一种截短侧耳素的提取纯化方法

专利名称：一种截短侧耳素的提取纯化方法
技术领域：
本发明涉及一种兽药的提取纯化方法，具体涉及一种截短侧耳素的提取纯化方 法，属于药物制备技术领域。
背景技术：
截短侧耳素(Pleuromutilin)是由侧耳菌(Pleurotus mutilus)产生的一类广谱 的二萜烯类抗生素，它通过作用于细菌核糖体50S亚基，抑制蛋白质合成，导致菌体死亡。 截短侧耳素类是一大类具有较好抗菌活性的抗生素家族，主要用作家禽和家畜的饲料添加 剂，在饲料中添加该类物质，可有效预防许多传染病，例如能够有效抑制革兰氏阳性菌，尤 其以葡萄球菌、链球菌最为明显，同时对于支原体感染也有治疗作用。截短侧耳素还用作截 短侧耳素类半合成衍生物的前体，目前已有衍生物泰妙菌素和沃尼妙林，它的许多衍生物 的抑菌活性和范围比截短侧耳素强，同时抗菌谱更广泛。专利200510122954. 0公开了一种泰妙菌素合成过程中用的截短侧耳素原 料的制备方法，专利201010180181. 2公开了 一种截短侧耳素的溶剂提取工艺，专利 200910073722. 9公开了一种截短侧耳素提取工艺，专利200810046089. X公开了一种高纯度截短侧耳素原料的发酵提取制备方法。在这些工艺中一般采用乙酸丁酯或甲醇、乙醇浸 提截短侧耳素，也有采用甲基异丁基甲酮作为浸提剂，这些方法虽然提取率高，但是所得产 品带有杂质，其纯度不高，且不易纯化。

发明内容
本发明针对上述不足，提供了一种截短侧耳素的提取纯化方法，该方法能够提高 截短侧耳素的提取率，且所得产品纯度高，在98%以上。本发明是通过以下措施实现的一种截短侧耳素的提取纯化方法，其特征是包括以下步骤(1)截短侧耳素粗品提取将截短侧耳素干菌丝用甲基异丁基甲酮浸取多次，浸取后压滤得浸取液，浸取液浓缩、 结晶、过滤、干燥得截短侧耳素粗品；(2)纯化2. 1将截短侧耳素粗品加入甲醇水溶液中，搅拌至全溶； 2. 2将上述溶液减压浓缩，浓缩至溶液沸点明显升高，馏出物基本无甲醇为止； 2. 3向浓缩液中加入石油醚进行搅拌萃取，静置分层后进行分离，取水相，水相再次加 入石油醚进行搅拌萃取，静置分层后分离得水相；2. 4将水相加入乙酸丁酯进行搅拌萃取，静置分层进行分离，取水相再次用乙酸丁酯萃 取，两次萃取的乙酸乙酯相合并进入下一步；2. 5将上述乙酸乙酯相在浓缩结晶罐中进行真空蒸发，浓缩至溶液粘稠、基本无溶剂蒸 出为止，然后向浓缩液中加入乙醚，逐渐降温至0-4°C，在此温度下结晶；2.6晶体完全析出后，将结晶分离，用冷乙醚洗涤，洗涤后过滤、干燥； 2. 7将干燥后的晶体用乙酸乙酯溶解，用活性炭脱色，然后溶液滤去活性炭，采用步骤 2. 5,2. 6的方法进行浓缩、结晶、过滤、干燥得截短侧耳素。上述提取纯化方法中，截短侧耳素粗品提取的具体步骤为1. 1向截短侧耳素干菌丝中加入甲基异丁基甲酮浸取三次，浸取后压滤，将三次所得的 浸取液合并，第一次浸取所用截短侧耳素(g)与甲基异丁基甲酮(ml)的比值为1 :3-5，后 两次浸取所用截短侧耳素(g)与甲基异丁基甲酮(ml)的比值为1 :2-4，每次浸取时间均为 lh；1. 