标记蛋白质的放射性卤素取代的乙烯基轭合物的制作方法

专利名称：标记蛋白质的放射性卤素取代的乙烯基轭合物的制作方法
技术领域：
本发明是关于标记蛋白质，尤其是抗体，用的放射性卤素取代的小分子，前者是用以临床诊断和治疗用的。本发明也包括了如何将高比度的放射性卤素引入蛋白质分子中的方法。
放射性卤化蛋白质一直是个广泛的科研课题，并可望在临床上发挥各种作用，这包括体外和体内。例如，放射性碘代铁蛋白在体外诊断中，用于测定血清中铁蛋白的浓度，刺激甲状腺的放射性碘化激素应用于类似的检验中。
卤素放射核的特性，使得它们在诊断成象和放射治疗方面很受重视。例如放射性123I(半衰期13小时，其γ射线能量为159kev，电子俘获)对于用在目前γ照相仪成象上是近乎理想的。131I(半衰期8天，放出的γ射线能量364kev，发射β粒子)虽然成象质量低，但却表明在甲状腺的放射治疗上是有用的。同样，溴的放射核，如75Br(半衰期1.6小时，放射正电子)和76Br(半衰期16小时，放射正电子)适用于正电子断层成象，而77Br(半衰期2.4天，放射几种γ射线，并有电子俘获)则适用于放射治疗。其它放射性卤素，如18F(半衰期110分钟，放射正电子)和211At(半衰期7.2小时，放射α粒子)也适用于放射性成象和放射治疗。
单克隆抗体对肿瘤细胞表面上的抗原有高度的选择性和亲和性，因而集中于癌细胞组织内。单克隆抗体的发展，增加了放射性标记抗体在临床上应用于诊断和/或治疗的可能性。
由于抗体的高度选择性，使得它们有可能作为某些特定放射核的载体分子，将放射性运送到癌细胞的位置上去。
其它易于集中到某一器官或发病组织上的蛋白质、蛋白片断、变形蛋白和肽等也是放射性卤化的预选材料。例如，放射性卤化的纤维蛋白原应用于体内深部静脉血栓形成的成象检验。对垂体和其它肽激素吸收的病态异常，亦可用相似方法监督。
遗憾的是，目前还没有把放射性卤素标记的抗体用于常规的体内临床诊断和治疗。将抗体和其它蛋白质用放射性卤素直接标记是有困难的。抗体对于各种放射性标记反应的条件，呈现出不同的灵敏度;标准放射性卤化作用所必需的氧化反应条件对于抗体的放射性标记则特别有害。将蛋白质直接进行碘化作用，这已是常规方法，但经常却使蛋白质的生物活性明显地降低。放射性标记与抗体连接的稳定性也很不一样。例如，一些用放射性碘同位素标记的抗体，在24小时内，放射性碘竟损失50%。放射性溴化作用比放射性碘化作用需要更强的氧化反应条件。将蛋白质用放射性溴同位素直接标记，很少成功，除非使用价格昂贵、难于制备的酶作为氧化剂。并且，蛋白质的直接卤化主要发生在酪氨酰基的残基上，酪氨酸上活化的酚环造成了邻位取代的放射性卤素标记内在的电子不稳定性。放射性卤素标记除了受到脱碘酶作用外(脱碘酶分解代谢结构上相似的甲状腺激素，例如甲状腺素)还要受到空间位阻的影响。
将蛋白质直接进行放射卤化的反应条件是很苛刻的。为了克服这一点所采用的方法，是先将小分子置于单独的反应容器中进行放射性标记，然后在温和的反应条件下，将它们连接到蛋白质分子上。这个途径是制备市场上出售的Bolton-Hunter试剂〔N-琥珀酰亚胺基-3-(4-羟基苯基)丙酸酯〕的基础。用放射碘可得到中等放射标记产率(被标记蛋白质的产率为35-60%)，但是所得到的放射性碘标记不稳定，这与其化学上相似的放射碘化酪氨酰残基有同样的问题。同样地，市售的(Wood)试剂，即甲基-4-羟基亚胺苄酸酯，在连接到蛋白上之前，能进行放射性碘化。但是碘化产物也有这个问题，因为邻位碘代酚本身是不稳定的。尽管这些试剂不能制得所需要的稳定性标记物，但已广泛地用来作放射性碘化的原料。因为使用中对蛋白的去活化作用很小。
在Bolton-Hunter试剂和Wood试剂中都用酚环，因为引入高比度的放射性碘到分子中去，需要活化的芳环。为了使放射性标记连接得更稳定，人们很希望将放射性卤素引入到其它小分子中去。
近来有文献报导，利用有机金属化合物作中间体，将高比度放射性卤素引入连接在链烯烃上的乙烯基中。例如，乙烯基锡烷已用来将放射性卤素引入到甾族化合物分子中的17位上(Hanson，R。N.，etal.，J.Nucl.Med.，23431-436，1982)，再标记蔗糖(Goodman，M.M.，etal.，第六届放射药物化学国际会议上，Boston，MA，6月29日-7月3日，1986，论文编号106)。也有报导用乙烯基硼酸将放射性卤素引入到甾族化合物中(Kabalka，G.W.，etal.，Synth.Commu.11247-251，1981;Kabalka，G.W.，etal.，ApplicationsofNuclearandRadiochemistry，Lambrecht，R.M.，etal.，Eds.，PergamonPress，Newark，N.J，第17章，197-203页，1981)。
本发明提供了一些放射性卤素取代的乙烯基小分子，它们能够连接到蛋白质上去(例如连接到单克隆抗体上去)，其反应条件可保持蛋白质的生物活性不变。通过选择链烯烃上其它取代基，以防止双键移动到分子的其它位置上去，来保持放射性卤素与碳-碳双键之间连接的稳定性。又选择链烯烃上的其它一些取代基，使之当放射性标记的蛋白轭合物引入生理环境中时，防止双键起加成反应。于是，提高了放射标记的稳定性。有关的放射性卤素取代的小分子通式如下
