一种新的倍半萜活性成分及其制备方法与应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种新的倍半萜化合物及其制备方法和应用。该发明具体公开了从犬问荆中经提取、萃取、柱层析分离以及重结晶纯化得到一种新的倍半萜化合物的制备方法，并采用光谱技术确定其分子式为C15H24O6，分子量为300，称为犬问荆内酯。通过琼脂扩散法检测该化学成分的抗菌活性，结果表明该活性成分对枯草芽孢杆菌具有明显的抑制活性。本发明中犬问荆内酯的制备方法简单、易行，短周期内即可获得高纯度、高收率和高附加值的产品，适用于产业化生产和应用，可为医药工业提供有药用价值的新化合物或先导化合物。
【专利说明】一种新的倍半疏活性成分及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种从植物中提取、分离纯化具有生物活性的化合物，具体是从犬问荆[Equisetum palustre L.]全草中提取、分离纯化一种新的具有生物活性的内酯化合物及其提取方法，属于植物次生代谢产物分离纯化领域。该化合物为犬问荆内酯，化学名为:
IS,2R, 7S, 8R-四羟基-丁香烷 _[4，7]_4，5-内酯。
【背景技术】
[0002]犬问荆[Equisetumpalustre L.],为木贼科(Equisetaceae)、问荆(Equisetum)属药用植物。广泛分布于全国各地海拔200-4000米地区。在国内外民间被广泛用于治疗溃疡、痔疮、肾结石等症，并具有镇静、保肝解毒、降血压、降血脂作用(于荣敏等，1986; Yesilada E.et al, 1995; Honda G.et al, 1996;李德坤等，2000; Ji Y.B.etal，2003)。兼具问荆的功效，在我国也经常将其作为问荆使用。犬问荆全草入药。《闽东本草》记载，犬问荆具有治疗“肠风痔漏”之功效。国内外民间验方中将其广泛应用于消化道溃疡疾病的治疗。现代药理研究表明，犬问荆具有抗泌尿系统、心血管系统、胃肠功能紊乱疾病、抗氧化、抗菌、抗肿瘤等多种生物学活性，资源丰富具有很高的应用价值。
[0003]犬问荆中已知的 次生代谢产物包括犬问荆碱,犬问荆定碱,烟碱，山柰酹-3-双葡萄糖-7-葡萄糖式，山柰酌.-3-鼠李糖葡萄糖式，山柰酌.-3-氧-芦丁式-7-氧-槐糖式，山柰酚-3-氧(6-氧-丙二酰基葡萄糖甙)-7-氧-葡萄糖甙，山柰酚-3，7-双葡萄糖甙，山柰酌._3_鼠李糖葡萄糖-7-葡萄糖式，山柰酌.-3-芸香糖-7-葡萄糖式，槲皮素-3-芸香糖-7-葡萄糖甙，乌头酸等(杨纯瑜等，1997;Gurbuz 1.et al，2009;周荣汉等，1985)。总体上，涉及生物碱、黄酮类和有机酸类。
[0004]本发明中的倍半萜化合物为首次从犬问荆中提取、分离纯化得到的萜类，并且为一种新化合物，在已有文献中未有报道。实验证明该化合物具有明显的抗菌活性，可在制备抗菌药物中应用。
【发明内容】
[0005]本发明的一个目的在于提供从犬问荆全草中提取分离得到的一种新的倍半萜化合物犬问荆内酯。
[0006]本发明的另一个目的是提供上述倍半萜化合物犬问荆内酯的制备方法。
[0007]本发明的再一个目的是提供上述倍半萜化合物犬问荆内酯在抗菌药物中的应用。
[0008]本发明提供的倍半萜活性成分——犬问荆内酯是通过以下方案获得的:
[0009](I)提取:将犬问荆全草原料粉碎后，按质量体积比加入5~20倍原料质量的丙酮、甲醇、乙醇或醇水混合溶液进行热回流、负压空化或超声波辅助提取，共提取2~5次，每次20min~60min,合并提取液,浓缩至干,得到犬问荆全草提取物；
