用于植物病原性真菌生物防治的蛋白的制作方法
【专利摘要】一种用于防治以镰刀菌属某些种(Fusarium?spp.)、核盘菌属某些种(Sclerotinia?spp.)、丝核菌属某些种(Rhizoctonia?spp.)、髓毛菌属某些种(Pithium?spp.)等为例的植物病原性真菌所导致的疾病症状的组合物。所提供的组合物具有包含与SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:5、SEQ?ID?NO6或SEQ?ID?NO:7有至少80%序列同一性的氨基酸序列的多肽分子。所述组合物可为种子处理物、植物处理物或土壤处理物之一。表达含有与SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:5、SEQ?ID?NO6或SEQ?ID?NO:7有至少80%序列同一性的氨基酸序列的多肽分子的转化的植物细胞，据此所述植物细胞抵抗植物病原性真菌的感染。一种表达含有与SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:5、SEQ?ID?NO6或SEQ?ID?NO:7有至少80%序列同一性的氨基酸序列的多肽分子的转化的微生物细胞。
【专利说明】用于植物病原性真菌生物防治的蛋白
【技术领域】
[0001]本发明涉及有效防治真菌植物病原的新型生物防治剂、相关组合物及其用途。具体而言，本发明涉及对植物病原性真菌有抑真菌作用和/或杀真菌作用的新型蛋白。本发明进一步涉及包含所述蛋白的生物防治剂以及涉及所述生物防治剂的用途、方法和组合物。
【背景技术】
[0002]镰刀菌(Fusarium)是广泛分布于植物上和土壤中的丝状真菌。某些镰刀菌菌种是植物病原体。例如，尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)造成了一百种以上植物的镰刀菌枯萎病(Fusarium Wilt Disease)。其通过定植于植物木质部来完成,其可导致木质部的堵塞和分解。当这种情况发生时植物会出现例如叶片萎蔫变黄的症状，最终导致植物的死亡。该病症是全球市场上格罗斯米歇尔香蕉品种减少和消失的主要原因。最近一种新的菌株已开始攻击主要的卡文迪什品种的植物，从而导致人们担心，在没有解决方案的情况下，该品种也将从世界市场消失。
[0003]镰刀菌根腐病是森林苗圃幼苗死亡率的重要原因，并且还导致第一生长季期间出圃后降低的存活率。该疾病是由几个镰刀菌菌种所造成并常见于在世界上许多地方。该疾病是在加拿大西部和美国以及在北中部和南部各州是特别问题。此外，由真菌松树脂溃瘍病菌(Fusarium circinatum)导致的松树脂溃瘍病是松树的一种严重疾病并且威胁森林业，尤其在美国和新西兰。福射松(Radiata或Monterey pine)对该疾病是高度易感的,在加州的一些地区成熟树木的死亡率达到80%。
[0004]赤霉病(FusariumHead Blight, FHB),也被称作“耳朵凋枯病(ear blight)” 或“斑点病(scab)”，是由镰刀菌造成的小麦、大麦、燕麦和其它小谷物的疾病。玉米和玉蜀黍可受被称为‘玉蜀黍棒腐病’的相似病症的影响。上述病症可降低作物的产量和等级，并且可潜在地以真菌毒素污染粮食。据估计，FHB每年耗费粮食行业近50亿美元。近年来，FHB已证明对加拿大西部的重要经济作物小麦和大麦有重要和不断增长的问题。在过去，尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和燕麦镰孢(Fusarium avenaceum)已被鉴定出来是在加拿大与FHB主要相关的两个种，在加拿大一些受影响地区产量已减少30%以上。得FHB和玉蜀黍棒腐病的粮食往往有真菌毒素(例如脱氧瓜萎镰菌醇(DON)单端孢霉烯)污染，其与拒绝进食、一般性的消化功能紊乱、腹泻和出血相关。产毒的3-乙酰脱氧瓜萎镰菌醇(3-AD0N)禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)群体在北美的出现是相当新的现象。它正在取代15-AD0N化学型。此外，大刀镰孢(F.culmorum)的真菌毒素特征——在实验室和田间两个条件下均与禾谷镰刀菌的相似——代表了全球范围的玉米、玉蜀黍和小麦产量的另外的威胁。目前，对于FHB和相关真菌毒素没有有效的防治措施。此外，玉米、小麦、大麦、燕麦或其他小谷物也无抗性品种。杀真菌剂可有效抑制该疾病但其仅暂时抑制。
