专利名称：用作内皮素转化酶抑制剂的含逆向酰胺键的硫衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有逆向酰胺键的新的硫衍生物，它们的制备方法，获得的新中间体，它们作为药物的应用，含有它们的药物组合物以及这类衍生物的新用途。
本发明的一个主题是具有下式(Ⅰ)的产物
其中R1代表一个苯基或联苯基，其上任选地可被一个或多个选自卤原子和以下的基团所取代任选地保护的羟基，含有至多4个碳原子的线型或支链的烷氧基，氰基，游离的，成盐的，成酯的或酰胺化的羧基，苄氧基或亚甲二氧基，n1和n2可以相同或不同，代表整数0或1，R2代表一个氢原子或一个被苯基、苯硫基或吲哚基并可任选地被第二个苯基所取代的甲基，这些苯基、苯硫基和吲哚基上可任选地被一个或多个选自卤原子及以下基团所取代任选地保护的羟基，含有至多4个碳原子的线型或支链的烷氧基，氰基，游离的、成盐的、酯化的或酰胺化的羧基，苄氧基，噻吩基，萘基和苯基；这后面的三种基团本身又可任选地被一个或多个选自卤原子和以下基团所取代任选地保护的羟基，含有至多4个碳原子的线型或支链的烷氧基，氰基和游离的、成盐的、酯化的或酰胺化的羧基，A代表游离的、成盐的、酯化的或酰胺化的羧基，游离的或成盐的四唑基，或含有至多10个碳原子并被一个选自以下基团取代的烷基游离的、成盐的、酯化的或酰胺化的羧基，任选地保护的羟基，含有至多4个碳原子的烷氧基，苯氧基，苯基，萘基，噻吩基，吲哚基和吡啶基，这些基团又可任选地被一个或多个选自卤原子和以下基团所取代任选地被保护的羟基，含有至多4个碳原子的线型或支链的烷氧基、氰基和游离的、成盐的、酯化的或酰胺化的羧基，如果合适，1和2指示式(Ⅰ)产物中的不对称中心，所说的式(Ⅰ)产物可以是它所有可能的外消旋的、对映异构的和非对映异构的异构体形式，以及所说的式(Ⅰ)产物与无机和有机酸类或与无机和有机碱类所形成的加合盐类。
在式(Ⅰ)产物和下文中-术语线性或支链的烷基是指以下基团甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，异戊基，己基，异己基、也可以是庚基，辛基，壬基和癸基以及它们的线型或支链位置的异构体，-术语线型或支链的烷氧基是指以下基团甲氧基，乙氧基，丙氧基，异丙氧基，线型的、仲或叔丁氧基，戊氧基或己氧基以及它们的线型或支链位置的异构体，-术语卤原子优选指氯原子，但也可代表氟、溴或碘原子。
羟基具体可以是三氟甲基磺酰氧基的形式。
式(Ⅰ)产物的羧基(一个或几个)可通过本领域技术人员已知的各种基团使其成盐化或酯化，其中可以提及的有，例如-在成盐的化合物中，有无机碱类，诸如例如，当量的钠、钾、锂、钙、镁或铵盐，或有机碱类诸如，例如，甲胺、丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、N,N-二甲基乙醇胺、三(羟甲基)氨基甲烷、乙醇胺、吡啶、甲基吡啶、二环己基胺、吗啉、苄胺、普鲁卡因、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、N-甲基-葡糖胺等。
其中钠盐和钾盐是优选的。
-在酯化化合物中，烷基可形成下列烷氧羰基或芳基烷氧羰基，诸如，例如甲氧羰基，乙氧羰基，正丙氧和异丙氧羰基、正丁氧、异丁氧和叔丁氧羰基或苄氧羰基；这些烷基可被选自以下的基团所取代，例如卤原子、羟基、烷氧基、酰基、酰氧基、烷硫基、氨基或芳基，诸如，例如在氯甲基，羟丙基，甲氧甲基，丙酰氧甲基，甲硫甲基，二甲基氨基乙基，苄基或苯乙基中。
这里也可提及与其余部分形成容易裂解的酯类的基团，诸如甲氧甲基，乙氧甲基；酰氧烷基诸如新戊酰氧甲基、新戊酰氧乙基，乙酰氧基甲基，乙酰氧基乙基；烷氧羰氧基烷基诸如甲氧羰氧甲基或乙基，异丙氧羰氧甲基或乙基。
这类酯基的表可在，例如欧洲专利EP 0,034,536中找到。
酰胺化的羧基意指-CON(R6)(R7)类型的基团，其中R6和R7可以是相同或不同的基团并代表一个氢原子或一个含有1至4个碳原子的烷基，诸如甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基或叔丁基。
在上面定义的-CON(R6)(R7)基团中，那些其中-N(R6)(R7)代表氨基，一或二甲基氨基的是优选的。
-N(R6)(R7)基也可以代表一个杂环基，它可以有或没有包含另外的杂原子。这里可以提及吡咯基，咪唑基，吲哚基，哌啶基，吗啉基，哌嗪基；其中哌啶基和吗啉基是优选的。
经保护的羟基中保护基的实例可具体在本领域技术人员已知的普通书藉中找到如1981年Wiley-Interscience Publishers,John Wiley&Sons出版的由哈佛大学的Theodora W.Greene编著的“ProtectiveGroups in Organic Synthesis”(“有机合成中的保护基”)一书。