通式中＊X是放射性卤素，C＝C是SP2杂化碳原子构成的双键基团，R1、R2和Y定义如下R1和R2是分别独立地选自下列基团的取代基。它们可以是氢;它们也可以是烷基或带取代基的烷基，只要烷基上取代的SP2或SP碳原子与C＝C至少相隔一个完全取代的SP3杂化碳原子;它们也可以是芳基或带取代基的芳基，只要芳基与C＝C直接相连;它们也可以是杂烷基，只要满足三个条件，第一，杂烷基中的杂原子不直接与C＝C相联，第二，与杂烷基上杂原子相连的任何一个SP2或SP杂化的碳原子与C＝C不直接相连，或不与C＝C共轭，第三，介于C＝C和连接到杂原子上的SP2(或SP)碳原子之间的单个SP3碳原子，必须是完全被取代的;R1和R2也可以是杂芳基，只要杂芳基上的杂原子不直接与C＝C相连;也可以是混合的烷芳基，只要满足两点，第一，杂原子不与C＝C直接相连，第二，或者混合烷芳基中的芳基部分与C＝C直接连接，或者任何芳基部分与C＝C至少相隔一个SP3杂化的碳原子，当在C＝C与芳基部分之间仅仅插入一个SP3杂化的碳原子时，这个SP3杂化的碳原子必须是完全被取代的。
Y可以是上述R1和R2所代表的任何一个取代基(但不包括氢)而且带有能与蛋白质结合的官能团，只要反应条件能保持蛋白质的生物活性即可。上面通式Ⅰ和Ⅱ所代表的化合物能够连接到蛋白质、蛋白片断、免疫结合体(如单克隆抗体和抗体片断)、血浆蛋白、肽和上述物质的混合物上，用作诊断和治疗的试剂。
本发明还提供了上述放射性卤素取代的小分子金属化合物的前体，以及盛装本发明的放射性标记和小分子金属化合物的放射性药盒。


图1的柱状图表示了本发明中5-〔125I〕-碘代-4-戊烯酸酯与单克隆抗体片断的轭合物在供药给小鼠后，在小鼠体内的生物分布资料。
图2的柱状图表示了本发明中3，3-二甲基-5-〔125I〕-碘代-4-戊烯酸酯与单克隆抗体片断的轭合物在供药给小鼠后，在小鼠体内生物分布的资料。
图3的柱状图表示了用标准的氯胺-T氧化法标记了放射性碘的单克隆抗体片断，在体内的生物分布资料。这种生物分布的研究是为了比较用本发明方法制备的放射性碘代单克隆抗体片断在体内的生物分布情况。
乙烯基同卤素间的化学键强度比芳基同卤素间的化学键强度要大些或者相等，而比烷基同卤素间的化学键强度要大。由于卤素与SP2杂化碳原子相连，使得乙烯基-卤素键和芳基-卤素键相对地比较稳定。与SP2杂化碳原子相连的卤素比起与SP3杂化碳原子(尤其是烯丙基和苄基)相连的卤素来，发生亲核取代反应的倾向性也要小得多。这样，在体内存在的内源的亲核物质就不易同乙烯卤化物和芳基卤化物作用而释放出卤阴离子。因此，放射性标记的乙烯基卤化物小分子是有希望的媒介物，将放射性卤素稳定地连接到蛋白质上去，只要蛋白质的生物活性和与放射性卤素连接的SP2杂化碳原子的完整性保持不变就可以了。下面通式Ⅰ和Ⅱ所代表的放射性卤素取代的小分子可以达到这些要求。
＊X是放射性卤素，C＝C是由SP2杂化碳原子组成的双键基团。取代基R1、R2和Y定义如下R1和R2是分别独立地选自下列基团的取代基。它们可以是氢;可以是烷基或者带取代基的烷基，只要烷基上被取代的SP2或SP碳原子与C＝C至少相隔一个完全取代的SP3杂化碳原子;它们也可以是芳基或取代芳基，只要芳基与C＝C直接相连，而且当芳基被取代的位置相对于C＝C是邻位或对位时该取代基不会通过共振结构供给芳基电子即可;它们也可以是杂烷基，只要满足以下三条，第一，烷基中的杂原子不直接同C＝C相连，第二，与杂烷基上杂原子相连的任何一个SP2或SP杂化的碳原子与C＝C不直接相连，否则将与C＝C产生共轭效应，第三，介于C＝C和连接到杂原子上的SP2(或SP)碳原子之间的单个SP3碳原子，必须是完全被取代的;R1和R2也可以是杂芳基，只要杂芳基上的杂原子不直接同C＝C相连;它们也可以是混合烷芳基，但要满足两点，第一，杂原子不直接同C＝C相连，第二，或者混合烷芳基中的芳基部分与C＝C直接相连，或者任何芳基部分与C＝C至少相隔一个SP3杂化碳原子，当在C＝C与芳基部分之间仅仅插入一个SP3杂化的碳原子时，这个SP3杂化的碳原子必需是完全被取代的。这里所谓的完全被取代的SP3碳原子，是指这个碳原子上没有连接氢或者能够引起C＝C异构化的任何取代基。
Y可以是上述R1和R2所代表的任何一种取代基(但不包括氢)而且带有能与蛋白质结合的官能团，只要反应条件能保持蛋白质的生物活性即可。通式Ⅰ和Ⅱ所代表的化合物能够连接到蛋白质、蛋白片断、免疫结合体(如单克隆抗体和抗体片断)、血浆蛋白、肽和上述物质的混合物上，用作诊断和治疗的试剂。
这里采用的符号“＊X”代表以下放射性同位素碘的放射性同位素，主要是123I、125I和131I;溴的放射性同位素，主要是75Br、76Br、77Br;氟的放射性同位素，主要是18F;砹的放射性同位素，主要是211At。从成象诊断角度看建议采用131I，尤其是123I最适合于γ照相仪成象，而18F、75Br、76Br和124I适合于正电子断层成象。从临床放射治疗角度看，＊X最好是131I、77Br和211At。对于体外的放射免疫检验，卤素的放射性同位素最好用125I和131I。
符号“C＝C”代表由SP2杂化的碳原子组成的双键单元，即人们熟悉的链烯烃。组成双键的每个碳原子，还有两个可用来成键的SP2轨道，放射性卤素＊X与其中的一个SP2轨道形成价键。符号“R1”和“R2”代表链烯烃上卤素以外的乙烯基的两个其它取代基，亦即代表同四个成键的SP2轨道中的其它两个形成价键的原子或基团。Y取代基与C＝C的第四个SP2轨道形成价键。