2浸取液用降膜浓缩器浓缩至晶体含量为15 20wt%，然后转入结晶罐，在缓慢搅拌 条件下，以5 10°C /h的降温速度降至0-4°C，保温至晶体完全析出；1.3将晶体分离，用预冷的甲基异丁基甲酮洗涤，然后过滤，用真空干燥器干燥至晶体 含湿量< 洲得截短侧耳素粗品；1.4将结晶母液和甲基异丁基甲酮洗涤液合并，浓缩至截短侧耳素含量> 20%，然后降 温结晶、甲基异丁基甲酮洗涤得截短侧耳素粗品，与步骤1. 3中粗品混合，浓缩所得的甲基 异丁基甲酮循环利用。上述提取纯化方法中，步骤2. 1中，截短侧耳素粗品(g)与甲醇水溶液(ml)的比 值为1:8-15，甲醇水溶液的浓度为50-70体积％。上述提取纯化方法中，步骤2. 3中，第一次萃取时，石油醚的加入量为浓缩液的 30-50体积％，第二次萃取时，石油醚的加入量为水相的30-50体积％，萃取时间均为15min。上述提取纯化方法中，步骤2. 4中，两次萃取乙酸乙酯的加入量(ml)为截短侧耳 素粗品(g)的8-15倍，萃取时间为30min。上述提取纯化方法中，步骤2. 5中，乙醚的加入量(ml)为浓缩液(g)的8-15倍，降 温速度为5 10°C /h。上述提取纯化方法中，步骤2. 6中，晶体干燥至干燥失重低于1%，干燥所用设备为 真空烘箱或双锥干燥机。上述提取纯化方法中，步骤2. 5的结晶母液和步骤2. 6的乙醚洗涤液合并，蒸馏回 收乙醚。上述提取纯化方法中，步骤2. 7中，乙酸乙酯的加入量(ml)为晶体(g)的8-15倍， 脱色时活性炭的用量为溶液的3-5wt%，脱色温度为50-60°C，脱色时间为30min。上述提取纯化方法中，步骤2. 1中，截短侧耳素粗品(g)与甲醇水溶液(ml)的比值 为1:10，甲醇水溶液的浓度为60体积％ ；步骤2. 4中，两次萃取乙酸乙酯的加入量(ml)为 截短侧耳素粗品(g)的10倍；步骤2. 5中，乙醚的加入量(ml)为浓缩液(g)的10倍；步骤 2. 7中，乙酸乙酯的加入量(ml)为晶体(g)的10倍。本发明的提取纯化方法是以发酵所得的截短侧耳素干菌丝为原料的，截短侧耳素 干菌丝的制备为现有技术，并不是本发明的创新点，本领域技术人员可以根据现有技术的 记载制备截短侧耳素干菌丝。有益效果本发明在浸提截短侧耳素粗品时采用甲基异丁基甲酮代替乙酸丁酯， 提取率增高，高于90%，在纯化过程中，通过选择合适的工艺步骤及萃取、洗涤剂，除去截短 侧耳素中所含的杂质，纯化度高，所含截短侧耳素纯度在98%以上。
具体实施例方式下面通过具体实施例对本发明进行进一步的阐述，应该明白的是，下述说明仅是 为了解释本发明，并不对其内容进行限定。实施例1一、截短侧耳素粗品提取1、向截短侧耳素干菌丝中加入3倍(g:ml)的甲基异丁基甲酮(MIBK)，搅拌浸取1小 时，浸取结束后过滤，浸取液经精过滤后进入浓缩器，菌丝再用4倍MIBK浸取两次，每次1 小时，浸取结束后压滤，所得浸取液合并进入浓缩器。压滤所用设备为板框压滤机。