专利名称：一种制备奈西立肽的方法
技术领域：
本发明涉及一种新的制备奈西立肽的方法。
背景技术：
奈西立肽(Nesiritide)，由Suhoh于1988年从猪脑组织中分离出来，是内源性利钠家族的重要成员之一，主要由心脏分泌。其结构与心钠素相似，具有利钠、利尿、扩张血管和抑制肾素分泌等作用，主要用于治疗心力衰竭等，适用于患有休息或轻微活动时呼吸困难的急性失代偿心力衰竭患者的静脉治疗，其效果较好且副作用小，是一种很有市场前景的多肽药物。奈西立肽的结构为:
权利要求
1.一种制备奈西立肽的方法，包括: 1)Fmoc-HiS (Rl)-载体树脂； 2)固相合成法制备线型奈西立肽树脂R3-X-Lys (Boc)-Met-Val-Gln (Trt)-Gly-Ser (tBu)-Gly-Cys (Trt)-Phe-Gly-Arg (Pbf)-Lys(Boc)-Met-Asp(tBu)-Arg(Pbf)-1le-Ser(R2)-Ser(R2)-Ser(R2) -Ser(R2) -Gly-Leu-Gly-Cys (Trt) -Lys (Boc) -Val-Leu-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) -His (Rl)-载体树脂； 3)线型奈西立肽树脂裂解得到线型奈西立肽；和 4)将线型奈西立肽氧化得到奈西立肽； 其中Fmoc为9-芴甲氧羰基，与氨基相连或与羧基所连的碳原子上的氮原子相连。
2.权利要求1的方法，还包括纯化奈西立肽的步骤，纯化优选通过重结晶方法或HPLC(例如反相HPLC)而进行。
3.权利要求1的方法，其中步骤1)-2)在固相反应柱中进行；且其中步骤I)的反应温度在-301:至01:，优选-301:至-201:，步骤2)-4)均在室温和常压下进行；所述树脂载体为2-CTC树脂或王树脂，优选2-CTC树脂；所述树脂的替代度为0.2-1.2mmol/g，优选为0.5-1.lmm ol/g,更优选为 0.6-1.0mmol/g。
4.权利要求1的方法，其中步骤I)-2)中的偶联剂为HOBt/DIC、HBTU/HOBt/DIPEA、HATU/HOAt/DIPEA,PyAOP/HOAt/DIPEA,PyBOP/HOBt/DIPE ;步骤 1)-2)中偶联反应的时间通常为1-6小时，优选2-5小时。
5.权利要求1的方法，其中Rl为Trt或-MBom;优选地，R2彼此独立地为Trt或mmt ；优选地，X 为 Ser (tBu) -Pro ;优选地，R3 为 Fmoc、Boc 或 H。
6.权利要求1的方法，其中步骤2)中脱除Fmoc的试剂为DBLK;脱保护反应时间通常为5-30分钟，优选10-20分钟。
7.权利要求1的方法，其中步骤3)中的裂解液为TFA、苯酚、苯甲硫醚、乙二硫醇、水混合溶剂，混合溶剂的配比为:TFA体积比为80-85%，苯酚的体积比1_5%、苯甲硫醚的体积比1-5%、乙二硫醇的体积比1-5%、水的体积比1-5%。
8.权利要求1的方法，其中步骤1)-2)中的溶剂为DMF、DCM或其混合物，其中二者体积比优选为1:1 ;步骤4)中的溶剂为水和乙腈的混合液或是水和甲醇的混合液，优选水和乙腈的体积比1:1的混合液。
9.权利要求1的方法，其中步骤4)中氧化剂为氧气或双氧水。
10.权利要求1的方法，其中步骤I)中在氨基酸Fmoc-His(Rl)-OH偶联至载体树脂上之后，还包括向其中加入一种封闭液除去树脂中过量的未反应基团的步骤；当所述载体树脂为2-CTC树脂时，所加入的封闭液优选为体积比DIPEA:甲醇:DCM=1: 2: 17的混合液；当所述载体树脂为王树脂时，所加入的封闭液优选为摩尔比为1:1的醋酐和吡啶；步骤I)制得的Fmoc-His (Rl)-载体树脂的替代度可为0.1-0.4mmol/g ;优选0.13-0.35mmol/g°
全文摘要
本发明提供了一种制备奈西立肽的方法，其通过低替代度的氨基酸树脂、小片段和不同侧链保护基来减少缺省肽的产生，提高粗肽纯度，有利于纯化，提高收率。
文档编号C07K1/04GK103204922SQ20131009638
公开日2013年7月17日 申请日期2013年3月22日 优先权日2013年3月22日
发明者肖庆, 向闯南, 刘建, 马亚平, 袁建成 申请人:深圳翰宇药业股份有限公司