一种截短侧耳素的水解方法
【专利摘要】本发明涉及一种截短侧耳素的水解方法，该方法采用向截短侧耳素的乙酸丁酯提取液中加入硫酸水溶液，在搅拌状态下升温至80～90℃，反应5～6h；反应完毕后，静置分层，将上层乙酸丁酯相在65℃~70℃真空浓缩；将浓缩液用热水洗涤2～3次，然后加入干燥剂脱水，过滤；将过滤液缓慢降温至0～5℃，产品析出，过滤干燥得截短侧耳素水解产物。本发明采用低浓度的硫酸水溶液进行截短侧耳素的水解，避免使用了强碱，降低了操作风险；其次，本发明采用直接浓缩结晶，未引入第二种溶剂，减少了有机溶媒的使用，生产周期较短，操作简单，产品收率较高，污染较少，适用于工业化生产。
【专利说明】一种截短侧耳素的水解方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物发酵【技术领域】，特别是涉及一种截短侧耳素的水解方法。
【背景技术】
[0002]截短侧耳素是由高等真菌产生的一种二萜类兽用抗生素，对革兰阳性菌和支原体有强的抗菌活性。截短侧耳素的构效关系研究表明:其C~14位侧链具有较好的生物活性，对C~14位侧链进行修饰，可改变其活性。目前国内外已成功开发了截短侧耳素的衍生物，如泰妙菌素(1^3111111；[11)、沃尼妙林(>311161]1111；[11)、瑞他莫林(代丨3卩3111111；[11)及阿扎莫林(Azamulin)等。通过化学修饰，使该类抗生素的抑菌活性明显提高，具有较好的应用前 旦
[0003]目前国内截短侧耳素类衍生物的生产均采用高产截短侧耳素的真菌发酵制备截短侧耳素发酵液，对发酵液进行过滤获取截短侧耳素菌丝体，然后对湿菌丝体或干菌丝体进行提取制备截短侧耳素后再进行化学合成。发酵滤液中含有的大量蛋白质与一些其他可溶性杂质会带入化学合成过程中，影响最终产品的质量。目前研究提出采用截短侧耳素的水解产物作为原料进行截短侧耳素衍生物的合成，会大大提高产品的纯度，但有关截短侧耳素水解方法的报道较少。专利CN101875603公开了一种截短侧耳素的水解方法，采用强碱进行水解，再进行萃取、结晶得到截短侧耳素的水解产物。该方法使用多种有机溶媒，产品处理较为复杂，对环境污染较大。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种截短侧耳素的水解方法，该方法工艺简单，产品收率较高，水解后直接用于化学合成制备截短侧耳素的衍生物。
[0005]本发明采用以下技术方案实现:
一种截短侧耳素的水解方法，其步骤如下:
(1)向截短侧耳素的乙酸丁酯提取液中加入硫酸水溶液，搅拌下升温至80~90°C反应
5~6h ;
(2)反应完毕后，静置分层，将水相弃去，将上层乙酸丁酯相70°C下真空浓缩；
(3)将浓缩液用热水洗涤2~3次,洗涤后,加入干燥剂脱水,过滤；
(4)将过滤液缓慢降温至O~5°C，产品析出，过滤干燥得截短侧耳素水解产物目特林。
[0006]上述截短侧耳素的乙酸丁酯提取液为截短侧耳素菌丝体采用乙酸丁酯浸提后，浓缩至质量体积浓度为10%~15%。。
[0007]上述硫酸水溶液浓度为I~2mol/L，加入量为截短侧耳素乙酸丁酯提取液体积的2~5倍。
[0008]上述干燥剂为无水硫酸钠或无水氯化钙中。
[0009]上述加入热水洗涤，加入热水的体积是浓缩液体积的0.5~I倍。
[0010]与现有技术相比，本发明的有益效果在于:本发明采用低浓度的硫酸水溶液进行截短侧耳素的水解，避免使用了强碱，降低了操作风险；其次，本发明采用直接浓缩结晶，未引入第二种溶剂，减少了有机溶媒的使用，生产周期较短，操作简单，产品收率较高，污染较少，适用于工业化生产。
【具体实施方式】
[0011]下面用实例予以说明本发明，应该理解的是，实例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。本发明的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。
[0012]下述实施例中截短侧耳素的乙酸丁酯提取液的获得方法:将截短侧耳素发酵液进行板框过滤得到截短侧耳素菌丝体，将菌丝体干燥后，采用乙酸丁酯浸提得乙酸丁酯提取液，菌丝体与乙酸丁酯的比例为1:5。
