用于改变xlhed表型的组合物和方法

用于改变xlhed表型的组合物和方法
【专利摘要】本发明涉及临时施用EDA激动剂、尤其EDI200的方法，所述方法与形成任何EDA依赖性结构如外胚层附属物所需要的最佳治疗反应窗口相关。使用所述方法可以设计靶向治疗给药和施用方案，以便校正或改变与遗传病、尤其XLHED相关的异常表型。
【专利说明】用于改变XLHED表型的组合物和方法
[0001]序列表的引用
[0002]本申请随电子格式的序列表一起提交。该序列表以2012年5月10日创建的大小为3，610比特且名称为2003.1000PCT_SEQLST.txt的文件提供。电子格式的序列表中的信息通过引用的方式完整并入本文。
[0003]相关申请的交叉引用
[0004]本申请要求2011年5月13日提交的美国临时申请号61/485，677的优先权，所述文献的内容通过引用方式完整并入本文。
【技术领域】
[0005]本发明涉及用于改变和/或调节经诊断患有或患有XLHED的个体的表型的组合物、方法、测定法和试剂盒。
技术背景
[0006]X-连锁少汗性外胚层发育不良(XLHED)是在人、狗、小鼠和牛中鉴定的疾病。一小组人疾病已经归因于EDA基因(前称为EDl)的缺陷，所述EDA基因编码外异蛋白(EDA，亚型EDA-A1)，该蛋白已经显示参与早期发育期间毛囊和齿胚的形态发生。该疾病的表型是毛发稀疏或无发、齿丢失和/或畸形、外分泌腺发育不全、复发性良性感染和支气管炎和肺炎易感性增加(Reed等人，1970 ；Nordgarden等人，2001)。由于不能出汗而造成发热,在患病儿童中存在显著的发病率和死亡率。显著的发病率包括呼吸道感染风险增加、因干眼所致的眼病以及因齿异常(出牙迟延、锥形齿冠(钉型牙)和少牙畸形)导致的咀嚼困难、生长迟缓、不良外观和言语障碍。首个XLHED模型在选自大规格黑6品系的小鼠中鉴定得到，这导致自发产生具有异常毛发和齿发育的后代。受影响的动物(命名为“虎斑小鼠”，原因是杂合子雌性的皮毛图案类似于虎斑猫)缺少功能性EDA蛋白质，这是由于EDA中存在移码突变，而所述移码突变导致缺少对正常齿、毛发和汗腺形成至关重要的受体结合和信号传导所必需的结构域(Ferguson等人，1997 ;Srivastava等人，1997)。因此,这些小鼠在尾部上没有汗腺和毛发。虎斑小鼠是目前广泛使用的XLHED模型。
[0007]发明简沭
[0008]TNF家族配体外异蛋白A(EDA)及其受体EDAR是皮肤附属物如毛发、牙齿和外分泌汗腺正确发育所需要的。“功能丧失性”EDA突变造成X-连锁少汗性外胚层发育不良(XLHED)，这是一种可以通过及时施用重组EDA在小鼠和狗中改善的病状。
[0009]根据本发明，提供用于临时施用EDA激动剂、尤其EDI200的方法，所述方法与形成任何EDA依赖性结构如外胚层附属物所需要的治疗反应窗口相关。
[0010]不同的EDA依赖性结构可以在不同的时间点诱导，并且可能需要不同的剂量或暴露时间。有趣地，一些结构可以在其正常发育时间后多达几日才诱导。当出于治疗目的而考虑EDAR激动剂时，这种性质非常重要。
[0011]在一个实施方案中，重组形式的EDA-Al (本文中称作EDI200、Fc:EDAl或Fc-EDA)用来校正哺乳动物胎儿中以及出生后的表型异常，所述重组形式的EDA-Al由与免疫球蛋白的一部分融合的该蛋白质的胞外结构域组成。EDI200含有EDA信号传导所需要的正常活性形式的受体结合结构域。作为对照，将EDAR-Fc (由与免疫球蛋白的Fe部分融合的EDA受体的胞外结构域组成的重组蛋白)用作EDI200的抑制剂，旨在控制体内EDI200活性的
持续期。
[0012]现已证明，哺乳动物中存在EDA受体(EDAR)表达期，并且对于施用EDI200 (FciEDAI)以便校正与缺少EDA信号传导相关的异常表型(如XLHED患者中所见的那些)，存在独特的功效窗口。
【专利附图】

