专利名称：胰高血糖素样肽-1突变体多肽及其制备方法和其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及糖尿病相关的药物领域，具体而言，本发明涉及一种新型胰高血糖素样肽-I (GLP-I)突变体多肽，该多肽具有延长的GLP-I的体内半衰期。本发明还涉及该多肽的制备方法及其应用。
背景技术：
糖尿病是一种遗传因素和多种环境因素相关联的以慢性高血糖为特征的代谢紊乱综合症。由于糖尿病还伴随着诸多并发症，现已成为仅次于恶性肿瘤和心血管疾病之后的第三大健康杀手。1984年,胰高血糖素样肽-I (Glucagon-like peptide-l,GLP_l)被发现，它是一种具有30个氨基酸的肠降血糖素，具有促进胰岛素分泌和生物合成，抑制胰高血糖素的分泌，促进胰岛细胞增殖，抑制胰岛细胞凋亡，保存细胞对血糖的敏感性等多种生理功能。GLP-I与其受体结合后能够增加细胞内cAMP浓度并激活蛋白激酶A(PKA)，通过cAMP/PKA激酶通路增强细胞内胰岛素基因的转录和翻译，并提高对葡萄糖刺激信号的敏感性，从而增加胰岛素分泌量。GLP-I还通过与细胞上的胰高血糖素样肽-I受体(GLP-IR)作用抑制胰高血糖素的分泌，或者间接通过促进胰岛素和生长抑素的分泌来抑制胰高血糖素的分泌。GLP-I作为降血糖药物受到限制的主要原因是GLP-I在体内能够迅速的被二肽基肽酶-IV(DPP-IV)所降解而失去活性。肠促胰岛素类似物(Exendin-4)是一条39个氨基酸组成的直链多肽，最初由南美巨蜥的唾液分离获得。它与人源GLP-I序列有53%的同源性。Exendin-4同样能够和GLP-I受体结合，产生促进胰岛素分泌等生理作用，且Exendin-4的N端第二个氨基酸为甘氨酸，能够耐受血浆中DPP-IV的分解，故Exendin-4被吸收入血后的半衰期较长(tl/2 = 2.4小时)；C端比GLP-I多9个氨基酸，结构上形成了“色氨酸笼” (“Trp-cage”)，能够和GLP-I受体更紧密的结合。由于GLP-I为人源多肽，没有Exendin-4的免疫源性问题，根据其设计的GLP-I类似物在临床试验中副作用较为轻微，已成为设计用于治疗2型糖尿病的GLP-I受体激动剂的理想原型，开发潜力巨大。2010年，诺和诺德公司以GLP-I为原型设计的Liraglutide (中文名利拉鲁肽，商品名Victoza )在美国上市，因其良好的临床效果、较低的副作用以及更好的患者依从度(一天注射一次)赢得了广泛关注，从而掀起了 GLP-I受体激动剂的开发热潮。虽然现在上市的Liraglutide等GLP-1受体激动剂延长了半衰期，但仍需患者每天注射药物，在药物使用舒适度上仍有改进空间。因此有必要进一步提高GLP-I类多肽药物的体内半衰期，提高患者依从度。
发明内容
因此，本发明的目的是针对临床上GLP-I类似物在体内存留时间较短，需要每天注射给药的缺限，提供一种半衰期较长的GLP-I突变体多肽，该GLP-I突变体多肽半衰期较长，不需要每天给患者注射，能够有效地提高患者的依从态度。本发明的另一个目的是提供上述多肽的制备方法，此外，还提供上述多肽在制备治疗糖尿病和肥胖症的药物中的应用。本发明的又一个目的是提供一种以GLP-I突变体多肽作为有效成分的药物组合物。用于实现上述目的的技术方案如下一方面，本发明提供一种胰高血糖素样肽-I突变体多肽,所述突变体多肽是在如下所示的SEQ ID NO I序列基础上突变产生的 7HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGRG36其中，上述序列氨基酸残基第9位Asp、16位Gly和/或27位Val发生点突变为 Cys，并在C末端添加Cys。如上所述的胰高血糖素样肽-I突变体多肽，在第16位Gly和/或第27位Val发生点突变；优选地，在第27位Val发生点突变。如上所述的胰高血糖素样肽-I突变体多肽，优选选自SEQ ID NO 2 7HAEGTFTSCVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRGC37 ；SEQ ID NO 3 :7HAEGTFTSDVSSYLECQAAKEFIAWLCKGRGC37 ;和
