专利名称：原位化学发光底物和测定的制作方法
技术领域：
本发明一般地涉及诊断测定，且更具体地涉及化学发光底物。公开了可用于产生原位化学发光底物的方法和将它们用于诊断测定中的方法。
背景技术：
临床诊断测定现在使用化学发光作为优选的技术发展水平的检测技术。含有化学发光读出的测定具有最灵敏的检测限和最宽的分析物定量动态范围。日益需要设计简化的、小型化的、自主式的和/或稳健的诊断平台，用于这样的场合或发展中国家:其中标准的实验室设备、受控的 环境和技术支持较少。目前商购可得的二氧杂环丁烷底物没有取得良好进展，其中受控的储存条件不可容易地得到。因而，需要使用具有更好热稳定性的前体制备原位二氧杂环丁烷底物的方法。发明概述
在第一个方面，本发明提供了产生光的方法，所述方法包括下述步骤:(a)提供氧化剂；(b)提供具有下述结构的烯醇醚:
权利要求
1.一种用于产生光的方法，所述方法包括下述步骤: (a)提供氧化剂； (b)提供具有下述结构的烯醇醚:
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述氧化剂选自:过氧化氢、钥酸钠、过氧化氢和钥酸钠、次氯酸盐、次氯酸盐和过氧化氢、芳基内过氧化物、过氧化钙过氧水合物以及它们的组合。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述氧化剂是过氧化氢、和过氧化氢和钥酸钠。
4.根据权利要求1所述的方法，其中A或B中的至少一个是
5.根据权利要求1所述的方法，其中A和B—起是
6.根据权利要求1所述的方法，其中R1是含有1-2个碳原子的烷基或含有1-2个碳原子的三氟烷基。
7.根据权利要求1所述的方法，其中T是
8.根据权利要求1所述的方法，其中OR2是磷酸酯、乙酸酯、1-磷酸_2，3-二酰基甘油酯、三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、单磷酸腺苷、腺苷、a -D-半乳糖苷、β -D-半乳糖苷、a -D-葡萄糖苷、β -D-葡萄糖苷、a -D-甘露糖苷、β -D-甘露糖苷、β -呋喃果糖苷、β -D-葡糖苷 酸或
9.根据权利要求8所述的方法，其中R2是
10.根据权利要求1所述的方法，其中R2是E-L-NuC-Z，其中E是包含亲电子原子的基团，所述原子在Z基团的酶切割以后被Nuc基团的电子对攻击，并通过邻助作用释放出1，2-二氧杂环丁烷酶底物阴离子；L是连接基团；Nuc是亲核原子；且2是酶可切割的基团；其中 E是羧基、羰基、被离去基团取代的亚甲基、磷酸盐、碳酸盐、黄原酸盐、亚硫酸盐、磺酸盐、亚硫酸氢盐或二硫化物； L选自:含有1-4个碳原子的 亚甲基或聚亚甲基、-(CH2)m-O-(CH2)n、-(CH2)m-S-(CH2)n-、或-(CH2) J1-NR6- (CH2) n-，其中 m 和 η 是 0_3,且 m+n 是 2 或 3,其中 R6是含有1-10个碳原子的烷基，且所述连接基团可以被含有1-24个碳原子的烷基、含有2-24个碳原子的烯基、含有1-24个碳原子的烷基取代，和被含有1-24个碳原子的酰氧基、含有2-24个碳原子的烯基单取代或二取代，和被含有1-24个碳原子的酰氧基、含有6-10个碳的芳基、含有1-24个碳原子的烷基单取代或二取代，和被苯基、羟苯基、吲哚基、巯基、含有1-4个碳原子的烷硫基、羟基、羧基、氨基、胍基、咪唑或氨基甲酰基或含有2-24个碳原子的烯基取代，和被苯基、羟苯基、吲哚基、巯基、含有1-4个碳原子的烷硫基、羟基、羧基、氨基、胍基、咪唑或氨基甲酰基取代； Nuc是氧原子或硫原子；且 Z是磷酰基、乙酰基、1-磷酸_2，3- 二酰基甘油酰基、腺苷三磷酰基、腺苷二磷酰基、腺苷单磷酰基、腺苷基、a-D-半乳糖基、β-D-半乳糖基、a-D-葡萄糖基、β _D_葡萄糖基、a-D-甘露糖基、β-D-甘露糖基、呋喃果糖基、β-D-glucosiduransyl或
