专利名称：罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种从中草药中制备原料药的方法，具体涉及一种从罗布麻叶中提取分离得到高纯度金丝桃苷的制备方法。
背景技术：
罗布麻叶为夹竹桃科植物罗布麻的干燥叶，罗布麻叶中主要含有黄酮类、鞣质、低分子有机酸类、长链脂肪酸酯、醇类、留体类等成分。《本草纲目》记载其有平心悸、止眩晕、消喘止咳、强心利尿之功效。现代研究表明，罗布麻叶具有降血压、降血脂、抗抑郁、镇静、利尿等多种药理作用。金丝桃苷(槲皮素-3-0-β -D-吡喃半乳糖苷)和异槲皮苷等为罗布麻叶中黄酮苷类成分，现代药理研究表明，金丝桃苷具有镇痛、保护心脑血管系统以及抗抑郁等活性。现有技术中分离纯化黄酮的方法较多，主要有色谱法，但是不同植物中含有的黄酮种类和结构都存在很大的差别，从而化学性质存在差异，在提取纯化过程中套用一般的提取纯化方法，得到的黄酮的纯度不高，如要达到很高的纯度，其分离效率较低，成本较高；目前针对罗布麻叶提取纯化高纯度的金丝桃苷的方法报道很少，且罗布麻叶中化学成分复杂，尤其是罗布麻叶中所含有的金丝桃苷和异槲皮苷性质相近，在提取分离过程中非常困难，而金丝桃苷特有的化学结构类型由于其活性强很有利用价值，因此为了充分利用罗布麻叶资源， 满足市场需求，很有必要研发出一套提取纯化效率高、成本低、且金丝桃苷纯度高的制备方法。
发明内容
发明目的本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法。技术方案为了实现以上目的，本发明提供的罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，具体包括以下步骤
(1)取罗布麻叶药材拣选、洗净、干燥后放入提取罐中，加5 10倍量的亲水性溶剂，加热回流广3次，过滤、合并提取液，浓缩，得罗布麻叶提取液，备用；
(2)取步骤⑴得到的罗布麻叶提取液加入乙醇使乙醇的浓度达到759Γ85%，静置、沉淀，滤出溶液，浓缩，得罗布麻叶提取液的醇沉液待用；
(3)取步骤(2)得到的罗布麻叶醇沉液上大孔树脂柱，先分别用水和浓度为10%乙醇洗脱，再用浓度为509Γ70%的乙醇洗脱，薄层色谱检识、收集509Γ70%乙醇洗脱液、浓缩，得到罗布麻叶中金丝桃苷的粗提物，备用；
(4)取步骤(3)得到的金丝桃苷粗提物用乙酸乙酯或正丁醇萃取，得萃取液，浓缩得到萃取物，然后加入亲水性溶剂，加热回流提取3飞次，每次广2小时，趁热过滤，滤液减压浓缩，4°C冷藏结晶，以亲水性溶剂洗涤，干燥，即得纯度为909Γ96%的金丝桃苷。以上所述的罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，步骤(1)和步骤(4)所述加热回流提取的温度为8(T85°C，此操作步骤在加热回流提取过程中以8(T85°C持续回流2小时，可以确保黄酮苷类化合物金丝桃苷提取较完全的同时不会破坏金丝桃苷的活性结构，本分明经成分结构研究和药理活性表明在iio°c左右高温下金丝桃苷的结构会发生变化，如由原来的黄酮苷变成查儿酮苷，从而活性降低，因此本发明在提取和纯化金丝桃苷时就严格控制提取的温度可以保证金丝桃苷结构的稳定性。且步骤⑴和步骤⑷所述的亲水性溶剂为甲醇或浓度 (Γιοο%的乙醇。作为优选方案，步骤(2)中金丝桃苷提取液加入高浓度的乙醇后金丝桃苷提取液中乙醇的浓度为80%，此步骤操作的目的是为了除去金丝桃苷提取液中的大分子化合物如鞣质、多糖等成分，便于后面的纯化工艺，可以大大提高纯化效率。