专利名称：一种硫糖肽的纯化工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及化学药物硫糖肽技术领域，特别涉及一种硫糖肽的纯化工艺。
背景技术：
硫糖肽是由猪十二指肠的提取物糖肽，经过硫酸化得到的一种硫酸多酯。硫糖肽是胃保护和抗溃疡药物，适用于治疗十二指肠溃疡和胃炎。目前在意大利上市，国内尚未见报道。药物的药效与硫含量的高低息息相关。现有硫糖肽原料药一般存在纯度不高，一般低于95%，硫含量偏低，一般低于14. 8%，会严重影响药效的发挥。
发明内容
为了解决以上问题，本发明提供了一种纯化硫糖肽、提高硫含量的硫糖肽的纯化工艺。本发明是通过以下方式实现的 一种硫糖肽的纯化工艺，包括以下步骤
(1)样品准备将硫糖肽粗品溶解于lwt%的氯化钠溶液中，硫糖肽浓度为5wt%，用醋酸调节PH值为6. 0 ；
(2)缓冲溶液的配制分别配制浓度为1衬％、4衬％和10wt%的氯化钠缓冲溶液，分别加入醋酸0. 05M，调节pH为6. 0 ；
(3)离子层析柱预处理离子交换柱中填充琼脂糖凝胶6B，填充体积与被分离样品的体积比为1 :2，用10衬％的氯化钠缓冲溶液冲洗离子交换柱，缓冲液用量为3倍树脂体积， 然后用lwt%的氯化钠缓冲溶液平衡离子交换柱，缓冲液用量为3倍树脂体积；
(4)样品上柱流速控制2倍树脂体积/h，上完样品后，用lwt%的氯化钠缓冲溶液冲洗，缓冲液用量为1倍树脂体积；
(5)洗涤用4wt%的氯化钠缓冲溶液洗涤离子交换柱1小时，流速为2倍树脂体积/h；
(6)洗脱用10wt%氯化钠缓冲溶液洗脱离子交换柱1小时，流速为2倍树脂体积/h， 得洗脱液；
(7)超滤脱盐将洗脱液用孔径0.45 μ m滤膜过滤，然后用3万分子量的超滤膜进行超滤脱盐至盐度2%，再浓缩至洗脱液体积的3/4 ；
(8)沉淀、干燥用95%以上的乙醇按体积比1:1将浓缩液在搅拌条件下沉淀，所得沉淀脱水干燥，得到纯化的硫糖肽。琼脂糖凝胶6B载量为110mg/mL，粒径45_165Mm。本发明的有益效果经过纯化的硫糖肽，纯度能达到99. 5%以上，硫含量15. 3%以上，弥补了硫糖肽纯度不高，硫含量偏低的缺陷，可以作为标准品使用，节约了购买标准品的成本。
附图1为使用本发明纯化工艺纯化得到的硫糖肽使用液相色谱法检测得到的谱图， 附图2为购自韩国的硫糖肽标准品使用液相色谱法检测得到的谱图。
具体实施方式
实施例1
硫糖肽的纯化工艺，包括以下步骤
(1)样品准备取硫糖肽粗品10g，纯度为85%，含硫量为14.5%，溶解于lwt%的氯化钠溶液中，硫糖肽浓度为5wt%，用醋酸调节pH值为6. 0，共200mL ；
(2)缓冲溶液的配制分别配制浓度为1衬％、4衬％和10wt%的氯化钠缓冲溶液，分别加入醋酸0. 05M，调节pH为6. 0 ；
(3)离子层析柱预处理离子交换柱中填充载量为110mg/ml的DEAE-s印harose6B， 填充100ml，用10wt%的氯化钠缓冲液冲洗离子交换柱，缓冲液用量为300mL，然后用lwt% 的氯化钠缓冲液平衡离子交换柱，缓冲液用量为300mL ；