[0005]除了作为常见的植物病原体，镰刀菌属某些种可有一定机率感染动物并且在人中可为浅表性感染和/或全身感染的致病原。镰孢菌(Fusaria)是抗药性最强的真菌之一，其导致镰孢菌感染难以治疗。侵袭性感染可以是致命的。
[0006]菌核病(Sclerotinia stem rot)是由病原体油菜核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)引起的。油菜核盘菌具有广泛宿主范围并已知感染多个植物种(油菜、向日葵、大豆、亚麻等)。在零轮作的条件下或若轮作包含几个易感的植物种，疾病暴发可为特别严重的。感染发生在开花期早期时产量损失可达到20%。另一种广泛传播的真菌植物病原是导致农作物出现“立枯病(damping off )”或“绿莖病(wire-stem)”疾病症状的丝核菌(Rhizoctonia)。感染可发生在生长季期间的任何时间,但幼苗期是最易感的。所有生长阶段疾病的发病率和严重程度受天气、土壤条件和接种水平的影响。凉爽天气有利于幼苗感染。同时，绿茎病的发病率在春秋季是最严重的，此时土壤湿润且凉爽。根腐病一般发生在温暖、潮湿的天气期间并且可影响在任何发育阶段的植株。幼苗受立枯病影响不出苗，或若出苗，也会快速衰落、倒下并死亡。在较成熟的幼苗中，较低的叶片变紫，并且接近土壤表面的较低的茎变得萎缩并且变成黑褐色。其他症状可能包括种子腐烂、根腐烂和较低叶柄上的溃瘍。终极腐霉(Pythium ultimum)是一种广泛分布在世界各地、无处不在的土传病原体，其对植物造成立枯病和根腐病。终极腐霉具有包括许多重要农作物和草坪草在内的广泛范围的宿主。
【发明内容】
[0007]本发明涉及防治真菌病原体和/或由以镰刀菌属某些种(Fusarium spp.)、核盘菌属某些种(Sclerotinia spp.)、丝核菌属某些种(Rhizoctonia spp.)、髓毛菌属某些种(Pithium spp.)等为例的植物病原性真菌所导致的疾病症状的新型蛋白。此外，这些新型蛋白还对以镰刀菌属某些种、核盘菌属某些种、丝核菌属某些种、髓毛菌属某些种等为例的植物病原性真菌产生的毒素有抗真菌毒素作用。
[0008]本发明的一些示例性实施方案涉及由Sphaerodes mycoparasitica产生的新型胞内蛋白，其可用于控制和/或 预防植物病原性真菌孢子的萌发、和/或控制植物病原性真菌菌丝体的增殖、和/或防止植物病原性真菌感染植物细胞、或其任何组合。
[0009]本发明的一些示例性实施方案涉及由S.mycoparasitica产生的新型胞外蛋白，其可用于控制和/或预防植物病原性真菌孢子的萌发、和/或控制植物病原性真菌菌丝体的增殖、和/或防止植物病原性真菌感染植物细胞、或其任何组合。
[0010]本发明的一个方面涉及由S.mycoparasitica产生的新型胞外蛋白，其包含SEQ IDNO:4并且分子量为约79kDa。
[0011]本发明的一个方面涉及由S.mycoparasitica产生的新型胞外蛋白，其包含SEQ IDNO:5并且分子量为约50kDa。
[0012]本发明的一个方面涉及由S.mycoparasitica产生的新型胞外蛋白，其包含SEQ IDNO:6并且分子量为约36kDa。
[0013]本发明的一个方面涉及由S.mycoparasitica产生的新型胞外蛋白，其包含SEQ IDNO:7并且分子量为约13kDa。
[0014]本发明的一些示例性实施方案涉及包含所述新型胞外蛋白中的一种或多种的组合物。所述组合物可为种子处理组合物，或者其可为植物处理组合物，或者其可为土壤处理组合物。[0015]本发明的一些示例性实施方案涉及被转化用于产生所述新型胞内蛋白和所述新型胞外蛋白中的一种或多种的微生物细胞。所述被转化的微生物细胞可用于防治由以镰刀菌属某些种、核盘菌属某些种、丝核菌属某些种、髓毛菌属某些种等为例的植物病原性真菌所造成的疾病症状。所述被转化的微生物细胞可用作种子处理物、和/或植物处理物、和/或土壤处理物、或其任何组合。或者，所述被转化的微生物细胞可用于产生所述新型蛋白。可收获所述蛋白并将其用于制备本发明的组合物。