式(Ⅰ)产物与无机或有机酸的加合盐类可以是，例如，与下列酸所形成的盐类盐酸，氢溴酸，氢碘酸，硝酸，硫酸，磷酸，丙酸，醋酸，甲酸，苯甲酸，马来酸，富马酸，丁二酸，酒石酸，柠檬酸，草酸，乙醛酸，天门冬酸，抗坏血酸，烷基单磺酸诸如例如甲烷磺酸、乙烷磺酸、丙烷磺酸，烷基二磺酸诸如例如甲烷二磺酸、α,β-乙烷二磺酸，芳基单磺酸诸如苯磺酸和芳基二磺酸类。
更具体地可以提及例如与盐酸或甲烷磺酸形成的盐类。
应该记住立体异构体可以在广义上来定义为具有同一结构式但不同基团在空间的排列方式不同的化合物的各种异构体。
应该理解如上面定义的式(Ⅰ)产物的定义中包括所有可能的立体异构体，所有的外消旋修饰体，所有的光学异构体和所有这些具有后面指出的生理活性的产物的混合物。
式(Ⅰ)产物中具体含有两个中心①和②，其中①是不对称的，而②在当R2不代表氢原子时也是不对称的。
本发明的一个具体主题是这样的式(Ⅰ)产物，其中第一个不对称中心①最好是R构型的，第二个不对称中心②最好是外消旋的或对映异构的R或S构型。
本发明的一个具体主题是如上定义的式(Ⅰ)产物，其中R1、R2和n2的意义与前相同，n1代表整数1，A代表游离的、成盐的、酯化的或酰胺化的羧基或含有最多10个碳原子并被选自以下基团所取代的烷基游离的、成盐的、酯化的或酰胺化的羧基，任选地经保护的羟基，含有至多4个碳原子的烷氧基，以及苯氧基，所说的式(Ⅰ)产物可以是它所有可能的外消旋的、对映异构的和非对映异构的异构体形式，以及所说的式(Ⅰ)产物与无机和有机酸类或与无机和有机碱类形成的加合盐类。
本发明的一个更具体的主题是如上定义的式(Ⅰ)产物，其中R1代表苯基或联苯基，其上任选地被一个卤原子所取代，或者被一个任选地以三氟甲基磺酰氧基形式保护的羟基所取代。
n1代表整数1。
n2代表整数0，R2代表一个氢原子或一个被苯基所取代的甲基，苯基本身又可任选地被一个噻吩基或苯基所取代，它本身还可任选地被一个氰基所取代。
A代表游离的、成盐的、酯化的或酰胺化的羧基或含有至多10个碳原子盐被苯氧基所取代的烷基；所说的式(Ⅰ)产物可以是它所有可能的外消旋的、对映异构的和非对映异构的异构体形式，以及所说的式(Ⅰ)产物与无机和有机碱类形成的加合盐类。
具体地，R1可代表一个苯基或联苯基。其上任选地被一个溴原子所取代。
本发明的一个相当具体的主题是如上定义的式(Ⅰ)产物，它们具有以下名称-[S-(R*,S*)]N-[1-(巯甲基)-2-苯乙基]-α-[[(苯甲氧基)羰基]氨基]-1H-吲哚-3-丙酰胺，-2′-氰基-α[[[-1-(巯甲基)-2-苯乙基]氨基]羰基]-(1,1′-联苯基)-4-丙酸，-(R)N-(1-巯甲基)-2-苯乙基)-11-苯氧基-十一碳酰胺，所说的式(Ⅰ)产物可以是它所有可能的外消旋的、对映异构的和非对映异构的异构体形式，以及所说的式(Ⅰ)产物与无机和有机碱类形成的加合盐类。
本发明的一个主题也包括如上面定式的式(Ⅰ)产物的制备方法，其特征为把下列式(Ⅱ)产物
其中n1的意义与前相同，R′1的意义与前面对R1的定义相同，其中供选择的反应官能团已任选地被保护，或者与下列式(Ⅲ)化合物进行反应
其中R′2的意义与前面对R2的定义相同。其中供选择的反应官能团已任选地被保护，R代表一个烷基或芳基烷基，以制得下列式(Ⅳ)产物
其中n1、R′1、R′2和R的意义与前相同，或者与具有下式(Ⅴ)的酰卤进行反应
其中n2的意义与前相同，Hal代表一个卤原子，R＇2的意义与前相同，A′的意义与前面对A的定义相同，其中供选择的反应官能团已任选地被保护，具体诸如A′不是代表一个游离的羧基，以制得下列式(Ⅵ)产物
其中n1、n2、R′1、R′2和A′的意义与前相同；为获得式(Ⅰ)产物或把式(Ⅰ)产物转化为其它具有式(Ⅰ)的产物，如果希望和如果必需，可将具有式(Ⅳ)和式(Ⅵ)的产物以任何顺序进行一种或多种以下反应-把酯官能团转化为羧酸官能团的皂化反应，-把氰官能团或酰胺官能团转化为羧酸或四唑官能团的反应，-把烷氧基官能团转化为羟基官能团的反应，-羧酸官能团的酯化、成盐化或酰胺化的反应，-从具有下式
的基团中释出巯基的反应，-消去经保护的反应官能团上带有的保护基的反应，-通过无机或有机酸类或碱类进行的成盐化反应以获得相应的盐类；这样得到的具有式(Ⅰ)的产物可以是它所有可能的外消旋的、对映异构的非对映异构的异构体形式。
在完成本发明的经优选的条件下，上述方法可以下面的方式来实施-如上定义的式(Ⅱ)产物与如上定义的式(Ⅲ)产物的反应最好是在三乙胺或也可以是DDC存在的条件下用一种缩合剂诸如例如EDC在二氯甲烷或BOP，乙腈等溶剂中来进行，-如上定义的式(Ⅱ)产物与如上定义的式(Ⅴ)产物的反应最好是在吡啶存在的条件下在二氯甲烷中进行。在式(Ⅴ)化合物中，卤原子最好是一个氯原子。
按照R′1、R′2和A′的意义，式(Ⅳ)和式(Ⅵ)产物可构成或不构成式(Ⅰ)产物，但可通过进行一种或多种上面指出的反应来产生式(Ⅰ)产物或被转化为具有式(Ⅰ)的其它产物，这些反应可按照，例如，后面所指出的方法来实施。
上面定义的反应中一些化合物可能带有的各种反应官能团如果必需可加以保护例如羟基或游离的羧基可用适当的保护基来保护。
