专利名称：白介素-1β转化酶的抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一类新的化合物，它们是白介素-1β转化酶(“ICE”)的抑制剂。本发明还涉及包含这些化合物的药用组合物。本发明的这些化合物和药用组合物适合于抑制ICE活性，且因此可以有利地作为对抗白介素-1-(“IL-1”)和编程性细胞死亡-介导的疾病，包括炎性疾病、自身免疫疾病、增生性疾病、感染性疾病和变性疾病。本发明还涉及抑制ICE活性的方法和使用本发明化合物和组合物治疗白介素-1-和编程性细胞死亡-介导的疾病的方法。
白介素1(“IL-1”)是一种主要的前炎症与免疫调节蛋白，它刺激成纤维细胞的分化与增生，通过滑膜细胞和软骨细胞产生前列腺素、胶原酶和磷脂酶，嗜碱细胞和嗜曙红细胞脱粒以及中性白细胞活化。Oppenheim，J.H.等，Immunology Today[现代免疫学]，7，第45-56页(1986)。如此以来，它涉及慢性与急性炎性和自身免疫疾病的发病机理。例如，在类风湿性关节炎中，IL-1是患病关节中的炎性症状和破坏软骨粘蛋白的介体。IL-1还是极强的骨吸收剂。在破坏性骨疾病如骨关节炎和多发性骨髓瘤中，它还被称作“破骨细胞活化因子”。Bataille，R.等，Int.J.Clin.Lab.Res.[临床实验研究杂志国际版]，21，第283页(1992)。在某些增生性紊乱如急性髓细胞性白血病和多发性骨髓瘤中，IL-1可以促进肿瘤细胞生长和粘连。在这些紊乱中，IL-1还刺激其它细胞因子如IL-6的生长，IL-6可以调节肿瘤发育。Tartour等，Cancer Res.[癌症研究] 54，6243(1994)。
IL-1作为炎性应答的一部分，主要由外周血单核细胞生产，且存在二种截然不同的拮抗形式，IL-1α和IL-1β。Mosely，B.S.等，Proc.Nat.Acad.Sci.，84，第4572-4576页(1987)；Lonnemann，G.等，Eur.J.Immunol.[欧洲免疫学杂志]，19，第1531-1536页(1989)。
IL-1β以生物无活性前体形式合成，即pIL-1β。pIL-1β缺乏常规的前导序列，且不能由信号肽酶加工。March，C.J.，Nature[自然]，315，第641-647页(1985)。而且，pIL-1β由白介素-1β转化酶(“ICE”)在Asp-116和Ala-117间裂解，产生可在人血清和滑液中见到的生物活性C-末端片断。Sleath，P.R.等，J.Biol.Chem..[生物化学杂志]，265，第14526-14528(1992)；A.D.Howard等，J.Immunol.[免疫学杂志]，147，第2964-2969(1991)。
ICE是主要定位于单核细胞中的半胱氨酸蛋白酶。它将前体IL-1β转化成成熟形式。Blacl，R.A.等，FEBS Lett.，247，第386-390(1989)；Kostura，M.J.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，86，第5227-5231(1989)。由ICE的加工也是通过细胞膜运输成熟IL-1β需要的。ICE，或其同系物，似乎还涉及调节细胞死亡或编程性细胞死亡。Yuan，J.等，Cell[细胞]，75，第641-652页(1993)；Miura，M.等，Cell[细胞]，75，第653-660页(1993)；Nett-Fiordalisi，M.A.等，J.Cell.Biochem.[细胞生物化学杂志]，17B，第117页(1993)。具体地说，ICE或ICE同系物被认为与神经发生性疾病如阿尔茨海默病和帕金森病中的编程性细胞死亡的调节有关。Marx，J.和M.Baringa，Science[科学]，259，第760-762页(1993)；Gagliardini，V.等，Science[科学]，263，第826-828页(1994)。
已证实ICE介导某些组织类型的编程性细胞死亡。Steller，H.，Science[科学]，267，第1445(1995)；Whyte，M.和Evan，G.，Nature[自然]，376，第17页(1995)；Martin，S.J.和Green，D.R.，Cell[细胞]，82，第349页(1995)；Alnemri，E.S.等，J.Biol.Chem.[生物化学杂志]，270，第4312页(1995)；Yuan，J.Curr.Opin.Cell Biol.，7，第211页(1995)。抑制编程性死亡的治疗应用可以包括治疗阿尔茨海默病、帕金森病、中风、心肌梗塞、脊柱萎缩和衰老。带有破裂ICE基因的转基因小鼠缺少Fas-介导的编程性细胞死亡。Kuida等(1995)。ICE的这种活性与其作为pro-IL-1β的加工酶的作用截然不同。可以想到，在某些组织中，ICE抑制或许不影响成熟IL-1β的分泌，但可以抑制编程性细胞死亡。