[0016]本发明的一些示例性实施方案涉及过表达所述新型蛋白中的一种或多种的被转化的植物细胞。此类被转化的植物细胞可包含于以种子、体细胞胚、器官发生组织等为例的可被培养成为完整植株的植物繁殖体。包含所述被转化的植物细胞的完整植株对以镰刀菌属某些种、核盘菌属某些种、丝核菌属某些种、髓毛菌属某些种等为例的植物病原性真菌所造成的疾病症状有抗性，或对所述疾病症状至少耐受。
【专利附图】
【附图说明】
[0017]本发明的示例性实施方案结合参考以下附图来描述，其中:
[0018]图l(a)A和图l(a)B为纸片扩散测定的显微图像，显示了本发明的示例性蛋白对尖孢镰刀菌(l(a)A)和禾谷镰刀菌(I (a)B)的菌丝体生长的抑制作用，图1 (b)为显示了示例性蛋白对生长3天和4天后尖孢镰刀菌(A)和禾谷镰刀菌(B)的菌丝体生长的抑制％的图表。
[0019]图2为由Sphaerodes mycoparasitica产生的胞内蛋白被10%非变性-PAGE分离成两条带的显微图像。
[0020]图3为从在图2中所示的10%非变性-PAGE凝胶上指示的上条带和下条带洗脱下来的S.mycoparasitica胞内蛋白被12%SDS_PAGE分离的显微图像。
`[0021]图4是由S.mycoparasitica产生的胞外蛋白被10%非变性PAGE分离成四条带的显微图像。
[0022]图5是从图4中所示的10%非变性PAGE凝胶的四条带中洗脱下来的S.mycoparasitica胞外蛋白的12%SDS_PAGE分离的显微图像。
[0023]图6为显示由S.mycoparasitica产生的胞外蛋白的四条带的FLPC分离的色谱图；
[0024]图7(a)是对照处理物中尖孢镰刀菌菌丝体生长的显微图像；图7(b)是在加了缓冲液的对照处理物中尖孢镰刀菌菌丝体生长的显微图像；图7((:)是所述50kDa胞内蛋白对尖孢镰刀菌菌丝体生长的抑制作用的显微照片；图7((1)是所述79kDa胞内蛋白对尖孢镰刀菌菌丝体生长的抑制作用的显微照片；
[0025]图8(a)是对照处理物中禾谷镰刀菌菌丝体生长的显微图像；图8(b)是在加了缓冲液的对照处理物中禾谷镰刀菌菌丝体生长的显微图像；图8((:)是所述50kDa胞内蛋白对禾谷镰刀菌菌丝体生长的抑制作用的显微照片；和图8(d)是所述79kDa胞内蛋白对禾谷镰刀菌菌丝体生长的抑制作用的显微照片；
[0026]图9(a)为显示所述79kDa胞外蛋白(ECl)相对于对照处理物(C)对尖孢镰刀菌菌丝体向外生长的抑制情况的显微图像，图9(b)为显示了所述50kDa胞外蛋白(EC2)和所述36kDa胞外蛋白(EC3)对尖孢镰刀菌菌丝体向外生长的抑制情况的显微图像；[0027]图10(a)为显示所述79kDa胞外蛋白(ECl)相对于对照处理物(C)对禾谷镰刀菌菌丝体生长的抑制情况的显微图像，图10(b)为显示了所述50kDa胞外蛋白(EC2)和所述36kDa胞外蛋白(EC3)对禾谷镰刀菌菌丝体向外生长的抑制情况的显微图像。
[0028]图11 (a)为显示所述13kDa胞外蛋白(ECl)相对于对照处理物(C)对禾谷镰刀菌菌丝体向外生长的抑制情况，图11(b)为显示了所述13kDa胞外蛋白(EC4)相对于对照处理物(c)对尖孢镰刀菌菌丝体向外生长的抑制情况；
[0029]图12(a)和图 12(b)为显示 S.mycoparasitica 胞外蛋白级分 EC1、EC2、EC3 和 EC4对尖孢镰刀菌孢子12(a)和禾谷镰刀菌孢子12(b)萌发的作用的图表。
[0030]图13为显示S.mycoparasitica胞外蛋白级分EC1、EC2、EC3和EC4对尖孢镰刀菌和禾谷镰刀菌的菌落生长和发展的抑制情况的图表。
[0031]图14A(c)、14A(a)、14A(b)为显示对照尖孢镰刀菌孢子的萌发情况的显微图像(C)、所述50kDa蛋白对尖孢镰刀菌孢子萌发的抑制作用的显微图像(a)、所述13kDa蛋白对尖孢镰刀菌孢子萌发的抑制作用的显微图像，以及图14B(c)、14B(a)、14B(b)为显示对照禾谷镰刀菌孢子萌发情况的显微图像(c)、所述50kDa蛋白对禾谷镰刀菌孢子萌发的抑制作用的显微图像(a)和所述13kDa蛋白对禾谷镰刀菌孢子萌发的抑制作用的显微图像；