可以提及以下的对反应官能团进行保护的不完全的表单-氨基可以其它氨基甲酸酯的形式被保护，诸如那些在多肽化学中已知的实例，-羟基可以被例如烷基所保护，诸如叔丁基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、甲氧甲基、四氢吡喃基、苄基或乙酰基。
如果希望的话，上述产物可以是对供选择的羧基官能团进行酯化、成盐化或酰胺化反应的目标，这些反应可按照本领域技术人员已知的方法来实施。
如果希望的话，上述产物的羧酸官能团可以用伯或仲胺来酰胺化，例如在二氯甲烷中，在室温下，在例如1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐存在的条件下。
羧酸官能团可以，例如，通过形成容易裂解的酯类的形式而被保护，诸如苄基或叔丁基酯，或多肽化学中已知的那些酯类。
酯官能团进行任选性的皂化反应而转化为上述产物中的羧酸官能团，如果希望的话，可在本领域技术人员已知的普通条件下进行，具体例如酸性或碱性水解或用例如苏打或碳酸钾在一种醇类介质诸如例如甲醇中，或者也可以用盐酸或硫酸进行水解。
上述产物中任选的氰基官能团，如果希望，可在本领域技术人员已知的普通条件下被转化为羧酸官能团，例如通过在诸如硫酸、冰醋酸和水组成的混合物这样的酸性介质中进行双重水解，这三种化合物优选以相等的比例组成混合物；也可在苏打、乙醇和水组成的混合物中在回流条件下水解。
上述产物中任选的氰基官能团，如果希望，也可在本领域技术人员已知的普通条件下被转化为四唑基官能团，例如通过金属叠氮化物诸如叠氮化钠或三烷基叠氮化锡对氰官能团的环加成反应，用下面指出的参考文献中描述的方法来进行KOZIMA.S.等人，J.OrganometallicChemistry，33,337(1971)〕。
羧酸官能团可按Bio.Med.Chem.Leh,1995,145中发表的方法转化为四唑。
上述产物中任选的烷氧官能团、具体地诸如甲氧基，如果希望，可在本领域技术人员已知的普通条件下被转化为羟基官能团，例如用三溴化硼在一种溶剂诸如例如二氯甲烷中，或用吡啶氢溴酸盐或盐酸盐，也可以在回流条件下用氢溴酸或盐酸水溶液或用三氟醋酸。
上述产物中供选择的羟基官能团，如果希望的话，也可在本领域技术人员已知的普通条件下被转化为羧酸官能团，诸如例如通过与Jones试剂的作用得到羧酸。
消去诸如例如上面指出的那些保护基的反应可在本领域技术人员已知的普通条件下进行，具体可通过用一种酸诸如盐酸、苯磺酸或对甲苯磺酸、甲酸或三氟醋酸进行酸水解，也可以用催化氢化反应。
邻苯二甲酰亚胺基可用肼来消去。
可以使用的不同保护基的表单可在例如专利文献BF 2,499,995中找到。
如果希望，上述产物可以是成盐化反应的目标，例如按照本领域技术人员已知的普通方法与一种无机或有机酸，或与一种无机或有机碱形成盐。
上述产物的任选的光活性异构体形式可通过本领域技术人员已知的普通方法对外消旋体进行拆分而制得。
上面定义的这些反应的说明被给出于后面描述的实例的制备中。
内皮素及其前体大内皮素的结构和性质已被描述于诸如例如WO93/11154这样的文献中。
本发明的式(Ⅰ)产物已被发现具有对于内皮素转化酶的抑制活性，这种酶可以由大内皮素适当地获得所谓内皮素，从而是一种极强的血管收缩剂。
因此本发明的式(Ⅰ)产物可被用来治疗由于不正常高的内皮素导致的疾病。
如上面所定义的式(Ⅰ)化合物以及如上面定义的它们的加合盐类具有有用的药理性质。
如上面定义的式(Ⅰ)产物，由于具有对内皮素转化酶的抑制性质，从而能具体降低内皮素的数量并减少它的影响，具体地有由内皮素诱导的血管收缩和增加血压的效应。特别是注意到式(Ⅰ)产物具有抗局部缺血的效果。
因此式(Ⅰ)产物也具有在所有细胞类型的水平上，降低内皮素刺激的效果，特别是平滑肌细胞，成纤维细胞、神经细胞和骨细胞。
这些性质证实它们在治疗中使用的合理性并且本发明的一个具体主题是把式(Ⅰ)产物用作药剂，所说的式(Ⅰ)产物可以是它所有可能的消旋的、对映异构和非对映异构的异构体形式，以及所说的式(Ⅰ)产物与药物上可接受的无机和有机酸类或与药物上可接受的无机和有机碱类所形成的加合盐类。
本发明的一个更具体的主题也是作为药剂的如前面定义的式(Ⅰ)的经优选的产物，其中R1代表一个苯基或联苯基、其上任选地被卤原子所取代，n1代表整数1，n2代表整数0，R2代表一个氢原子或一个被苯基所取代的甲基，苯基上可任选地被一个噻吩基或苯基所取代，它们本身还可任选地被一个氰基所取代，A代表游离的、成盐的、酯化的或酰胺化的羧基或含有至多10个碳原子并被一个苯氧基所取代的烷基；所说的式(Ⅰ)产物可以是它所有可能的外消旋的或光活性的异构体形式，以及所说的式(Ⅰ)产物与药物上可接受的无机和有机酸类或与药物上可接受的无机和有机碱类所形成的加合盐类。
本发明的相当具体的一个主题是作为药剂的在后面实例中要描述的产物，特别是如上面定义的式(Ⅰ)产物，它们的名称如下-[S-(R*,S*)]N-[1-(巯甲基)-2-苯乙基]-α-[[(苯甲氧基)羰基]氨基]-1H-吲哚-3-丙酰胺，-2′-氰基-α-[[[1-(巯甲基)-2-苯乙基]氨基]羰基](1,1′-联苯基)-4-丙酸，-(R)N-(1-巯甲基)-2-苯乙基)-11-苯氧基-十一碳酰胺，以及所说的式(Ⅰ)产物与药物上可接受的无机和有机碱类所形成的加合盐类。