【附图说明】
[0013]图1是拍摄WT和虎斑小鼠的3x3组照片，所述照片显示当子宫内治疗小鼠时，拯救了针毛。小图A:对妊娠第Ell.5、Ε13.5、Ε14.5、Ε16.5、Ε17.5日的EDA缺陷型怀孕虎斑小鼠或在Pl(出生日)、P2、P3、P4或P5的新生虎斑乳鼠以lmg/kg静脉内(母体中)或腹内(新生鼠中)施用EDI200，24小时后，以30mg/kg施用EDAR-Fc以阻断剩余的EDI200。在断奶时，对受治母鼠的乳鼠或受治乳鼠分析针毛的存在(箭头)。出于比较，显示未治疗的WT和虎斑对照。在图片顶部显示治疗的时程。显示相对于针毛诱导而言最相关的治疗时程。小图B:结果的图示。虎斑小鼠中皮肤衍生附属物的EDA依赖性发育的相关时期以24小时时间划分(矩形)，显示胚妊娠日(E11.5、E12.5等)和出生后日(P1、P2等，以Pl作为出生日)时间。矩形中的指征指回复虎斑表型的程度(:无回复(reversion)，像虎斑一样；+: —些回复；++:大幅回复，类似于WT ；nd:未测定)。上方曲线代表推断的用于虎斑小鼠中针毛形成的治疗机会窗口。
[0014]图2是拍摄WT和虎斑小鼠的3x3组照片，所述照片显示当子宫内和出生后治疗小鼠时拯救了汗腺。小图A:对妊娠第Ell.5、E13.5、E14.5、E16.5、E17.5日的EDA缺陷型怀孕虎斑小鼠或在Pl(出生日)、？243、？4或？5的新生虎斑乳鼠以lmg/kg静脉内(母体中)或腹内(新生鼠中)施用EDI200，24小时后，以30mg/kg施用EDAR-Fc以阻断剩余的EDI200。在断奶时，使用碘/淀粉出汗试验，对受治母鼠的乳鼠或受治乳鼠分析汗腺的存在。将汗腺开口可视化为黑色点。出于比较，显示未治疗的WT和虎斑对照。在图片顶部显示治疗的时程。显示相对于汗腺诱导而言最相关的治疗时程。小图B:结果的图示。虎斑小鼠中皮肤衍生附属物的EDA依赖性发育的相关时期以24小时时间划分(矩形)，时间以胚妊娠日(E11.5、E12.5等)和出生后日(P1、P2等，以Pl作为出生日)显示。矩形中的指征指回复虎斑表型的程度(:无回复，像虎斑一样；+: —些回复；++:大幅回复，类似于WT ；nd:未测定)。上方曲线代表用于虎斑小鼠中汗腺形成的推断的治疗机会窗口。
[0015]图3是拍摄WT和虎斑小鼠的3x3组照片，所述照片显示当子宫内和出生后治疗小鼠时拯救了尾毛。小图A:对妊娠第Ell.5、E13.5、E14.5、E16.5、E17.5日的EDA缺陷型怀孕虎斑小鼠或在Pl(出生日)、？243、？4或？5的新生虎斑乳鼠以lmg/kg静脉内(母体中)或腹内(新生鼠中)施用EDI200，24小时后，以30mg/kg施用EDAR-Fc以阻断剩余的EDI200。在断奶时，使用碘/淀粉出汗试验，对受治母鼠的乳鼠或受治乳鼠分析汗腺的存在。出于比较，显示未治疗的WT和虎斑对照。在图片顶部显示治疗的时程。显示相对于尾毛诱导而言最相关的治疗时程。小图B:结果的图示。虎斑小鼠中皮肤衍生附属物的EDA依赖性发育的相关时期以24小时时间划分(矩形)，时间以胚妊娠日(E11.5、E12.5等)和出生后日(P1、P2等，以Pl作为出生日)显示。矩形中的指征指回复虎斑表型的程度无回复，像虎斑一样；+: —些回复；++:大幅回复，类似于WT ；nd:未测定)。上方曲线代表推断的用于虎斑小鼠中尾部背侧和腹侧上尾毛形成的治疗机会窗口。
[0016]图4是拍摄WT和虎斑小鼠的一组照片，所述照片显示可以在延迟几日情况下诱导尾毛。小图A:从出生(Pl)至断奶(P21)每日拍摄WT小鼠尾部的图片。尾部背面和腹面分别在左手侧和右手侧。尾部背面上的毛发首先在P6出现(箭头)。仅显示最相关的时间。小图B:从出牛.(Pl)至断奶(P21)每日拍摄在Pl用EDI200治疗并且24小后施用过量EDAR-Fc的EDA缺陷型虎斑小鼠的尾部的图片。尾部背面上的毛发首先在PlO出现(箭头)，即比WT小鼠中晚大约4日。仅显不最相关的时间。小图C:与图3的小图B相同，.显示可以在虎斑小鼠中诱导背部尾毛的第一时间E16.5与作为小图B中所示的实验中起始治疗时间的Pl相隔大约4日。该结果连同小图A和B中所示的结果一起表明，与WT小鼠相t匕，在Pl用EDI200治疗的虎斑小鼠中的背部尾毛形成延迟约4日启动。
