专利名称：：茄呢醇衍生物、制备及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明属于药物化合物、制备及其应用
技术领域：
，涉及一种茄呢醇衍生物、制备及其应用。
背景技术：
：全反式多聚异戊二烯醇是一类具有全反式立体构型的多萜化合物，在生命体内，它是许多类异戊二烯复合物、异戊二烯基蛋白质及糖类化合物不可缺少的生物合成前体，并且在生命活动的初期，它做为生物膜及细胞的组成部分而具有重要的生化作用。茄呢醇天然存在于烟叶、马铃薯叶中，是具有九个异戊二烯单元的四倍半萜醇，茄呢醇的许多衍生物具有确切而重要的生理功能，近年来，茄呢醇衍生物的生理活性研究倍受关注，目前有关茄呢醇衍生物在抗肿瘤活性的报道日益增多，尤其是含茄呢基衍生物在抗肿瘤药物增效剂方面的研究更值得重视，专利号为6011069的美国专利公开了一种含有茄呢基的衍生物N-茄呢基-N-3,4-二甲氧苯基丁二胺(SDB-乙二胺)，该化合物虽然具有明显的抗肿瘤药物增效作用，但体外抗肿瘤活性较弱。另外，在文献报道中较少出现通过酰胺化学键连接的茄呢醇衍生物，鉴于酰胺键在生物体内经过各种酶的作用后易于水解，而水解后的代谢物往往表现出各自原来就具备的生理作用，我们考虑将一些临床应用的药物或者药物前体通过酰胺化学键与具有明显生理活性的茄呢基哌嗪烷基胺进行连接，从而合成一系列新型的琉呢醇衍生物。
发明内容本发明的目的是提供一种新的茄呢醇衍生物。本发明进一步的目的是提供一种操作简便、条件温和、反应收率高、适宜于工业化的茄呢醇衍生物制备方法。本发明另外的目的是提供一种茄呢醇衍生物在制备抗肿瘤药物、抗肿瘤药物增效剂上的应用。本发明采用以下技术方案来实现上述目的一种茄呢醇衍生物，为以下通式化合物其中，n=l2，R为5-卤代嘧啶甲基、5-烷基取代嘧啶甲基、对位芳香基团取代苯甲基或者6-垸氧基萘取代乙基。R优选为5-氟代嘧啶甲基、5-氯代嘧啶甲基、5-d4烷基取代嘧啶甲基、对位苯基取代苯甲基、对位Cw垸基苯取代苯甲基、对位Cw垸氧基苯取代苯甲基、对位吡啶取代苯甲基、对位Cw烷基吡啶取代苯甲基、对位Cw烷氧基吡啶取代苯甲基或者6-C^烷氧基萘取代乙基。茄呢醇衍生物最优选为以下通式化合物O;其中，<image>imageseeoriginaldocumentpage5</image>茄呢醇衍生物的制备方法为将N-茄呢基-N'-胺烷基哌嗪溶于有机溶剂中，在催化剂作用下与相应的原料酸反应，反应温度控制在0~25°C;反应时间为248小时，反应结束后过滤，滤液加入有机溶剂并用碱液洗涤，干燥剂干燥有机层，蒸除溶剂后，柱层析分离得本发明所述茄呢醇衍生物；其中所述催化剂为二烷基取代碳二酰亚胺类縮合剂与N-羟基亚胺类试剂的组合物；所述原料酸为5-卤代脲嘧啶乙酸、5-烷基取代脲嘧啶乙酸、对位芳香基团取代苯乙酸或者6-烷氧基萘取代乙酸；所述有机溶剂为多卤代烷烃或环醚类有机溶剂。本发明所采用的原料N-茄呢基-N'-胺烷基哌嗪的制备方法方法参见Wang,C.-J.;J.-H.;Gan,Y;CHen,Zh.-Y:;Du,G,J.;Zhao,J.*C/n.".CTze附.2006,77,1301—1304。所述催化剂优选为二环己基碳二酰亚胺、二异丙基碳二酰亚胺与l-羟基苯并三唑、N-羟基琥珀酰亚胺中各取任意一种试剂的组合物；所述原料酸优选为5-氟代嘧啶乙酸、5-氯代嘧啶乙酸、5-Cw垸基取代嘧啶乙酸、对苯基取代苯乙酸、对Cw烷基苯取代苯乙酸、对Cw垸氧基苯基苯乙酸、对吡啶苯乙酸、对Cw烷基吡啶基苯乙酸、对Cw垸氧基吡啶基苯乙酸、6-C^烷氧基萘取代乙酸；所述有机溶剂优选为三氯甲垸或二氯甲垸。