tool 7] seq id N04 :7Haegtftsdvssylegqaakefiawlckgrgc37。另一方面，本发明提供一种胰高血糖素样肽-I突变体串联多肽，由上述所述的胰高血糖素样肽-I突变体多肽C末端添加的Cys串联Exendin-4 (31-39)而成，并且所述胰高血糖素样肽-I突变体串联多肽自身折叠成二硫键，所述Exendin-4 (31-39)具有SEQ IDNO 5所示的氨基酸序列。如上所述的胰高血糖素样肽-I突变体串联多肽，其C末端添加的Cys与SEQ IDNO I序列在氨基酸残基第9位Asp、16位Gly或27位Val发生点突变成的Cys形成。如上所述的胰高血糖素样肽-I突变体串联多肽，所述二硫键由胰高血糖素样肽-I突变体多肽C末端添加的Cys与SEQ ID NO I序列在氨基酸残基第16位Gly或27位Val发生点突变成的Cys形成。如上所述的胰高血糖素样肽-I突变体串联多肽，所述二硫键由胰高血糖素样肽-I突变体多肽C末端添加的Cys与SEQ ID NO I序列在氨基酸残基第27位Val发生点突变成的Cys形成。如上所述的胰高血糖素样肽-I突变体串联多肽,所述胰高血糖素样肽-I突变体多肽通过C末端添加的Cys串联1、2或3个Exendin-4 (31-39)。如上所述的胰高血糖素样肽-I突变体串联多肽,所述胰高血糖素样肽-I突变体多肽通过C末端添加的Cys串联2个Exendin-4 (31-39)。如上所述的胰高血糖素样肽-I突变体串联多肽，其优选选自序列为SEQ ID NO6-14的多肽。再一方面，本发明提供如上所述的胰高血糖素样肽-I突变体多肽或如上所述的胰高血糖素样肽-I突变体串联多肽在制备用于治疗和/或预防糖尿病和/或肥胖症的药物组合物中的应用；优选地，所述药物组合物为注射剂；更优选地，所述注射剂为冻干粉针或溶液注射剂。
又一方面，本发明提供一种药物组合物，所述的组合物含有如上所述的胰高血糖素样肽-I突变体多肽或如上所述的胰高血糖素样肽-I突变体串联多肽。如上所述的药物组合物，其还含有还包含一种或多种药学上可接受的载体；优选地，所述药学上可接受的载体选自水溶性填充剂、pH调节剂、稳定剂、注射用水和渗透压调节剂；更优选地，所述水溶性填充剂选自以下的一种或几种甘露醇、低分子右旋糖苷、山梨醇、聚乙二醇、葡萄糖、乳糖和半乳糖；更优选地，所述pH调节剂为生理可接受的酸、碱和/或盐，优选选自以下的一种或几种
非挥发性酸如枸橼酸、磷酸、乳酸、酒石酸或盐酸，碱如氢氧化钾、氢氧化钠或氢氧化钾或氢氧化铵，盐如碳酸钠或碳酸钾或碳酸铵盐，碳酸氢钠或碳酸氢钾或碳酸氢铵盐；更优选地，所述稳定剂为选自以下的一种或几种EDTA_2Na、硫代硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、磷酸氢二钾、碳酸氢钠、碳酸钠、精氨酸、谷氨酸、聚乙二醇6000、聚乙二醇4000、十二烷基硫酸钠或三羟甲基氨基甲烷等，进一步优选自焦亚硫酸钠、磷酸氢二钾、精氨酸、聚乙二醇6000、三羟甲基氨基甲烷中的一种或几种；更优选地，所述渗透压调节剂选自氯化钠和/或氯化钾。本发明的技术方案也可进一步表述如下本发明一方面提供一种GLP-I突变体多肽，所述GLP-I突变体多肽具有SEQ ID NOI所示的序列在氨基酸残基第9位Asp、16位Gly或27位Val发生点突变为Cys，并在C末端添加Cys所产生的氨基酸序列。优选地，在第16位Gly或第27位Val发生点突变。优选地，在第27位Val发生点突变。本发明另一方面还提供上述GLP-I突变体串联多肽，所述突变体串联多肽由上述所述的GLP-I突变体多肽C末端添加的Cys串联Exendin-4 (31-39)而成，并且所述突变体串联多肽自身折叠成二硫键，所述Exendin-4 (31-39)具有SEQ ID NO 5所示的氨基酸序列。优选地，所述二硫键由GLP-I突变体多肽C末端添加的Cys与SEQ IDNO I所示的序列在氨基酸残基第9位Asp、16位Gly或27位Val发生点突变成的Cys形成。优选地，所述二硫键由GLP-I突变体多肽C末端添加的Cys与SEQ IDNO I所示的序列在氨基酸残基第16位Gly或27位Val发生点突变成的Cys形成。