[0017]图5是拍摄WT和虎斑小鼠的一组照片，所述照片显示当子宫内和出生后治疗小鼠时扬救了眼部。小图A:对妊娠第Ell.5、Ε13.5、Ε14.5、Ε16.5、Ε17.5日的EDA缺陷型怀孕虎斑小鼠或在Pl(出生日)、P2、P3、P4或P5的新生虎斑乳鼠以lmg/kg静脉内(母体中)或腹内(新生鼠中)施用EDI200，24小时后，以30mg/kg施用EDAR-Fc以阻断剩余的EDI200。在一种情况下，怀孕小鼠在E18.5以lmg/kg施用EDI200,并且乳鼠在P2以lmg/kg再次接受EDI200，而不接受任何EDAR-Fc。在断奶时，对受治母鼠的乳鼠或受治乳鼠分析眼外观。出于比较，显示未治疗的WT和虎斑对照。在图片顶部显示治疗的时程。显示相对于眼回复而言最相关的治疗时程。注意对于在E18.5和P3治疗的小鼠，三只小鼠中仅一只具有明显回复的眼部表型。小图B:结果的图示。虎斑小鼠中皮肤衍生附属物的EDA依赖性发育的相关时期以24小时时间划分(矩形)，时间以胚妊娠日(E11.5、E12.5等)和出生后日(P1、P2等，以Pl作为出生日)显示。矩形中的指征指回复虎斑表型的程度(:无回复，像虎斑一样；+: —些回复；++:大幅回复，类似于WT ；nd:未测定)。
[0018] 图6是拍摄WT和虎斑小鼠的一组照片，所述照片显示当子宫内和出生后治疗小鼠时在多个时间拯救多种牙齿。小图A:对妊娠第Ell.5、Ε13.5、Ε14.5、Ε16.5、Ε17.5日的EDA缺陷型怀孕虎斑小鼠或在Pl (出生日)、？2、？3、？4或？5的新生虎斑乳鼠以lmg/kg静脉内(母体中)或腹内(新生鼠中)施用EDI200，24小时后，以30mg/kg施用EDAR-Fc以阻断剩余的EDI200。在一种情况下，怀孕虎斑小鼠在E14.5用EDI200治疗，但是24小时后不注射EDAR-Fc (E14.5 (无停顿))。在约I月龄处死受治母鼠的乳鼠或受治乳鼠并且分析下颚中的齿形态。出于比较，显示未治疗的WT和虎斑对照。在图片顶部显示治疗的时程。显示相对于牙齿诱导而言最相关的治疗时程。完整白色箭头:来自WT的第二臼齿的特征性形状。开放箭头:第一白齿的前部分。细箭头:第三白齿。值得注意的是，在虎斑小鼠中，第三臼齿(图片左手侧上的小臼齿)可存在或不存在。小图B:结果的图示。虎斑小鼠中皮肤衍生附属物的EDA依赖性发育的相关时期以24小时时间划分(矩形)，时间以胚妊娠日(E11.5、E12.5等)和出生后日(P1、P2等，以Pl作为出生日)显示。矩形中的指征指回复虎斑表型的程度(:无回复，像虎斑一样；+:—些回复；++:大幅回复，类似于或大于WT ；nd:未测定)。上方曲线代表推断虎斑小鼠下颚上臼齿形成的治疗机会窗口。M1、M2、M3:臼齿1、2和3。
[0019]图7是本文所述的实验的一般方法的简图。小图A:在EDA缺陷型生物(在本文中为小鼠)中，内源EDA不产生或无活性，但是EDA受体仍以可传导信号的形式表达。提供Fc-EDA形式的重组EDA足以激活EDAR信号传导途径并拯救一些或全部EDA缺陷型表型。如果在内源EDAR可以反应时的时间施加Fc-EDA，则治疗是有效的。小图B =Fc-EDA的施用可以在新生EDA缺陷型小鼠中直接进行，或通过将Fc-EDA施用至怀孕母体而在胎儿中间接进行。Fe-部分可以跨胎盘转移并因此抵达胎儿。可以选择Fc-EDA的施用剂量和时间。小图C =Fc-EDA在受治疗的EDA缺陷型动物中的作用可以在所期望的时间段后通过施用过量的EDAR-Fc被阻断。EDAR-Fc也可以通过跨胎盘转运系统抵达胎儿循环。
[0020]发明详沭