2、浸取液用降膜浓缩器浓缩至接近析出晶体(晶体含量约为15 20wt%)，浓缩 液迅速转入结晶罐，在缓慢搅拌条件下，浓缩液以5-10°C /h的降温速度缓慢降温，降至 0-4°C，在此温度保温，晶体逐渐析出，直至结晶完全。3、将结晶分离，用温度在0_4°C之间的甲基异丁基甲酮洗涤晶体，然后再次过滤， 洗涤液并入结晶母液，晶体用真空干燥器干燥至含湿量< 2%，得截短侧耳素粗品。4、将结晶母液和甲基异丁基甲酮洗涤液混合，再次用浓缩器浓缩至截短侧耳素含 量>20%，然后用结晶罐进行降温结晶，晶体经洗涤，干燥得得截短侧耳素粗品，与上面得到 的粗品混合，浓缩蒸馏所得的溶剂MIBK可循环使用。二、截短侧耳素粗品纯化1、将截短侧耳素粗品用60体积％的甲醇水溶液溶解，甲醇水溶液的量为粗品的12 倍(质量体积)，将溶液用浓缩器减压浓缩，蒸发至溶液沸点明显升高，馏出物基本没有甲 醇为止(密度计检测)。此时开始有固体析出，需注意避免堵塞管路，将浓缩液转移入萃取 罐。2、向萃取罐加入浓缩液40体积％量的石油醚，搅拌15分钟，静置分层，分离将上 层醚相转入暂存罐，下层水相转入另一萃取罐，向水相再次加入水相40体积％量的石油醚， 搅拌15分钟，静置分层，分离将两次醚相合并，蒸馏回收石油醚，剩余的残渣为杂质。3、将石油醚两次萃取后所得的水相用乙酸丁酯萃取，搅拌萃取30min，静置分层， 分离将水相再用乙酸丁酯萃取一次，搅拌萃取30min，静置分层，分离将两次萃取所得的乙 酸丁酯相混合，进入浓缩结晶罐，两次所加乙酸丁酯的体积用量(ml)为截短侧耳素粗品的 质量(g)的10倍。4、乙酸丁酯相在浓缩结晶罐中真空加热蒸发，浓缩至粘稠、基本无溶剂蒸出为止， 然后在搅拌下向浓缩液中加入乙醚，在5-10°C /h的降温速度缓慢降温至0-4°C，保温至晶 体析出完全，乙醚的用量(ml)为浓缩液(g)的10倍。使用过滤器或离心机进行晶体分离， 用温度0-4°C的冷乙醚洗涤晶体，晶体用真空烘箱或双锥干燥机干燥至干燥失重低于1%。 将结晶母液和乙醚洗涤液混合，蒸馏回收乙醚，所得残渣为杂质。5、将上述干燥的晶体加入乙酸乙酯，在脱色罐中搅拌升温至完全溶解，乙酸乙酯 加入量(ml)为晶体质量的10倍。在溶液中加入3 5wt%的活性炭，在50-60°C搅拌脱色 30分钟，溶液在保温条件下经活性碳过滤器过滤后，进入浓缩结晶罐。经降温浓缩结晶、过 滤干燥得截短侧耳素，纯度为99. 5%，收率高于90%。实施例2方法步骤同实施例1，不同的是 一、截短侧耳素粗品提取1、开始，向截短侧耳素干菌丝(g)中加入5倍的甲基异丁基甲酮(ml)进行浸取，然后菌 丝再用2倍的MIBK浸取两次。二、截短侧耳素粗品纯化1、将截短侧耳素粗品用65体积％的甲醇水溶液溶解，甲醇水溶液的量为粗品的10倍 (质量体积)。2、第一次萃取石油醚的加入量为浓缩液的50体积％，第二次萃取石油醚的加入量 为水相的30体积％。3、乙酸丁酯萃取时，两次所加乙酸丁酯的体积用量(ml)为截短侧耳素粗品的质量 (g)的8倍。