已有报道说ICE是由二个亚单元p20和p10(分别为20kDa和10kDa分子量)组成的异二聚体。这些亚单元通过p30的方式，经自催化活化机理，由45kDa酶原(p45)衍生。Thornberry，N.A.等，Nature[自然]，356，第768-774页(1992)。ICE酶原已被分成几个功能域前功能域(p14)、p22/20亚单元、多肽接头和p10亚单元。Thornberry等，同上；Casano等，Genomics[基因组]，20，第474-481页(1994)。
已对全长p45的cDNA和氨基酸序列作了鉴定。PCT专利申请WO91/15577和WO 94/00154。该p20和p10 cDNA和氨基酸序列也是已知的。Thornberry等，同上。小鼠和大鼠ICE已经被测序和克隆。它们的氨基酸和核酸序列与人ICE的高度相似。Miller，D.K.等，Ann.N.Y.Acad.Sci.，696，第133-148页(1993)；Molineaux，S.M.等，Proc.Nat.Acad.Sci.，90，第1809-1813页(1993)。ICE的三维结构已通过X-射线晶体学作原子分辨确定。Wilson，K.P.等，Nature[自然]，370，第270-275页(1995)。活性酶以二个p20和二个p10亚单元的四聚体存在。
此外，存在ICE的人同系物，该ICE在酶的活性位点区带有序列相似性。这些同系物包括TX(或ICErel-II或ICH-2)(Faueheu等，EMBO J.，14，第1914页(1995)；Kamens J.等，J.Boil.Chem.[生物化学杂志]，270，第15250页；Nicholson等，J.Biol.Chem.270，15870(1995))，TY(或ICEreI-II1)(NichoIson等，J.Biol.Chem.[生物化学杂志]，270，第15870页(1995))，ICH-1(或Nedd-2)(Wang，L.等，Cell[细胞]，78，第739页(1994))，MCH-2，(Fernandes-Alnemri，T.等，Cancer Res.[癌症研究]，55，第2737(1995)，CPP32(或YAMA或apopain)(Fernandes-Alnemri，T.等，J.Boil.Chem.[生物化学杂志]，269，第30761(1994)；Nicholson，D.W.等，Nature[自然]，376，第37页(1995)，和CMH-1(或MCH-3)(Lippke等，J.Boil.Chem.[生物化学杂志]，(1996)；Fernandes-Alnemri，T.等，CancerRes.，(1995))。当在转染细胞系中过表达时，每一种这些ICE同系物，以及ICE本身，均能够诱导编程性细胞死亡。用肽基ICE抑制剂Tyr-Val-Ala-Asp-氯甲基酮抑制一种或多种这些同系物导致抑制初生细胞或细胞系中的编程性细胞死亡。Lazebnik等，Nature[自然]，371，第346页(1994)。本文中描述的化合物也能够抑制一或多种ICE同系物(参见实施例)。因此，人们可以设想使用这些化合物来抑制含有ICE同系物的组织类型中的编程性细胞死亡，但所述细胞类型不含活性ICE或产生成熟IL-1β。
ICE抑制剂代表一类用于控制炎症或编程性细胞死亡或二者的化合物。ICE的肽和肽基抑制剂已有描述。PCT专利申请WO 91/15577；WO 93/05071；WO 93/09135；WO 93/14777和WO 93/16710；和欧洲专利申请0 547 699。已观察到这类ICE的肽基抑制剂阻断在炎症的小鼠模型中产生成熟IL-1β(Ku等，或参见下文)和体外抑制白血病细胞的生长(Estrov等，Blood[血液]，84，第380a页(1994))。
因此，需要这样的化合物，它们可以有效地体内抑制ICE的作用，用作药剂来预防和治疗慢性和急性形式的IL-1-介导的疾病、编程性细胞死亡-介导的疾病、以及炎症、自身免疫、骨破坏性、增生性、传染性、变性或坏死性疾病。
本发明提供一类新的用作ICE抑制剂的化合物及其可药用的衍生物。这些化合物可以单独使用或与其它治疗或预防药剂如抗生素、免疫调节剂或其它消炎剂组合，用于治疗或预防由IL-1或编程性细胞死亡介导的疾病。根据一个优选的实施方案，本发明化合物能够结合至ICE的活性位点且抑制此酶的活性。
本发明的主要目的是提供一类由下列化学式代表的ICE抑制剂
其中各取代基在本文中定义。
缩写与定义缩写符号试剂或片断Ala丙氨酸Arg精氨酸Asn天冬酰胺Asp天冬氨酸Cys半胱氨酸Gln谷氨酰胺Glu谷氨酸Gly甘氨酸His组氨酸Ile异亮氨酸Leu亮氨酸Lys赖氨酸Met蛋氨酸Phe苯丙氨酸Pro脯氨酸Ser丝氨酸Thr苏氨酸Trp色氨酸Tyr酪氨酸Val缬氨酸Ac2O 乙酸酐n-Bu 正丁基DMF二甲基甲酰胺DIEA N，N-二异丙基乙胺EDC1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐Et2O 乙醚EtOAc 乙酸乙酯Fmoc 9-芴基甲氧基羰基HBTU O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基尿鎓六氟磷酸盐HOBT 1-羟基苯并三唑水合物MeOH 甲醇TFA三氟乙酸定义本文中采用下列术语术语“活性位点”是指ICE中的任一或所有下列位点底物结合位点、抑制剂结合的位点和底物裂解出现的位点。