作为本发明主题的这种药物，通过利用它们对内皮素转化酶的抑制剂作用而在治疗诸如，例如，血管痉挛，由大脑出血导致的血管痉挛、冠状动脉痉挛，外周血管痉挛以及肾机能不全等方面找到它们的用途。这些药物也可被用来治疗心肌梗塞；充血性心机能不全，预防血管成形术后狭窄的复发，心脏和血管的纤维变性，用于治疗动脉粥样硬化，一些类型的高血压，具体诸如肺性高血压，以及治疗哮喘。
作为本发明主题的这种药物也可在治疗骨质疏松症，前列腺肥大和用作神经防护剂等方面找到用途。
本发明还被推广到含有至少一种上面定义的药物作为活性成份的药物组合物。
这些药物组合物可通过口腔、直肠途径、非肠道途径给药，或在皮肤和粘膜上经局部途径作表面施药，或者经静脉或肌内注射。
这些组合物可以是固体或液体，并可以一般用于人类药物的所有药剂型式提供，诸如例如，普通片剂或糖衣片，胶囊，粒，栓，供注射用的制剂，软膏，乳膏，凝胶和气雾剂等；它们是按通常的方法制备的。活性组分可并入通常用于这些药物组合物中的赋形剂中，诸如滑石，阿拉伯胶，乳糖，淀粉，硬脂酸镁，可可酪，水溶液或非水溶液媒介物，动物或植物来源的脂肪物质，石蜡衍生物，乙二醇类，各种润湿剂，分散剂或乳化剂，防腐剂等。
常用剂量按照所用的产物，患者和病情而变化，一般口服剂量对于成年人为，例如，每在1至300mg，或静脉途径给药为每天1至100mg。
式(Ⅱ)、(Ⅲ)和(Ⅴ)的一些原料产物是已知的，它们可以市场买到或按照本领域技术人员已知的普通方法来制备，也可按照例如欧洲专利EP 0465369所指出的方法来制备。
特别是一些式(Ⅱ)产物可以从别的式(Ⅱ)产物来制备，例如把它们进行一种或多种前面描述过的反应，进行反应的条件也已在前面被描述过。
式(Ⅱ)化合物的制备也在后面描述的实例中被指明。
应该注意式(Ⅱ)化合物可以是外消旋的或光活性纯净形式的，结果，得到的式(Ⅳ)产物也可以是外消旋或光活性纯净形式的。
其中n1代表整数1并且R＇1代表苯基的式(Ⅱ)化合物可以按EP0465369的制备实例1E中指出的方法来制备。或者从氨基酸L-苯丙氨酸出发以生成S构型的式(Ⅱ)产物，或者从氨基酸D-苯丙氨酸出发以生成R构型的式(Ⅱ)产物，或者从氨基酸L-和D-苯丙氨酸的混合物出发，以生成外消旋形式的式(Ⅱ)产物；这样得到的这些式(Ⅱ)产物在和式(Ⅲ)化合物反应以后即分别生成这样的式(Ⅳ)产物，其中①分别为S构型(实例1)、R构型(实例2)或者是外消旋形式的(实例5)。
其它式(Ⅱ)化合物可以同样方式从别的氨基酸来制得。
具体地说，其中R′1代表联苯基的式(Ⅱ)产物可以从酪氨酸出发来制得。
这样一种反应在后面描述的实例7的制备中被指明。
其它n1代表整数0的式(Ⅱ)化合物可从相应的酸出发，通过文献中描述的Curtius反应来生成所需的胺。
式(Ⅲ)化合物代表氨基酸类，它在氮上可被取代这类式(Ⅲ)化合物可从市场买到，或用本领域技术人员已知的普通方法来制备。
式(Ⅴ)化合物优选是从相应的酸制备的酰氯，这些酸本身可从市场买到或可按本领域技术人员已知的普通方法来制备，诸如通过卤代烷与丙二酸酯的缩合反应。
最后，本发明的一个主题是作为新的工业产品的上面定义的式(Ⅳ)和式(Ⅵ)化合物。
特别是本发明的一个主题是用上面定义的式(Ⅰ)产物来制备一种内皮素转化酶的抑制剂。
这样，本发明的一个具体主题是利用上面定义的式(Ⅰ)产物来制备药物组合物，打算通过它对内皮素转化酶的抑制作用来治疗一些疾病，具体有诸如内皮素诱导的高血压，血管痉挛，大脑出血的影响，肾机能不全，心肌梗塞，心肌机能不全以及用来预防血管成形术后再狭窄的复发和心脏及血管的纤维变性。
以下的实例说明了本发明但不是限制它。实例1[S-N-(1-巯甲基)-2-苯乙基]-2-(((苯甲氧基-羰基)氨基)-吲哚-3-丙酰胺步骤1[S-(R*,R*)]N-[1-[(乙酰硫基)甲基]-2-苯基乙基]α-[[(苯甲氧基)羰基]氨基]-1H-吲哚-3-丙酰胺把183mg 1-(3-二甲胺基丙基)3-乙基碳二亚胺盐酸盐加入10ml二氯甲烷中并加入120μl三乙胺。在室温进行搅拌10分钟并加入300mg N-羰苄氧基Triptomane(NCBz Trp)。把反应物重新在室温放置10分钟，然后-次加入200mg S构型的胺盐酸盐，后者是以L-苯丙氨酸为原料按EP 0465369中的制备实例1E中指出的方法制备的。反应物在室温搅拌4小时，接着蒸发，溶于30ml乙酸乙酯中并用0.1N盐酸洗涤两次，再用盐水洗涤(两次)。在硅胶柱上经色谱法提纯后用50-50乙酸乙酯-己烷作洗脱剂，即得到270mg预期的产物。步骤2[S-N-(1-巯甲基)-2-苯乙基]-2-(((苯甲氧基)羰基)氨基)-吲哚-3-丙酰胺把120mg上面步骤1制得的产物引入3ml甲醇中。加入0.34ml 1N苏打溶液并把反应物在0℃保持1小时。将其溶于4ml水中后，用1N盐酸进行酸化直到pH约为1/2并滤出形成的沉淀。干燥后即得120mg预期的产物，M.P.=164℃。