以上所述的制备方法，作为优选方案，步骤(3)中所述的大孔吸附树脂为非极性大孔吸附树脂，作为更优的方案，所述的非极性大孔吸附树脂采用D101、AB-8或HPD100型大孔吸附树脂，本发明通过正交实验筛选不同极性不同型号的大孔树脂、不同浓度(10%、 20%、40%、50%、60%、70%、80%)的乙醇洗脱剂，以金丝桃苷的含量为指标，实验结果表明以非极性大孔吸附树脂D101、AB-8或HPD100型大孔吸附树脂除杂效果比较好，且实验结果表明浓度为10%的乙醇可以洗脱大部分极性稍大的杂质，但是对金丝桃苷成分的洗脱能力弱， 而浓度为509Γ70%的乙醇对金丝桃苷的洗脱能力最好，基本可以洗脱吸附的所有金丝桃苷成分，但是随着乙醇浓度的增加，虽然能够洗脱出金丝桃苷，但是同时也会把一些其它杂质如叶绿素一起洗脱下来，使金丝桃苷的纯度降低，因此本发明经正交实验筛选结果确定出最佳的吸附材料为DlOl、ΑΒ-8或HPD100型大孔吸附树脂和洗脱剂为浓度为50% 70%的乙醇；且步骤(3)先用纯水冲洗大孔树脂可以洗脱掉大部分极性大的水溶性杂质，有利于后续的纯化。本发明在用509Γ70%乙醇洗脱黄酮类成分时以薄层色谱作为检识手段，所用的薄层板为聚酰胺薄层板，展开剂由体积比为6 :4的乙酸乙酯和丙酮组成，显色剂为10%三氯化铝，并在365nm紫外灯下检视，合并含有金丝桃苷成分的流份，去除其它成分的流份，因此分离的目的性强。以上所述的制备方法，作为优选方案，步骤(4)在用乙酸乙酯或正丁醇萃取前先用盐酸调节金丝桃苷粗提物溶液的PH值到3，金丝桃苷化合物为多酚羟基黄酮苷类化合物，本发明经过不同PH值的筛选，当用酸调金丝桃苷粗提物溶液的pH值到3可以有针对性的使带4个酚羟基的金丝桃苷沉降聚集，然后再用溶剂进行有目的萃取，使金丝桃苷快速高效的转溶于萃取溶剂，可以提高萃取效率3倍多，但是酸性又不能太强，因为酸性太强， 金丝桃苷黄酮苷类化合物的苷键容易水解变成苷元和半乳糖，因此，本发明通过大量实验筛选并结合薄层色谱和高效液相色谱检测，确定最佳的PH值为3，在该pH值条件下，既可促使金丝桃苷聚集沉降从而快速转溶于萃取溶剂，且金丝桃苷的苷键不会水解。以上所述的制备方法，本发明考察不同溶剂对金丝桃苷黄酮苷类成分萃取能力， 筛选结果表明金丝桃苷类成分在乙酸乙酯或正丁醇中的溶解度较大，因此作为优选方案， 取步骤(4)得到的金丝桃苷粗提物后再用乙酸乙酯或正丁醇萃取，可以有效的把金丝桃苷粗提物中金丝桃苷黄酮苷类化合物萃取出来，从而和其它杂质相分离，进一步提高金丝桃苷的纯度。以上所述的罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，作为优选方案，乙酸乙酯或正丁醇萃取浓缩得到萃取物，然后加入乙醇或甲醇，8(T85°C加热回流提取3飞次，每次广2小时， 趁热过滤，滤液减压浓缩，4°C冷藏结晶，以乙醇或甲醇洗涤，干燥，即可得纯度为909Γ96% 的金丝桃苷。本发明在乙酸乙酯或正丁醇萃取物的基础上根据金丝桃苷的结构和化学性质，再采用乙醇或甲醇在8(T85°C合适温度下回流提取3飞次可以进一步将金丝桃苷充分提取出来，然后再在优选的4°C下冷却，金丝桃苷可以很好的析晶，从而可以非常有效的将性质相近的金丝桃苷和异槲皮苷两种黄酮苷成分分开，从而可以得到纯度909Γ96%的金丝桃苷。本发明提供的另一种罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，其特征在于包括以下步骤
(1)取罗布麻叶药材拣选、洗净、干燥后放入提取罐中，加5 10倍量的亲水性溶剂，加热回流广3次，过滤、合并提取液，浓缩，得罗布麻叶提取液，备用；
(2)取步骤⑴得到的罗布麻叶提取液加入乙醇使乙醇的浓度达到759Γ85%，静置、沉淀，滤出溶液，浓缩，得罗布麻叶提取液的醇沉液待用；
(3)取步骤(2)得到的罗布麻叶醇沉液上大孔树脂柱，先分别用水和浓度为10%乙醇洗脱，再用浓度为509Γ70%的乙醇洗脱，薄层色谱检识、收集509Γ70%乙醇洗脱液、浓缩，得到罗布麻叶中金丝桃苷的粗提物，备用；