术语“链烯基”，单独或组合时，是指含有2至10个碳原子的直链或支链链烯基。这些基团的实例包括但不限于乙烯基、E-和Z-丙烯基、异丙烯基、E-和Z-丁烯基、E-和Z-异丁烯基、E-和Z-戊烯基、癸烯基等。
术语“炔基”，单独或组合时，是指含有2至10个碳原子的直链或支链炔基。这些基团的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基、炔丙基、丁炔基、己炔基、癸炔基等。
术语“取代”是指化合物中的氢原子被取代基替代。
术语“Ki”是指抑制靶体酶如ICE的活性时化合物效力的数字确定。较低的Ki值反映较高的效力。Ki值是用实验确定的速率数据去拟合标准酶动力方程而得(参见，I.H.Segel，Enzyme Kinetics[酶动力学]，Wiley-Interscience，1975)。
在此申请中所用的术语“患者”是指哺乳动物，特别是人。
术语“药用有效量”是指在患者中治疗或改善IL-1-或编程性细胞死亡-介导的疾病的有效量。术语“预防有效量”是指在患者中预防或基本上减少IL-1-或编程性细胞死亡-介导的疾病的有效量。
术语“可药用的载体或辅助剂”是指无毒的载体或辅助剂，它们可以与本发明化合物一起施用于患者，且不破坏其药理活性。
术语“可药用的衍生物”是指本发明化合物或是当施用于受体时能够(直接或间接)提供本发明化合物的其它任何化合物的所有可药用的盐、酯、或其酯的盐，或是其抗ICE活性代谢物或残余物。
本发明化合物可药用的盐包括例如那些由可药用的无机或有机酸和碱衍生的盐。适合的酸的实例包括氢氯酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富马酸、马来酸、磷酸、乙醇酸(glycolic acid)、乳酸、水杨酸、琥珀酸、对甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、柠檬酸、甲磺酸、甲酸、苯甲酸、缩苹果酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。其它，例如，草酸，虽然本身不是可药用的，可以采用于盐的制备中，其盐用作获得本发明化合物和其可药用酸加成盐的中间体。由适合的碱衍生而来的盐包括碱金属(例如钠)、碱土金属(例如镁)、铵和N-(C1-4烷基)4+盐。
还可以预想到本文公开的化合物的碱性含氮基团的“季铵化作用”。这些碱性氮可以用本领域普通技术人员已知的试剂来季铵化，例如用低级烷基卤化物，如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸酯包括二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯；长链卤化物如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基卤化物、溴化物和碘化物；以及芳烷基卤化物，包括苄基和苯乙基溴化物。用这种季铵化作用可以获得水或油溶性或可分散性产物。
本发明ICE抑制剂可以含有一或多个“不对称”碳原子，且因此可以出现外消旋体和外消旋体混合物、单个的对映体、非对映体混合物和单个的非对映体。这些化合物的所有异构体形式均包括在本发明中。每一产生立体的(stereogenic)碳原子均可以是R或S构形。虽然在本申请中例举的具体化合物和骨架可以用特定的立体化学构形来描述，但可以预想到在任何给定的手性中心处具有另一相对的立体化学的化合物和骨架或其混合物。
本发明的ICE抑制剂可以包括这样的结构物，此结构物可以任选在碳、氮或其它原子上被各种取代基取代。这些结构物可被单或多取代。优选的是，结构物含有0至3个取代基。当多取代时，每一取代基可以不依赖于任何其它取代基而选择，只要这些取代基的组合导致形成一稳定的化合物。
由本发明可预想到的取代基和可变项的组合只是那些导致形成稳定化合物的组合。在此所用的“稳定”一词是指具有充分的稳定性，足以用本领域已知的方法生产和施用于哺乳动物的化合物。典型的是，这些化合物在40℃或更低的温度下，在无水汽或其它化学反应条件下，至少稳定一周。
为有助于更全面地了解本文所描述发明，下文将给出更详细的描述。本发明的一个实施方案(A)的ICE抑制剂是式(α)化合物
其中n＝0、1或2；R11是
m是1或2；R11和R13独立地选自-R7、-C(O)-R7和-C(O)-N(H)-R7，或是R12和R13一起形成4-8元饱和环状基团；R2是-H或任选由Ar、-OH、-OR7、-C(O)-OH、C(O)-NH2或-OR5取代的-C1-6直链或支链烷基；R7选自-Ar、任选由-Ar取代的-C1-6直链或支链烷基、任选由Ar取代的-C1-6直链或支链链烯基和任选由Ar取代的-C2-6直链或支链炔基；R5选自下列 -C(O)-R7，-C(O)-OR9，-C(O)-N(R9)(R10)，-S(O)2-R7，-C(O)C(O)-R7，-R7，和-H；