在甲醇中，浓度为0.5％时测得的比旋光值αD=-20.8°。分析IR(CHCl3)cm-1=C-NH 3477-3420＞C=O 1716-1673SH 2570芳环+C=C+酰胺Ⅱ1620-1578-1585-1497NMR(250MHz,1H,CDCl3)0,81(t,1H,sH)；2,09至2,37(m,CHCH2-SH)-2,64(d,2H,CH2)；3,11(dd,1H,CH2)；3,32(dd,1H)；4,20(m 1H)；4,45(n,1H)；5,12(s,2H,O-CH2-ph)；5,43(d,1H,NH)；5,75(d,1H,NH)；6,96至7,66(n,14H)；8,07(s1,1H,NH吲哚)。实例2[(R*,S*)]-N-[1-(巯甲基)-2-苯乙基]-α-[[(苯甲氧基)羰基]氨基]-1H-吲哚-3-丙酰胺按实例1进行操作，但在步骤1中用R构型的胺盐酸盐，它是用D-苯丙氨酸作原料按EP-0465369中的制备实例1E中指出的方法制得的，用这样的方法可得120mg预期的产物。
在氯仿中，浓度为0.75％时测得的比旋光值αD=+8.5°分析NMR(1H,CDCl3,250MHz,δppm)1,04(t,1H,SH)；2,3至2,7(m,4H,2xCH2)；3,11(dd,1H)；3,34(dd,1H)；4,18(m,1H,CH-CH2)；4,44(m,1H,CH-NHCHO)；5,11(s,2H,CH2ph)；5,40(d,1H,NH)；5,75(d,1H,NH)；8,02(s,1H,NH吲哚)；6,95(n,3H,H芳香)；7,10至7,4(n,11H,H芳香)；7,66(dl,1H,芳香)实例3[S-(R*R*)]-2-(((1,1-二甲基乙氧基)羰基)氨基)-N-(1-(巯甲基)-2-苯乙基)-吲哚-3-丙酰胺步骤1[S-(R*,R*)]-N-[1-[(乙酰硫基)甲基]-2-苯乙基]-α-[[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-1H-吲哚-3-丙酰胺按实例1的步骤1进行操作，但用N-BOC-色氨酸(即N-叔丁氧羰基色氨酸)代替N-CBZ-色氨酸(即N-苄氧羰基色氨酸)，用这样的方法得到270mg预期的产物。步骤2[S-(R*,R*)]-2-(((1,1-二甲基乙氧基)羰基)氨基)-N-(1-巯甲基)-2-苯乙基)-吲哚-3-丙酰胺按实例1的步骤2进行操作，用这样的方法获得120mg预期的产物。M.P.=77℃。
在甲醇中，浓度0.5％时测得的比旋光值αD=-22.4°。分析NMR(1H,CDCl3,250MHz,δppm)0,87(t,1H,SH)；1,44(s,9H,tbu)；2,26(m,CH2,2H)；2,65(m,2H,CH2-ph)；3,10(dd,1H,CH2)；3,30(dd,1H,CH2)；4,22(m,1,1H,CH)；4,39(m,CH,1H)；5,13(d,1H,NH)；5,84(d,1H,NH)；6,99(s,1H,H2 indole)；7至7,22(m,7H)；7,36(d,1H,Ar)；7,67(s,1H,Ar)；8,04(s1,1H,吲哚)。IR(CHCl3)cm-1=C-NH3477-3420＞C=O1706-1672SH 2570共轭体系+酰胺Ⅱ带+芳环1620-1605-1513-1496-1490叔丁基的甲基 1368实例42′-氰基-α-[[[1-(巯甲基)-2-苯乙基]氨基]羰基]-(1,1′-联苯基)-4-丙酸步骤12′-氰基-α-(乙氧羰基)-(1,1′-联苯基)-4-丙酰氯把105mg 60％分散于油中的氢化钠在使用前用戊烷洗涤两次，引入15ml四氢呋喃中并在0℃在氩气保护下放置。把0.5ml叔丁基丙二酸乙酯滴加到1ml四氢呋喃中，整个溶液在室温放置30分钟，然后回到0℃，并滴加按照EP 0465368(实例49)中所示方法制备的410mg 4′-(溴甲基)-(1,1′-联苯基)-2-腈的溶液。将溶液在0℃搅拌1小时并在室温搅拌3小时，然后用1N盐酸酸化至pH≌2。用乙酸乙酯进行提取，接着干燥。在硅胶柱上经色谱法提纯后用乙酸乙酯-环乙烷(25∶75)作洗脱剂，得400mg油状物，把它溶于10ml二氯甲烷中。加入10ml三氟醋酸，整个反应物在室温放置3小时，然后进行蒸发。把油状残余物溶于10ml亚硫酰氯中并搅拌过夜。蒸去亚硫酰氯后，得到的预期的酰氯直接被用于下一步骤中。步骤2[R-(R*,R*)]和[R-(R*,S*)]α-[[[1-[(乙酰硫基)甲基]-2-苯乙基]氨基]羰基]-2′-氰基(1,1′-联苯基)-4-丙酸乙酯把10ml二氯甲烷加到上面步骤1所制得的产物中，在把反应物加热到回流状态之后，加入377mg按EP 0465369的制备实例1E制得的胺盐酸盐。然后加入几滴吡啶以使pH≌4-6，并在回流条件下进行搅拌4小时。然后把溶液蒸发，在硅胶柱上经色谱法提纯后，用乙酸乙酯-环己烷-二氯甲烷(25∶25∶50)作洗脱剂，即获得400mg预期的产物。分析NMR(1H,CDCl3,200MHz)1,2(2t,3H,CH3)；2,4和2,45(2s,3H,SAc)；2,7-3,5(m,7H)；4,2(m,2H,CO2CH2)；4,4(m,1H,OC-CH-CO)；6,55和6,65(2d,1H,NH)；7,1至7,6(m,11H)；7,7(d,1H,Ar)；7,9(d,1H,Ar)。步骤32′-氰基-α-[[[1-(巯甲基)-2-苯乙基]氨基]羰基]-(1,1′-联苯基)-4-丙酸把400mg在上面步骤2中获得的产物引入5ml四氢呋喃中并加入2.5ml水。然后在室温下加入115mg氢氧化锂，并把整个反应物搅拌2小时。