N-茄呢基-N'-胺垸基哌嗪与原料酸的摩尔比为1:1~2。茄呢醇衍生物在制备抗肿瘤药物上的应用。茄呢醇衍生物在制备抗肿瘤药物增效剂上的应用。本发明合成了一系列新型结构的茄呢醇衍生物，它们均为未见文献报道的新化合物，该化合物是基于对茄呢醇进行结构修饰后得到的一系列酰胺型衍生物，由于在制备中不涉及产物立体构型的改变，保持了茄呢醇单元原有的全反式立体构型，是天然产物的同系衍生物，具有抗肿瘤药物活性，是重要的药物先导物，是天然产物结构修饰新的途径。本发明所采用的制备方法具有操作简便、条件温和、反应收率高、适宜于工业化的特点。本发明公开的化合物初步生物活性测试表明，与化合物SDB-乙二胺(IC5。>10(^M)对比，更具有优越性，该系列化合物具有较强的抗肿瘤活性，体外细胞毒性有明显地增加，并且它们保留了对抗肿瘤药物的增效作用，在低浓度下，本发明所公布化合物对抗肿瘤药物的增效作用与SDB-乙二胺相当。图1是实施例2的IR图2是实施例2的HNMR图；图3是实施例3的IR图；图4是实施例3的HNMR图；图5是实施例4的IR图；图6是实施例4的HNMR图7是实施例5的IR图8是实施例5的HNMR图。实验仪器名称与型号WC-1型显微熔点仪；BmkerAV-400型核磁共振仪(CDCl3做溶剂，TMS为内标)；Anatar-360型傅立叶红外光谱仪(KBr压片)；Esquire3000型LC-MS质谱仪。具体实施例方式实施例l制备N-茄呢基-N'-胺烷基哌嗪的方法。取茄呢醇(纯度>卯％，烟叶中提取)20mmol溶于无水石油醚中，冰水浴下滴加lOOmmol三溴化磷，搅拌反应3小时。结束反应，向反应液中加入5mL水和10mL无水乙醇。静置，分出有机层，用饱和碳酸钠溶液调节pH值至7.0左右，石油醚萃取有机层，干燥，得到茄呢基溴。将ll.Ommol无水哌嗪，5mL无水乙醇和30mL异丙醚置于圆底烧瓶中，室温搅拌下，每隔1小时加入lg总量为10g的茄呢基溴。加毕，继续反应48小时。将粗产品倾入15mL冷水中，用氯仿提取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂后柱层析分离得茄呢基哌嗪。取N-(w-溴代烷基)邻苯二甲酰亚胺9mmo1，茄呢基哌嗪7.5mmol，5.1g无水K2C03于烧瓶中，加入20mL乙腈，搅拌下滴加2mL三乙胺，加毕回流反应16小时。减压蒸出乙腈，用50mL三氯甲烷溶解产品，水洗，干燥。减压蒸除溶剂得粗品，再经硅胶柱层析分离得N-[w-(4-茄呢基-l-哌嗪基)-烷基]邻苯二甲酰亚胺。将5mmol化合物N-[w-(4-茄呢基-l-哌嗪基)-烷基]邻苯二甲酰亚胺加入20mL无水乙醇中，搅拌下滴加水合肼0.3g(6mmol)，加毕，回流反应3小时。待反应液降至室温，过滤，滤液滴加10。/。NaOH溶液调节pH值至IO左右，减压蒸出乙醇，剩余物中加入适量水，然后用三氯甲垸萃取，干燥，减压蒸除溶剂得粗产品。再经硅胶柱层析分离得N-茄呢基-N'-胺垸基哌嗪。实施例2制备通式中n=2,R为5-氟脲嘧啶-l-乙酸时衍生物的方法。控温0。C下，将0.94mmol5-氟脲嘧啶-l-乙酸、1.5mmo1二环己基碳二酰亚胺、0.94mmolN-羟基琥珀酰亚胺溶于10mL三氯甲垸中，搅拌30分钟，升至室温，加入0.94mmolN-茄呢基-N'-胺丁垸基哌嗪，继续反应48小时。过滤，滤液加入30mL三氯甲烷，用5%氢氧化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥有机层，蒸除溶剂，柱层析分离(r三氯甲烧7甲醇=10:1)得产物。