每一Ar是独立地选自下列的环状基团苯基、1-萘基、2-萘基、茚基、奥基、芴基和蒽基，和选自下列的杂环状芳基2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基(pyraxolyl)、2-吡唑啉基、吡唑烷基、异噁唑基、异三唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，3-三唑基、1，3，4-噻二唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、1，3，5-三噻烷基、中氮茚基、吲哚基、异氮茚基、3H-吲哚基、二氢吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、1H-吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、喹啉基、1，2，3，4-四氢异喹啉基、异喹啉基、1，2，3，4-四氢异喹啉基、肉啉基、2，3-二氮杂萘基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-二氮杂萘基、哌啶基(peridinyl)、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基和吩噁嗪基，并且所述芳基任选由下列基团单或多取代-F、-Cl、-Br、-I、-OR14、-NO2、-S(O2)-N(R9)(R10)、-C(O)-N(R9)(R10)、-N(H)-C(O)-N(R9)(R10)、-N(R9)(R10)、-C(O)-OR9、-CF3、-OCF3、C1-6直链或支链烷基、1，2-亚甲二氧基、-CN、或-N(H)C(NR9)N(R9)(R10)；每一R14是-H或C1-6直链或支链烷基；每一R9和R10独立地选自-H、-Ar和任选由-Ar取代的C1-5直链或支链烷基；每一R4是任选由-Ar或-W取代的-C1-5直链或支链烷基；W是-OR9、-SR9、-N(H)C(NR9)N(R9)(R10)、-C(O)-OR9或-N(R9)(R10)；R3是-CH2Ar或5至15元非芳族环状基团，它含有1至3个环，且任选含有0至2个桥环氧原子、硫原子或氮原子，并且其中该环状基团任选与Ar稠合；其前提是，当-Ar是由含有R9或R10的基团取代，而R9或R10又包含一或多个另外的-Ar基团时，则这些-Ar基团不被含有R9或R10的基团取代；此实施方案的优选化合物是这样的化合物，其中R5是-C(O)-R7或-C(O)C(O)-R7；每一R4是任选由Ar取代的C1-5直链或支链烷基；m是1；n是1；R3是-CH2Ar或
E是CH或N；每一D独立地是N或C，其中C任选由下列基团取代-OR14、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-S(O)2-N(R9)(R10)、-C(O)-N(R9)(R10)、-N(H)-C(O)-N(R9)(R10)、-N(R9)(R10)、-C(O)-OR9、-CF3、-OCF3、C1-6直链或支链烷基、1，2-亚甲二氧基、-CN、或-N(H)C(NR9)N(R9)(R10)；每一R9和R10独立地选自下列-H、-Ar和任选由-Ar取代的-C1-5直链或支链烷基。
本发明另一实施方案的ICE抑制剂是式(β)化合物
其中m是1或2；n＝0、1或2；R1选自下列-CN，-C(O)-H，-C(O)-CH2XR6，-C(O)-CH2F，-C＝N-O-R7，和-C(O)-R8；X选自O、S、S(O)和S(O)2；R6独立地选自-H、-(CH2)p-Ar，和-C(O)-Ar；p是0、1、2或3；R7选自-Ar、任选由-Ar取代的-C1-6直链或支链烷基、任选由Ar取代的-C1-6直链或支链链烯基和任选由Ar取代的-C2-6直链或支链炔基；R8选自下列基团，其中任一环可以任选由下列基团单或多取代-NH2、-C(O)-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-NO2、-CN、-全氟烷基C1-3烷基、-R5、-OR5、-OR7、-N(H)-R5、-N(H)-R7、1，2-亚甲二氧基和-SR7
