过考察转化的最佳溶剂、最佳pH及最佳时间，得到以下提取工艺丹参饮片加6倍50%乙醇提取2小时，滤过，药渣中加入5倍50%乙醇继续提取1 小时，滤过，合并两次提取液，浓缩至无醇味，加水成为含0. 5g生药/mL的溶液，100°C保温 16小时。即得富含丹酚酸A的提取液。( 二)纯化工艺步骤一、粗分离在前期研究丹酚酸L和M时，发现AB-8大孔吸附树脂对丹酚酸A的吸附能力要强于其余水溶性成分，并且解吸快，解吸率高，因此该步骤选择了 AB-8.生药-树脂比为 3:1。具体工艺如下将转化后的丹参提取液加入填装有AB-8大孔吸附树脂的色谱柱上，用30%冲洗， 流速控制在1. 5-2. OBV/h,接8BV(8倍柱床体积)，弃去。换用95%乙醇洗脱，流速控制在 1. 5-2. OBV/h,同时用喷有三氯化铁的薄层层析板检测至无蓝色斑点，下接约0. 8BV，浓缩至浸膏，经HPLC检测，主要是丹酚酸A极少量丹酚酸B，见图1。步骤二、脱色从上一步骤中得到的丹酚酸溶液有较深的颜色，因此需要解决脱色问题，此步选择了 D101、LS-18、LS-300、ADS-7、D301、D201、201 X 4 和聚酰胺八种填料，结果表明，D101、 LS-18、LS-300、ADS-7基本没有脱色作用。而D301、D201、201 X 4对丹酚酸A有很强的死吸附作用，被吸附后均无法被洗脱。聚酰胺既具有很好的脱色作用，而且还具有很好的分离效^ ο综上所述，此步骤选择聚酰胺为最佳脱色填料，具体工艺如下填装生药-填料比为10 1的100-200目的聚酰胺，用乙醇处理好后将流动相调整为40%乙醇，将步骤二中的浓浸膏用40%乙醇溶解，加入柱中，先用40%乙醇洗脱，流速为1. 0-1. 5BV/h，下接10BV，弃去。再用60%乙醇洗脱，可见柱上有一个明显的黄色色带，用喷有三氯化铁的薄层层析板监测此色带，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点，约5BV，浓缩至浸膏。步骤三、纯化在不使用有机溶剂的前提下，纯化过程中可供选择的填料比较有限，在比较了葡聚糖凝胶LH-20及MCI之后，经反复试验，最终选择了先经过MCI，然后再经过葡聚糖凝胶的方法，纯化工艺具体如下浸膏用10倍量的20%乙醇溶解，上MCI-GEL反相精细分离柱(生药-填料比 20 1)，用20%乙醇洗脱，流速为lBV/h，用喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，约3BV。浓缩至浸膏后再用20%乙醇溶解，上葡聚糖凝胶 LH-20柱(生药-填料比20 1)，用20%乙醇洗脱，以喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为上，约5BV。浓缩至无醇，即得。步骤四干燥由于在直接减压干燥过程中丹酚酸A容易被氧化变色，因此最后选择了冷冻干燥。工艺为预冻4小时以上，-50°C干燥M小时，即得丹酚酸A。检测图见图2。本发明还包括一种丹酚酸A的纯化方法，包括以下步骤取上述方法得到的丹酚酸A用乙醇溶解，加入填装有葡聚糖凝胶LH-20的柱中，用乙醇洗脱，以喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，浓缩至无醇，冷冻干燥，即得。优选的纯化方法包括以下步骤取上述方法得到的丹酚酸A，用20%乙醇溶解，加入填装有葡聚糖凝胶LH-20的柱中，用20%乙醇洗脱，以喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，浓缩至无醇，冷冻干燥，即得。本发明得到的制备工艺操作简单，采用乙醇-水体系，无毒无有机污染，可以大批量制备。可以实现制备含量90%以上原料药。本发明工艺紧密联系生产实际条件，因此，可以实现产业化。
图1粗分离后的样品HPLC检测2丹酚酸A单体HPLC检测图