[0032]图15(a)和图15(b)为显示成晶胞外蛋白ECl和成晶胞外蛋白EC3相对于对照(15(a))对燕麦镰孢的菌丝体生长(15(b))的作用的显微图像。
[0033]图16(a)和图16(c)的显微图像显示了成晶胞外蛋白ECl和成晶胞外蛋白EC3相对于对照(16(a))对禾谷镰刀菌定殖于发芽小麦种子和菌丝体生长的作用(16(b))，而(16(c))为显示用所述胞外蛋白处理的小麦幼苗表面的很多裂解的禾谷镰刀菌菌丝元素的激光扫描共聚焦显微图像(见箭头)。“K+”表示包含ECl胞外蛋白和EC3胞外蛋白的培养基。“K- “表示培养基中不含ECl胞外蛋白和EC3胞外蛋白。“K-晶体”鉴定了一种或多种胞外蛋白分子的位置；
[0034]图17(a)和图17(b)为显示成晶胞外蛋白ECl和成晶胞外蛋白EC3相对于对照(17(a))对禾谷镰刀菌菌丝体生长的作用(17(b))的显微图像。
[0035]图18(a)为显不图17(b)的晶体蛋白处理的禾谷键刀菌的蛋白晶体和裂解的真菌菌丝的存在情况的扫描电子显微图像，图18(b)为显示图17(b)的晶体蛋白处理的禾谷镰刀菌的菌丝中蛋白晶体的存在情况的激光扫描共聚焦显微图像，图18(c)为显示图17(b)的晶体蛋白处理的禾谷键刀菌中蛋白晶体和许多破碎菌丝兀素和凋亡_裂解细胞(箭头)的存在情况的化学力显微图像。“K晶体:鉴定了一种或多种胞外蛋白分子的位置”；
[0036]图19为显示构成所述79kDA ECl蛋白的氨基酸的MALD1-T0F-MS分离情况的图表;
[0037]图20为显示构成所述50kDA EC2蛋白的氨基酸的MALD1-T0F-MS分离情况的图表;
[0038]图21为显示构成所述36kDA EC3蛋白的氨基酸的MALD1-TOF-MS分离情况的图表;
[0039]图22为显示构成所述13kDA EC3蛋白的氨基酸的MALD1-TOF-MS分离情况的图表;
[0040]图23(a)-图23(f)为以下的显微图像:(23 (a)) PDA上油菜核盘菌的对照未处理培养物、(23(b))含胞外蛋白ECl和胞外蛋白EC3的PDA上生长的油菜核盘菌培养物、(23(c))立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)的对照未处理培养物、(23 (d))含胞外蛋白ECl和胞外蛋白EC3的PDA上生长的立枯丝核菌培养物、(23(e))终极腐霉的对照未处理培养物、(23(f))含胞外蛋白ECl和胞外蛋白EC3的PDA上生长的终极腐霉培养物；和
[0041]图24为显示成晶胞外蛋白ECl和成晶胞外蛋白EC3对油菜核盘菌、立枯丝核菌和终极腐霉的菌丝体生长的抑制作用的图表。
【具体实施方式】
[0042]Sphaerodes mycoparasitica(子囊菌纲(Ascomycetes),黑抱壳目(Melanosporales))是一种真菌寄生菌,分离自来源于小麦田或芦笑田的燕麦镰孢、禾谷镰刀菌和尖孢镰刀菌的分离株。该种的特征在于子囊孢子的大小、形状(梭形和三角形)和孢子壁文饰(网纹并平滑)的独特组合。此外，分生孢子产生自子囊果囊被壁的表面上的简单瓶梗、子囊果周边菌丝上的简单瓶梗和产生自菌丝的不规则分支的分生孢子梗上的简单瓶梗。S.mycoparasitica具有瓶梗式无性型,并且在子囊果囊被壁的表面上产生简单瓶梗或在子囊果周边菌丝上产生不规则分散的简单瓶梗，以及在分生孢子梗上产生简单瓶梗。S.mycoparasitica形成寄生在镰刀菌的活菌丝的钩状结构。
[0043]Sphaerodes mycoparasitica 的样本培养物已以保藏号 IDAC301008-01 保藏于加拿大国际保藏单位(International Depositary Authority of Canada Collection)(1015Arlington Street, Winnipeg, Canada, R3E3R2)。生体营养(biotrophically)寄生燕麦键抱(有性型:燕麦赤霉(Giberella avenacea))的 Sphaerodes mycoparasitica 的样本培养物已以保藏号IDAC301008-02保藏于加拿大国际保藏单位，并在此被称为“SM_Bst”。生体营养寄生禾谷镰刀菌(有性型:玉蜀黍赤霉(Giberella zeae))的Sphaerodesmycoparasitica的样本培养物已以保藏号IDAC301008-03保藏于加拿大国际保藏单位,并在此被称为“SM-Gst ”。