(4)取步骤(3)得到的金丝桃苷粗提物用乙酸乙酯或正丁醇萃取，得萃取液，浓缩得到萃取物，然后加入亲水性溶剂，加热回流提取3飞次，每次广2小时，趁热过滤，滤液减压浓缩，4°C冷藏结晶，以亲水性溶剂洗涤，干燥，得金丝桃苷，然后采用制备液相进一步纯化，得到纯度为98% 99%的金丝桃苷。以上所述的罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，步骤(1)和步骤(4)所述加热回流提取的温度为8(T85°C，步骤(1)和步骤⑷所述的亲水性溶剂为甲醇或浓度1(Γ100%的乙醇。作为优选方案，步骤(2)中金丝桃苷提取液加入高浓度的乙醇后金丝桃苷提取液中乙醇的浓度为80%，此步骤操作的目的是为了除去金丝桃苷提取液中的大分子化合物如鞣质、多糖等成分，便于后面的纯化工艺，可以大大提高纯化效率。以上所述的制备方法，作为优选方案，步骤(3)中所述的大孔吸附树脂为非极性大孔吸附树脂，作为更优的方案，所述的非极性大孔吸附树脂采用D101、AB-8或HPD100型大孔吸附树脂。作为优选方案，以上所述的罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，其中步骤(4)所述的制备液相的色谱条件为色谱柱为安捷伦反相C18柱，流动相为甲醇-0. 5%磷酸水溶液梯度洗脱(梯度洗脱的条件为0至30分钟，甲醇的含量由5%上升到40%，30至60分钟甲醇的含量由40%上升到80%)，检测波长为360 nm，流速为5ml/min，检测器为二极管阵列检测
ο本发明继续通过制备液相方法纯化金丝桃苷，其色谱条件为色谱柱选用安捷伦反相C18柱，流动相经方法学考察以甲醇-0. 5%磷酸水溶液梯度洗脱，作为优选，梯度洗脱的条件为0至30分钟，甲醇的含量由5%上升到50%，30至60分钟甲醇的含量由50%上升到88%，在此流动相条件下，本发明利用二极管阵列检测器，在360nm波长下检测金丝桃苷峰，有目的，有针对性的收集流份，可得到纯度为96、9%的金丝桃苷。有益效果本发明提供的罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法和现有技术相比具有以下优点
(1)本发明提供的制备方法，可操作性强，提取分离效率高，分离得到的金丝桃苷纯度高可达到9(Γ99%以上，符合一类原料药的要求，并且制备工艺中能量消耗少，生产成本低， 环保、可实现工业化大生产。(2)本发明提供的罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，根据罗布麻药材所含化学成分的特点，较系统的考察了，提取温度对金丝桃苷质量的影响，确定最佳温度为8(T85°C，保证金丝桃苷有较大提取效率的同时结果不会发生变化；在分离过程中本发明先采用大孔树脂纯化富集总黄酮，确定最佳的大孔树脂材料，尤其在洗脱剂方面，重点考察了不同浓度的乙醇的洗脱能力，确定洗脱工艺，先用10%乙醇除杂，再用对总黄酮洗脱能力强对杂质洗脱能力弱的5(Γ70%乙醇洗脱，可以最大程度得到纯度高的总黄酮，使纯化效率提高，然后本发明调节PH值后再采用针对金丝桃苷溶解萃取能力强的乙酸乙酯或正丁醇进行萃取，得到萃取液后，本发明再采用乙醇或甲醇在8(T85°C加热回流提取，然后再在优选的冷却温度下，放置析晶，可以非常有效的将性质相近的金丝桃苷和异槲皮苷两种黄酮苷成分分开，从而可以得到纯度达909Γ96%的金丝桃苷。另外本发明还采用制备液相纯化金丝桃苷，用方法学考察确定流动相，并根据金丝桃苷吸收波长，有针对性、高效率的进行分离纯化，能得到纯度达96 99%的金丝桃苷。
具体实施例方式根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。实施例1
罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，具体包括以下步骤
(1)取罗布麻叶药材拣选、洗净、干燥后放入提取罐中，加10倍量的甲醇，在85°C加热回流2次，每次2小时过滤、合并提取液，浓缩，得罗布麻叶提取液，备用；
(2)取步骤(1)得到的罗布麻叶提取液加入乙醇使乙醇的浓度达到80%，静置、沉淀，滤出溶液，浓缩，得罗布麻叶提取液的醇沉液待用；
(3)取步骤(2)得到的罗布麻叶醇沉液上DlOl型大孔树脂柱，首先用水冲洗5 10个柱体积，然后用10%乙醇洗脱广3个柱体积，再用60%乙醇洗脱3飞个柱体积，薄层色谱检识， 收集60%乙醇洗脱，于60 V条件下减压回收溶剂，浓缩，得罗布麻叶粗提物，备用；