[0021]除非另外限定，否则本文中所用的全部技术与科学术语具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。尽管与本文所述的那些方法和材料相似或等同的方法和材料也可以用于实施或测试本发明中表征的方法，然而下文仍描述了合适的方法和材料。
[0022]定义
[0023]出于便利，下文提供了在本说明书、实例和所附权利要求中使用的某些术语和短语的含义。所述定义本质上不意在限制，而是起到提供更清晰理解本发明某些方面的作用。
[0024]本文所用的术语“活化”指信号传导途径或生物学反应的任何改变，例如包括比基础水平增高、从受抑制状态恢复至基础水平和刺激该途径高于基础水平。
[0025]术语“对齐的发育窗口”意指两个或更多个物种之间在它们的表型发育中相关的时间框架。对齐的发育窗口可以反映其中两个物种的发育为一致的情况下的治疗窗口。对齐的发育窗口也可以提供界定“先导”、“延迟”或“扩大”的治疗窗口的基础。本文中术语“对齐”的使用不意在暗示窗口的起点`和终点精确匹配。本领域技术人员理解，在任何两个生物(甚至相同物种的生物)之间，发育将不以完全相同的方式在完全相同的时间发生。因此，应当理解，种内和种间变异确实存在，“对齐”意指本领域技术人员接受的对齐的发育窗口(包括轻微变异)。
[0026]术语“生物学样品”或“生物样品”指从生物(例如，人类患者)或从生物的组分(例如，细胞)或从其体液(例如，血液、血清、痰、尿等)获得的样品。样品可以为任何生物组织、器官、器官系统或液体。样品可以是“临床样品”，其是源自患者的样品。这类样品包括但不限于痰、血液、血细胞(例如，白细胞)、羊水、血浆、精液、骨髓和组织或芯针、细针或冲击针活组织检查样品、尿、腹膜液和胸膜液或来自其中的细胞。生物样品也可以包括组织切片，如为组织学目的取得的冷冻切片。生物样品也可以称作“患者样品”。
[0027]本文所用的术语“相关”或“相关性”指两个或更多个随机变量或观察的数值之间的关系。如果当通过统计方法或检验分析，发现这种关系满足所使用的统计检验的显著性阈值，则相关性可以是统计学上的。
[0028]“发育窗口”是一个或多个表型在生物中正常发展的时间框架。
[0029]术语“胚”意指处于发育过程中的未出生后代。
[0030]术语“胚分期”指胚在发育中经历的任何时期。胚分期已经由几种方法分类，所述方法包括卡内基分期体系和Theiler分期体系。[0031]术语“细胞类型”指来自给定来源(例如，组织、器官)的细胞或处于给定分化状态的细胞，或与给定病变或遗传变化相关的细胞。
[0032]术语“病状”指任何细胞、器官、器官系统或生物的状态。病状可以反映个体的疾病状态或简单地反映生理表现或情况。病状可以表征为表型状况，如疾病或遗传病的宏观表现，如与该病状相关的基础性基因或蛋白质表达图谱。病状可以是良性或恶性。
[0033]术语“可检测的”指借助以下标准技术可检测的RNA表达模式:聚合酶链反应(PCR)、逆转录酶(RT)PCR、差异展示和RNA印迹分析或本领域技术人员熟知的任何方法。类似地，蛋白质表达模式可以借助标准技术如蛋白质印迹法“检测到”。
[0034]出于治疗目的，“哺乳动物”指划归为哺乳动物的任何动物，包括人、家养动物和家畜，和动物园、体育用或宠物动物，如狗、马、猫、牛、猴等。优选地，哺乳动物是人。
[0035]当应用于例如XLHED时，短语“治疗方法”或其等同物指作用的程序或过程，其中将所述程序或过程设计成减少、消除或改变与个体中疾病或病状相关的表型表现和/或副作用，或减轻所述疾病或病状的症状。疾病或病症的“治疗方法”并不必然地意指事实上将彻底地消除该疾病或其他病症，或事实上将彻底地缓解该疾病或其他病症的症状。经常，治疗癌症的方法将甚至在成功可能性低的情况下进行，但是考虑到个体医疗史和估计的存活预期，所述方法仍视为总体有益的作用过程。