其中Y独立地选自O和S；每一Ar是一环状基团，独立地选自下列碳环芳基苯基、1-萘基、2-萘基、茚基、奥基、芴基和蒽基，和选自下列的杂环状芳基2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基(pyraxolyl)、2-吡唑啉基、吡唑烷基、异噁唑基、异三唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，3-三唑基、1，3，4-噻二唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、1，3，5-三噻烷基、中氮茚基、吲哚基、异氮茚基、3H-吲哚基、二氢吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、1H-吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、喹啉基、1，2，3，4-四氢异喹啉基、异喹啉基、1，2，3，4-四氢异喹啉基、肉啉基、2，3-二氮杂萘基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-二氮杂萘基、哌啶基(peridinyl)、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基和吩噁嗪基，且环状基团任选由下列基团单或多取代-OR14、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-S(O)2-N(R9)(R10)、-C(O)-N(R9)(R10)、-N(H)-C(O)-N(R9)(R10)、-N(R9)(R10)、-C(O)-OR9、-CF3、-OCF3、C1-6直链或支链烷基、1，2-亚甲二氧基、-CN、或-N(H)C(NR9)N(R9)(R10)；每一R9和R10独立地选自-H、-Ar和任选由Ar取代的-C1-5直链或支链烷基；每一R14是-H或C1-6直链或支链烷基；R5选自下列-C(O)-R7，-C(O)-OR9，-C(O)-N(R9)(R10)，-S(O)2-R7，-C(O)C(O)-R7，-R7，和-H；R4是任选由Ar或W取代的-C1-5直链或支链烷基；W是-OR9、-SR9、-N(H)C(NR9)N(R9)(R10)、-C(O)-OR9和-NR9，(R10)；R3是-CH2Ar或5至15元非芳族环状基团，它含有1至3个环，且任选含有0至2个桥环氧原子、硫原子或氮原子，并且其中该环状基团任选与Ar稠合；
R2是-H、或C1-6直链或支链烷基，其中烷基任选由Ar、-OH、-OR7、-C(O)-OH、C(O)-NH2或-OR5取代；其前提是，当-Ar是由含有R9或R10的基团取代，而R9或R10又包含一或多个另外的-Ar基团时，则这些-Ar基团不被含有R9或R10的基团取代；此实施方案的优选化合物是这样的化合物，其中R1是-C(O)-H；R5是-C(O)-R7或-C(O)C(O)-R7；R4是任选由-Ar取代的-C1-5直链或支链烷基；m是1；n是1；R3是-CH2Ar或
E是CH或N；每一D独立地是N或C，其中C任选由下列基团取代-OR14、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-S(O)2-N(R9)(R10)、-C(O)-N(R9)(R10)、-N(H)-C(O)-N(R9)(R10)、-N(R9)(R10)、-C(O)-OR9、-CF3、-OCF3、C1-6直链或支链烷基、1，2-亚甲二氧基、-CN、或-N(H)C(NR9)N(R9)(R10)；每一R9和R10独立地选自下列-H、-Ar和任选由-Ar取代的-C1-5直链或支链烷基。
此实施方案的优选化合物包括但不限于
此实施方案的其它优选化合物是这样的化合物，其中R1是-C(O)-R8；R5是-C(O)-R7或-C(O)C(O)-R7；R4是任选由-Ar取代的-C1-5直链或支链烷基；m是1；n是1；R3是-CH2Ar或
E是CH或N；每一D独立地是N或C，其中C任选由下列基团取代-OR14、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-S(O)2-N(R9)(R10)、-C(O)-N(R9)(R10)、-N(H)-C(O)-N(R9)(R10)、-N(R9)(R10)、-C(O)-OR9、-CF3、-OCF3、C1-6直链或支链烷基、1，2-亚甲二氧基、-CN、或-N(H)C(NR9)N(R9)(R10)；每一R9和R10独立地选自下列-H、-Ar和任选由-Ar取代的-C1-5直链或支链烷基。
此实施方案的优选化合物包括但不限于
此实施方案的其它优选化合物是那些其中R1是-C(O)-CH2XR6的化合物。
本发明的ICE抑制剂可以使用常规技术合成。有利地是，这些化合物由容易得到的起始原料常规地合成。
本发明化合物属于已知的最容易合成的ICE抑制剂。以前描述的ICE抑制剂通常含有四个或更多的手性中心和许多的肽连键。本发明化合物可相对容易地合成显示出可大规模合成这些化合物的优点。
应当理解，取决于包括溶剂选择、pH、和其它本领域技术人员已知的条件，本发明的这些化合物可以存在几种平衡形式。所有的这些化合物的这些形式都包括在本发明中。具体地说，本发明的许多化合物，特别是那些含有R1上醛或酮基以及羧酸基团(R2＝H)的化合物，可以取半缩酮(或半缩醛)或水合形式。例如，当R1是-C(O)-H和R2是-H时，本发明化合物可以取描述于下列的形式水合形式
取决于对溶剂或其它本领域技术人员已知的条件的选择，本发明化合物也可以取酰氧基缩酮、酰氧基缩醛、缩酮或缩醛形式