[0044]S.mycoparasitica 的大亚基核糖体 RNA 基因(LSU)的 1226bp DNA 序列在 SEQ IDNO:1中给出。
[0045]SEQ ID NO: 1.[0046]Iatagggagaa gaagcactgc gattgcccta gtaacggcga gtgaagcggc agcagcccag
61atttggaatc tggtcctttt ggggcccgag ttgtaatctg cagaggaagc gtctggtgcg
121gtgccggcct agttccctgg aacgggacgc cgtagagggt gacagccccg tacggtcggc
181caccaaacct gtgtgtcgct ccttcgaaga gtcgcgtagt ttgggaaigc lgcgtaaagt
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3 OItgatcgaaag atgaaaagca ccttgaaaat ggggttaaaa agtacgtgaa attgccaaag
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721gtalgagcgt ttctggtcgg acccgaaaga gggtgaacla tgcttgggia ggglgaagcc
781agaggaaact ctggtggagg ccccgtttgg gttctgacgt gcaaatcgat ccataaacct
841gggcatagcg gcgaaagact aatcgaacct tctagtagct ggttcgcatt ctctctctcg
901cacgagagag agaaaacctc tgtgatatca cgattatcag tgaaaaccac accgagaccc
961aacggagttc ttctggattt cctcatgctt caattaccac gcctagtgga cctacctgga
1021gcgctacaat aaagtcatac gaaaatctcg aagatcgggg tgacggtgag ggatcctaag
1081gttctctcgt Igagtgcgit ggacgggcat ggccgtcagc gatctggggc gaccgttgcc
1141ggatcataag ggctttagtg cttaggctat Iggtattgag gggtctgaag acggtaatct
1201gaaaccaaag gcttlattct aaacccgcgc agcatgggcg tagtaggaag agacagcgaa
1261gtctag
[0047]S.mycoparasitica 的小亚基核糖体 RNA 基因(SSU)的 l233bpDNA 序列在 SEQ ID
NO:2中给出。
[0048]SEQ ID NO:2
[0049]
【权利要求】
1.一种用于防治由一种或多种植物病原性真菌造成的疾病症状的组合物，所述组合物包含多肽分子和载体，所述多肽分子包含与选自SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:5,SEQ ID N06和SEQ ID NO: 7的氨基酸序列有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
2.权利要求1的组合物，其中所述多肽分子包含与SEQID NO: 4有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
3.权利要求1的组合物，其中所述多肽分子包含SEQID N0:4。
4.权利要求1的组合物，其中所述多肽分子包含与SEQID NO: 5有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