11.根据权利要求10所述的方法，其中Z是
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述酶部分包含水解酶。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述水解酶是碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、β -葡萄糖苷酶、β -葡糖苷酸酶或神经氨酸酶。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述酶部分是酶。
15.根据权利要求14所述的方法，其另外包括下述步骤:在加入所述1，2-二氧杂环丁烷酶底物的水性溶液以后，检测从所述反应混合物发射出的光，其中光的发射指示所述酶的存在，并且发射的光的量可以与样品中存在的所述酶的量相关联。
16.根据权利要求13所述的方法，其中所述酶部分是酶连接的抗体，所述酶连接的抗体包含能够与抗原结合的第一抗体和酶，所述酶能够切割所述1，2- 二氧杂环丁烷酶底物，使得所述底物分解并产生光。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述第一抗体与所述酶共价地或非共价地连接。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述第一抗体与标记共价地连接，且所述酶与这样的分子共价地连接:所述分子能够非共价地结合所述标记。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述标记是生物素或生物素衍生物，且所述分子是抗生物素蛋白或抗生蛋白链菌素。
20.根据权利要求18所述的方法，其中所述标记是半抗原，且所述分子是能够结合所述半抗原的抗体。
21.根据权利要求16所述的方法，其另外包括下述步骤: (a)提供疑似包含抗原的样品； (b)提供包含第二抗体的固相，所述第二抗体能够结合所述抗原； (c)使所述样品和酶连接的抗体与所述固相接触，以形成所述酶复合物；和， (d)在加入所述1，2-二氧杂环丁烷酶底物的水性溶液以后，检测从所述反应混合物发射出的光，其中光的发射指示所述抗原的存在，并且发射的光的量可以与所述样品中存在的所述抗原的量相关联。
22.根据权利要求21所述的方法，其另外包括下述步骤:从所述酶复合物除去任何未结合的酶连接的抗体 。
23.根据权利要求13所述的方法，其中所述酶部分是包含抗原和酶的酶连接的抗原，所述酶能够切割所述1，2- 二氧杂环丁烷酶底物，使得所述底物分解并产生光。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述抗原与所述酶共价地或非共价地连接。
25.根据权利要求24所述的方法，其中抗原与标记共价地连接，且所述酶与这样的分子共价地连接:所述分子能够非共价地结合所述标记。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述标记是生物素或生物素衍生物，且所述分子是抗生物素蛋白或抗生蛋白链菌素。
27.根据权利要求25所述的方法，其中所述标记是半抗原，且所述分子是能够结合所述半抗原的抗体。
28.根据权利要求23所述的方法，其另外包括下述步骤: (a)提供疑似包含抗原的样品； (b)提供固相，所述固相包含能够结合所述抗原的抗体； (c)使所述样品和酶连接的抗原与所述固相接触，以形成所述酶复合物；和， (d)在加入所述1，2-二氧杂环丁烷酶底物的水性溶液以后，检测从所述反应混合物发射出的光，其中发射的光的量可以与所述样品中存在的所述抗原的量相关联。
29.根据权利要求28所述的方法，其另外包括下述步骤:从所述酶复合物除去任何未结合的酶连接的抗原。