有一点很重要，即R1、R2(也包括Y)不会使放射性卤素与SP2碳原子形成的价键变得不稳定。例如，杂原子氧或氮直接与C＝C的SP2杂化碳原子的任意一个连接，则可能改变链烯烃的电子分布，导至放射性卤素的脱除。有些杂原子可与C＝C直接相连，只要它不供给C＝C非键电子。这种杂原子的例子，有如酰胺键上的氮，它与另一官能团羰基结合，羰基使非键电子离域。这样取代基R1和R2可以是杂烷基或杂芳基，但杂原子最好不要直接连到C＝C上面去。还有一点也很重要，乙烯基的取代基R1和R2不能使得链烯烃容易起亲核加成反应。对C＝C发生亲核加成反应的例子包括March定义的迈克尔(Michael)加成反应，一种加到α、β不饱和羰基化合物上的加成反应。(参考文献March，J.，Advaned Organic Chemistry，3rd Edition，John Wiley and Sons，New York，NY664-666，1985)。因此，对于杂烷基，与杂原子相连的任何SP2或SP碳原子不能与C＝C直接相连，即不能与C＝C发生共轭作用。并且，当介于C＝C和与杂原子相连的SP2(或SP)碳原子之间有单个SP3杂化碳原子时，则它必是完全被取代的，以使C＝C双键不能发生异构化。否则，键合到α位(相对于杂原子而言)上SP3碳原子的质子和连接到C＝C基团上的烯丙基呈现酸性，导致C＝C基团的活化和该双键的位移，从而产生了烯丙基放射性卤代的小分子，而这是很不希望发生的。
还有重要的一点是，在生理条件下R1和R2对于生物分子来说要求是惰性的。例如，还原性的蔗糖就不宜作R1和R2，因为这种非惰性的取代基定会导致非特异的糖基化，也会使体内非靶子组织标记上放射性。
烷基取代基R1或R2可以包括质子、含有1-12个碳原子的支链、直链或环烷烃基团;这1-12个碳原子最好是被质子或甲基取代的。R1和R2最好是质子和甲基。杂烷基取代基R1和R2可以是这样一些基团，其中烷基部分可带有下列取代基卤素、OH、OG、O2CG、CO2G、CONH2、CONG、CONHG、NH2、NG2NHG、SH、SR、SOG、SO2G、SO2NG2、SO2NH2和SO2NHG，或者其中包含有下列连接基团-O-、-NH-、-NG-、-CO-、-CO2-、-CONH-、-CONG-、-S-、-SO-、-SO2-、-CO2NH-和-SO2NG-，其中G是1到大约8个碳原子的烷基，或者1到大约8个碳原子的链烯基以及芳基。但杂环烷基R1和R2并不限于以上这些基团。
芳基取代基R1和R2可以包括5、6和7个碳原子的芳环，最好是苯基，当然不只限于这些取代基。多核芳烃取代基R1和R2可以包括三个以内的芳环，每个芳环含有5、6或7个碳原子。杂芳烃取代基R1和R2可以包括5、6或7元芳环，其中含有1-3个左右的杂原子(O、S和N)，而最好的杂芳基取代基是吡啶，当然不只限于以上这些基团。上述的芳基、多核芳基和杂芳基可以带有3个之多可电离的取代基团(可电离的基团有硝基、磺酸基、羧基、和氨基)，以提高化合物Ⅰ和Ⅱ在水中的溶解度。芳基、多核芳基和杂芳基取代基R1和R2亦可带有烷基及含有氧、氮及硫的杂烷基那样的取代基。
链烯烃的乙烯基取代基R1和R2也可以是混合的烷芳基，它们含一个或多个SP3碳原子连接C＝C和芳基部分。如上所述，如果仅有一个插入的SP3碳原子，那么这个碳原子必须是完全被取代的，因为苄基质子(是酸性的)经弱碱处理可能导致双键的位移，因而破坏了放射性卤素与SP2碳原子所形成的键。混合烷芳基取代基R的芳基部分可以是碳环，也可以是杂环。
“Y”所代表的取代基必须符合下面两点要求首先，作为链烯烃的乙烯基取代基Y，和上述取代基R1和R2一样，一定不能高度活化C＝C基团。因而，Y可以是上面公开的R1和R2所代表的任何基团(不包括连接到C＝C上的氢)。其次，Y取代基带有一个官能团(以下简称“Z”)，在温和的条件下能够接到蛋白质上去(例如通过酰化或aminidination)并保持蛋白质的生物活性不变。
Z可以是任何一种活化官能团，它要能够同蛋白质上的、蛋白片断上的、抗体上的、与片断结合的抗原上的、氨基酸聚合体上的、血浆蛋白上的、肽激素上的以及上述物质混合物上的亲核基团发生反应。这里所谓的“蛋白质”是包括任何一种蛋白质、多肽或其片断。“活化官能团”是指，在水溶液里，Z取代基能够同有生物活性的蛋白质上的亲核取代基迅速发生反应或与之发生结合作用，其反应条件如温度和pH不会减弱或破坏结合蛋白的生物活性。适用的官能团Z的例子有亚胺酯、烷基亚胺酯、氨基烷基亚胺酯、琥珀酰亚胺酯、酰基琥珀酰亚胺、亚胺酸酯、烷基亚胺酸酯、氨基烷基亚胺酸酯、酚酯、取代酚酯、四氟苯酯、酸酐、异硫氰酸酯、胺、肼、酰肼、烷基卤化物、马来酰亚胺和迈克尔(Michael)型受体，但不局限于上述这些。Z最好用酚酯或亚胺酯，这样便于同蛋白质的氨基酸或糖残基上的亲核官能团(或连接位置)进行共价结合;或者酚酯或亚胺酯与连接分子共价结合，然后这些连接分子再结合到蛋白上去。所谓“连接分子”是指双官能团结合试剂，如氨基酸聚合物、糖、二羧酸、二胺和多元醇。
另外，官能团Z也可以是个亲核基团，它易于同含有活化官能团的衍生蛋白质或蛋白片断结合。同亲核官能团Z反应的衍生蛋白质，包括已经与交联剂反应的蛋白质，这些交联剂包括带有均二官能团的亚胺酯、带有均二官能团的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯和带有杂二官能团的交联剂，该杂二官能团交联剂具有以下活性官能团NHS酯、马来酰亚胺、吡啶二硫化物、活化的卤素如α-酮基卤化物。这些交联试剂从市场上是可以买到的，例如可以向Pierce化学公司(Rock-ford县，伊利诺州)购买。因此，官能团Z可以是醛、硫醇、胺、羧酸酯、醇、重氮基，或者是能与含有至少一个α，β-不饱和羧基(如马来酰亚胺)的迈克尔(Mechael)型受体反应的基团。