然后通过加入1N盐酸把反应物酸化至pH≌2，加入5ml水后，用二氯甲烷+10％甲醇进行三次提取。干燥并蒸发后，在硅胶柱上进行层析，用二氯甲烷-甲醇(90∶10)作洗脱剂，即得280mg预期的产物(白色泡沫状)，是两种非对映异构体的混合物，Tgomme≌130℃分析NMR(DMSO,300MHz,δppm)1,98(m,sH)；2,4至3,3(m,7H)；3,93 et 4,02(m,1H,OC-CH-CO)；7,08至7,32(m,7H,Ar)；7,41(m,2H,Ar)；7,55(m,2H,Ar)；7,77(m,1H)；7,92(d,1H,Ar)；8,32和8,38(d1,1H,CONH)。实例5(S)α-(((1-(巯甲基)-2-苯乙基)氨基)羰基)苯丙酸步骤1α-(乙氧羰基)苯丙酰氯按实例4的步骤1进行操作，但用溴化苄(市售)来代替4′-(溴甲基)(1,1′-联苯基)2-腈，用这样的方法即得到预期的产物。步骤2[S-(R*,R*)]和[S-(R*,S*)]α-[[[1-[(乙酰硫基)甲基]-2-苯乙基]氨基]羰基]-苯丙酸乙酯按实例4的步骤2进行操作，用这样的方法即得到预期的产物。步骤3(S)α-(((1-(巯甲基)-2-苯乙基)氨基)羰基)苯丙酸按实例4的步骤3进行操作，用这样的方法即获得预期的产物。M.P.=65-70℃分析NMR(DMSO,300MHz,δppm)两种非对映异构体(S,R)和(S,S)的混合物1.75和2.22(wt SH)；2.3至4.5(m,8H,)7至7.30(m,10H)；8.09和8.56(d,1H,CONH)；12.52(宽的m,COOH)。实例6(R) N-(1-巯甲基)2-苯乙基)-11-苯氧基-十一碳酰胺步骤111-苯氧基-十一碳酰氯把250mg 11-苯氧基-十一碳酸(市售)与2ml纯净的亚硫酰氯混合并把整个反应物在室温放置过夜。用这样的方法即获得265mg预期的产物。步骤2(R)N-[1-[(乙酰硫基)甲基]-2-苯乙基]-11-苯氧基-十一碳酰胺按实例4的步骤2进行操作，从265mg上述步骤1制得的产物和120mg按EP 0465369制备实例1E的方法制得的胺盐酸盐(R构型)开始，用这样的方法得到150mg预期的产物。步骤3N-(1-巯甲基)-2-苯乙基)11-苯氧基-十一碳酰胺把100mg上面步骤2中制得的产物引入4ml甲醇中，并在0℃加入120μl 2N苏打溶液。整个反应物在0℃搅拌1小时。然后加入10ml水，滤出形成的白色沉淀并干燥。用这样的方法可得70mg预期的产物。M.P.=65℃NMR(CDCl3,300MHz,δppm)1,20至1,82(m,17H)；2,14(t,COCH2)；2,66(m,拆分的sys/ABCH,CH2SH)；2,88(m,ph-CH2,CH)；3,95(t,CH2-CH2-OPh)；4,37(m,CH2-CH(NH)CH2)；5,55(d,NHCO)；6,85至6,97(m,2H)；7,16至7,35(m,8H)。实例72′-氰基-α-[[[1-(巯甲基)-2-联苯基乙基]氨基]羰基]-(1,1′-联苯基)-4-丙酸。
按实例4进行操作，取作原料的胺盐酸盐中的R1代表联苯基，用来代替R1代表苯基的胺盐酸盐，这种原料是用(R)-α-[[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]氨基][1,1′-联苯基]-4-丙酸作原料，用它的R构型的异构体制得的，而这种R构型异构体则是像它的对映异构体S构型产物那样，按照下列参考文献中描述的方法来制备的Journal ofMedecinal Chemistry,1995,Vol.38,1689，然后像EP 0465369步骤D那样来制备它相应的盐酸盐，用这样的方法得到实例7所预期的产物。
在像上述实例4和7那样进行反应时，如果适当，用4′-2-噻吩基-苄基溴来代替4′-(溴甲基)(1,1′-联苯基)2-腈，它可按照下列参考文献中描述的方法来制备Journal of Medicinal Chemistry38,2357,1995，并用2-噻吩基硼酸作为芳基硼酸，用这样的方法获得下面实例8、9和10的产物实例8[[[1-(巯甲基)-2-联苯基乙基]氨基]羰基]-(1,1′-噻吩基苯基)-4-丙酸分析MS(M-CO2)H+:458实例9[[[1-(巯甲基)-2-苯乙基]氨基]羰基](1,1-噻吩基苯基)-4-丙酸实例102′-氰基-α-[[[1-(巯甲基)-2-(对三氟甲基磺酰氧基)苯乙基]氨基]羰基](1,1′-联苯基)-4-丙酸分析NMR(DMSO)2.6至3.2(7H)；3.92和4.04(m,1H)；7.06至7.95(Ar)；8.25和8.4(1H,NH)。药物组成的实例11制备了相应于下列配方的片剂实例4的产物…………………………50mg完成每一片剂的赋形剂，加到………200mg(赋形剂详尽成分乳糖，滑石，淀粉，硬脂酸镁)。