30.根据权利要求13所述的方法，其中所述酶部分是酶连接的寡核苷酸，所述酶连接的寡核苷酸包含能够与核酸杂交的寡核苷酸和酶，所述酶能够切割所述1，2- 二氧杂环丁烷酶底物，使得所述底物分解并产生光。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述寡核苷酸与所述酶共价地或非共价地连接。
32.根据权利要求31所述的方法，其中寡核苷酸与标记共价地连接，且所述酶与这样的分子共价地连接:所述分子能够非共价地结合所述标记。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述标记是生物素或生物素衍生物，且所述分子是抗生物素蛋白或抗生蛋白链菌素。
34.根据权利要求32所述的方法，其中所述标记是半抗原，且所述分子是能够结合所述半抗原的抗体。
35.根据权利要求30所述的方法，其另外包括下述步骤: (a)提供疑似包含核酸的样品； (b)将所述核酸固定化在固相上， (C)使所述固定化的核酸和所述酶连接的寡核苷酸接触，以形成酶复合物；和， (d)在加入所述1，2-二氧杂环丁烷酶底物的水性溶液以后，检测从所述反应混合物发射出的光，其中光的发射指示所述核酸的存在，并且发射的光的量可以与所述样品中存在的所述核酸的量相关联。
36.根据权利要求35所述的方法，其另外包括下述步骤:从所述酶复合物除去任何未结合的酶连接的寡核苷酸。
37.根据权利要求1所述的方法，其中所述反应混合物另外包含促进剂。
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述促进剂包括聚合物型的季铵盐、聚合物型的季鱗盐或它们的组合。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述促进剂另外包含受体染料。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所述受体染料是荧光素。
41.根据权利要求38所述的方法，其中所述聚合物型的季铵盐是聚(乙烯基苄基三甲基氯化铵)，聚[乙烯基苄基(苄基二甲基氯化铵)]、聚[乙烯基(苄基三丁基氯化铵)]、聚[乙烯基(苄基三戊基氯化铵)]或它们的组合。
42.根据权利要求 38所述的方法，其中所述聚合物型的季鱗盐是聚(乙烯基苄基三甲基氯化鱗)、聚(乙烯基苄基三丁基氯化鱗)、聚(乙烯基苄基三辛基氯化鱗)、包含聚(乙烯基苄基三丁基氯化鱗)和聚(乙烯基苄基三辛基氯化鱗)的共聚物或它们的组合。
43.根据权利要求1所述的方法，其中所述烯醇醚是
44.一种用于确定样品中酶的存在或量的测定方法，所述方法包括下述步骤: (a)提供氧化剂； (b)提供具有下述结构的烯醇醚:
45.一种用于确定样品中抗原的存在或量的测定方法，所述方法包括下述步骤: (a)提供氧化剂； (b)提供具有下述结构的烯醇醚:
46.一种用于确定样品中抗原的存在或量的测定方法，所述方法包括下述步骤: (a)提供氧化剂； (b)提供具有下述结构的烯醇醚:
47.一种用于确定样品中核酸的存在和/或量的测定方法，所述方法包括下述步骤: (a)提供氧化剂； (b)提供具有下述结构的烯醇醚:
48.一种用于检测样品中分析物的存在或量的试剂盒，所述试剂盒包括: (a)氧化剂,和 (b)具有下述结构的烯醇醚:
49.根据权利要求48所述的试剂盒，其中所述氧化剂选自:过氧化氢、钥酸钠、过氧化氢和钥酸钠、次氯酸盐、次氯酸盐和过氧化氢、芳基内过氧化物、过氧化钙过氧水合物以及它们的组合。
50.根据权利要求49所述的试剂盒，其中所述氧化剂是过氧化氢、或过氧化氢和钥酸钠。
51.根据权利要求48所述的试剂盒，其中A或B中的至少一个是
52.根据权利要求48所述的试剂盒，其中A和B—起是
53.根据权利要求48所述的试剂盒，其中R1是含有1-2个碳原子的烷基或含有1-2个碳原子的三氟烷基。