衍生蛋白质也包括用氧化剂(如高碘酸盐)处理过的糖蛋白。糖蛋白经氧化剂处理后，在糖的部分的蔗糖单元上产生出醛基。胺或肼的官能团Z将同醛基反应，将放射性卤素取代的分子结合到糖蛋白上去。
一般说来，Y(和R1、R2一样)应是短链取代基，因为据信未连接上的或分裂开来的带有放射性卤素的短链分子易被肾脏排出。因此，Y取代基(不包括官能基Z)应是不超过5个左右碳原子的直链取代基，最好是不超过3个碳原子的直链取代基。这种短链的Y取代基可以含有任何一个大小适宜的烷基、杂烷基、芳基、杂芳基或者混合烷芳基，这些基团和前面说的R1和R2一样。在某些情况下，在C＝C和用于与蛋白进行接合的官能团Z之间，Y可以含有稍长的间隔基团。作为那种较长的间隔基团的例子有多肽和多糖，当然不限于此。
本发明中，含有Z基团的放射性卤素取代的小分子可用通式Ⅲ和Ⅳ来表示
放射性卤素＊X是在C＝C上的取代基。相对于取代基Y，＊X有顺式、反式或孪位(未画出)取代。整数“n”最好是3-5。为了达到上述目的，适用的官能团Z包括酚酯(例如对硝基苯酯或四氟苯酯)，酰亚胺酯(例如琥珀酰亚胺酯)、酰亚胺酸酯，酸酐、酰基琥珀酰亚胺、重氮基、肼、烷基卤化物(例如苄基卤化物)，还有其它官能团，只要它们能将这些分子以共价键合到蛋白上即可。较好的Z基团有酰亚胺酯、烷基酰亚胺酯、氨基烷基酰亚胺酯，酰亚胺酸酯、烷基酰亚胺酸酯、氨基烷基酰亚胺酸酯以及迈克尔型受体，如马来酰亚胺。
通式Ⅰ和Ⅱ也包括这样一些放射性卤素取代的小分子，其中Y取代基带有Z官能团的前体。适宜的前体化合物有羧酸，这里Z是酚酯、酰亚胺酯、酸酐、酰基琥珀酰亚胺或马来酰亚胺;腈，这里Z是酰亚胺酸酯;醇，这里Z是醛;卤化物，这里Z是异硫氰酸盐，硫醇、肼或胺;以及胺，这时Z是重氮或马来酰亚胺。
通式Ⅲ标出了间隔成分(CH2)n，Y中的间隔基团可由容许的R1和R2取代基里去选择，它们的长度相当于12个以下直链碳原子的长度，而以不超过5个直链碳原子的长度为宜。但最好还是短于3个直链碳原子的长度(即n＝1，2，3)来隔开Z和乙烯基，以便能较快地清除诊断成象中的本底活性(未与抗体连接的任何放射性标记小分子)并减少辐射对非靶子组织的损伤。
最好的实施例是，Y有一个完全被取代的碳原子与C＝C直接相连。这样的原子排布，在空间上阻碍了在C＝C上发生亲核取代，防止了双键的位移，而使得间隔基团相对地不易被酶作用而降解。这类分子代表性的通式如下
＊X、R1、R2，n和Z的意义和前面一样。此外Y的间隔基团(CH2)n可以是芳基、多核芳基和杂芳基。
作为说明，列出以下几个放射性卤素取代的小分子，但不限于这些分子
5-碘-4-戊烯酸
3，3-二甲基-5-碘-4-戊烯酸
4-〔2′-碘-乙烯基〕苯甲酸最好是上述这些带有羧基的化合物连接到活化官能团上(例如琥珀酰亚胺酯或者是四氟苯酯)以促进放射性卤素取代的小分子与多肽、蛋白质和蛋白片断的结合，而反应条件能保持轭合物中蛋白质部分的生物活性不变。如果多肽、蛋白质和蛋白质片断已经与前面介绍的双官能团交联剂结合了，那么由上述可知以上放射性卤素取代的小分子也可以同它们直接作用。
本发明也提供通式Ⅵ或Ⅶ的有机金属中间体分子
这里M是含金属(金属化了的)的适用于金属转移作用或放射性卤素金属化作用的基团，下面将进一步介绍。R1、R2、Y和C＝C的意义与以前相同。M可以是三烷基锡如Sn(n-Bu)3或SnMe3，其中Bu是丁基，Me是甲基，或是下列基团之一HgX(X＝Cl、Br或I)、HgOAc(OAc是醋酸根)、B(OH)2、BX2、BQ2(Q是氢化物、烷基、或含有不超过5个或最好更少些碳原子的烷氧基)、Zr(cp)2Cl(cp是环戊二烯基)、SiX4和SiF5K2。为了便于说明，下面举几个有关的有机金属中间体分子的例子，但不限于这些化合物
通式为ⅵ和ⅶ的化合物能够通过若干方法来制备。这些方法包括对相应的炔基前体进行氢化金属化，在相应的乙烯基卤化物前体上用有机金属基团取代卤素，或者施加金属化转变作用于相应的乙烯基金属或有机金属化合物。适合于作为氢化金属化炔基前体的有LiAlH4、(烷基)2AlH、氢化三正丁基锡、SnMe3H、Cl2SiH和Zr(cp)2HCl。
有两个普遍的方法被用来合成通式为ⅳ、ⅴ和ⅵ的化合物。第一个方法是用氢化金属化反应来使带有Y官能团或其前体的炔基衍生物金属化。例如，带有相应于上面化合物ⅳ的Y官能团的炔基衍生物有
市场上可以买到的一种炔基衍生物(Aldrich化学公司，Milwaukee，WI)，它带有对应于化合物ⅳ的Y官能团的前体，它是
在化合物ⅶ里带有活性官能团Z的Y取代基的炔基衍生物有
这些化合物中的任何一个都可以被氢化金属化，但是最好用(n-Bu)3SnH来使化合物ⅸ氢化金属化，以获得上述化合物ⅳ的活化形式。
第二个合成方法，称之为金属化转变反应，利用位置选择性的转变，将一种乙烯金属衍生物转变成另一种乙烯金属衍生物。乙烯金属衍生物能够用下列基团之一使之金属化转变Sn(n-Bu)3、SnMe3(或其它三烷基锡)、HgX、HgOAc、BX2、BQ2、Zr(cp)2Cl或SiX3，其中X是Cl、Br或I，CP是环戊二烯、OAc是醋酸根，Q是氢化物基团、烷基或烷氧基。在某些情况下，这些金属化转变后的化合物太活泼了，不宜进行放射性卤代作用。这些金属化的化合物可转变成不太活泼的金属有机化合物以适应放射性卤化作用的需要。例如，用氢氧根离子