如图l、2所示的实验数据如下C59H94N5F03,yield81.1%,mp73.5-75.0。C,IR(KBr)，％/cm":3343，2924,1661,1447,1241;'HNMR(400MHz,CHC13)&7.39(d，J=5.3Hz,1H),7.30(brs，1H-NH),5.25(t,J=6.8Hz,IH)，5.10(t,J=6.2Hz,8H),4.30(s,2H),4.15(brs，1H),3.28(m，2H),3.04(d,J=6.6Hz，2H),2.67(m,8H),2.51(brs，2H),2.06画1.98(m,36H):1.64(s,3H)，1.60(s,27H);ESI画MSm/z:940.9(M++1).实施例3制备通式所示n=l，R为对联苯基乙酸时衍生物的方法。控温15。C下，将1.13mmol对联苯基乙酸、1.7mmol二异丙基碳二酰亚胺、U3mmolN-羟基琥珀酰亚胺溶于10mL二氯甲烷中，搅拌30分钟，升至室温，加入0.94mmolN-茄呢基-N'-胺丙烷基哌嗪，继续反应24小时。过滤，滤液加入30mL二氯甲烷，用5%氢氧化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥有机层，蒸除溶剂，柱层析分离(F二氯甲烷K乙醇二20:l)得产物。如图3、4所示的实验数据如下C66H99N30,yield68.0%，mp49.0-50.5°C,IR(KBr),%/cm—、3419,2925,2853，3419,2925，2853;iHNMR(400MHz,CHC13)&7.65-7.59(m,5H),7.49-7.44(m,2H),7唇7.28(m,2H),5.88(brs，1H)，5.46(brs,1H),5.12(t，J=6.5Hz,8H),3.61(s,2H),3.25(m,2H),2.98(d,J=5.9Hz,2H),2.51(brs，8H),2.35(brs,2H),2.10画1.99(m,34H),1.69(s,3H),1.61(s，27H);ESI-MSm/z:950.9(M++1).实施例4制备通式1所示11=2,R为2-甲基-2-(3-(6'-甲氧基萘)-乙酸时衍生物的方法。控温20°C下，将1.41mmol的2-甲基-2-卩-(6'-甲氧基萘)-乙酸、2.12mmol二环己基碳二酰亚胺，1.41mmol的1-羟基苯并三唑溶于10mL二氧六环中，搅拌30分钟，加入0.94mmo1的N-茄呢基-N'-胺丁烷基哌嗪，继续反应12小时。过滤，滤液加入30mL二氧六环，用5%氢氧化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥有机层，蒸除溶剂，柱层析分离(r础酸F翻二5:l)得产物。如图5、6所示的实验数据如下C67H103N3O2,yield56.4%,mp37.0-38.5。C，IR(KBr)，秀/cm扁'3298，2928,1646,1603,1547;'HNMR(400MHz,CHC13)&7.71國7.67(m,3H)，7.39-7.37(m,1H)，7.16-7.11(m，2H),5.75(s,1H,-NH),5.25(t,J二6.6Hz,1H),5.10(t,J=5.9Hz,8H)，3.92(s，3H,-OCH3),3.66(q,J=6.8Hz,1H)，3.20(brs,2H),2.97(brs,2H),2.43(brs,8H)，2.29(brs,2H),2.08-1.98(m,36H),1.64(s,3H),1.60(s,27H),1.42(s,3H);ESI-MSm/z:983.1(M++1).