专利名称：一种快速制备色谱分离制备丹酚酸b的方法
技术领域：
本发明涉及一种从丹参药材中分离纯化得到纯度大于98.0%的丹酚酸B的制备方法。
背景技术：
丹参为唇形科植物Mlvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎，具有祛淤止痛、 活血通经、清心除烦之功效。丹参主要含两类有效成分一为脂溶性的二萜类化合物，二为水溶性的多聚酚酸类成分。实验研究证明，丹参水溶性成分具有多方面的药理活性，具有很强的抗氧化活性。丹酚酸B为丹参中重要的水溶性有效成分之一，约占总酚酸的70%，在 2010版中国药典中，已将丹酚酸B作为丹参片的指标成分。丹酚酸B由三分子丹参素与一分子咖啡酸缩合而成，研究表明其有强烈的抗氧化和清除氧自由基的活性，对肾功能不全和肝损伤均有一定保护作用。分离制备丹参水溶性活性成分对进一步揭示丹参药效的物质基础和开发新的天然药物具有十分重要的意义。而丹酚酸B在水溶液中的稳定性与pH值、 温度有很大关系，给中药制剂的生产和储存带来较大的困难。目前丹酚酸B的分离纯化方法主要有(1)柱层析法，但操作比较复杂，效率不高， 而且需要不同填料结合使用；(2)制备型高效液相色谱法，对设备和试剂要求高，成本较高，难以规模化生产；(3)高速逆流色谱法，需要进行大量实验选择合适的溶剂系统。快速制备色谱是在传统柱色谱的基础上发展起来的快速分离系统，采用自动输液系统和更小粒径的填料，通过连接检测器进行实时监测，并可自动收集馏分。该色谱仪可使用分析纯试剂做流动相，降低了成本，可承受较高流速，通过调节流动相的比例实现对物质的快速、有效分离，并且重复性好。丹酚酸B的结构式如下
权利要求
1.一种快速制备色谱分离制备丹酚酸B的方法，其特征在于丹参药材先用含乙醇的水溶液提取，经有机溶剂萃取得到浸膏，以浸膏为原料，以快速制备色谱为分离手段，以甲醇-水为洗脱体系，最终制得丹酚酸B;具体步骤为(1)药材处理丹参药材以1 10 20的料液比(m/v)，用体积分数30% 80%的乙醇-水溶液，超声提取0. 5 池，过滤，滤液60°C以下减压浓缩至为原体积的1/2 1/4，过滤，滤液用乙醚萃取，乙醚用量与浓缩液体积比为0. 5 1 ；水层加酸调节pH为3 4，过滤获得水层清液，水层清液以乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层减压浓缩至干，得到乙酸乙酯浸膏；(2)样品处理乙酸乙酯浸膏加体积分数10% 70%的甲醇-水溶解，得浓度为30 60mg · mL—1的样品溶液，离心，取上清液，得到样品溶液；(3)色谱柱预处理快速制备色谱选择制备型中低压液相色谱柱，以洗脱体系溶液平衡色谱柱；洗脱体系溶液为甲醇-水溶液，其中甲醇在甲醇-水溶液中的体积分数为 25% 50% ；(4)进样将步骤( 获得的样品溶液进样，进样体积为1 5mL；(5)洗脱采用洗脱体系溶液洗脱，流速控制在3 5mL· HiirT1，收集洗脱液；洗脱体系溶液为甲醇-水溶液，其中甲醇在甲醇-水溶液中的体积分数为25% 50% ；(6)丹酚酸B的获取收集的洗脱液经饱和后，用乙酸乙酯萃取，经浓缩和干燥得到丹酚酸B。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤⑴所述的提取温度小于60°C。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)所述超声提取0.5 池后，过滤的残渣按料液比1 10 20的比例加入体积分数30% 80%乙醇再次提取0.5 浊，合并两次的提取液，滤过，合并滤液，浓缩；过滤，滤液以乙醚萃取，弃去，水层调pH为3 4 后，过滤，滤液再以乙酸乙酯萃取；步骤(1)调节水层为酸性采用盐酸溶液，浓度为0.1 Imol · L—1O
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)所述的乙醚萃取次数为1 3次，每次乙醚的用量与浓缩液的体积比为1 0.5 1。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)所述的乙酸乙酯萃取次数为1 3 次，每次乙酸乙酯的用量与水层清液体积比为1 0.5 1。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(3)是以5 10倍柱体积的洗脱体系溶液平衡色谱柱。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(3)所述制备型中低压色谱柱选用商品化或自己填充的中低压色谱柱，填料为C18键合相填料；色谱柱填料平均粒径为30 60 μ m0
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(6)收集的洗脱液加入氯化钠固体至饱和，用乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯层，经减压浓缩和真空干燥得丹酚酸B，减压浓缩和真空干燥的温度为30°C 60°C。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(5)所述的洗脱过程采用在线紫外检测， 自动收集洗脱液，紫外检测波长为2Mnm和^6nm。
全文摘要
本发明提供了一种快速制备色谱分离制备丹酚酸B的方法，是一种从丹参药材中分离纯化得到纯度大于98.0％的丹酚酸B的制备方法。药材经提取、有机溶剂萃取之后得到乙酸乙酯浸膏，采用快速制备色谱仪，C18键合相为填料的中低压色谱柱，以甲醇-水为洗脱体系，自动收集洗脱液。洗脱液经有机溶剂萃取，减压浓缩真空干燥，最后得到纯度>98.0%的丹酚酸B。本发明所述方法与现有技术相比，操作简便，成本低，重复性好，效率高，所得产品纯度高，可用于丹酚酸B的规模化生产。
文档编号C07D307/86GK102532077SQ201210004340
公开日2012年7月4日 申请日期2012年1月6日 优先权日2012年1月6日
发明者徐新军, 杨梅, 王大冲, 王建, 谢春燕, 谢鸷生, 黄洁云 申请人:中山大学, 回音必集团(江西)东亚制药有限公司