(4)样品上柱流速控制200mL/h，上完样品后，用lwt%的氯化钠缓冲液冲洗，缓冲液用量为IOOmL ；
(5)洗涤用4wt%的氯化钠缓冲液洗涤离子交换柱1小时，流速为200mL/h；
(6)洗脱用10衬％氯化钠缓冲液洗脱离子交换柱1小时，流速为200mL/h，得洗脱液 200mL ；
(7)超滤脱盐将洗脱液用孔径0.45 μ m滤膜过滤，然后用3万分子量的超滤膜进行超滤脱盐至盐度2%，再浓缩至150ml ；
(8)沉淀、干燥用95%的乙醇按体积比1:1将浓缩液在搅拌条件下沉淀，所得沉淀脱水干燥，得到纯化的硫糖肽。以韩国的硫糖肽标准品作为标准，采用外标法测得本发明纯化工艺得到的硫糖肽含量为102%，硫含量为15. 5%，谱图如附图1和附图2所示。说明本发明的纯化工艺得到的硫糖肽纯度已经超过硫糖肽标准品，本身已经可以作为标准品使用。
权利要求
1.一种硫糖肽的纯化工艺，其特征是包括以下步骤(1)样品准备将硫糖肽粗品溶解于lwt%的氯化钠溶液中，硫糖肽浓度为5wt%，用醋酸调节PH值为6. O ；(2)缓冲溶液的配制分别配制浓度为1衬％、4衬％和10wt%的氯化钠缓冲溶液，分别加入醋酸0. 05M，调节pH为6. 0 ；(3)离子层析柱预处理离子交换柱中填充琼脂糖凝胶6B，填充体积与被分离样品的体积比为1 :2，用10wt%的氯化钠缓冲溶液冲洗离子交换柱，用量为3倍树脂体积，然后用 lwt%的氯化钠缓冲溶液平衡离子交换柱，用量为3倍树脂体积；(4)样品上柱流速控制2倍树脂体积/h，上完样品后，用lwt%的氯化钠缓冲溶液冲洗，用量为1倍树脂体积；(5)洗涤用4wt%的氯化钠缓冲溶液洗涤离子交换柱1小时，流速为2倍树脂体积/h；(6)洗脱用10wt%氯化钠缓冲溶液洗脱离子交换柱1小时，流速为2倍树脂体积/h， 得洗脱液；(7)超滤脱盐将洗脱液用孔径0.45 μ m滤膜过滤，然后用3万分子量的超滤膜进行超滤脱盐至盐度2%，再浓缩至洗脱液体积的3/4 ；(8)沉淀、干燥用95%以上的乙醇按体积比1:1将浓缩液在搅拌条件下沉淀，所得沉淀脱水干燥，得到纯化的硫糖肽。
2.根据权利要求1所述的纯化工艺，其特征在于琼脂糖凝胶6B载量为110mg/mL，粒径 45-165Mm。
全文摘要
本发明涉及化学药物硫糖肽技术领域一种硫糖肽的纯化工艺。包括将硫糖肽粗品溶解于氯化钠溶液中；配制pH为6.0浓度为1wt%、4wt%和10wt%的氯化钠缓冲溶液；离子层析柱预处理；样品上柱上完样品用1wt%的氯化钠缓冲液冲洗；洗涤用4wt%的氯化钠缓冲液洗涤离子交换柱；洗脱用10wt%氯化钠缓冲液洗脱离子交换柱得洗脱液；超滤脱盐将洗脱液过滤，超滤脱盐；沉淀干燥用乙醇将浓缩液沉淀，所得沉淀脱水干燥，得到纯化的硫糖肽。经过纯化的硫糖肽，纯度能达到99.5%以上，硫含量15.3%以上，弥补了硫糖肽纯度不高，硫含量偏低的缺陷，可以作为标准品使用，节约了购买标准品的成本。
文档编号C07K2/00GK102321151SQ201110227778
公开日2012年1月18日 申请日期2011年8月10日 优先权日2011年8月10日
发明者李全义, 李刚, 王新志 申请人:山东众山生物科技有限公司