优选地，所述二硫键由GLP-I突变体多肽C末端添加的Cys与SEQ IDNO I所示的序列在氨基酸残基第27位Val发生点突变成的Cys形成。优选地，所述GLP-I突变体多肽通过C末端添加的Cys串联1、2或3个Exendin-4(31-39)。优选地，所述GLP-I突变体多肽通过C末端添加的Cys串联2个Exendin-4(31-39)。本发明又一方面还提供上述GLP-I突变体串联多肽的制备方法，该方法包括GLP-I突变体串联多肽经多肽合成仪固相制备后，加入50-100mM的DTT (二硫基苏糖醇)或巯基乙醇进行变性，而后于4°C缓慢氧化或通入氧气形成二硫键，即得。本发明再一方面还提供上述GLP-I突变体串联多肽在制备治疗糖尿病的药物中的应用，以及该多肽复合物在制备治疗和/或预防肥胖症的药物中的应用。并且，所述药物组合物优选为注射剂，更优选地为冻干粉针或溶液注射剂。
本发明的又一方面还提供一种药物组合物，包含上述所述的GLP-I突变体串联多肽。优选地，还包含可接受的辅料成分。现结合本发明的目的对本发明逐一加以描述。(I)GLP-I 多肽本发明所述的GLP-I多肽序列如下SEQ ID NO I 7HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG36(2) GLP-I突变体多肽本发明所述的GLP-I突变体的多肽序列如下序列SEQ ID NO 2 7HAEGTFTSCVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRGC37SEQ ID NO 3 7HAEGTFTSDVSSYLECQAAKEFIAWLCKGRGC37SEQ ID NO 4 7HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLCKGRGC37(3)Exendin-4 (31-39)Exendin-4 (31-39)为天然产物的后 9 个氨基酸，SEQ ID NO 5 31PSSGAPPPS39(4) GLP-I 突变体与 Exendin-4 (31-39)串联多肽三种GLP-I突变体多肽的C端分别串联I个、2个和3个Exendin-4 (31-39)序列，串联后多妝序列如下SEQ ID NO 6-14所不SEQ ID NO 6 HAEGTFTSCVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRGCPSSGAPPPSSEQ ID NO 7 HAEGTFTSCVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRGCPSSGAPPPSPSSGAPPPSSEQ ID NO 8 HAEGTFTSCVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRGCPSSGAPPPSPSSGAPPPSPSSGAPPPSSEQ ID NO 9 HAEGTFTSDVSSYLECQAAKEFIAWLCKGRGCPSSGAPPPSSEQ ID NO 10 HAEGTFTSDVSSYLECQAAKEFIAWLCKGRGCPSSGAPPPSPSSGAPPPSSEQ ID NO 11 HAEGTFTSDVSSYLECQAAKEFIAWLCKGRGCPSSGAPPPSPSSGAPPPSPSSGAPPPSSEQ ID NO 12 HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLCKGRGCPSSGAPPPSSEQ ID NO 13 HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLCKGRGCPSSGAPPPSPSSGAPPPS
SEQ ID NO 14 HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLCKGRGCPSSGAPPPSPSSGAPPPSPSSGAPPPS