[0036]本文所用的短语“肠胃外施用“和“肠胃外方式施用”意指除了肠内和局部施用之外的施用模式，通常通过注射施用，并且包括而不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、椎管内、硬膜外和胸骨内注射和输注。
[0037]术语“出生前”意指在出生之前或妊娠期间。
[0038]术语“出生后”意指在出生后。
[0039]术语“表型表现”指疾病的宏观表现。
[0040]术语“预测”意指特定事件将在未来发生或很有可能发生的声明或宣称。
[0041]术语“预后”意指特定生物事件将在未来发生或很有可能发生的声明或宣称。
[0042]术语“进展”或“病情进展”意指疾病或病状的推进或加重或者朝疾病或病状推进或加重。
[0043]术语“受试者”指人或其他脊椎动物、尤其哺乳动物患者并且包括期望使用本发明方法检查和治疗的任何个体。然而，应当理解“患者”并不自动地暗示存在症状或疾病。本文所用术语“患者”优选地指需要治疗的人。
[0044]除非另外指明，否则本文所用术语“治疗”意指逆转、减轻、抑制病症或病状的进展，或部分或完全防止该病症或病状的表型表现。除非另外指明，否则本文所用术语“疗法”指治疗的行为。
[0045]术语“治疗结局”意指一种或多种治疗的结局。治疗结局可以是正向或负向的。可以主观或客观地测量治疗结局的性质，例如“正向”结局。例如，正向结局可以反映为患者症状的主观表征(例如，“感觉”变好)，或也可以表示为病症的客观量度(例如，毛发生长增加、齿形态或出汗能力)。
[0046]本文所用的术语“治疗窗口”指在其范围内药物组合物的施用将产生至少一些正向治疗结局的时间框架。治疗窗口可以按小时、日、周、月或年计量。它们也可以在紧接受精后但是在胚着床之前的时间、当生物处于子宫内时或在出生之前或之后的任何时间出现。为此目的，可以理解，可以根据母体治疗表征生物从受孕至出生(包括子宫内)的治疗窗口。在这种情况下，尽管称作治疗母体，但是母体与药物组合物接触类似于“治疗”胚胎或胎儿。治疗窗口可以与“对齐的发育窗口”一致。治疗窗口可以是先导的、延迟的或扩大的。
[0047]术语“扩大的治疗窗口”意指期间可以施用治疗的时间框架，所述时间框架在持续期上比只基于对齐发育窗口的治疗窗口长。扩大的治疗窗口的开始或结束可以与对齐的发育窗口的开始或结束一致并且在时间上扩至更早开始或更晚结束。它们也可以比对齐的发育窗口长并且在时间上扩至 更早开始且更晚结束，因而完全包括一个或多个对齐的发育窗口。扩大的治疗窗口可以按小时、日、周、月或年为单位表示。扩大的治疗窗口可以比构成对齐的发育窗口的正常发育窗口长1-20%、2-30%、5-50%或更长。它们可以长3倍、4倍、5倍或更多。
[0048]术语“延迟的治疗窗口”意指期间可以施用治疗的时间框架，所述时间框架在时间上比只基于对齐发育窗口的治疗窗口开始得更晚。延迟的治疗窗口在预期的对齐发育窗口之后的某个时间点开始并且在时间上延续稍晚。它们可以无限延续并且可以覆盖一个或多个后续的对齐发育窗口。延迟的治疗窗口可以按小时、日、周、月或年为单位表示。延迟的治疗窗口可以比构成对齐的发育窗口的正常发育窗口长1_20%、2-30%、5-50%或更长。它们可以长3倍、4倍、5倍或更多。如果它们比对齐的发育窗口长，则按照定义，延迟的治疗窗口是单纯在稍晚时间开始的扩大的治疗窗口。
[0049]术语“先导治疗窗口”意指期间可以施用治疗的时间框架，所述时间框架在时间上比只基于对齐发育窗口的治疗窗口开始得更早。先导治疗窗口在预期的对齐发育窗口开始之前开始。它们也可以比对齐的发育窗口长并且延续进入并超出一个或多个对齐的发育窗口。先导治疗窗口可以按小时、日、周、月或年为单位表示。先导治疗窗口可以比构成对齐的发育窗口的正常发育窗口长1_20%、2-30%、5-50%或更长。它们可以长3倍、4倍、5倍或更多。如果它们比对齐的发育窗口长，则按照定义，先导治疗窗口是单纯在稍早时间开始的扩大的治疗窗口。
