一种高纯度米尔贝霉素的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种高纯度米尔贝霉素的制备方法。将米尔贝霉素粗品用大孔吸附树脂富集并分离出米尔贝霉素A3和A4，浓缩、干燥；然后将米尔贝霉素A3和A4干粉用甲醇或乙腈溶解，用半制备液相色谱制备得高纯度米尔贝霉素A3和A4。该制备方法简单，无副产物和杂质残留，产品分离纯化稳定且成品纯度高(可达99.99％)。
【专利说明】一种高纯度米尔贝霉素的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于化学领域，具体涉及一种大环内酯类抗生素米尔贝霉素标准品的制备方法。
【背景技术】
[0002]米尔贝霉素(milbemycin)是大环内酯类抗体内外寄生虫药物，主要有A3、A4同系物，常用做犬的驱虫药。米尔贝霉素对控制和预防大部分常见寄生虫疾病都有很好的效果。通常用来预防恶丝虫病，控制线虫、钩虫引发的犬、猫疾病及犬的鞭虫病。由于米尔贝霉素受外国专利保护，我国使用的米尔贝霉素主要来自于国外进口，昂贵的价格使米尔贝霉素的使用受到了巨大的限制。在生产技术和应用上我国都远远低于外国水平，并且目前文献中还未出现有关米尔贝霉素的制备方法。自行研发米尔贝霉素的制备方法将打破这种垄断现象，能大大加快我国自主生产米尔贝霉素的脚步，因此如何制备出高纯度的米尔贝霉素成品，一直受到人们的重视。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于解决我国对于米尔贝霉素纯品制备技术空洞的缺陷，提供一种大环内酯类抗生素米尔贝霉素的制备方法，其制备工艺简单，收率高，相比其他手段，成本有明显的降低，产品分离纯化结果稳定且成品纯度高。
[0004]为实现上述技术目的，本发明采取的技术方案是:
[0005]一种高纯度米尔贝霉素的制备方法，包括如下步骤:
[0006]I)将含量多50% (质量百分比含量)米尔贝霉素粗品用大孔吸附树脂富集并分离出米尔贝霉素A3和A4，浓缩、干燥得到干粉；
[0007]2)将米尔贝霉素A3和A4干粉用甲醇或乙腈溶解，然后用半制备液相色谱制备得高纯度米尔贝霉素A3和A4。
[0008]上述步骤I)富集用的树脂例如HP20、HPD100, HPD300吸附树脂。通常，树脂装柱的径高比1: (5-8)。
[0009]在本发明的一些具体实施例中，步骤I)将米尔贝霉素粗品用60%乙醇或甲醇溶解后上柱，然后以50%-62% (V/V)的乙醇溶液或者55%-65% (V/V)的甲醇溶液为流动相进行解吸，将米尔贝霉素A3和A4的解吸液合并、浓缩，用酯类有机溶剂(例如乙酸乙酯、乙酸丁酯)萃取，再浓缩得到米尔贝霉素A3和A4的干粉。
[0010]上述步骤2)所用甲醇是纯度达99.%的分析级甲醇，所用乙腈为纯度达99.%分析级乙腈；利用甲醇或乙腈将步骤I)得到的干粉溶解为浓度为30mg/mL?67mg/mL的溶液，然后进行半制备液相色谱。
[0011]在本发明的一些具体实施例中，步骤2)的半制备液相色谱以乙腈:水:甲醇=70:28:2(体积比)的溶液为流动相，流速15mL/min?20mL/min，紫外检测波长为244nm，分别收集米尔贝霉A3和A4。
[0012]在本发明的具体实施例中，上述步骤2)所用的半制备液相色谱仪为安捷伦1200，半制备柱为LP-C8 (上海月旭科技有限公司)，半制备柱为25.01*250mm，粒径为5_8 μ m。
[0013]制备得到的米尔贝霉素A3和A4样品通过高效液相色谱(HPLC)进行纯度检测，纯度均达到98% -100%，制备收率彡95%。
[0014]本发明提供了一种大环内酯类抗生素米尔贝霉素的制备方法，大大提高了米尔贝霉素制备纯度，米尔贝霉素A3和A4产物纯度高(可达99.%)，而且制备工艺简单，收率高，相比其他手段，成本有明显的降低，不易产生副产物，实现了我国对米尔贝霉素高纯度纯品分离的突破。
【具体实施方式】
[0015]以下通过【具体实施方式】对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。
[0016]实施例1
[0017]取IL HP20树脂装柱(径高比=1:6)，取米尔贝霉素粗品12g(含量为56% )，用60%乙醇溶解至3000mL上柱。用50%的乙醇解吸树脂柱，检测。将分离出的米尔贝霉素A3、A4合并，浓缩后水层为500mL，加500mL乙酸乙酯进行萃取，取乙酸乙酯层，浓缩、干物质重8.09g(含量为82% )。
[0018]取2g富集后的米尔贝霉素A3和A4用30mL的甲醇溶解。将溶解液进半制备液相色谱仪，所用的半制备液相色谱仪为安捷伦1200，半制备柱为LP-C8(上海月旭科技有限公司)，25.01*250mm，粒径为5-8 μ m。每针进样4mL，流动相为乙腈:水:甲醇=70:28:2 (体积比)，流速15mL/min?20mL/min，紫外检测波长为244nm，分别收集A3和A4，总质量1.92g，收率为 96%。
[0019]采用岛津液相色谱仪LC2010对收集样品进行HPLC检测，进样体积为20 μ 1，流动相为乙腈:水:三乙胺:冰醋酸= 3000:1000:4:4(体积比)，紫外检测波长240nm，柱压力为8.2Mpa，样品检测纯度为100%。
[0020]实施例2:
[0021]取1.8L HP100树脂(上海华震树脂有限公司)装柱(径高比=1:8)，取米尔贝霉素粗品26.39g(含量为51.20% )，用60%乙醇溶解至3000mL上柱。用60%的二氯甲烷解吸树脂柱，梯度抽取检测。将分离出的米尔贝霉素A3、A4合并，浓缩后水层为810mL，加SlOmL乙酸乙酯进行萃取，取乙酸乙酯层，浓缩，干物质重14.5g(含量为93.21% )。
[0022]取2g富集后的米尔贝霉素A3和A4用30mL的乙腈溶解。将溶解液进半制备液相色谱仪，所用的半制备液相色谱仪为安捷伦1200，半制备柱为LP-C8(上海月旭科技有限公司)，25.01*250mm，粒径为5-8 μ m。每针进样4mL，流动相为乙腈:水:甲醇=70:28:2 (体积比)，流速15mL/min?20mL/min，紫外检测波长为244nm，分别收集A3和A4，总质量为1.8g，收率为90%。
[0023]采用岛津液相色谱仪LC2010对收集样品进行HPLC检测，进样体积为20 μ I，流动相为乙腈:水:三乙胺:冰醋酸= 3000:1000:4:4(体积比)，紫外检测波长240nm，柱压力为8.2Mpa，样品检测纯度为99.8%。
[0024]实施例3
[0025]取2L HP300大孔吸附树脂装柱(径高比=1:7)，取米尔贝霉素粗品14.94g(含量为53.21% )，用60%乙醇溶解至3000mL上柱。用55%的乙醇解吸树脂柱，梯度抽取检测。将分离出的米尔贝霉素A3、A4合并，浓缩后水层为450mL，加450mL乙酸乙酯进行萃取，取乙酸乙酯层，浓缩，干物质重8.91g(含量为89.23% ) ο
[0026]取2g富集后的米尔贝霉素A3和A4用30mL的乙腈溶解。将溶解液进半制备液相色谱仪，所用的半制备液相色谱仪为安捷伦1200，半制备柱为LP-C8(上海月旭科技有限公司)，25.01*250mm，粒径为5-8 μm。每针进样4mL，流动相为乙腈:水:甲醇= 70:28:2，流速15mL/min?20mL/min，紫外检测波长为244nm，分别收集A3和A4，总质量为1.96g，收率为 98%。
[0027]采用岛津液相色谱仪LC2010对收集样品进行HPLC检测，进样体积为20 μ I，流动相为乙腈:水:三乙胺:冰醋酸= 3000:1000:4:4(体积比)，紫外检测波长240nm，柱压力为8.2Mpa，样品检测纯度为100%。
【权利要求】
1.一种高纯度米尔贝霉素的制备方法，包括如下步骤: 1)将含量多50%的米尔贝霉素粗品用大孔吸附树脂富集并分离出米尔贝霉素A3和A4，浓缩、干燥得干粉； 2)将步骤I)得到的米尔贝霉素A3和A4干粉用甲醇或乙腈溶解，用半制备液相色谱制备得高纯度米尔贝霉素A3和A4。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤I)富集用的树脂选自下列型号的树脂之一:HP20、HPD100 和 HPD300。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤I)所用树脂柱的径高比为I: (5 ?8) ο
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤I)具体是:将米尔贝霉素粗品用60%乙醇或60%甲醇溶解后上柱，然后以50% -62%的乙醇溶液或者55% -65%的甲醇溶液为流动相进行解吸，将米尔贝霉素A3和A4的解吸液合并、浓缩，用酯类有机溶剂萃取，再浓缩、得到米尔贝霉素A3和A4的干粉。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述酯类有机溶剂是乙酸乙酯或乙酸丁酯。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)用甲醇或乙腈将干粉溶解为浓度30mg/mL?67mg/mL的溶液进行半制备液相色谱。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)所用甲醇是纯度达99%的分析级甲醇，所用乙腈为纯度达99.%分析级乙腈。
8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)的半制备液相色谱以体积比乙腈:水:甲醇=70:28:2的溶液为流动相，流速15mL/min?20mL/min，紫外检测波长为244nm，分别收集米尔贝霉A3和A4。
9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)采用的半制备液相色谱仪为安捷伦1200，半制备柱为LP-C8色谱柱。
10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，步骤2)半制备柱为25.01*250mm，粒径为 5-8 μπι。
【文档编号】C07D493/22GK104497003SQ201410696342
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年11月27日 优先权日:2014年11月27日
【发明者】周筠翔, 赵燕, 谢云, 张洪兰, 詹付凤, 叶静 申请人:北大医药重庆大新药业股份有限公司, 北大方正集团有限公司, 北大医疗产业集团有限公司