[0013]实施例中的产品纯度采用高效液相色谱法进行检测。
[0014]实施例1
向质量体积浓度为10%的截短侧耳素的乙酸丁酯提取液中缓慢加入其2倍体积、浓度为lmol/L的硫酸水溶液，搅拌下升温至80°C反应6h ;反应完毕后，静置分层，将水相弃去，将上层乙酸丁酯相65°C下真空浓缩后，加入浓缩液体积的0.5倍的热水洗涤2次，洗涤后，加入无水硫酸钠脱水，过滤；将过滤液缓慢降温至0°C，产品析出，过滤干燥得截短侧耳素水解产物。收率94%，纯度92.4%。
[0015]实施例2
向质量体积浓度为12%的截短侧耳素的乙酸丁酯提取液中缓慢加入其2倍体积、1.5mol/L的硫酸水溶液，搅拌下升温至90°C反应6h ;反应完毕后，静置分层，将水相弃去，将上层乙酸丁酯相70°C下真空浓缩后，加入浓缩液体积的I倍的热水洗涤3次，洗涤后，加入无水硫酸钠脱水，过滤；将过滤液缓慢降温至0°C，产品析出，过滤干燥得截短侧耳素水解产物。收率90%,纯度93.7%。
[0016]实施例3
向质量体积浓度为15%的截短侧耳素的乙酸丁酯提取液中缓慢加入其3倍体积、2mol/L的硫酸水溶液，搅拌下升温至80 V反应5h ；反应完毕后，静置分层，将水相弃去，将上层乙酸丁酯相70°C下真空浓缩后，加入浓缩液体积的I倍的热水洗涤3次，洗涤后，加入无水氯化钙脱水，过滤；将过滤液缓慢降温至5°C，产品析出，过滤干燥得截短侧耳素水解产物。收率 89%,纯度 95.6%ο
[0017]实施例4
向质量体积浓度为15%的截短侧耳素的乙酸丁酯提取液中缓慢加入其5倍体积、Imol/L的硫酸水溶液，搅拌下升温至80 V反应6h ；反应完毕后，静置分层，将水相弃去，将上层乙酸丁酯相70°C下真空浓缩后，加入浓缩液体积的0.5倍的热水洗涤2次，洗涤后，加入无水硫酸钠脱水，过滤；将过滤液缓慢降温至0°C，产品析出，过滤干燥得截短侧耳素水解产物。收率91%，纯度90.8%ο
[0018]实施例5
向质量体积浓度为10%的截短侧耳素的乙酸丁酯提取液中缓慢加入其5倍体积、2mol/L的硫酸水溶液，搅拌下升温至90 V反应5h ；反应完毕后，静置分层，将水相弃去，将上层乙酸丁酯相68°C下真空浓缩后，加入浓缩液体积的0.5倍的热水洗涤2次，洗涤后，加入无水氯化钙脱水，过滤；将过滤液缓慢降温至5°C，产品析出，过滤干燥得截短侧耳素水解产物。收率87%，纯度91.5%ο
[0019]实施例6
向质量体积浓度为12%的截短侧耳素的乙酸丁酯提取液中缓慢加入其4倍体积、1.5mol/L的硫酸水溶液，搅拌下升温至85°C反应6h ;反应完毕后，静置分层，将水相弃去，将上层乙酸丁酯相70°C下真空浓缩后，加入浓缩液体积的I倍的热水洗涤2次，洗涤后，加入无水硫酸钠脱水，过滤；将过滤液缓慢降温至0°C，产品析出，过滤干燥得截短侧耳素水解产物。收率88%，纯度93.8%。`
【权利要求】
1.一种截短侧耳素的水解方法，其特征是:向截短侧耳素的乙酸丁酯提取液中加入硫酸水溶液，在搅拌状态下升温至80~90°C，反应5~6h ;反应完毕后，静置分层，将上层乙酸丁酯相在65°C~70°C下真空浓缩；将浓缩液用热水洗涤2~3次，然后加入干燥剂脱水，过滤；将过滤液缓慢降温至O~5°C，产品析出，过滤干燥得截短侧耳素水解产物。
2.按照权利要求1所述的截短侧耳素的水解方法，其特征在于所述截短侧耳素的乙酸丁酯提取液为截短侧耳素菌丝体采用乙酸丁酯浸提后，浓缩至质量体积浓度为10%~15%。
3.按照权利要求1所述的截短侧耳素的水解方法，其特征在于所述硫酸水溶液浓度为I~2mol/L，其用量为截短侧耳素乙酸丁酯提取液体积的2~5倍。
4.按照权利要求1所述的截短侧耳素的水解方法，其特征在于所述干燥剂为无水硫酸钠或无水氯化钙。
5.按照权利要求1所述的截短侧耳素的水解方法，其特征在于所述加入热水洗涤，加入热水的体积是浓缩液体积 的0.5~I倍。
【文档编号】C07C49/743GK103641702SQ201310575450
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2013年11月18日 优先权日:2013年11月18日
【发明者】王 义, 周丽娜 申请人:宁夏泰瑞制药股份有限公司