具体实施例方式下面结合实施例对本发明的药物做进一步说明，下述各实施例仅用于说明本发明而并非对本发明的限制。实施例11、含量大于90%样品的制备2kg丹参饮片，用6倍、5倍量50 %乙醇提取两次Qh，lh)，滤过，合并提取液，浓缩至RDl. 20 (800C )，加水至4L，100°C保温16小时。即得富含丹酚酸A的提取液。将转化后的丹参提取液加入填装有700gAB_8大孔吸附树脂的色谱柱上，用30% 乙醇冲洗，流速控制在1. 5-2. OBV/h,下接9L，弃去。换用95%乙醇洗脱，同时用喷有三氯化铁的薄层层析板检测至无蓝色斑点，下接1L，浓缩至浸膏。取100gl00-200目的聚酰胺，用乙醇处理好后将流动相调整为40%乙醇，将浓浸膏用40 %乙醇溶解，加入柱中，先用40 %乙醇洗脱，下接5L，弃去。再用60 %乙醇洗脱，可见柱上有一个明显的色带，用喷有三氯化铁的薄层层析板检测此色带，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点，约2. 5L，浓缩至浸膏。浸膏用10倍量的20%乙醇溶解，上装有IOOmL MCI-GEL反相精细分离的柱，用 20%乙醇洗脱，用喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，下接500ml。浓缩至无醇，冷冻干燥，得6. 5g丹酚酸A单体，批号20080920。2、含量大于98%样品的制备取90%以上的丹酚酸A3g，用20%乙醇溶解，加入填装有IOOg葡聚糖凝胶LH-20 的柱中，用20%乙醇洗脱，以喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，约1L。浓缩至无醇，冷冻干燥，即得，共1. 68g，批号20090927。3、含量测定1、仪器及色谱条件仪器安捷伦1100高效液相色谱仪，四元泵，紫外检测器。色谱柱Agilent C18分析柱(4. 6mmX 250mm, 5 μ m)；流动相采用梯度洗脱，见表1 ；流速=ImL · min—1 ；检测波长 280nm ；柱温:30°C。
表1色谱条件梯度
溶剂-时间(min)0815 20 25 80% 乙腈+20%(0.02% 磷酸) 10% 22% 26% 10% 10% 0.02% 磷酸水溶液90% 78% 74% 90% 90% 2、对照品溶液剂待测样品溶液的配制 取丹酚酸A对照品(购于天津一方科技)10mg，精密称定，置IOOml容量瓶中，用甲醇溶解，并定溶至刻度，即得浓度为0. llmg/ml的对照品溶液。分别取丹酚酸A粗品及高纯度丹酚酸AlOmg，每个样品平行取两份，精密称定，置 IOOml容量瓶中，用甲醇溶解，并定溶至刻度，摇勻，待测。3、测定取对照品溶液及样品溶液各10 μ L，进行测定，每个样平行进两针。4、结果，见表2。表2丹酚酸A样品含量测定结果
样品名称百分含量(％)
J、}酚酸 A粗品 2009080291.2%丹酚酸A粗品 2009092092% 高纯度」、]_酚酸八20090812 98% 高纯度丹酚酸A2009CW27 98.4%实施例2步骤一、提取丹参饮片加95%乙醇提取2小时，滤过，药渣中加入95 %乙醇继续提取1小时，滤过，合并两次提取液，浓缩至无醇味，加水制成含0. 5g生药/mL的溶液，100°C保温16小时。 即得富含丹酚酸A的提取液。步骤二、粗分离将转化后的丹参提取液加入填装有AB-8大孔吸附树脂的色谱柱上，用水冲洗，流速控制在1. 5-2. OBV/h，下接8BV，弃去。换用50%乙醇洗脱，同时用喷有三氯化铁的薄层层析板检测至无蓝色斑点，下接约0. 8BV,浓缩至浸膏，经HPLC检测，主要是丹酚酸A及少量的丹酚酸B。步骤三、脱色填装生药-填料比为10 1的100-200目的聚酰胺柱，用50 %乙醇处理好后将流动相，将步骤二中的浓浸膏用50 %乙醇溶解，加入柱中，先用50 %乙醇洗脱，流速为 1. 0-1. 5BV/h，下接10BV，弃去。再用50%乙醇洗脱，可见柱上有一个明显的色带，用喷有三氯化铁的薄层层析板检测此色带，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点，约5BV，浓缩至浸膏。