适宜的前体分子包括4-戊炔酸(Aldrich化学公司，Milwaukee，WI);3，3-二甲基-4-戊炔酸(HelveticaChimicaActa511663-1678，1968);和4-乙炔基苯甲酸(J.Org.Chem.434491-4495，1978)。
通过下面两个截然不同的反应中的任意一个，能够合成乙烯锡烷。第一个反应是在60℃或室温下，在自由基引发剂如AIBN(2，2-偶氮二(2-甲基-丙腈))存在下将炔基衍生物同氢化三正丁基锡反应。在第二个反应中，将乙烯基卤化物的衍生物(可由相应的炔基衍生物制得)在接近-100℃下同正丁基锂反应或在室温下同镁反应。接着乙烯基金属同三烷基锡试剂(最好是氯化三正丁基锡)的卤化衍生物反应。
按照Angew.Chem.Int.Ed.Engl.15333-340，1976所述的方法，利用锆的氢化物、(cp)2ZrHCl，进行炔基衍生物的锆氢化反应来合成乙烯基锆的衍生物。同样，利用邻苯二酚甲硼烷、乙硼烷或者BHCl2来实现炔基衍生物的硼氢化反应，接着进行水解，以合成乙烯基硼酸衍生物。
通过下面两个截然不同的方法都可制得乙烯基五氟硅酸酯。在第一种反应里，用三氯硅烷将炔基衍生物氢化硅烷化，接着用氟化钾来处理中间产物乙烯基三氯硅烷基衍生物。在第二个反应里，将乙烯基卤化物衍生物在接近-100℃下同正丁基锂反应，或在室温下同镁反应，接着将乙烯基金属同四氯化硅作用。再将得到的乙烯基三氯硅烷基衍生物按照前面介绍的方法，转变成相应的乙烯基五氟硅酸酯。
合成乙烯基汞衍生物的较好方法是通过上面乙烯基锡烷或乙烯基硼酸酯的金属化转变作用。乙烯基锡烷同Hg(OAc)2的反应，通过位置选择性取代，得到相应的乙烯基-HgOAc衍生物(J.Org.Chem.，22248，1957);同样，乙烯基硼酸酯同Hg(OAc)2反应，得到相应的乙烯基-HgOAc(J.Am.Chem.Soc.，944371-4373，1972)。乙烯基-HgOAc可进一步转变成乙烯基-Hg-X，这是通过与卤素离子(X)的反应来实现的。
将待进行放射性标记的化合物连接到蛋白质上去，需要借助官能团Z，如将羧酸前体基团转变为含有很好的离去基团(如羟基琥珀酰亚胺)的一种酯，或将腈基前体转变为酰亚胺酸酯，便可得到官能基Z。这种转变可以认为是将分子朝向与蛋白质上相应的官能团，如氨基(例如赖氨酸残基)、硫醇或羟基(或羧酸酯，但不太好)，反应的方向活化。因为金属氢化物尤其是氢化三烷基锡和氢化硼都是还原剂，采用这些试剂在氢化金属化之后只能合成为活化的酰亚胺和酰亚胺酸酯或其它对还原反应灵敏的官能团Z。在引入放射性卤素之前，先制得活化酰亚胺或酰亚胺酸酯或其它官能团Z，以免降低放化产率和引入放化杂质。
从游离的羧酸或它们的甲锡烷酯制得的金属化乙烯基衍生物转变成N-琥珀酰亚胺酯，这一步可以采用二环己基碳化二亚胺(DCC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的无水四氢呋喃溶液，在放射性卤化作用之前进行。但是由氰化物来合成酰亚胺酸酯是有问题的，这是因为乙烯基-金属键，尤其是乙烯基-锡键有酸性倾向。因此可于金属化之前或放射性卤化作用之前将含氰基的化合物转变成酰亚胺酸酯。
乙烯基金属衍生物可通过卤代脱金属化反应实现放射性卤化，这最好是在已经连接了官能团Z之后进行。相应的N-琥珀酰亚胺酯通过位置选择性脱金属反应进行放射性卤化，从而制得所需要的化合物。由于N-琥珀酰亚胺酯有水解的可能，所以反应时间应尽可能缩短。例如，为了通过缩短脱金属反应的时间减少水解作用，可以把反应温度改为室温。另外，可以采用水解速度比较低的反应混合物。例如，醋酸加到混合物中，明显地降低了N-琥珀酰亚胺酯的水解速率，有助于避免通常会在例如Bolton-Hunter方法中遇到的把时间限制得过短的问题。
在进行任何纯化或处理步骤之前，放射性卤化反应混合物里应当加入硫代硫酸钠稀溶液。在放射性标记的蛋白质纯化之前或纯化过程中，剩余的放射性卤素很容易通过色谱分离去掉。
放射性卤化反应最好在含质子的溶剂中进行，例如在水、甲醇、乙醇以及它们的混合物。在将放射性物质加入蛋白质溶液之前或反过来将蛋白质加入放射性物质中之前，需要的话，醇溶剂很容易除去。另外，非质子溶剂如四氯化碳，也能用于放射性卤化作用中，因为两相体系有利于分离掉标记化合物中游离的放射性卤素。
放射性卤化作用可以通过放射性-高效液相色谱法来监测和纯化。例如，用反相高效液相色谱柱(C-18)，淋洗剂为甲醇-水(含1%醋酸)。
可以预料，按本发明制得的用小分子放射性碘代后的蛋白质所具有的稳定性和生物分布性能，将使得这些试剂更适宜于诊断和治疗。
本发明也提供临床使用的放射性药盒，盒内有一个或一组小瓶，盛有通式Ⅰ到Ⅶ的任一化合物，而最好这些化合物带有活化官能团Z。通式为Ⅵ和Ⅶ的化合物通常将与适当的缓冲溶液及其它试剂一并提供，于是加入放射性卤素就将得到所需要的放射性卤化分子。放射性卤化产物再连接到蛋白上去，如连接到盒中另外单独有一瓶中的单克隆抗体上去。盒中也包括一根到几根色谱柱或其它适当的分离装置，以便去除放射性卤化蛋白质中的剩余前体和杂质。
本发明还提供了稳定放射性卤素的方法，即将通式为Ⅰ和Ⅱ的小分子连接到具有生物活性的非蛋白分子上，如甾族化合物及其它激素分子上。