[0050]术语“治疗有效物质”意指一种组合物，所述组合物将激发组织，器官、系统、生物、动物或人类产生研究者、兽医师、医生、或其他临床医生所寻求的生物反应或医学反应。
[0051]术语“治疗有效量”或“有效量”意指主题化合物或组合的量，所述量将激发组织，器官、系统、生物、动物或人类产生研究者、兽医师、医生、或其他临床医生所寻求的生物反应或医学反应。在这种情境下，生物反应或医学反应包括治疗结局。
[0052]改夺或调节表型表现
[0053]本发明提供用于校正、改变或缓和与外胚层发育不良、尤其XLHED相关的各种表型表现的方法。外胚层发育不良的表型表现包括但不限于牙齿丢失或牙齿形状异常(包括但不限于第一、第二或第三白齿，或第一或第二前白齿、犬齿(canine)或第一或第二切齿的任一者)，以下腺体的形态异常或缺少:汗腺、睑板腺、上呼吸道腺体、皮脂腺、唾液腺和其他腺体，缺少各种类型的毛发或各种类型的毛发形态异常，以及脱发。
[0054]通过施用针对EDA受体的重组形式配体，实现与XLHED相关的表型表现的校正、改变和/或缓和。这类重组EDA组合物包括在2010年4月8日提交的美国专利申请USSN12/756, 268中详细描述的那些，其中所述美国专利申请USSN12/756, 268是2004年10月25日提交的美国专利申请USSN10/503，999的继续申请，现授权为美国专利7，736，657，所述美国专利7，736，657是2002年8月21提交的国际申请号PCT/EP2002/009354根据35U.S.C371部分进入国家阶段的申请，所述国家阶段申请指定进入美国并且要求2002年2月10提交的德国申请号10205368.5和2002年2月11提交的德国申请号10205583.1的优先权，前述文献的内容通过引用方式完整并入本文。
[0055] 在本发明的一个实施方案中，重组融合蛋白是EDI200(又名Fc-EDA，Fc:EDAl)。EDI200是一种由人IgGl的Fe区和EDA - Al的受体结合结构域(肿瘤坏死因子(TNF)结构域)组成的完全人源化的Fe融合蛋白。生物活性蛋白是糖基化的并且主要作为由6个相同Fc = EDA-Al单体组成的六聚物存在。单体的380个氨基酸序列在本文中作为SEQ IDNO:1提供。
[0056]施用和给药
[0057]当待治疗的生物是哺乳动物如人时，该组合物可以通过本领域已知的任何手段施用，所述手段包括但不限于口服、腹内或肠胃外途径，包括颅内(例如，心室内、实质内和鞘内)、静脉内、肌内、皮下、透皮、气道(气溶胶)、经鼻、直肠和局部(包括颊部和舌下)施用。在某些实施例中，通过静脉内输注或注射这些组合物。
[0058]通常，EDI200的适合剂量处于接受者、患者或个体每日每千克体重0.01至200.0毫克范围内，通常处于每日每千克体重I至50mg的范围内。例如，EDI200可以按每单次剂量 0.05mg/kg、0.5mg/kg、lmg/kg、L 5mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、3.5mg/kg、7mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg或50mg/kg施用。药物组合物可以每日施用一次,或可以作为两个、三个或更多个子剂量在一天内以适宜的间距施用或者甚至通过受控释放制剂通过连续输注或递送法施用。在这种情况下，每个子剂量中所含的EDI200必须是相应地更少，以便实现每日总剂量。给药也可以是I次、2次、3次或多次给药的多次给药方案。也可以将剂量单位复配用于在几天内递送，例如，使用在几天时间范围内提供持久释放的常规持续释放制剂。持续释放制剂是本领域熟知的并且特别可用于在特定部位递送药物，如可以随本发明的药物一起使用。在这个实施例中，剂量单位含有相应的多个每日剂量。
[0059]单一剂量对任何特定表型或症状的影响可以长久持续，从而使后续剂量以不多于