5.权利要求1的组合物，其中所述多肽分子包含SEQID NO:5。
6.权利要求1的组合物，其中所述多肽分子包含与SEQID NO:6有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
7.权利要求1的组合物，其中所述多肽分子包含SEQID NO:6。
8.权利要求1的组合物，其中所述多肽分子包含与SEQID NO: 7有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
9.权利要求1的组合物，其中所述多肽分子包含SEQID NO:7。
10.权利要求1-9中任一项的组合物，其中所述组合物为种子处理组合物。
11.权利要求1-9中任一项的组合物，其中所述组合物为植物处理组合物。
12.权利要求1-9中任一`项的组合物，其中所述组合物为土壤处理组合物。
13.权利要求1-12中任一项的组合物，其中所述植物病原性真菌为镰刀菌属某些种(Fusarium spp.)、核盘菌属某些种(Sclerotinia spp.)、丝核菌属某些种(Rhizoctoniaspp.)或髓毛菌属某些种(Pithium spp.)之一。
14.权利要求中1-13中任一项的组合物用于防治植物中由镰刀菌属某些种、核盘菌属某些种、丝核菌属某些种或髓毛菌属某些种之一造成的疾病症状的用途。
15.权利要求14的用途，包括处理种子、处理植物和处理植物生长基质中的一种或多种。
16.表达多肽分子的微生物细胞用于防治由一种或多种植物病原性真菌造成的疾病症状的用途，所述多肽分子包含与选自SEQ ID NO:4, SEQ ID N0:5、SEQ ID N06和SEQ IDNO: 7的氨基酸序列有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
17.权利要求16的用途，其中所述多肽分子包含与SEQID NO: 4有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
18.权利要求16的用途，其中所述多肽分子包含SEQID N0:4。
19.权利要求16的用途，其中所述多肽分子包含与SEQID NO: 5有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
20.权利要求16的用途，其中所述多肽分子包含SEQID N0:5。
21.权利要求16的用途，其中所述多肽分子包含与SEQID NO: 6有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
22.权利要求16的用途，其中所述多肽分子包含SEQID N0:6。
23.权利要求16的用途，其中所述多肽分子包含与SEQID NO: 7有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
24.权利要求16的用途，其中所述多肽分子包含SEQID N0:7。
25.权利要求16-24中任一项的用途，其中所述微生物细胞为真菌细胞、酵母细胞或细菌细胞。
26.权利要求25的用途,其中所述真菌细胞为Sphaerodesmycoparasitica的细胞或青霉属某些种(Penicillium spp.)的细胞。
27.权利要求25的用途,其中所述酵母细胞为接合酵母属某些种(Zygosaccharomycesspp.)的细胞、酵母属某些种(Saccharomyces spp.)的细胞、毕赤氏酵母属某些种(Pichiaspp.)的细胞或克鲁维氏酵母属某些种(Kluyveromyces spp.)的细胞。
28.权利要求25的用途，其中所述细菌细胞为大肠杆菌(Escherichiacoli)的细胞、假单胞菌属某些种(Pseudomonas spp.)的细胞或芽孢杆菌属某些种(Bacillus spp.)的细胞。
29.一种被转化的植物细胞，其表达包含与选自SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:5,SEQ ID N06和SEQ ID N0:7的氨基酸序列有至少80%序列同一性的氨基酸序列的多肽分子，其中所述植物细胞对镰刀菌属某些种的感染有抗性。