(4)取步骤(3)得到的金丝桃苷粗提物用水饱和的正丁醇萃取10次，合并萃取液，减压回收溶剂，真空干燥得罗布麻叶正丁醇萃取物；然后加8倍量95%乙醇，在80°C加热回流提取3次，每次1小时，趁热过滤，滤液减压回收溶剂，然后在4°C冷藏12小时，放置析晶，然后用95%乙醇洗涤，抽干；再加入5倍量95%乙醇在80°C回流提取2次，每次1小时，趁热过滤，滤液减压回收溶剂，4°C放置冷藏12小时，滤取结晶，以95%乙醇洗涤，干燥，高效液相色谱法检测，得到纯度为95%的金丝桃苷。实施例2
罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，具体包括以下步骤
(1)取罗布麻叶药材拣选、洗净、干燥后放入提取罐中，加8倍量的80%乙醇，在85°C加热回流3次，每次1. 5小时过滤、合并提取液，浓缩，得罗布麻叶提取液，备用；
(2)取步骤(1)得到的罗布麻叶提取液加入乙醇使乙醇的浓度达到85%，静置、沉淀，滤出溶液，浓缩，得罗布麻叶提取液的醇沉液待用；
(3)取步骤(2)得到的罗布麻叶醇沉液上AB-8型大孔树脂柱，首先用水冲洗5 10个柱体积，然后用20%乙醇洗脱广3个柱体积，再用55%乙醇洗脱3飞个柱体积，薄层色谱检识， 收集55%乙醇洗脱，于60°C条件下减压回收溶剂，浓缩，得罗布麻叶粗提物，备用；
(4)取步骤(3)得到的金丝桃苷粗提物用稀盐酸调pH=3，再用乙酸乙酯萃取8次，合并萃取液，减压回收溶剂，真空干燥得罗布麻叶乙酸乙酯萃取物；然后加6倍量甲醇，在80°C 加热回流提取3次，每次1小时，趁热过滤，滤液减压回收溶剂，然后在4°C冷藏12小时，放置析晶，然后用甲醇洗涤，抽干；再加入5倍量甲醇在80°C回流提取3次，每次1小时，趁热过滤，滤液减压回收溶剂，4°C放置冷藏12小时，滤取结晶，以甲醇洗涤，干燥，高效液相色谱法检测，得到纯度为95. 8%的金丝桃苷。实施例3
罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，具体包括以下步骤
(1)取罗布麻叶药材拣选、洗净、干燥后放入提取罐中，加10倍量的50%乙醇，在85°C 加热回流2次，每次3小时过滤、合并提取液，浓缩，得罗布麻叶提取液，备用；
(2)取步骤(1)得到的罗布麻叶提取液加入乙醇使乙醇的浓度达到75%，静置、沉淀，滤出溶液，浓缩，得罗布麻叶提取液的醇沉液待用；
(3)取步骤(2)得到的罗布麻叶醇沉液上HPD100型大孔树脂柱，首先用水冲洗5 10个柱体积，然后用10%乙醇洗脱广3个柱体积，再用5(Γ70%乙醇洗脱3飞个柱体积，薄层色谱检识，收集60%乙醇洗脱，于60 V条件下减压回收溶剂，浓缩，得罗布麻叶粗提物，备用；
(4)取步骤(3)得到的金丝桃苷粗提物用，用稀盐酸调ρΗ=3，再采用水饱和的正丁醇萃取10次，合并萃取液，减压回收溶剂，真空干燥得罗布麻叶正丁醇萃取物；然后加10倍量80%甲醇，在80°C加热回流提取3次，每次1小时，趁热过滤，滤液减压回收溶剂，然后在 4°C冷藏12小时，放置析晶，然后用甲醇洗涤，抽干；再加入5倍量80%甲醇在80°C回流提取2次，每次1小时，趁热过滤，滤液减压回收溶剂，4°C放置冷藏12小时，滤取结晶，以甲醇洗涤，干燥，高效液相色谱法检测，得到纯度为96. 2%的金丝桃苷。实施例4
罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，具体包括以下步骤
(1)取罗布麻叶药材拣选、洗净、干燥后放入提取罐中，加10倍量的60%乙醇，在85°C 加热回流2次，每次3小时过滤、合并提取液，浓缩，得罗布麻叶提取液，备用；
(2)取步骤(1)得到的罗布麻叶提取液加入乙醇使乙醇的浓度达到80%，静置、沉淀，滤出溶液，浓缩，得罗布麻叶提取液的醇沉液待用；