3、4或5天的间距或以不多于1、2、3或4周的间距施用。
[0060]技术人员理解，某些因素可能影响有效治疗受试者所需的剂量和时程，所述因素包括但不限于疾病或病症的严重性、先前的治疗、受试者的总体健康和/或年龄和存在的其他疾病。另外，用治疗有效量的组合物治疗受试者可以包括单次治疗或系列治疗。使用常规方法或基于使用适宜动物模型的体内测试，可以估计本发明涵盖的单个药物组合物的有效剂量和体内半寿期。
[0061]本发明还包括了含有本发明表征的EDI200化合物的药物组合物和制剂。本发明还包括化合物组合或治疗方案组合的用途，其中每个方案作为组分而具有含EDI200的药物组合物的施用。本发明的药物组合物可以按许多方式施用，这取决于是否需要局部或全身性治疗，也取决于待治疗的区域。施用可以是局部施用(例如，通过透皮贴剂)，肺部施用，例如，通过吸入或吹入散剂或气溶胶剂，包括采用雾化器；气管内、鼻内、表皮和透皮、口服或肠胃外施用。肠胃外施用包括静脉内、动脉内、皮下、腹内或肌内注射或输注施用；皮下施用，例如，借助植入的装置；或颅内施用，例如，通过实质内、鞘内或心室内施用。EDI200可以按靶向特定组织的方式递送。
[0062]用于局部施用的药物组合物和制剂可以包括透皮贴剂、油膏剂、洗剂、乳膏剂、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体剂和散剂。常规的药用载体、含水、粉状或油质基质、增稠剂等可以是必需或期望的。经涂布的避孕套、手套等也可以是有用的。适合的局部用制剂包括其中EDI200与局部用递送剂如脂质、脂质体、脂肪酸、脂肪酸酯、类固醇、螯合剂和表面活性物质混合的那些。[0063]在本发明的一个实施方案中，接受含EDI200的药物组合物治疗的受试者、患者或个体是表现异常表型的个体的母体。在这种情况下，可以在受孕(受精)后的任何时间治疗母体。
[0064]在一个实施方案中，在受精3日内治疗母体。在另一个实施方案中，在胚着床之前治疗母体。在一个实施方案中，在胚着床之后治疗母体。母体可以在胚妊娠期间的任何时间或在出生后治疗。如果在妊娠期间治疗，则治疗可以持续多个小时、日或周。治疗可以是不连续或断续的。如果在胚的妊娠期间治疗，在时间上，治疗可以在胚的一个或多个连续或者分隔的特定卡内基分期期间进行。在一个实施方案中，在母体的后代可以在母体泌乳时从母体接受有效量的EDI200的时间，治疗母体。在这个实施方案中，可以在后代出生之前(或之后)的任何时间治疗母体，其中EDI200可以发现于母体的哺乳期流体(例如，乳汁)中。
[0065]在一个实施方案中，在卡内基分期17-23内的一个或多个时间，使母体与包含EDI200的药物组合物接触。在一个实施方案中，在卡内基分期17和22之间治疗母体。在一个实施方案中，在卡内基分期17、18、19、20、21、22或23之一期间治疗母体。治疗也可以完全或部分地跨越一个或多个分期。
[0066]可以借助来自其中发育阶段已经对齐的一个或多个代表性动物模型的相关数据，确定人治疗窗口。本领域内接受的这类对齐是卡内基和Thieler分期的那些。另外，并且根据本发明，此类对齐的治疗窗口的范围可以变动。可以基于本领域已知的发育过程差异的其他证据变动。例如，如果已经显示某个表型在对齐的发育窗口外部被拯救，则可以调整治疗窗口以解释这些数据。在一个例子中，已知当动物用EDI200治疗时，小鼠中的尾毛启动在正常发育后4日仍可以发生。在这种情况下，治疗窗口可能符合稍晚的卡内基或Theiler分期并因此是延迟或放大的治疗窗口。因此，应当理解本发明的治疗窗口可以根据发育中的差异而扩大，从而在所讨论表型的正常发育过程之前、在所讨论表型的正常发育过程之后，或随被扩大至包括多于一个发育窗口或对齐的发育窗口的给药方案一起，需要治疗。