(5)本发明的药物组合物本发明的具二硫键的GLP-I突变体串联多肽可以与一种或多种药学上可接受的辅料共同制成药物组合物，这些辅料包括水溶性填充剂、PH调节剂、稳定剂、注射用水、渗透压调节剂等等。本发明所述的水溶性填充剂辅料为选自以下的一种或多种甘露醇、低分子右旋糖苷、山梨醇、聚乙二醇、葡萄糖、乳糖、半乳糖等。所述pH调节剂选自以下的一种或多种枸橼酸、磷酸、乳酸、酒石酸、盐酸等非挥发性的酸，以及氢氧化钾、氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化铵、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铵盐、碳酸氢钠、碳酸氢钾或碳酸氢铵盐等生理可接受的有机或无机酸、碱或盐等。所述稳定剂选自以下的一种或多种EDTA_2Na、硫代硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、磷酸氢二钾、碳酸氢钠、碳酸钠、精氨酸、谷氨酸、聚乙二醇6000、聚乙二醇4000、十二烷基硫酸钠或三羟甲基氨基甲烷等。优选为焦亚硫酸钠、磷酸氢二钾、精氨酸、聚乙二醇6000、三羟甲基氨基甲烷。所述渗透压调节剂为氯化钠和/或氯化钾。(5)注射剂的制备方法本发明的药物组合物可以通过肌肉、静脉内、皮下注射途经进行给药，优选的剂型为冻干粉或溶液注射剂。冷冻干燥注射剂的制备方法取串联多肽溶液适量，加入水溶性填充剂、稳定剂、渗透压调节剂等，加入注射用水适量，调节PH值至4-8使其溶解，加水稀释至适当浓度，加A 0. 1-0. 5%活性炭，在0-10°C下搅拌10-20分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液进行分装，采用冷冻干燥法，制得白色疏松块状物，封口即得，每个规格含有GLP-I突变体串联多肽在5 u g-lmgo注射液的制备方法取串联多肽溶液或冻干粉适量，加入水溶性填充剂、稳定剂、渗透压调节剂等，加入注射用水适量，调节PH值至4-8使其溶解，加水稀释至适当浓度，加A 0. 1-0. 5%活性炭，在0-10°C下搅拌10-20分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液进行分装，封口即得，每个规格含有GLP-I突变体串联多肽在g-lmg。本发明的药物组合物可以通过肌肉、静脉内、皮下注射途经进行给药，优选的剂型为冻干粉或溶液注射剂。虽然剂量依治疗对象、给药方式、症状及其它因素而改变，本发明的组合物在相当宽的剂量范围内是有效的。在成人的治疗中，剂量范围在g/人-Img/人，每日一次或每几日一次给药。实际剂量应该由医生根据有关的情况来决定，这些情况包括被治疗者的身体状态、给药途径、年龄、体重、患者对药物的个体反应，患者症状的严重程度等等，因此上述剂量范围并不是以任何方式限制本发明的范围。本发明利用串联多肽技术，在多肽C末端串联了数个EXendin-4(31-39)序列，增加了多肽与GLP-I受体的结合能力，并在野生GLP-I基础上设计了半胱氨酸突变位点，因此突变多肽能够自身折叠形成二硫键，保护了易受DPP IV降解的多肽N端，克服了半衰期短的问题。所提供的串联突变多肽中，由于C端Exendin-4(31-39)的存在，使其与GLP-I受体的结合能力提高至，而因二硫键的存在而形成的多肽二级结构的保护作用，使得串联突变多肽在体内的半衰期可达到24小时以上，较单独给药的GLP-I的半衰期明显延长，极大地便利了 GLP-I (半衰期仅为2分钟)的临床推广和应用。
以下 ，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中图I本发明所述的GLP-I突变体串联多肽在小鼠体内的降血糖功能实验的结果示意图。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。实施例I GLP-I突变体串联多肽的合成I. I :GLP_1多肽序列的确定、制备和测序验证。以氨基端受Fmoc保护的氨基酸为原料，采用固相合成法于Libertyl单通道全自动微波多肽合成系统(购于美国培安科技公司北京办事处)上进行合成，合成方法参照生产商的仪器说明书进行。经过Fmoc氨基酸(购于上海吉尔生化)的脱保护、耦合以及最后的切割反应，最终形成目的多肽。所得多肽经上海生工生物技术公司测序确认。