(3)取步骤(2)得到的罗布麻叶醇沉液上DlOl型大孔树脂柱，首先用水冲洗5 10个柱体积，然后用10%乙醇洗脱广3个柱体积，再用5(Γ70%乙醇洗脱3飞个柱体积，薄层色谱检识，收集60%乙醇洗脱，于60°C条件下减压回收溶剂，浓缩，得罗布麻叶粗提物，备用；
(4)取步骤(3)得到的金丝桃苷粗提物用，用稀盐酸调pH=3，再采用水饱和的正丁醇萃取8次，合并萃取液，减压回收溶剂，真空干燥得罗布麻叶正丁醇萃取物；然后加10倍量乙醇，在80°C加热回流提取3次，每次1小时，趁热过滤，滤液减压回收溶剂，然后在4°C冷藏 12小时，放置析晶，然后用甲醇洗涤，抽干；再加入6倍量乙醇在80°C回流提取2次，每次1 小时，趁热过滤，滤液减压回收溶剂，4°C放置冷藏12小时，滤取结晶，以甲醇洗涤，干燥，甲醇稀释后上制备液相纯化，得到纯度为98. 6%的金丝桃苷，其色谱条件为色谱柱为安捷伦反相C18柱，流动相为甲醇-0. 5%磷酸水溶液梯度洗脱(梯度洗脱的条件为0至30分钟，甲醇的含量由5%上升到40%，30至60分钟甲醇的含量由40%上升到80%)，检测波长为360nm， 流速为5ml/min，检测器为二极管阵列检测器。实施例5
罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，具体包括以下步骤
(1)取罗布麻叶药材拣选、洗净、干燥后放入提取罐中，加10倍量的甲醇，在85°C加热回流2次，每次2小时过滤、合并提取液，浓缩，得罗布麻叶提取液，备用；
(2)取步骤(1)得到的罗布麻叶提取液加入乙醇使乙醇的浓度达到80%，静置、沉淀，滤出溶液，浓缩，得罗布麻叶提取液的醇沉液待用；
(3)取步骤(2)得到的罗布麻叶醇沉液上DlOl型大孔树脂柱，首先用水冲洗5 10个柱体积，然后用10%乙醇洗脱2 3个柱体积，再用60%乙醇洗脱4飞个柱体积，薄层色谱检识， 收集60%乙醇洗脱，于60 V条件下减压回收溶剂，浓缩，得罗布麻叶粗提物，备用；
(4)取步骤(3)得到的金丝桃苷粗提物，用稀盐酸调pH=3，再用水饱和的正丁醇萃取 12次，合并萃取液，减压回收溶剂，真空干燥得罗布麻叶正丁醇萃取物；然后加8倍量90% 乙醇，在80°C加热回流提取3次，每次1小时，趁热过滤，滤液减压回收溶剂，然后在4°C冷藏12小时，放置析晶，然后用90%乙醇洗涤，抽干；再加入6倍量95%乙醇在80°C回流提取 2次，每次1小时，趁热过滤，滤液减压回收溶剂，4°C放置冷藏12小时，滤取结晶，以95%乙醇洗涤，干燥，以甲醇洗涤，干燥，甲醇稀释后上制备液相纯化，得到纯度为99. 1%的金丝桃苷，其色谱条件为色谱柱为安捷伦反相C18柱，流动相为甲醇-0. 5%磷酸水溶液梯度洗脱 (梯度洗脱的条件为0至30分钟，甲醇的含量由5%上升到40%，30至60分钟甲醇的含量由 40%上升到80%)，检测波长为360 nm，流速为5ml/min，检测器为二极管阵列检测器。发明提供的制备方法，工艺设计合理，操作简单、提取效率高、适合大规模制备，同时制备得到的金丝桃苷纯度可达90、9%，符合一类原料药的要求。以上实施方式只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人了解本发明内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所做的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。
权利要求
1.罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)取罗布麻叶药材拣选、洗净、干燥后放入提取罐中，加5 10倍量的亲水性溶剂，加热回流广3次，过滤、合并提取液，浓缩，得罗布麻叶提取液，备用；(2)取步骤⑴得到的罗布麻叶提取液加入乙醇使乙醇的浓度达到759Γ85%，静置、沉淀，滤出溶液，浓缩，得罗布麻叶提取液的醇沉液待用；(3)取步骤(2)得到的罗布麻叶醇沉液上大孔树脂柱，先分别用水和浓度为10%乙醇洗脱，再用浓度为509Γ70%的乙醇洗脱，薄层色谱检识、收集509Γ70%乙醇洗脱液、浓缩，得到罗布麻叶中金丝桃苷的粗提物，备用；(4)取步骤(3)得到的金丝桃苷粗提物用乙酸乙酯或正丁醇萃取，得萃取液，浓缩得到萃取物，然后加入亲水性溶剂，加热回流提取3飞次，每次广2小时，趁热过滤，滤液减压浓缩，4°C冷藏结晶，以亲水性溶剂洗涤，干燥，即得纯度为909Γ96%的金丝桃苷。