下面通过一些例子，对本发明作进一步说明例一合成5-(三正丁基锡烷基)-4-戊烯酸三正丁基锡烷基酯将氢化三正丁基锡(2.0当量，Aldrich公司产品)和4-戊炔酸(1.0当量，Aldrich产品)的混合物加热到60℃，维持6小时。将粗产品进行Kugelrohr蒸馏，得到5-(三正丁基锡烷基)-4-戊烯酸三正丁基锡烷基酯。
例二5-(三正丁基锡烷基)-4-戊烯酸(2，3，5，6-四氟苯)酯的合成在室温下，向5-(三正丁基锡烷基)-4-戊烯酸三正丁基锡烷基酯(1.0当量)的无水四氢呋喃溶液中，加入二环己基碳化二亚胺(1.2当量，Aldrich公司产品)，和2，3，5，6-四氟苯酚(1.2当量，Aldrich公司产品)。混合物搅拌过夜。过滤，浓缩滤液，残渣经色谱分离，得5-(三正丁基锡烷基)-4-戊烯酸(2，3，5，6-四氟苯)酯。
例三4-〔2′-(三正丁基锡烷基)乙烯基〕苯甲酸三正丁基锡烷基酯的合成将4-乙烯基苯甲酸(1.0当量)和氢化三正丁基锡(1.0当量，Aldrich公司产品)的混合物加热到60℃，保持6小时。粗产品经Kugelrohr蒸馏，得到4-〔2′-(三正丁基锡烷基)乙烯基〕苯甲酸三正丁基锡烷基酯。
例四4-〔2′-(三正丁基锡烷基)乙烯基〕苯甲酸N-琥珀酰亚胺酯的合成在室温下，将二环己基碳化二亚胺(1.2当量，Aldrich公司产品)和N-羟基琥珀酰亚胺(1.2当量，Aldrich公司产品)加入到4-〔2′-(三正丁基甲锡烷基)乙烯基〕苯甲酸三正丁基锡烷基酯(1.0当量)的无水四氢呋喃溶液中。静置过夜。将混合物过滤，浓缩滤液，将残渣经过色谱分离得到4-〔2′-(三正丁基锡烷基)乙烯基〕苯甲酸N-琥珀酰亚胺酯。
例五4-〔2-(三正丁基锡烷基)乙烯基〕苯甲酸N-琥珀酰亚胺酯的放射性碘化将10μg(0.08μmol)N-氯代琥珀酰亚胺的10μl甲醇溶液加入到盛有10-50μg(即0.02-0.10μmol)4-〔2-(三正丁基锡烷基)乙烯基〕苯甲酸N-琥珀酰亚胺酯和50μL 5%醋酸/甲醇的瓶中。再加10μL Na125I溶液(用Delbecco′s磷酸盐缓冲盐水稀释;Gibco实验室出品)(放射性强度为100微居里到2毫居里)。3-5分钟后，再加入10-20μL 0.72mg/mL的Na2S2O5水溶液。向混合物表面吹N2气流将它浓缩，直到体积减小到只有水相的体积大小。这个混合物，按照前面介绍的方法，直接用于蛋白质标记试验。另外，按同样方法用131I进行放射性碘化。
例六用4-(2′-碘代乙烯基)苯甲酸N-琥珀酰亚胺酯标记蛋白质将4-(2′-碘代乙烯基)苯甲酸N-琥珀酰亚胺酯的粗产品溶液转移到盛有蛋白质缓冲溶液(PH8.5-9)的瓶里，或者反过来将后者加到前者的溶液中。在室温下，结合作用在5分钟内完成。利用凝胶渗透色谱柱或微孔过滤系统(例如Centricon超离心)将标记的蛋白与未结合的放射性分开，进行纯化。
例七5-(三正丁基锡烷基)-4-戊烯酸(2，3，5，6四氟苯基)酯的放性碘化将10μg(0.08μmol)N-氯代琥珀酰亚胺的10μL甲醇溶液加入到盛有10-50μg(即0.02-0.10μmol)的5-(三正丁基锡烷基)-4-戊烯酸2，3，5，6-四氟苯酯和50μL5%醋酸/甲醇的瓶中。再加10μL Na125I溶液(用Delbecco′s磷酸盐缓冲盐水稀释;Gibco实验室出品)(放射性强度为100微居里到2毫居里)。3-5分钟后，再加入10-20μL 0.72mg/ml的Na2S2O5水溶液。向混合物的表面吹氮气流，将其体积浓缩到只有水相体积的大小。这个混合物即可按照前面介绍的方法直接用于蛋白质标记试验。另外，按同样方法用131I进行放射性碘化。
例八用5-〔125I〕-碘代-4-戊烯酸(2，3，5，6-四氟苯)酯标记蛋白质将5-〔125I〕-碘代-4-戊烯酸(2，3，5，6-四氟苯)酯的粗水溶液转移到盛有蛋白质的缓冲溶液的瓶中(PH8.5-10)，或者反过来，将后者加入到前者的溶液中。将此溶液加热到37℃，保持20分钟，以进行结合反应。利用凝胶渗透色谱法或微孔过滤系统(如Centricon超离心)将标记的蛋白质与未结合的放射性分开，达到纯化目的。
例九5-(三正丁基锡烷基)-4-戊烯酸(2，3，5，6-四氟苯)酯的制备依次将Bu2SnH(1.7mL，6.3mmol)和Et2B(0.30ml，1.0M的己烷溶液，0.30mmol)先后加入到4-戊炔酸(308mg，3.1mmol)的甲苯(7.0mL)溶液中，操作在氮气气氛下进行。然后将溶液在室温下搅拌1 3/4 小时，再减压蒸出溶剂。将得到的油状物溶于乙酸乙酯中，并用饱和的Nacl溶液洗涤。用MgSO4干燥乙酸乙酯相，过滤，并减压浓缩，得到2.0g粗产品。依次将2，3，5，6-四氟代酚(554mg，3.4mmol)的四氢呋喃(1.0mL)溶液和二环己基碳化二亚胺(652mg，3.2mmol)的四氢呋喃(1.0mL)溶液加入到上述粗产品的无水四氢呋喃(15mL)溶液中。在室温下将此溶液搅拌过夜，形成白色沉淀。减压蒸去四氢呋喃，残渣制成乙腈悬浮液。滤出不溶的沉淀，滤液经闪式层析纯化(硅胶柱，25mm×90mm，5%乙酸乙酯/己烷淋洗)，得到883mg(50%)的5-(三正丁基锡烷基)-4-戊烯酸(2，3，5，6-四氟苯)酯，这是几种异构体的混合物。核磁共振数据如下1H NMR(200MHz，CDCl3)δ8.90(m，1H)，6.20(m，2H)，2.78(bg，2H，J＝7Hz)，2.60(m，2H)，1.65-1.20(m，18H)，1.90(t，9H，J＝8Hz);13C NMR(50.3Hz，CDCl3)δ169.75，145.95，145.80，132.14，130.77，106.70(t，J＝23Hz)，103.63(t，J＝23Hz)，34.04，33.13，32.62，32.23，29.43，27.63，13.96，10.53，9.71。