药理学结果内皮素转化酶(ECE)抑制效应的测定应用一种试验方法，其中产物(2,3-3H)丙酰基-b-ET-1(19-35)在产物P存在的条件下被ECE裂解为产物(2,3-3H)丙酰基-b-ET-1(19-21)；(2,3-3H)-丙酰基-b-ET-1(19-35)的制备将在以下的a)中描述，产物P的ECE抑制活性将用下面的b)中指出的方法来测定产物P的ECE抑制活性按此在当形成的标记裂解产物的量愈高时变得愈低，后者可用放射活性计数来测定，操作如下进行a)氚化肽(2,3-3H)丙酰基-b-ET-1(19-35)的制备N-丁二酰亚胺基-(2,3-3H)-丙酸酯(Amersham codeTRK.556)是在5ml甲苯的溶液中，浓度1毫居里/ml,99毫居里/mmol5毫居里和50mmoles。
蒸出甲苯直到获得10μl溶液，然后加入25μl含有mg b-ET-1(19-35)的DMSO溶液，所用b-ET-1(19-35)(分子量=2014.2)事先已在碳酸钾保干器中干燥过夜。继续蒸发10分钟，然后在氮气流下把溶液搅拌15分钟以除去残留的甲苯。然后缓和地搅拌4天。
为提纯产物，加入225μl pH值为6.5的磷酸盐缓冲溶液和50μl乙腈并进行搅拌10分钟，得到的放射活性溶液分成两个150μl部分注入Nucleosil C18柱中(150×4.6mm)。
进行洗脱时的流速为0.8ml/mn，20分钟内用0至20％乙腈梯度洗脱，然后50分钟用20至35％的乙腈进行梯度洗脱。分析洗脱馏分的分析是通过用液体闪烁计数器(1μl在5ml闪烁液体HiSafe3中)计数氚60秒来进行的。
汇合有放射活性的馏分，分成200μl试样放入硅烷化的Eppendorf管中，它可在-80℃或-20℃的条件下保存。
制得的产物特性dpm=1,067,274,560，相应于0.5毫居里。
放射活性产率10％比活性(99×10)/30.5=32.5毫居里/mmolb)内皮素转化酶(ECE)抑制活性的测定10μl ECE，即1至2μg纯化的ECE，事先在37℃保温30分钟，被加入400μl 50mM Tris马来酸盐pH=6.5的缓冲液和20μl 5M氯化钠溶液中；5μl准备试验其抑制活性的产物P做成不同浓度的溶液，从1μM至100mM(即产物P的最终浓度为10mM至1mM)。
通过加入10μl按上面步骤a)制备的(2,3-3H)-丙酰基-b-ET-1(19-35)，即最终浓度为1.8×10-12M，开始反应。
在37℃保温1小时后，通过加入600μl乙酸乙酯停止反应，并通过机械搅拌2分钟来提取(2,3-3H)丙酰基-b-ET-1(19-21)。
移出300μl有机相，加入5ml液体闪烁剂，并用液体闪烁计数器计数放射活性1分钟。
除ECE对照试验(即只有酶而没有加入准备试验其抑制ECE活性的产物)的测量进行六次以外，其它测量都进行三次。
抑制百分数按以下的关系式计算被试验的产物-空白试验对照的酶-空白试验空白试验是用不含酶的溶液进行的。
这一试验方法通过把它用于已知的抑制剂如P1，即phosphoramidon，和P2，即-(苯乙基膦酰基)-Leu-Trp(TAKEDA)而被证实有效。
下表给出得到的试验结果，是用本发明实例中的产物作为准备试验其ECE抑制活性的产物P进行的。
由得到的cpm值并以抑制百分数对抑制剂的浓度(nM)作图，即可计算出IC50值，它相应于使ECE活性被抑制达50％时抑制剂的浓度值。
得到的数值结果列于下表中结果<
>
权利要求
1．用具有下式(Ⅰ)的产物来制备药物，打算用它来治疗需要抑制内皮素转化酶的病理。
其中R1代表一个苯基或联苯基，其上任选地可被一个或多个选自卤原子和以下的基团所取代任选地保护的羟基，含有至多4个碳原子的线型或支链的烷氧基，氰基，游离的、成盐的、酯化的或酰胺化的羧基，苄氧基或亚甲二氧基，n1和n2可以相同或不同，代表整数0或1，R2代表一个氢原子或一个被苯基、苯硫基或吲哚基并可任选地被第二个苯基所取代的甲基，这些苯基、苯硫基和吲哚基上可任选地被一个或多个选自卤原子及以下基团所取代任选地保护的羟基，含有至多4个碳原子的线型或支链的烷氧基、氰基、游离的、成盐的、酯化的或酰胺化的羧基，苄氧基、噻吩基，萘基和苯基；这后面的三种基团本身又可任选地被一个或多个选自卤原子和以下基团所取代任选地保护的羟基，含有至多4个碳原子的线型或支链的烷氧基，氰基和游离的、成盐的、酯化的或酰胺化的羧基，A代表游离的、成盐的、酯化的或酰胺化的羧基，游离的或成盐的四唑基，或含有至多10个碳原子并被一个选自以下基团取代的烷基游离的、成盐的、酯化的或酰胺化的羧基，任选地保护的羟基，含有至多4个碳原子的烷氧基，苯氧基，苯基，萘基，噻吩基，吲哚基和吡啶基，这些基团又可任选地被一个或多个选自卤原子和以下基团所取代任选地被保护的羟基，含有至多4个碳原子的线型或支链的烷氧基，氰基和游离的、成盐的、酯化的或酰胺化的羧基，如果合适，①和②指示式(Ⅰ)产物中的不对称中心，所说的式(Ⅰ)产物可以是它所有可能的外消旋的、对映异构的和非对映异构的异构体形式，以及所说的式(Ⅰ)产物与无机和有机酸类或与无机和有机碱类所形成的加合盐类。