缩酮或缩醛形式
此外，应当理解，本发明化合物的平衡形式可以包括互变形式。这些化合物的所有的这些形式均包括在本发明中。
应当理解，本发明化合物可以通过适宜的官能性修饰来增强选择性生物性能。这些修饰是本领域已知的，且包括那些增加生物渗透入给定的生物体系(例如，血液、淋巴系统、中枢神经系统)，增加口服有效性，增加溶解性以使得可通过注射来施用，改变代谢和改变排泄速率的修饰。此外，这些化合物可以改变成前药物形式，这样由于代谢作用或对前药物的其它生物化学处理，使得在患者体内产生所需的化合物。这些前体药物形式典型地是在体外测定很少表现出活性或无活性。这些前药物形式包括化合物的缩酮、缩醛、肟和腙形式，这些化合物含有酮或醛基团，特别是当上述基团出现在本发明化合物中R1基团时。其它的前药物形式包括半缩酮、半缩醛、酰氧基缩酮、酰氧基缩醛、缩酮和缩醛形式，这些形式描述于EQ1和EQ2中。
本发明化合物是ICE的优异配体。因此，这些化合物是能够以IL-1-和编程性细胞死亡介导的疾病中的活动为靶体和抑制之，且因此，以此蛋白在炎性疾病、自身免疫疾病、增生性紊乱、传染性疾病、和变性疾病的最终活性为靶体和抑制之。例如，本发明化合物通过抑制ICE，抑制前体IL-1β转化成成熟IL-1β。因为ICE是产生成熟IL-1β所必需的，因此通过抑制成熟IL-1的产生，抑制此酶便可有效地阻止IL-1介导的生理作用和症状如炎症的开始出现。因此，通过抑制IL-1β前体活性，本发明化合物有效地起到IL-1抑制剂的作用。
本发明化合物可以用常规的方式采用来治疗由IL-1或编程性细胞死亡介导的疾病。这些治疗方法、其剂量水平和要求可以通过本领域技术人员已知的可行方法和技术来选择。例如本发明化合物可以与可药用辅助剂组合，用药物学上可接受的方式并用可有效减轻此疾病严重性的药量，施用于患有IL-1-或编程性细胞死亡介导的疾病的患者。
此外，本发明化合物可以用在组合物和方法中，用于治疗或和保护患者对抗IL-1-或编程性细胞死亡介导的疾病超过一段延长的时间。这些化合物可以采用单独或与其它本发明化合物一起，以在药用组合物中常规利用ICE抑制剂相关的方式，用于上述组合物中。例如，本发明化合物可以与常规采用于疫苗的可药用辅助剂组合，并以对保护的患者的预防有效量施用超过一段延长的时间，以对抗IL-1-或编程性细胞死亡介导的疾病。
本发明化合物还可以与其它ICE抑制剂共同施用，以增加对抗各种IL-1-或编程性细胞死亡介导的疾病的治疗或预防效果。
除此之外，本发明化合物可以用来与常规的消炎剂或与基质金属蛋白酶抑制剂、脂肪氧合酶抑制剂和除了IL-1β之外的细胞因子拮抗剂组合。
本发明化合物还可以与免疫调节剂(例如溴匹立明、抗人α干扰素抗体、IL-2、GM-CSF、蛋氨酸脑啡肽、干扰素α、二乙基二硫代氨基甲酸酯、肿瘤坏死因子、纳曲酮和rEPO)或与前列腺素组合施用，预防或防治IL-1-或编程性细胞死亡介导的疾病症状如炎症。
当本发明化合物与其它药剂组合治疗施用时，它们可以顺序或同时施用于患者。此外，本发明药用或预防组合物可以包含本发明ICE抑制剂与其它治疗或预防药剂的组合。
本发明药用组合物包含任何本发明化合物及其可药用的盐与任一种可药用载体、辅助剂或赋形剂。可用于本发明药用组合物中的可药用载体、辅助剂和赋形剂包括，但不限于，离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、盐或电解质如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯类、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段共聚物、聚乙二醇及羊毛脂。
本发明药用组合物可以经口、不经肠，通过吸入喷雾、局部、经直肠、经鼻、经颊、经阴道或经由植入的贮器施用。优选经口施用。本发明的药用组合物可以含有任一种常规的无毒可药用载体、辅助剂或赋形剂。“不经肠”一词在本文中包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、滑膜腔内、胸骨内、鞘内、损害部内、颅内注射或输注技术。
药用组合物可以是无菌可注射制剂形式，例如，无菌可注射水或油脂性悬浮液。此悬浮液可以使用适合的分散或润湿剂(如，吐温80)和悬浮剂，用本领域已知的技术加工。无菌可注射制剂也可以是无毒非肠道可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如溶于1，3-丁二醇中的溶液。可以采用的可接受的赋形剂和溶剂是甘露醇、水、林格溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌、固定油常规地采用来作为溶剂或悬浮介质。对于此目的，任选品牌的固定油均可以采用，包括合成的单或二甘油酯。脂肪酸如油酸及其甘油酯衍生物可以用于可注射制剂中，这些脂肪酸可以是天然可药用油，如橄榄油或蓖麻油，特别是其聚氧乙基化衍生物。这些油溶液或悬浮液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，如Ph.Helv或类似的醇。