例十3，3-二甲基-5-(三正丁基锡烷基)-4-戊烯酸(2，3，5，6-四氟苯)酯的制备在氮气气氛下，依次将Bu3SnH(0.10mL，0.38mmol)和Et3B(0.03mL，1.0M的己烷溶液，0.03mmol)加入到3，3-二甲基-4-戊炔酸(20mg，0.16mmol)的甲苯(0.3mL)溶液中。在室温下将此溶液搅拌2 1/2 小时，然后减压蒸去溶剂。将得到的油状物溶于无水四氟呋喃(0.32mL)中，再先后加入2，3，5，6-四氟代酚(60mg，0.36mmol)和二环己基羰基二亚胺(68mg，0.33mmol)。室温下将溶液搅拌过夜形成白色沉淀。再减压蒸去四氢呋喃，残渣制成在乙腈中的悬浮液。滤去不溶性沉淀，滤液经闪式色谱纯化(硅胶柱，10mm×160mm，2%乙酸乙酯/己烷淋洗)得到41mg(45%)2，3，5，6四氟苯基3，3-二甲基-5-(三-正-丁基甲锡烷基)-4-戊烯酸酯的异构体混合物。核磁共振数据如下1H NMR(200MHz，CDCl3)δ7.00(m，1H)，6.73(d，0.63H，J＝14Hz)，6.05(m，0.74H)，5.76(d，0.63H，J＝14Hz)，2.645(S，0.74H)，2.64(S，1.26H)，1.28(S，3.78H)，1.25(S，2.22H)，1.70-0.80(m，27H)，13C NMR(50.3MHz，CDCl3)167.78，167.61，156.17，155.64，125.53，123.79，103.19(t，J＝22Hz)，46.56，45.72，37.82，34.84，29.98，29.92，27.21，27.11，26.90，26.72，25.34，24.59，13.52，11.58。
例十一5-(三正丁基锡烷基)-4-戊烯酸(2，3，5，6-四氟苯)酯或3，3-二甲基-5-(三正丁基锡烷基)-4-戊烯酸(2，3，5，6-四氟苯)酯的制备将N-氯代琥珀酰亚胺(10μg，0.08μmol)的甲醇(10μL)和磷酸缓冲盐水(10μL，M.A.Bioproducts出品)溶液加入到含有5-(三-正-丁基甲锡烷基)-4-戊烯酸(2，3，5，6-四氟苯)酯(25μg，0.05μmol)或者含有3，3-二甲基-5-(三正丁基甲锡烷基)-4-戊烯酸(2，3，5，6-四氟苯)酯(25μg，0.05mol)的25μL 5% HOAC/MeOH溶液的小瓶里。再往其中加入Na125I溶液(在0.1N NaoH中的溶液，为了便于转移加甲醇稀释，100微居里到2毫居里)。在室温下放置5分钟，再加入10μL 0.72mg/mL的Na2S2O5溶液。上述两种化合物的放射性标记产率一般均超过80%。产物可按下述方法直接用于蛋白质的标记。
例十二用5-〔125I〕-碘代-4-戊烯酸(2，3，5，6-四氟苯)酯或(3，3-二甲基-5-〔125I〕-碘代-4-戊烯酸(2，3，5，6-四氟苯)酯标记蛋白质将蛋白质缓冲溶液(PH8.5-9.5)加入盛有放射性碘代酯的粗产品溶液的瓶中。加热到37℃，保持30-60分钟，以完成结合反应。结合反应的产率约为35%。通过凝胶渗透色谱，将标记的蛋白质与未结合的放射性分开，达到纯化的目的。
例十三生物分布的研究下面的动物试验证实了本发明的小分子放射性碘代的蛋白质比起通常用的含有酚基的芳环放射性碘代蛋白质来在体内有更好的稳定性。实验中，取甲状腺对碘的吸收(测颈部的放射性)作为体内脱碘作用的度量。
12只小鼠都注射了抗黑瘤抗体纤维蛋白片断，抗体都是按例十二的方法，用5-〔125I〕-碘代-4-戊烯酸(2，3，5，6-四氟苯)酯标记的。四只小鼠一组分成三组，分别于注射后4、20和40小时后处死，立即用常规方法测定放射性标记的生物分布。结果用柱状图表示于图1。图中使用了下列符号BL，血;TU，黑色素瘤;SK，皮肤;MU，骨胳肌;BO，骨骼;LU，肺;LI，肝;SP，脾;ST，胃;NE，颈部(包括甲状腺体);KI，肾;IN，肠。结果用“剂量%/g组织”表示。
另外用12只小鼠作平行试验，给小鼠都注射了抗黑瘤抗体纤维蛋白片断，抗体都是按例十二的方法，用3，3-二甲基-5-〔125I〕碘代-4-戊烯酸(2，3，5，6-四氟苯)酯标记的。按上述同样方法测放射性标记的生物分布。结果示于图2。
在对照试验里，8只小鼠都注射抗黑瘤抗体纤维蛋白片断，抗体是用已知的氯胺-T氧化法直接标记上放射性碘的。分别于4小时、20小时将小鼠处死。研究结果示于图3。
由各图看出4小时和20小时的生物分布，两个乙烯基碘取代的抗体轭合物和氯胺-T直接标记的抗体在皮肤、肌肉、骨骼、肝、肾和肠内分布是很相似的，这表明这几个放射性标记的抗体行为是相似的。但是，动物注射了直接标记的抗体以后，颈部(甲状腺)已积累了相当大部分的放射性碘。这提示我们，直接标记的抗体的脱碘作用比两种乙烯基碘代抗体的脱碘作用都要大。
本发明的放射性卤代蛋白质产物能够用于放射性诊断和治疗。例如，能够和与肿瘤细胞有关的抗原有选择性作用的单克隆抗体或能与抗原结合的片断都可以用本方法进行放射性卤化作用，然后用于哺乳动物体内的肿瘤细胞位置的成象上。为达到成象的要求，向病人体内注入足够量的放射性卤代抗体，例如用静脉注射的办法，然后用闪烁计算器(如γ照相仪)进行扫描。也可将这种放射性卤代抗体引入哺乳动物的体内，进行肿瘤的放射治疗。