I. 2 Exendin-4(31-39)的确定、制备和测序验证。以氨基端受Fmoc保护的氨基酸为原料，采用固相合成法于Libertyl单通道全自动微波多肽合成系统上进行合成，合成方法参照生产商的仪器说明书进行。所得多肽经上海生工生物技术公司测序确认。I. 3 :突变体串联多肽的确定、制备和测序验证以氨基端受Fmoc保护的氨基酸为原料，采用固相合成法于Libertyl单通道全自动微波多肽合成系统上进行合成，合成方法参照生产商的仪器说明书进行。所得多肽经上海生工生物技术公司测序确认。GLP-I突变体串联多肽经多肽合成仪固相制备后，加50-100mM的DTT (二硫基苏糖醇)或-巯基乙醇进行变性，而后于4°C缓慢氧化或通入氧气形成二硫键，即得GLP-I突变体串联多妝。所述GLP-I突变体串联多肽由GLP-I突变体多肽通过C末端的Cys串联1、2或3个Exendin-4 (31-39)而成，优选地，所述突变体串联多肽由GLP-I突变体通过C末端的Cys串联2个Exendin-4 (31-39)而成，并且所述GLP-I突变体串联多肽通过C末端的Cys与SEQ ID NO I所示的序列在第9位Asp、16位Gly或27位Val发生点突变成的Cys折叠成二硫键，优选地，所述GLP-I突变体串联多肽通过C末端的Cys与SEQ ID NO I所示的序列在第16位Gly或27位Val发生点突变成的Cys折叠成二硫键，更为优选地，所述GLP-I突变体串联多肽通过C末端的Cys与SEQ ID NO I所示的序列在第27位Val发生点突变成的Cys折叠成二硫键；所述Exendin-4 (31-39)具有SEQ ID NO 5所示的氨基酸序列,所述GLP-I突变体多肽具有SEQ ID NO I所示的序列在氨基酸残基第9位Asp、16位Gly或27位Val发生点突变为Cys，并在C末端添加Cys所产生的氨基酸序列(SEQ ID NO 2-4)，优选地，在第16位Gly发生点突变(SEQ ID NO 3)或第27位Val发生点突变(SEQ ID NO3)，更为优选地，在第27位Val发生点突变(SEQ ID NO 3)。实施例2 GLP-I突变体串联多肽体外GLP-I受体结合实验受体结合实验利用GLP-I受体高表达细胞系INS-I (大鼠P胰岛瘤细胞，ATCC,Manassas, VA)进行。首先将INS-I细胞接种于12孔板上，并于实验前2小时用PBS缓冲液冲洗细胞，而后用4%多聚甲醛室温下固定细胞10分钟。细胞计数后，IO5个细胞/孔分别于GLP-I突变体串联多肽(SEQ ID N06-14)及天然GLP-I共同孵育2小时。PBS将未与细胞结合的多肽冲洗后，使用GLP-1ELISA试剂盒进行检测。从表I可看出，GLP-I突变体串联多肽较大提高了其与GLP-I受体的结合能力，相比GLP-I而言。表I、GLP-I突变体串联多肽及GLP-I多肽与体外GLP-I受体结合的结合常数
权利要求
1.一种胰高血糖素样肽-I突变体多肽，其特征在于，所述胰高血糖素样肽-I突变体多肽是在如下所示的SEQ ID NO I序列基础上突变产生的7HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGRG36 其中，上述序列氨基酸残基第9位Asp、16位Gly和/或27位Val发生点突变为Cys，并在C末端添加Cys。
2.根据权利要求I所述的胰高血糖素样肽-I突变体多肽，其特征在于，在第16位Gly和/或第27位Val发生点突变；优选地，在第27位Val发生点突变。
3.根据权利要求I所述的胰高血糖素样肽-I突变体多肽,其特征在于,所述的胰高血糖素样肽-I突变体多肽选自SEQ ID NO 2 7HAEGTFTSCVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRGC37 ；SEQ ID NO 3 7HAEGTFTSDVSSYLECQAAKEFIAWLCKGRGC37 ;和seq id N04 7HaegtftsdvssylegqaakefiAffLCKGRGC37