4、乙醚的用量(ml)为浓缩液(g)的8倍。5、乙酸乙酯加入量(ml)为晶体质量的8倍。最终所得截短侧耳素纯度为98. 9%， 收率高于90%。实施例3方法步骤同实施例1，不同的是 一、截短侧耳素粗品提取1、开始，向截短侧耳素干菌丝(g)中加入5倍的甲基异丁基甲酮(ml)进行浸取，然后菌 丝再用2倍的MIBK浸取两次。二、截短侧耳素粗品纯化1、将截短侧耳素粗品用70体积％的甲醇水溶液溶解，甲醇水溶液的量为粗品的8倍 (质量体积)。2、第一次萃取石油醚的加入量为浓缩液的30体积％，第二次萃取石油醚的加入量 为水相的50体积％。3、乙酸丁酯萃取时，两次所加乙酸丁酯的体积用量(ml)为截短侧耳素粗品的质量 (g)的15倍。4、乙醚的用量(ml)为浓缩液(g)的9倍。5、乙酸乙酯加入量(ml)为晶体质量的9倍。最终所得截短侧耳素纯度为98. 3%， 收率高于90%。实施例4方法步骤同实施例1，不同的是 一、截短侧耳素粗品提取1、开始，向截短侧耳素干菌丝(g)中加入4倍的甲基异丁基甲酮(ml)进行浸取，然后菌 丝再用3倍的MIBK浸取两次。二、截短侧耳素粗品纯化1、将截短侧耳素粗品用60体积％的甲醇水溶液溶解，甲醇水溶液的量为粗品的12倍 (质量体积)。2、第一次萃取石油醚的加入量为浓缩液的40体积％，第二次萃取石油醚的加入量 为水相的50体积％。
3、乙酸丁酯萃取时，两次所加乙酸丁酯的体积用量(ml)为截短侧耳素粗品的质量 (g)的9倍。4、乙醚的用量(ml)为浓缩液(g)的15倍。5、乙酸乙酯加入量(ml)为晶体质量的15倍。最终所得截短侧耳素纯度为98. 5%， 收率高于90%。
权利要求
1.一种截短侧耳素的提取纯化方法，其特征是包括以下步骤(1)截短侧耳素粗品提取将截短侧耳素干菌丝用甲基异丁基甲酮浸取多次，浸取后压滤得浸取液，浸取液浓缩、 结晶、过滤、干燥得截短侧耳素粗品；(2)纯化2.1将截短侧耳素粗品加入甲醇水溶液中，搅拌至全溶；2. 2将上述溶液减压浓缩，浓缩至溶液沸点明显升高，馏出物基本无甲醇为止； 2. 3向浓缩液中加入石油醚进行搅拌萃取，静置分层后进行分离，取水相，水相再次加 入石油醚进行搅拌萃取，静置分层后分离得水相；2. 4将水相加入乙酸丁酯进行搅拌萃取，静置分层进行分离，取水相再次用乙酸丁酯萃 取，两次萃取的乙酸乙酯相合并进入下一步；2. 5将上述乙酸乙酯相在浓缩结晶罐中进行真空蒸发，浓缩至溶液粘稠、基本无溶剂蒸 出为止，然后向浓缩液中加入乙醚，逐渐降温至0-4°C，在此温度下结晶； 2.6晶体完全析出后，将结晶分离，用冷乙醚洗涤，洗涤后过滤、干燥； 2. 7将干燥后的晶体用乙酸乙酯溶解，用活性炭脱色，然后溶液滤去活性炭，采用步骤 2. 5,2. 6的方法进行浓缩、结晶、过滤、干燥得截短侧耳素。
2.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征是截短侧耳素粗品提取的具体步骤为1. 1向截短侧耳素干菌丝中加入甲基异丁基甲酮浸取三次，浸取后压滤，将三次所得的 浸取液合并，第一次浸取所用截短侧耳素(g)与甲基异丁基甲酮(ml)的比值为1 :3-5，后 两次浸取所用截短侧耳素(g)与甲基异丁基甲酮(ml)的比值为1 :2-4，每次浸取时间均为 lh；1. 