步骤四、纯化浸膏用10倍量的50%乙醇溶解，上MCI-GEL反相精细分离柱(生药-填料比 20 1)，用50%乙醇洗脱，流速为lBV/h，用喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，约3BV。浓缩至浸膏后再用50%乙醇溶解，上葡聚糖凝胶 LH-20柱(生药-填料比20 1)，用50%乙醇洗脱，以喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，约5BV。浓缩至无醇，即得。步骤五、干燥步骤四浓缩液冷冻干燥M小时，即得丹酚酸A。实施例3步骤一、提取丹参饮片加50%乙醇提取2小时，滤过，药渣中加入50%乙醇继续提取1小时，滤过，合并两次提取液，浓缩至无醇味，加水制成含0. 5g生药/mL的溶液，100°C保温16小时。 即得富含丹酚酸A的提取液。步骤二、粗分离将转化后的丹参提取液加入填装有AB-8大孔吸附树脂的色谱柱上，用水冲洗，流速控制在1. 5-2. OBV/h，下接8BV，弃去。换用50%乙醇洗脱，同时用喷有三氯化铁的薄层层析板检测至无蓝色斑点，下接约0. 8BV,浓缩至浸膏，经HPLC检测，主要是丹酚酸A及少量的丹酚酸B。步骤三、脱色填装生药-填料比为10 1的100-200目的聚酰胺柱，用50 %乙醇处理好后将流动相，将步骤二中的浓浸膏用50 %乙醇溶解，加入柱中，先用50 %乙醇洗脱，流速为 1. 0-1. 5BV/h，下接10BV，弃去。再用50%乙醇洗脱，可见柱上有一个明显的色带，用喷有三氯化铁的薄层层析板检测此色带，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点，约5BV，浓缩至浸膏。步骤四、纯化浸膏用10倍量的20 %乙醇溶解，上MCI-GEL反相精细分离柱(生药-填料比 20 1)，用20%乙醇洗脱，流速为lBV/h，用喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，约3BV。浓缩至浸膏后再用20%乙醇溶解，上葡聚糖凝胶 LH-20柱(生药-填料比20 1)，用20%乙醇洗脱，以喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，约5BV。浓缩至无醇，即得。步骤五、干燥步骤四浓缩液冷冻干燥M小时，即得丹酚酸A。
权利要求
1.一种丹酚酸A的制备方法，其特征在于，包括以下步骤 步骤一、提取丹参加乙醇提取； 步骤二、粗分离用填装有AB-8大孔吸附树脂的色谱柱对丹酚酸A进行粗分离； 步骤三、脱色用聚酰胺柱脱色； 步骤四、纯化用MCI-GEL反相精细分离柱和葡聚糖凝胶LH-20柱进一步纯化； 步骤五、干燥冷冻干燥。
2.如权利要求1的方法，其特征在于，包括以下步骤 步骤一、提取丹参加乙醇提取，滤过，滤液浓缩至无醇味，即得富含丹酚酸A的提取液； 步骤二、粗分离将提取液加入填装有AB-8大孔吸附树脂的色谱柱上，用乙醇洗脱，同时用喷有三氯化铁的薄层层析板检测至无蓝色斑点，收集洗脱液，浓缩至浸膏； 步骤三、脱色浓浸膏用乙醇溶解，加入聚酰胺柱中，乙醇洗脱，可见柱上有一个明显的黄色色带，用喷有三氯化铁的薄层层析板监测此色带，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点，浓缩至浸膏；步骤四、纯化浸膏用乙醇溶解，上MCI-GEL反相精细分离柱，用乙醇洗脱，用喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，收集洗脱液，浓缩至浸膏后再用乙醇溶解，上葡聚糖凝胶LH-20柱，用乙醇洗脱，以喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，收集洗脱液，浓缩至无醇； 步骤五、干燥冷冻干燥，即得。
3.如权利要求2的方法，其特征在于，包括以下步骤 步骤一、提取丹参饮片加乙醇提取2小时，滤过，药渣中加入乙醇继续提取1小时，滤过，合并两次提取液，浓缩至无醇味，加水制成含0. 5g生药/mL的溶液，100°C保温16小时，即得富含丹酚酸A的提取液， 步骤二、粗分离将转化后的丹参提取液加入填装有AB-8大孔吸附树脂的色谱柱上，用水冲洗，流速控制在1. 5-2. OBV/h，下接8BV，弃去，换用乙醇洗脱，同时用喷有三氯化铁的薄层层析板检测至无蓝色斑点，下接约0. 