2．如权利要求1中的应用，其中R1、R2和n2的意义与权利要求1中的相同，n1代表整数1，A代表游离的、成盐的、酯化的或酰胺化的羧基或一个含有至多10个碳原子并被选自以下基团所取代的烷基游离的、成盐的、酯化的或酰胺化的羧基，任选地保护的羟基，含有至多4个碳原子的烷氧基和苯氧基；所说的式(Ⅰ)产物可以是它所有可能的外消旋的、对映异构的和非对映异构的异构体形式，以及所说的式(Ⅰ)产物与无机和有机酸类或与无机和有机碱类所形成的加合盐类。
3．如权利要求1或2中的应用，其中R1代表一个苯基或联苯基，其上任选地可被一个卤原子或一个羟基所取代，任选地可以是三氟甲基磺酰氧基的形式，n1代表整数1，n2代表整数0，R2代表一个氢原子或一个被苯基取代的甲基，苯基本身又可任选地被一个噻吩基或苯基所取代，它们本身又可任选地被一个氰基所取代，A代表游离的、成盐的、酯化的或酰胺化的羧基，或一个含有至多10个碳原子的烷基，其上可被一个苯氧基所取代；所说的式(Ⅰ)产物可以是它所有可能的外消旋的、对映异构的和非对映异构的异构体形式，以及所说的式(Ⅰ)产物与无机和有机碱类形成的加合盐类。
4．如权利要求1中的应用，其中产物的名称如下-[S-(R*,S*)]N-[1-(巯甲基)-2-苯乙基]-α-[[(苯甲氧基)羰基]氨基]-1H-吲哚-3-丙酰胺，-2′-氰基-α-[[[1-(巯甲基)-2-苯乙基]氨基]羰基]-(1,1′-联苯基)-4-丙酸，-(R)N-(1-巯甲基)-2-苯乙基)-11-苯氧基-十一碳酰胺，所说的式(Ⅰ)产物可以是它所有可能的外消旋的、对映异构的和非对映异构的异构体形式，以及所说的式(Ⅰ)产物与无机和有机碱类形成的加合盐类。
5．用于权利要求(Ⅰ)中的式(Ⅰ)产物的制备方法，其特征为把具有下式(Ⅱ)的产物
其中n1的意义与权利要求1中的相同，R′1的意义与权利要求1中对R1的定义相同，其中任选的反应官能团已任选地被保护，或者与具有下式(Ⅲ)的化合物进行反应；
其中R′2的意义与权利要求1中的对R2的定义相同，其中任选的反应官能团已任选地被保护，并且R代表一个烷基或芳烷基，以获得具有下列式(Ⅳ)的产物
其中n1、R′1、R′2和R的意义与前相同；或者把式(Ⅱ)产物与具有下式(Ⅴ)的酰卤进行反应；
其中n2的意义与权利要求1中的相同，Hal代表一个卤原子，R′2的意义与前相同，A′的意义与权利要求1中对A的定义相同，其中任选的反应官能团已任选地被保护，具体地诸如A′不是代表游离的羧基，以获得具有下式(Ⅵ)的产物
其中n1、n2、R′1、R′2和A′的意义与前相同；为获得式(Ⅰ)产物或把式(Ⅰ)产物转化为其它具有式(Ⅰ)的产物，可将式(Ⅳ)和式(Ⅵ)产物以任何顺序进行，如果希望和如果必需，一种或多种下列反应-将酯官能团转化为羧酸官能团的皂化反应，-氰基官能团转化为羧酸或四唑基官能团的反应，-烷氧基官能团转化为羟基官能团的反应，-羧酸官能团的酯化、成盐化和酰胺化反应，-由下列基团
释出巯基官能团的反应，-从已保护的反应官能团上消去所带的保护基团的反应，-与无机或有机的酸类或碱类的成盐化反应以获得相应的盐类，这样得到的式(Ⅰ)产物可以是它所有可能的外消旋的、对映异构的和非对映异构的异构体形式。
6．下列产物-[S-(R*,S*)]N-[1-(巯甲基)-2-苯乙基]-α-[[(苯甲氧基)羰基]氨基]-1H-吲哚-3-丙酰胺，-2′-氰基-α-[[[1-(巯甲基)-2-苯乙基]氨基]羰基](1,1′-联苯基)-4-丙酸，-(R)N-(1-巯甲基)-2-苯乙基)-11-苯氧基-十一碳酰胺，所说的产物可以是它所有可能的外消旋的、对映异构的和非对映异构的异构体形式，以及所说的式(Ⅰ)产物与药物上可接受的无机和有机碱类所形成的加合盐类。
7．含有至少一种如权利要求6中所定义的产物作为活性成分的药物组合物。
8．用权利要求5中定义的式(Ⅳ)和式(Ⅵ)产物来制备内皮素转化酶的抑制剂。
9．用权利要求1至4和权利要求8中定义的式(Ⅰ)产物来制备药物组合物，打算通过对内皮素转化酶的抑制，用来治疗诸如由内皮素诱导的高血压、血管痉挛，大脑出血的影响，肾机能不全，心肌梗塞，心脏机能不全等疾病，以及预防血管整形术后狭窄的复发以及心脏和血管纤维变性。
全文摘要
本发明的主题是具有右式(Ⅰ)的产物:其中R
文档编号C07D333/24GK1217713SQ9719438
公开日1999年5月26日 申请日期1997年3月3日 优先权日1996年3月4日
发明者P·德普雷, J·杜马斯, J·纪尧姆 申请人:赫斯特·马里恩·鲁索公司