本发明的药用组合物可以以任选口服可接受的剂量形式口服施用，包括但不限于，胶囊、药片、和水悬浮液和溶液。在口服药片的情况下，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。还可典型地加入润滑剂，如硬脂酸镁。对于胶囊形式的口服施用，可用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当水悬浮液口服施用时，活性成分与乳化与悬浮剂组合。如果需要，可以加入某些增甜和/或芳香和/或着色剂。
本发明药用组合物还可以以用于直肠施用的栓剂形式。这些组合物可以通过将本发明化合物与适合的非刺激性赋形剂混合而制备，所述的赋形剂在室温下为固体，但在直肠温度下为液体，且因此在直肠中将溶解而释放出活性组分。这些材料包括，但不限于，可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
当所需的处理涉及局部涂用容易达到的区域或器官时，本发明药用组合物的局部施用特别有用。局部涂于皮肤时，药用组合物应同含有悬浮或溶解于载体的活性组分的适合的油膏一起配制。用于本发明化合物的局部施用的载体包括，但不限于，矿物油、液体石油、白石油、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。另外，药用组合物可以同含有悬浮或溶解于载体的适合的洗液或霜一起配制。适合的载体包括，但不限于，矿物油、失水山梨醇单硬脂酸酯、多乙氧基醚60、鲸蜡基酯蜡、十八烷醇(cetearyl alcolol)、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。本发明药用组合物还可以通过直肠栓或以适合的灌肠剂局部涂于下肠道。局部经皮膏药也包括在本发明中。
本发明药用组合物可以通过鼻气雾剂或吸入法施用。这些组合物根据药用配制领域熟知的技术制备，且可以采用苯甲醇或其它本领域已知的适合防腐剂、提高生物有效性吸收促进剂、碳氟化合物、和/或其它增溶剂或分散剂来制备成盐水中的溶液。
在预防和治疗IL-1-和编程性细胞死亡介导的疾病时，所述疾病包括炎性疾病、自身免疫疾病、破坏性骨疾病、增生性疾病、传染性疾病、变性疾病、骨关节炎、胰腺炎、哮喘、成人呼吸窘迫综合征、肾小球性肾炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮病、慢性甲状腺炎、格雷夫斯病、自身免疫胃炎、胰岛素依赖性糖尿病(I型)、自身免疫溶血性贫血、自身免疫中性白细胞减少症、血小板减少症、慢性活动性肝炎、重症肌无力、炎性肠病、节段性回肠炎、牛皮癣、移植物抗宿主疾病、骨质疏松症、多发性骨髓瘤相关的骨疾病、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、转移黑素瘤、卡波西肉瘤、多发性骨髓瘤、脓毒症、败血症性休克、志贺菌病、阿尔茨海默病、帕金森病、大脑缺血、心肌缺血、棘肌萎缩、多发性硬化、与AIDS相关的脑炎、与HIV相关的脑炎、和由于中风引起的神经损害，使用剂量水平为约0.01至约100毫克活性成分化合物/千克体重/日，优选约1至50毫克/千克体重/日。典型的是，本发明药用组合物每日施用约1至5次，或是连续输注。这样的施用可以用作慢性或急性治疗。可以与载体材料组合以产生单位剂型的活性成分的量将取决于所治疗的宿主以及具体的施用方式。典型的制剂含有约5％至约95％的活性化合物(w/w)。优选的是，这些制剂含有约20％至约80％的活性化合物。
改善患者的病症时，如果需要，可以施用本发明化合物、组合物或组合的维持剂量。随后，作为症状的函数，可以减少施用的剂量或次数，以保持改善的症状水平，当症状缓解到所需的水平时，应当停止治疗。然而，根据任何复发或疾病症状，患者或许需要长期间歇治疗。
技术人员知道，或许需要比上面提到的那些剂量更低或更高的剂量。对于具体的患者而言，特定的剂量和治疗方案将取决于各种因素，包括所采用的特定化合物的活性、年龄、体重、一般身体状况、性别、饮食、施用时间、排泄速率、药剂组合、疾病的严重度和病史长短、和患者对疾病的素因以及治疗医生的判断。
可以用本发明化合物治疗或预防的IL-1-和编程性细胞死亡介导的疾病，包括但不限于，炎性疾病、自身免疫疾病、增生性疾病、传染性疾病、变性和坏死性疾病。
可以治疗或预防的炎性疾病包括但不限于骨关节炎、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、哮喘和成人呼吸窘迫综合征。优选的是，炎性疾病为骨关节炎或急性胰腺炎。
可以治疗或预防的自身免疫疾病包括但不限于肾小球性肾炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮病、慢性甲状腺炎、格雷夫斯病、自身免疫胃炎、胰岛素依赖性糖尿病(I型)、自身免疫溶血性贫血、自身免疫中性白细胞减少症、血小板减少症、慢性活动性肝炎、重症肌无力、炎性肠病、节段性回肠炎、牛皮癣和移植物抗宿主疾病。优选的是，自身免疫疾病是类风湿性关节炎、炎性肠病、节段性回肠炎和牛皮癣。