实施例5制备通式所示n=2，R为对联苯基乙酸时衍生物的方法。控温25°C下，将1.88mmol对联苯基乙酸，2.82mmol二异丙基碳二酰亚胺，L88mmo1的l-羟基苯并三唑溶于10mL1，2-二氯乙烷中，搅拌30分钟，加入0.94mmol的N-茄呢基-N'-胺丁烷基哌嗪，继续反应2小时。过滤，滤液加入30mLl,2-二氯乙垸，用5%氢氧化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥有机层，蒸除溶剂，柱层析分离(K石油醚r乙酸乙酯二3:l)得产物。如图7、8所示的实验数据如下C67H101N3O，yield72.5%,mp48.0隱50.0。C,IR(KBr),%/cm.1:3298,2930,2848,1639,1547;iHNMR(400MHz,CHC13)3:7.59-7.57(m,5H),7.46-7.43(m,2H)，7.35-7.33(m,2H),5.87(brs,1H,-NH),5.24(t，J=6.7Hz，IH),5.10(t,J=6.4Hz,8H),3.60(s，2H),3.26(d,J=5.7Hz，2H),2.99(brs,2H),2.55(brs,8H),2.35(brs，2H)，2.01-1.98(m，36H),L63(s,3H),1.60(s，27H);ESI-MSm/z:965.0(M++1).本发明茄呢醇衍生物有如下用途1、作为抗肿瘤药物使用。2、作为抗肿瘤药物的增效剂使用。茄呢醇衍生物的药物应用实验在体外测试了对L1210和CHO肿瘤细胞的生长抑制率及对临床药物长春新碱的抗肿瘤增效作用。细胞培养条件取增殖期细胞，加入5%小牛血清，2mML-谷氨酸，100U/mL青霉素，100pg/mL链霉素培养液中。于37°C，5%C02环境中培养。细胞毒性测试取待测衍生物分别加入含有L1210细胞、CHO细胞的培养液中，于上述条件下培养48小时。用四甲基偶氮唑盐(MTT)染色，以酶标仪测定染色细胞溶液的吸光度值从而计算细胞的存活率，结果见表1。增效活性测试方法:分别取长春新碱、长春新碱与待测衍生物的混合物(长春新碱浓度为2%mol/L，衍生物的浓度均为1%mol/L)加入含有L1210细胞的培养液中，于上述条件下培养48小时。用四甲基偶氮唑盐(MTT)染色，以酶标仪测定染色细胞溶液的吸光度值从而计算细胞的存活率。通过比较混合物与对照物对细胞的抑制活性确定衍生物的增效活性，结果见表2。表1茄呢基衍生物的细胞毒性数据<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表1中IC5。值为能使正常分裂生长的肿瘤细胞数抑制到50%水平时化合物的浓度(pM)值，IC5。值越小表示化合物的细胞毒性越强，上述结果表明，本发明所公布的实施例2、3的化合物对肿瘤细胞均具有较好的体外抑制活性的作用，实施例4、5对肿瘤细胞具有一定的体外抑制活性的作用，可作为抗肿瘤药物使用。_表2茄呢基衍生物对长春新碱的增效活性数据单独抑制率(％)联合抑制率(％)增效Compd.1次2次平均1次2次平均系数实施例29.098.498.7937.7138.0437.881.22实施例34.752.403.5844.0144.6544.331.72^V'/rald17,/120.4320.0743.5744.4944.031.04实施例526.5827.0026.7934.8735.0934.980.71VCR22.5221.8822.20表2所示结果表明，本发明所公布的所有实施例的化合物与抗肿瘤药物长春新碱联合使用时所产生的细胞毒性比化合物单独使用的细胞毒性增强；说明所有实施例的茄呢醇衍生物都具有抗肿瘤增效作用，其中实施例2、3的化合物与抗肿瘤药物长春新碱联合使用时所产生的细胞毒性显著增强；其增效能力与SDB相比处于同等水平。