8BV,浓缩至浸膏，经HPLC检测，主要是丹酚酸A及少量的丹酚酸 B,步骤三、脱色填装生药-填料比为10 1的100-200目的聚酰胺柱，用乙醇处理好后将流动相，将步骤二中的浓浸膏用乙醇溶解，加入柱中，先用乙醇洗脱，流速为1. 0-1. 5BV/h,下接10BV， 弃去，再用乙醇洗脱，可见柱上有一个明显的色带，用喷有三氯化铁的薄层层析板检测此色带，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点，约5BV，浓缩至浸膏，步骤四、纯化浸膏用10倍量的乙醇溶解，上MCI-GEL反相精细分离柱，生药-填料比20 1，用乙醇洗脱，流速为lBV/h，用喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，约3BV，浓缩至浸膏后再用乙醇溶解，上葡聚糖凝胶LH-20柱，生药-填料比 20 1，用乙醇洗脱，以喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，约5BV，浓缩至无醇，即得，步骤五、干燥步骤四浓缩液冷冻干燥M小时，即得丹酚酸A。
4.如权利要求3的方法，其特征在于，包括以下步骤步骤一、提取丹参饮片加6倍50%乙醇提取2小时，滤过，药渣中加入5倍50%乙醇继续提取1小时，滤过，合并两次提取液，浓缩至无醇味，加水制成含0. 5g生药/mL的溶液，100°C保温16 小时，即得富含丹酚酸A的提取液，步骤二、粗分离将转化后的丹参提取液加入填装有AB-8大孔吸附树脂的色谱柱上，用水冲洗，流速控制在1. 5-2. OBV/h，下接8倍柱床体积，弃去，换用95%乙醇洗脱，同时用喷有三氯化铁的薄层层析板检测至无蓝色斑点，下接约0. 8BV,浓缩至浸膏，经HPLC检测，主要是丹酚酸A及少量的丹酚酸B，步骤三、脱色填装生药-填料比为10 1的100-200目的聚酰胺柱，用乙醇处理好后将流动相调整为40 %乙醇，将步骤二中的浓浸膏用40 %乙醇溶解，加入柱中，先用40 %乙醇洗脱，流速为 1. 0-1. 5BV/h,下接10BV，弃去，再用60%乙醇洗脱，可见柱上有一个明显的色带，用喷有三氯化铁的薄层层析板检测此色带，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点，约5BV，浓缩至浸膏，步骤四、纯化浸膏用10倍量的20%乙醇溶解，上NCI-GEL反相精细分离柱，生药-填料比20 1， 用20%乙醇洗脱，流速为lBV/h，用喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，约3BV，浓缩至浸膏后再用20%乙醇溶解，上葡聚糖凝胶LH-20柱， 生药-填料比20 1，用20%乙醇洗脱，以喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，约5BV，浓缩至无醇，即得，步骤五、干燥步骤四浓缩液经预冻4小时以上，-50°C干燥M小时，即得丹酚酸A。
5.如权利要求4的方法，其特征在于，包括以下步骤取权利要求1-3方法得到的丹酚酸A用乙醇溶解，加入填装有葡聚糖凝胶LH-20的柱中，用乙醇洗脱，以喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，浓缩至无醇，冷冻干燥，即得。
6.如权利要求5的方法，其特征在于，包括以下步骤取权利要求1-3方法得到的丹酚酸A，用20%乙醇溶解，加入填装有葡聚糖凝胶LH-20 的柱中，用20%乙醇洗脱，以喷有三氯化铁的薄层层析板检测，从有蓝色斑点开始接收，至无蓝色斑点为止，浓缩至无醇，冷冻干燥，即得。
全文摘要
本发明涉及一种丹酚酸A的制备方法，该方法包括以下步骤步骤一、提取，丹参加乙醇提取；步骤二、粗分离，用填装有AB-8大孔吸附树脂的色谱柱对丹酚酸A进行粗分离；步骤三、脱色，用聚酰胺柱脱色；步骤四、纯化，用MCI-GEL反相精细分离柱和葡聚糖凝胶LH-20柱进一步纯化；步骤五、干燥，冷冻干燥。
文档编号C07C67/48GK102464586SQ20101054165
公开日2012年5月23日 申请日期2010年11月12日 优先权日2010年11月12日
发明者周水平, 张兰兰, 朱永宏, 罗学军, 陈晓鹏, 靳元鹏 申请人:天津天士力制药股份有限公司