54.根据权利要求48所述的试剂盒，其中T是
55.根据权利要求48所述的试剂盒，其中OR2是磷酸酯、乙酸酯、1-磷酸_2，3- 二酰基甘油酯、三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、单磷酸腺苷、腺苷、a-D-半乳糖苷、β-D-半乳糖苷、a -D-葡萄糖苷、β -D-葡萄糖苷、a -D-甘露糖苷、β -D-甘露糖苷、β -呋喃果糖苷、β -D-葡糖苷酸或
56.根据权利要求55所述的试剂盒，其中R2是
57.根据权利要求48所述的试剂盒，其中R2是E-L-NuC-Z，其中E是包含亲电子原子的基团，所述原子在Z基团的酶切割以后被Nuc基团的电子对攻击，并通过邻助作用释放出.1，2-二氧杂环丁烷酶底物阴离子；L是连接基团；Nuc是亲核原子；且2是酶可切割的基团；其中 E是羧基、羰基、被离去基团取代的亚甲基、磷酸盐、碳酸盐、黄原酸盐、亚硫酸盐、磺酸盐、亚硫酸氢盐或二硫化物； L选自:含有1-4个碳原子的亚甲基或聚亚甲基、-(CH2)m-O-(CH2)n、-(CH2)m-S-(CH2)n-、或-(CH2) m-NR6- (CH2) n-，其中 m 和 η 是 0_3,且 m+n 是 2 或 3,其中 R6是含有1-10个碳原子的烷基，且所述连接基团可以被含有1-24个碳原子的烷基、含有2-24个碳原子的烯基、含有1-24个碳原子的烷基取代，和被含有1-24个碳原子的酰氧基、含有2-24个碳原子的烯基单取代或二取代，和被含有1-24个碳原子的酰氧基、含有6-10个碳的芳基、含有1-24个碳原子的烷基单取代或二取代，和被苯基、羟苯基、吲哚基、巯基、含有1-4个碳原子的烷硫基、羟基、羧基、氨基、胍基、咪唑或氨基甲酰基或含有2-24个碳原子的烯基取代，和被苯基、羟苯基、吲哚基、巯基、含有1-4个碳原子的烷硫基、羟基、羧基、氨基、胍基、咪唑或氨基甲酰基取代； Nuc是氧原子或硫原子；且 Z是磷酰基、乙酰基、1-磷酸_2，3- 二酰基甘油酰基、腺苷三磷酰基、腺苷二磷酰基、腺苷单磷酰基、腺苷基、a-D-半乳糖基、β-D-半乳糖基、a-D-葡萄糖基、β _D_葡萄糖基、a-D-甘露糖基、β-D-甘露糖基、β_呋喃果糖基、β-D-glucosiduransyl或
58.根据权利要求57所述的试剂盒，其中Z是
59.根据权利要求48所述的试剂盒，其另外包括促进剂。
60.根据权利要求59所述的试剂盒，其中所述促进剂包括聚合物型的季铵盐、聚合物型的季鱗盐或它们的组合。
61.根据权利要求60所述的试剂盒，其中所述促进剂另外包含受体染料。
62.根据权利要求61所述的试剂盒，其中所述受体染料是荧光素。
63.根据权利要求60所述的试剂盒，其中所述聚合物型的季铵盐是聚(乙烯基苄基三甲基氯化铵)、聚[乙烯基苄基(苄基二甲基氯化铵)]、聚[乙烯基(苄基三丁基氯化铵)]、聚[乙烯基(苄基三戊基氯化铵)]或它们的组合。
64.根据权利要求60所述的试剂盒，其中所述聚合物型的季鱗盐是聚(乙烯基苄基三甲基氯化鱗)、聚(乙烯基苄基三丁基氯化鱗)、聚(乙烯基苄基三辛基氯化鱗)、包含聚(乙烯基苄基三丁基氯化鱗)和聚(乙烯基苄基三辛基氯化鱗)的共聚物；或它们的组合。
65.根据权利要求48所述的试剂盒，其中所述烯醇醚是
66.一种用于制备1，2- 二氧杂环丁烷酶底物的方法，所述方法包括下述步骤: (a)提供氧化剂； (b)提供具有下述结构的烯醇醚:
全文摘要
在水性条件或其它测定条件中原位产生化学发光的酶底物的方法。也公开了使用所述底物产生光、检测和/或量化酶、抗原和/或核酸的方法。还公开了与这些方法有关的试剂盒。
文档编号C07D305/14GK103209970SQ201180043359
公开日2013年7月17日 申请日期2011年7月6日 优先权日2010年7月8日
发明者A.斯帕克斯, Z.王, M.吉 申请人:生命科技公司