30.权利要求29的被转化的植物细胞，其中所述多肽分子包含与SEQID N0:4有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
31.权利要求29的被转化的植物细胞，其中所述多肽分子包含SEQID N0:4。
32.权利要求29的被转化 的植物细胞，其中所述多肽分子包含与SEQID NO:5有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
33.权利要求29的被转化的植物细胞，其中所述多肽分子包含SEQID N0:5。
34.权利要求29的被转化的植物细胞，其中所述多肽分子包含与SEQID N0:6有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
35.权利要求29的被转化的植物细胞，其中所述多肽分子包含SEQID N0:6。
36.权利要求29的被转化的植物细胞，其中所述多肽分子包含与SEQID NO:7有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
37.权利要求29的被转化的植物细胞，其中所述多肽分子包含SEQID N0:7。
38.权利要求29-37中任一项的被转化的植物细胞，其中所述植物细胞为油料植物细胞或谷类植物细胞或豆类植物细胞。
39.一种用于防治由一种或多种植物病原性真菌造成的疾病症状的分离蛋白，所述分离蛋白包含多肽分子，所述多肽分子包含与选自SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:5,SEQ ID N06和SEQ ID NO: 7的氨基酸序列有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
40.权利要求39的分离蛋白，其中所述多肽序列包含与SEQID N0:4有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
41.权利要求39的分离蛋白，其中所述蛋白包含SEQID N0:4。
42.权利要求39的分离蛋白，其中所述蛋白包含与SEQID NO:5有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
43.权利要求39的分离蛋白，其中所述蛋白包含SEQID N0:5。
44.权利要求39的分离蛋白，其中所述蛋白包含与SEQID NO:6有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
45.权利要求39的分离蛋白，其中所述蛋白包含SEQID N0:6。
46.权利要求39的分离蛋白，其中所述蛋白包含与SEQID NO:7有至少80%序列同一性的氨基酸序列。
47.权利要求39的分离蛋白，其中所述蛋白包含SEQID NO:7。
48.一种分离的核酸分子，其编码权利要求39-47中任一项的蛋白。
49.一种微生物细胞，其由权利要求48的核酸分子转化。
50.权利要求49的微生物细胞，其中所述核酸分子与启动子可操作地连接。
51.权利要求49或50的微生物细胞，其中所述微生物细胞为真菌细胞、酵母细胞或细菌细胞。
52.权利要求51的微生物细胞,其中所述真菌细胞为Sphaerodesmycoparasitica的细胞或青霉属某些种的细胞。
53.权利要求51的微生物细胞，其中所述酵母细胞为接合酵母属某些种的细胞、酵母属某些种的细胞、毕赤氏酵母属某些种的细胞或克鲁维氏酵母属某些种的细胞。
54.权利要求51的微生物细胞，其中所述细菌细胞为大肠杆菌细胞、假单胞菌属某些种的细胞或芽胞杆菌属某些种的细胞。
55.—种植物细胞，其由权利要求48的核酸分子转化。
56.权利要求55的植物细胞，其中所述核酸分子与启动子可操作地连接。
57.权利要求55或56的微生物细胞，其中所述植物细胞为油料植物细胞或谷类植物细胞或豆类植物细胞。
【文档编号】C07K14/37GK103517983SQ201180070381
【公开日】2014年1月15日 申请日期:2011年2月25日 优先权日:2011年2月25日
【发明者】V·武亚诺维奇 申请人:萨斯喀彻温大学