[0067]可以通过测量怀孕母体的血液或血清中提供与胚龄的相关性的标记，确定可用于母体的将改变或调节出生后代中异常表型的治疗窗口。这类量值包括但不限于人促性腺素释放激素(hCG)、激素如雌激素、睾酮、孕酮，母体或胎儿状态的其他生物指示物，包括葡萄糖、蛋白质等。胚胎或胎儿的物理量值也可以告知适宜的治疗窗口。这些量值具有非侵入性但却精确的优点。一旦包括这样的方法，通过超声法获得胎儿量值。
[0068]同样，如果胚胎或胎儿需要用本发明的组合物如EDI200治疗，则借助内窥镜法、手术或显微手术，利用多种方法将组合物直接递送至胚胎。通过这类方法，递送可以抵达胎儿的细胞、组织、器官或器官系统或抵达包围胎儿的羊水。
[0069]本发明还提供了出生后对后代的治疗。根据待改变的表型，某些治疗窗口在出生后仍保持开放。对后代的治疗可以在出生后的任何时间，但是优选地在生命第一年进行。
[0070]在一个实施方案中，在齿形态存在异常的情况下，稍晚用包含EDI200的药物组合物治疗是可能的。
[0071]人胚分期
[0072]已经基于多种特征如体节数目和胚长度的平均数确定了 23个形态学上不同的“卡内基”分期(因该项工作始于卡内基研究所而如此命名)，其贯穿人妊娠的前60日。基于其外部特征，给胚划分卡内基分期(从I至23编号)。分期基于脊椎动物胚的外部和/或内部形态发育，并且不直接依赖于年龄或尺寸。正常的人胚阶段划分成23个卡内基分期。这些分期汇总于表1中。
[0073]表1:人胚发育的卡内基分期
【权利要求】
1.一种改变哺乳动物生物体中外胚层发育不良的一个或多个表型表现的方法，所述哺乳动物生物体经诊断患有或疑似患有外胚层发育不良，所述方法包括向所述哺乳动物生物体施用包含EDI200的药物组合物，其中所述外胚层发育不良的表型表现选自:牙齿丢失、牙齿形状异常、汗腺的形态异常或缺少汗腺、缺少睑板腺、缺少上呼吸道腺体、缺少皮脂腺、缺少唾液腺、缺少各种类型的毛发或各种类型的毛发形态异常和脱发，并且其中施用在所述哺乳动物生物体的妊娠期间进行。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述外胚层发育不良是少汗性外胚层发育不良。
3.根据权利要求2所述的方法，其中通过治疗母体向所述生物体施用包含EDI200的药物组合物。
4.根据权利要求3所述的方法，其中通过选自子宫内注射、静脉内注射或动脉内注射的方法以肠胃外方式治疗母体。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述药物组合物在妊娠期间选自以下的时间段施用:在受:精后着床如、在着床后、在妊娠第5_9周之间、在妊娠第6_8周之间、在妊娠第6周期间、在妊娠第7周期间、在妊娠第8周期间和在妊娠第8周后。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述表型表现是缺少各种类型的毛发或各种类型的毛发形态异常或脱发，并且施用在妊娠第6-8周之间进行。
7.根据权利要求5所述的方法，其中所述表型表现是缺少各种类型的毛发或各种类型的毛发形态异常或脱发，并且施用在延迟的治疗窗口期间进行。
8.根据权利要求7所述 的方法，其中所述延迟的治疗窗口包含4至10日。
9.根据权利要求5所述的方法，其中所述表型表现是汗腺形态异常或缺少汗腺，并且施用在妊娠第8周后或在出生后进行。
10.根据权利要求5所述的方法，其中所述表型表现是牙齿丢失或牙齿形状异常，并且施用在妊娠第5-9周之间进行。
11.根据权利要求10所述的方法，其中牙齿丢失或牙齿形状异常包括以下的一个或多个:第一、第二或第三白齿，或第一或第二前白齿、犬齿或第一或第二切齿。
【文档编号】C07K17/00GK103534269SQ201280023625
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2012年5月10日 优先权日:2011年5月13日
【发明者】帕斯卡·施耐德, 克里斯蒂娜·科瓦尔奇克 申请人:安迪穆医药有限公司