2浸取液用降膜浓缩器浓缩至晶体含量为15 20wt%，然后转入结晶罐，在缓慢搅拌 条件下，以5 10°C /h的降温速度降至0-4°C，保温至晶体完全析出；1.3将晶体分离，用预冷的甲基异丁基甲酮洗涤，然后过滤，用真空干燥器干燥至晶体 含湿量< 洲得截短侧耳素粗品；1.4将结晶母液和甲基异丁基甲酮洗涤液合并，浓缩至截短侧耳素含量> 20%，然后降 温结晶、甲基异丁基甲酮洗涤得截短侧耳素粗品，与步骤1.3中粗品混合，浓缩所得的甲基 异丁基甲酮循环利用。
3.根据权利要求1或2所述的提取纯化方法，其特征是步骤2.1中，截短侧耳素粗品 (g)与甲醇水溶液(ml)的比值为1:8-15，甲醇水溶液的浓度为50-70体积％。
4.根据权利要求1或2所述的提取纯化方法，其特征是步骤2.3中，第一次萃取时， 石油醚的加入量为浓缩液的30-50体积％，第二次萃取时，石油醚的加入量为水相的30-50 体积％，萃取时间均为15min。
5.根据权利要求1或2所述的提取纯化方法，其特征是步骤2.4中，两次萃取乙酸乙 酯的加入量(ml)为截短侧耳素粗品(g)的8-15倍，萃取时间为30min。
6.根据权利要求1或2所述的提取纯化方法，其特征是步骤2.5中，乙醚的加入量 (ml)为浓缩液(g)的8-15倍，降温速度为5 10°C /h。
7.根据权利要求1或2所述的提取纯化方法，其特征是步骤2.6中，晶体干燥至干燥失重低于1%，干燥所用设备为真空烘箱或双锥干燥机。
8.根据权利要求1或2所述的提取纯化方法，其特征是步骤2.5的结晶母液和步骤 2.6的乙醚洗涤液合并，蒸馏回收乙醚。
9.根据权利要求1或2所述的提取纯化方法，其特征是步骤2.7中，乙酸乙酯的加入 量(ml)为晶体(g)的8-15倍，脱色时活性炭的用量为溶液的3-5wt%，脱色温度为50_60°C， 脱色时间为30min。
10.根据权利要求1或2所述的提取纯化方法，其特征是步骤2.1中，截短侧耳素粗 品(g)与甲醇水溶液(ml)的比值为1:10，甲醇水溶液的浓度为60体积％;步骤2.4中，两 次萃取乙酸乙酯的加入量(ml)为截短侧耳素粗品(g)的10倍；步骤2. 5中，乙醚的加入量 (ml)为浓缩液(g)的10倍；步骤2. 7中，乙酸乙酯的加入量(ml)为晶体(g)的10倍。
全文摘要
本发明公开了一种截短侧耳素的提取纯化方法，步骤为将截短侧耳素干菌丝用甲基异丁基甲酮浸取，处理得粗品；粗品用甲醇溶解，先后用石油醚和乙酸丁酯萃取，经浓缩、结晶、乙醚洗涤、活性炭脱色得截短侧耳素成品。本发明在浸提截短侧耳素粗品时采用甲基异丁基甲酮代替乙酸丁酯，提取率增高，高于90%，在纯化过程中，通过选择合适的工艺步骤及萃取、洗涤剂，除去截短侧耳素中所含的杂质，纯化度高，所含截短侧耳素纯度在98%以上。
文档编号C07C67/58GK102050737SQ201010582400
公开日2011年5月11日 申请日期2010年12月10日 优先权日2010年12月10日
发明者王斌, 王永恒, 胡江林, 赵硕珍 申请人:山东胜利股份有限公司