4.一种胰高血糖素样肽-1突变体串联多肽，由权利要求I至3中任一项所述的胰高血糖素样肽-I突变体多肽C末端添加的Cys串联Exendin-4 (31-39)而成，并且所述胰高血糖素样肽-I突变体串联多肽自身折叠成二硫键，所述Exendin-4(31-39)具有SEQ ID NO 5所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求4所述的胰高血糖素样肽-I突变体串联多肽，其特征在于，所述二硫键由胰高血糖素样肽-I突变体多肽C末端添加的Cys与SEQID NO I序列在氨基酸残基第9位Asp、16位Gly或27位Val发生点突变成的Cys形成。
6.根据权利要求5所述的胰高血糖素样肽-I突变体串联多肽，其特征在于，所述二硫键由胰高血糖素样肽-I突变体多肽C末端添加的Cys与SEQID NO I序列在氨基酸残基第16位Gly或27位Val发生点突变成的Cys形成。
7.根据权利要求6所述的胰高血糖素样肽-I突变体串联多肽，其特征在于，所述二硫键由胰高血糖素样肽-I突变体多肽C末端添加的Cys与SEQID NO I序列在氨基酸残基第27位Val发生点突变成的Cys形成。
8.根据权利要求4至7任一项所述的胰高血糖素样肽-I突变体串联多肽，其特征在于，所述胰高血糖素样肽-I突变体多肽通过C末端添加的Cys串联1、2或3个Exendin-4(31-39)。
9.根据权利要求8所述的胰高血糖素样肽-I突变体串联多肽,其特征在于,所述胰高血糖素样肽-I突变体多肽通过C末端添加的Cys串联2个Exendin-4 (31-39)。
10.根据权利要求4所述的胰高血糖素样肽-I突变体串联多肽，其特征在于，所述的串联多肽选自序列为SEQ ID NO 6-14的多肽。
11.权利要求I至3任一项所述的胰高血糖素样肽-I突变体多肽或权利要求4至10任一项所述的胰高血糖素样肽-I突变体串联多肽在制备用于治疗和/或预防糖尿病和/或肥胖症的药物组合物中的应用；优选地，所述药物组合物为注射剂；更优选地，所述注射剂为冻干粉针或溶液注射剂。
12.—种药物组合物，其特征在于，所述的组合物含有权利要求I至3任一项所述的胰高血糖素样肽-I突变体多肽或权利要求4至10任一项所述的胰高血糖素样肽-I突变体串联多妝。
13.根据权利要求12所述的药物组合物，其特征在于，还含有还包含一种或多种药学上可接受的载体； 优选地，所述药学上可接受的载体选自水溶性填充剂、PH调节剂、稳定剂、注射用水和渗透压调节剂； 更优选地，所述水溶性填充剂选自以下的一种或几种甘露醇、低分子右旋糖苷、山梨醇、聚乙二醇、葡萄糖、乳糖和半乳糖； 更优选地，所述PH调节剂为生理可接受的酸、碱和/或盐，优选选自以下的一种或几种 非挥发性酸如枸橼酸、磷酸、乳酸、酒石酸或盐酸， 碱如氢氧化钾、氢氧化钠或氢氧化钾或氢氧化铵， 盐如碳酸钠或碳酸钾或碳酸铵盐，碳酸氢钠或碳酸氢钾或碳酸氢铵盐； 更优选地，所述稳定剂为选自以下的一种或几种EDTA-2Na、硫代硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、磷酸氢二钾、碳酸氢钠、碳酸钠、精氨酸、谷氨酸、聚乙二醇6000、聚乙二醇4000、十二烷基硫酸钠或三羟甲基氨基甲烷等，进一步优选自焦亚硫酸钠、磷酸氢二钾、精氨酸、聚乙二醇6000、三羟甲基氨基甲烷中的一种或几种； 更优选地，所述渗透压调节剂选自氯化钠和/或氯化钾。
全文摘要
本发明提供一种胰高血糖素样肽-1突变体多肽及其制备方法和应用，所述突变体串联多肽由胰高血糖素样肽-1突变体C末端添加的Cys串联Exendin-4(31-39)而成，并且所述突变体串联多肽自身折叠成二硫键，所述胰高血糖素样肽-1突变体多肽具有SEQ ID NO 1所示的序列在氨基酸残基第9位Asp、16位Gly或27位Val发生点突变为Cys，并在C末端添加Cys所产生的氨基酸序列，所述Exendin-4(31-39)具有SEQ ID NO 5所示的氨基酸序列；所述胰高血糖素样肽-1突变体串联多肽用于制备治疗糖尿病、治疗和/或预防肥胖症的药物组合物。
文档编号C07K14/605GK102766204SQ20111011515
公开日2012年11月7日 申请日期2011年5月5日 优先权日2011年5月5日
发明者付刚, 任晓文, 徐为人, 汤立达, 王玉丽, 龚珉 申请人:天津药物研究院