[0010](2)负压空化混悬液液萃取:将犬问荆全草提取物分散于按质量体积比3~5倍的40~50° C水中，然后装入负压空化萃取柱，分别用和水等体积的石油醚或正己烷负压空化混悬液液萃取2~4次，萃取后的水相再分别用与水等体积的乙酸乙酯负压空化混悬液液萃取2~4次，合并乙酸乙酯萃取液，浓缩至干，得到乙酸乙酯萃取物；
[0011](3)柱层析分离:将乙酸乙酯萃取物用甲醇溶解，加入与乙酸乙酯萃取物等质量的目数为300~400的层析硅胶拌匀、40° C减压蒸干，预先称取乙酸乙酯萃取物质量4~5倍的500~800目层析硅胶，采用体积比为4:1的正己烷-乙酸乙酯混合溶剂湿法装柱，将拌好样品的硅胶装入层析柱内，以体积比为4:1~1:1的正己烷-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，薄层层析检测，合并含化合物犬问荆内酯的流份，浓缩至干，得到犬问荆内酯粗品；
[0012](4)重结晶:上述犬问荆内酯粗品用乙酸乙酯重结晶得犬问荆内酯纯品。
[0013]本发明产品经质谱、红外光谱、核磁共振波谱和X射线单晶衍射等多种手段检测，确定了犬问荆内酯的分子式为C15H24O6，化学结构式为:
[0014]
【权利要求】
1.一种倍半萜生物活性成分，其特征在于:以犬问荆为原料，经提取、负压空化混悬液液萃取、柱层析分离和重结晶得到，并采用质谱和核磁共振等光谱分析技术，确定该化合物为犬问荆内酯:1s，2R, 7S, SR-四羟基-丁香烷-[4，7]_4，5-内酯，其化学结构式如下:
2.按照权利要求1所述的一种倍半萜活性成分的制备方法，其特征在于具体制备步骤如下: (1)提取:以犬问荆全草为原料，经粉碎后，按质量体积比加入5~20倍原料质量的丙酮、甲醇、乙醇或醇水混合溶液进行热回流、负压空化或超声波辅助提取，共提取2~5次，每次20min~60min,合并提取液,浓缩至干,得到犬问荆全草提取物； (2)负压空化混悬液液萃取:将犬问荆全草提取物分散于按质量体积比3~5倍的40~50° C水中，然后装入负压空化萃取柱，分别用和水等体积的石油醚或正己烷负压空化混悬液液萃取2~4次，萃取后的水相再分别用与水等体积的乙酸乙酯负压空化混悬液液萃取2~4次，合并乙酸乙酯萃取液，浓缩至干，得到乙酸乙酯萃取物； (3)柱层析分离:将乙酸乙酯萃取物用甲醇溶解，加入与乙酸乙酯萃取物等质量的目数为300~400的层析硅胶拌匀、40° C减压蒸干，预先称取乙酸乙酯萃取物质量4~5倍的500~800目层析硅胶，采用体积比为4:1的正己烷-乙酸乙酯混合溶剂湿法装柱，将拌好样品的硅胶装入层析柱内，以体积比为4:1~1:1的正己烷-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，薄层层析检测，合并含化合物犬问荆内酯的流份，浓缩至干，得到犬问荆内酯粗品； (4)重结晶:犬问荆内酯粗品用乙酸乙酯重结晶得犬问荆内酯纯品。
3.权利要求1中所述的倍半萜化学成分在制备抗菌药物中的应用。
【文档编号】C07D307/93GK104016952SQ201310063103
【公开日】2014年9月3日 申请日期:2013年2月28日 优先权日:2013年2月28日
【发明者】付玉杰, 祖元刚, 魏作富, 张芳荣, 陈永轩, 王微, 罗猛, 牟璠松, 彭霄 申请人:东北林业大学, 付玉杰