2.根据权利要求1所述的罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(4)所述加热回流提取的温度为8(T85°C，步骤(1)和步骤(4)所述的亲水性溶剂为甲醇或浓度1(Γ100%的乙醇。
3.根据权利要求1所述的罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，其特征在于，步骤(2)中罗布麻叶提取液中加入乙醇使乙醇的浓度为80%。
4.根据权利要求1所述的罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述的大孔树脂为非极性大孔吸附树脂。
5.根据权利要求4所述的罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，其特征在于，所述的非极性大孔吸附树脂为DlOl、ΑΒ-8或HPD100型大孔吸附树脂。
6.根据权利要求1所述的罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，其特征在于，步骤(4)在用乙酸乙酯或正丁醇萃取前先用盐酸调节金丝桃苷粗提物溶液的ρΗ值到3。
7.一种罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)取罗布麻叶药材拣选、洗净、干燥后放入提取罐中，加5 10倍量的亲水性溶剂，加热回流广3次，过滤、合并提取液，浓缩，得罗布麻叶提取液，备用；(2)取步骤⑴得到的罗布麻叶提取液加入乙醇使乙醇的浓度达到759Γ85%，静置、沉淀，滤出溶液，浓缩，得罗布麻叶提取液的醇沉液待用；(3)取步骤(2)得到的罗布麻叶醇沉液上大孔树脂柱，先分别用水和浓度为10%乙醇洗脱，再用浓度为509Γ70%的乙醇洗脱，薄层色谱检识、收集509Γ70%乙醇洗脱液、浓缩，得到罗布麻叶中金丝桃苷的粗提物，备用；(4)取步骤(3)得到的金丝桃苷粗提物用乙酸乙酯或正丁醇萃取，得萃取液，浓缩得到萃取物，然后加入亲水性溶剂，加热回流提取3飞次，每次广2小时，趁热过滤，滤液减压浓缩，4°C冷藏结晶，以亲水性溶剂洗涤，干燥，得金丝桃苷，然后采用制备液相进一步纯化，得到纯度为96% 99%的金丝桃苷。
8.根据权利要求7所述的罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述的制备液相的色谱条件为色谱柱为安捷伦反相C18柱，流动相为甲醇-0. 5%磷酸水溶液梯度洗脱，检测波长为360nm，流速为5ml/min，检测器为二极管阵列检测器。
全文摘要
本发明公开了罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，该制备方法首先确定了最佳提取温度，分离材料，洗脱剂浓度，然后调节pH值后再采用针对金丝桃苷溶解萃取能力强的溶剂进行萃取，得到萃取液后，本发明再采用乙醇或甲醇在80~85℃加热回流提取，然后再在优选的冷却温度下，放置析晶，可以非常有效的将性质相近的金丝桃苷和异槲皮苷两种黄酮苷成分分离，发明还采用制备液相进一步纯化金丝桃苷，用方法学考察确定流动相，并根据金丝桃苷吸收波长，有针对性、高效率的进行分离纯化，能得到纯度达90~99%的金丝桃苷，符合一类原料药的要求。
文档编号C07H1/08GK102190693SQ20111007563
公开日2011年9月21日 申请日期2011年3月29日 优先权日2011年3月29日
发明者刘志辉, 夏建龙, 贾媛, 钱芳, 陆超, 陈武 申请人:江苏省中医院