其它易于集中在器官和病态组织内的蛋白质、蛋白片断、修饰蛋白和肽等，也能用本发明的方法进行放射性卤化，并用于监察体内平衡失调及发病状况。例如，放射性卤素标记的纤维蛋白原可通过体内成象的方法用于诊断深部静脉的血栓。同样方法，可以监察由于病态造成对垂体和其它肽激素的吸收的改变。
作为进一步的例子，按照本发明的方法经过放射性卤素标记的抗体亦可用于体内放射性免疫检验。
所有前面提到的放射性卤化的蛋白质，都是稳定地放射性标记了的，因为放射性卤素是在轭合物的非活化双键上进行取代的。
权利要求
1.通式为(I)或(Ⅱ)的化合物
其中＊X是放射性卤素，C=C是由SP2杂化碳原子组成的双键基团，R1和R2可以分别独立地选自于下列取代基氢，烷基或取代烷基，只要烷基上取代的SP2或SP碳原子与C=C至少相隔一个完全取代的SP3杂化碳原子就行，芳基或取代芳基，只要该芳基或取代芳基与C=C直接相连，杂烷基，只要满足三个条件第一，杂烷基中的杂原子不直接与C=C相连；第二，与杂烷基上杂原子相连的任何一个SP2或SP杂化的碳原子与C=C不直接相连，或不与C=C发生共轭，第三，介于C=C和连接到杂原子上的SP2(或SP)碳原子之间的单个SP3杂化碳原子必须是完全被取代的，杂芳基，只要其中的杂原子不直接与C=C相连，或不与C=C共轭就行，混合的烷芳基，但是，第一，杂原子不与C=C直接相连；第二，或者混合烷芳基中的芳基部分与C=C直接相连，或者任何芳基部分与C=C至少相隔一个SP3杂化的碳原子；第三，若在C=C与芳基之间仅仅间隔一个SP3杂化的碳原子，则此SP3杂化的碳原子必须是完全被取代的，Y可以是上述R1和R2所代表的任何一个取代基(但不包括氢)，而且还带有能与蛋白质、蛋白片断或多肽结合的官能团，只要反应条件能保持蛋白质、蛋白片断或多肽的生物活性即可。
2.根据权利要求1的化合物，其中＊X选自123I、125I、131I、75Br、76Br、77Br、18F和211At。
3.通式为(Ⅵ)或(Ⅶ)的化合物
其中M是三烷基锡、Sn(n-Bu)3、SnMe2、SiX4、BX2、HgX(X是Cl、Br或I)、HgOAc(OAc是乙酸根)、B(OH)2、BQ2〔Q是氢化基团、烷基或含有不超过5个左右碳原子的烷氧基〕，Zr(CP)2Cl(CP是环戊二烯基)或SiF5K2，C＝C是由SP2杂化碳原子组成的双键基团，R1和R2可以分别独立地选自以下取代基氢，烷基或取代烷基，只要烷基上取代的SP2或SP碳原子与C＝C至少相隔一个完全被取代的SP3杂化碳原子。芳基或取代芳基，只要它们与C＝C直接相连。杂烷基，只要满足三个条件第一，杂烷基中的杂原子不直接与C＝C相连;第二，与杂烷基上杂原子相连的任何一个SP2或SP杂化的碳原子与C＝C不直接相连，或不与C＝C发生共轭;第三，介于C＝C和连接到杂原子上的SP2(或SP)碳原子之间的单个SP3杂化碳原子必需是完全被取代的，杂芳基，只要其中的杂原子不直接与C＝C相连，或不与C＝C共轭，混合烷芳基，只要，第一，杂原子不与C＝C直接相连;第二，或者混合烷芳基中的芳基部分与C＝C直接相连，或者任何芳基部分与C＝C至少相隔一个SP3杂化的碳原子;第三，若在C＝C与芳基之间仅仅间隔一个SP3杂化的碳原子，则此SP3杂化的碳原子必须是完全被取代的，Y是上述R1和R2所代表的任何一个取代基(但不包括氢)，而且还带有能与蛋白质、蛋白片断或多肽结合的功能团，只要反应条件能保持蛋白质、蛋白片断或多肽的生物活性即可。
4.根据权利要求1或3的化合物，其中R1和R2可分别独立地选自于氢、1个到大约12个碳原子的烷基和5-7个碳原子的芳基。
5.根据权利要求4的化合物，其中R1和R2可分别独立地选自于氢或甲基。
6.根据权利要求1或3的化合物，其中官能团Y选自下列基团酰亚胺酯、烷基酰亚胺酯、氨基烷基酰亚胺酯、琥珀酰亚胺酯、酰基琥珀酰亚胺酯、酰亚胺酸酯、烷基酰亚胺酸酯、氨基烷基酰亚胺酸酯、酚酯、取代酚酯、四氟苯基酯、酸酐、异硫氰酸酯、胺、肼、酰肼、烷基卤化物、马来酰亚胺和迈克尔型受体。
7.根据权利要求1或3的化合物，其中Y包含一个完全被取代的SP3杂化碳原子，直接与C＝C相连。
8.一种放射性卤化蛋白质，它是与权利要求1的化合物相结合的蛋白质，这种化合物中的取代基Y的官能团与蛋白质反应，使此化合物结合到蛋白质上去。
9.权利要求8的放射性卤代蛋白质，其中蛋白质是单克隆抗体或其片断，放射性卤素选自下列卤素同位素123I、125I、131I、75Br、76Br、77Br、18F和211At。
10.权利要求9的放射性标记的蛋白质、其中单克隆抗体或其片断会结合到癌细胞上去。
全文摘要
本发明涉及标记蛋白质，尤其是抗体，用的放射性卤化的乙烯基小分子，由通式I和II表示。式中各基团的定义见说明书。通式I和II所表示的化合物能够结合到蛋白质(如单克隆抗体)上去，得到可用作诊断和治疗的试剂。本发明也包括了如何将高比度的放射性卤素引入蛋白质分子中的方法。本发明还包括了含有任何有关的小分子的放射性药盒，以及通式为I和II的化合物的金属化前体。
文档编号C07K16/00GK1030748SQ88102358
公开日1989年2月1日 申请日期1988年4月16日 优先权日1987年4月16日
发明者丹尼尔·斯科特·威尔伯, 斯蒂芬·W·哈德利 申请人:尼奥尔克斯公司