增效系数的计算方法为增效系数=联合抑制率/(单独抑制率+VCR的抑制率)。权利要求1、一种茄呢醇衍生物，其特征在于，为以下通式化合物其中，n＝1～2，R为5-卤代嘧啶甲基、5-烷基取代嘧啶甲基、对位芳香基团取代苯甲基或者6-烷氧基萘取代乙基。2、如权利要求1所述的茄呢醇衍生物，其特征在于，R为5-氟代嘧啶甲基、5-氯代嘧啶甲基、5-Cw烷基取代嘧啶甲基、对位苯取代苯甲基、对位C^垸基苯取代苯甲基、对位Cw垸氧基苯取代苯甲基、对位吡啶取代苯甲基、对位Cw烷基吡啶取代苯甲基、对位Cw烷氧基吡啶取代苯甲基或者6-d爿烷氧基萘取代乙基。3、如权利要求2所述的茄呢醇衍生物，其特征在于，为以下通式化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>;其中，n=l曰寸，R为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>或者4、茄呢醇衍生物的制备方法，其特征在于，将N-茄呢基-N'-胺烷基哌嗪溶于有机溶剂中，催化剂作用下与原料酸反应，在0~25°C下反应2~48小时，反应结束后过滤，滤液加入有机溶剂并用碱液洗漆，干燥剂干燥有机层，蒸除溶剂后，柱层析分离得本发明所述茄呢醇衍生物；其中所述催化剂为二烷基取代碳二酰亚胺类縮合剂与N-羟基亚胺类试剂的组合物；所述原料酸为5-卤代脲嘧啶乙酸、5-烷基取代脲嘧啶乙酸、对位芳香基团取代苯乙酸或者6-烷氧基萘取代乙酸；所述有机溶剂为多卣代垸烃或环醚类有机溶剂。5、如权利要求4所述茄呢醇衍生物的制备方法，其特征在于，所述催化剂为二环己基碳二酰亚胺、二异丙基碳二酰亚胺与1-羟基苯并三唑、N-羟基琥珀酰亚胺中各取任意一种试剂的组合物；所述原料酸为5-氟代嘧啶乙酸、5-氯代嘧啶乙酸、5-Cw烷基取代嘧啶乙酸、对苯基取代苯乙酸、对Cw垸基苯取代苯乙酸、对Cw垸氧基苯基苯乙酸、对吡啶苯乙酸、对Cw垸基吡啶基苯乙酸、对Cw烷氧基吡啶基苯乙酸或者6-Cw垸氧基萘取代乙酸；所述有机溶剂为三氯甲垸或者二氯甲垸。6、如权利要求4或5所述的茄呢醇衍生物的制备方法，其特征在于，N-茄呢基-N'-胺烷基哌嗪与原料酸的摩尔比为1:1~2。7、莉呢醇衍生物在制备抗肿瘤药物上的应用。8、茄呢醇衍生物在制备抗肿瘤药物增效剂上的应用。全文摘要本发明公开一种茄呢醇衍生物，为以下通式化合物，其中，n＝1～2，R为5-卤代嘧啶甲基、5-烷基取代嘧啶甲基、对位芳香基团取代苯甲基或者6-烷氧基萘取代乙基；制备方法为将N-茄呢基-N′-胺烷基哌嗪溶于有机溶剂中，催化剂催化下与原料酸反应，0～25℃下反应2～48小时，后处理并经柱层析分离得本发明所述茄呢醇衍生物；上述化合物是一系列新的酰胺型茄呢醇衍生物，由于在制备中不涉及产物立体构型的改变，保持了茄呢醇单元原有的全反式立体构型，是天然产物的同系衍生物，具有抗肿瘤药物活性和抗肿瘤增效作用，本发明所采用的制备方法具有操作简便、条件温和、反应收率高、适宜于工业化的特点。文档编号C07D239/553GK101104608SQ200710054079公开日2008年1月16日申请日期2007年3月19日优先权日2007年3月19日发明者王建红,王超杰,瑾赵,陈智勇申请人:河南大学