可以治疗或预防的骨破坏性疾病包括但不限于骨质疏松症、多发性骨髓瘤相关的骨疾病。
可以治疗或预防的增生性疾病包括但不限于急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、转移黑素瘤、卡波西肉瘤和多发性骨髓瘤。
可以治疗或预防的传染性疾病包括但不限于脓毒症、败血症性休克和志贺菌病。
可以用本发明化合物治疗或预防的IL-1-介导的变性或坏死性疾病包括但不限于阿尔茨海默病、帕金森病、大脑缺血和心肌缺血。优选的是，变性疾病是阿尔茨海默病。
可以用本发明化合物治疗或预防的编程性细胞死亡介导的变性疾病包括但不限于阿尔茨海默病、帕金森病、大脑缺血、心肌缺血、棘肌萎缩、多发性硬化、与AIDS相关的脑炎、与HIV相关的脑炎、衰老、脱发和由于中风引起的神经损害。
虽然本发明主要在于本文所公开的化合物用于预防与治疗IL-1-和编程性细胞死亡介导的疾病的应用，但本发明化合物也可用作其它半胱氨酸蛋白酶的抑制剂。
本发明化合物也可以用作有效结合于ICE或其它半胱氨酸蛋白酶的商品化试剂。作为商品化试剂，本发明化合物及其衍生物可以在ICE或ICE同系物的生化或细胞测定中用来阻止靶肽的蛋白分解，或可以被衍生而作为亲合色谱应用的栓接底物与稳定树脂结合。这些以及其它特征在于商业化半胱氨酸蛋白酶抑制剂的应用对于本领域技术人员而言是显而易见的。
为了更全面地了解本发明，给出下列实施例。这些实施例目的仅在于说明而非旨在以任何方式限定本发明的范围。
实施例1ICE的抑制使用描述于下文的三种方法，获得几种本发明化合物的抑制常数(Ki)和IC50值。1.使用UV可见底物的酶测定此测定使用琥珀酰-Tyr-Val-Ala-Asp-对硝基酰苯胺底物进行。类似底物的合成由L.A.Reiter作过描述(Int.J.Peptide Protein Res.43，87-96(1994))。测定混合物含有65μl缓冲液(10mM Tris，1mM DTT，0.1％CHAPS@pH8.1)10μl ICE(50nM终浓度，给出～1mOD/min的速率)5μl DMSO/抑制剂混合物20μl 400μM底物(80μM终浓度)100μl总反应体积可见ICE测定是在96孔微量滴定板上操作。将缓冲液、ICE和DMSO(如果抑制剂存在)以上列所列的顺序加入孔中。在所有的组分存在于所有的孔中之时开始，将组分留于常温下温育15分钟。微量滴定板读数器设置成在37℃下保温。温育15分钟之后，将底物直接加入到孔中，并在37℃ 405-603nm下，根据生色团(pNA)的释放，监测反应20分钟。对数据进行线性拟合，将速率换算成mOD/min值。DMSO只在实验涉及抑制剂时才存在，在其它的实验中，用缓冲液将体积补至100μl。
实施例2使用描述于实施例1中的测定法，确定出化合物706、710、719、720、725-727、729、731、733、743、745和747-757的下列Ki值。实施例2化合物的结构示于下列表格和实施例3中。
类型1 类型2
实施例3根据下文合成实施例2的化合物
N-苄基甘氨酸乙酯(701)向苯甲醛(14.0g，0.132mol)的无水乙醇(500mL)溶液中加入甘氨酸乙酯盐酸盐(37.0g，0.256mol)、NaOAc(32.5g，0.396mol)和氰基硼氢化钠(9.8g，0.158mol)，并将所得的混合物加热回流。回流1小时后，冷却反应，并真空浓缩。残留物吸收入1N NaOH和EtOAc中。将不同的层分离，有机相用1N NaOH、盐水洗，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。残留物吸收入EtOAc(150mL)中，并用气态HCl处理。收集所得的固体，用Et2O洗，并干燥，给出23.4g化合物701，为其盐酸盐。
((2(S)-叔丁氧基羰基氨基-3-甲基丁酰基)苄基氨基)乙酸乙酯(702)在-20℃下，向N-Boc-缬氨酸(2.18g，10mmol)和DIEA(4.4mL，25.3mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入三甲基乙酰氯(1.2mL，9.7mmol)。搅拌30分钟后，加入化合物701(2.18g，10mmol)，并让反应温热至室温，并搅拌5小时。将反应真空浓缩，残留物吸收入EtOAc和水中。将不同的层分离，有机相用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和硫酸氢钾水溶液、盐水洗，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，给出3.45g化合物702。
((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)苄基氨基)乙酸乙酯(703)在0℃下，向化合物702(3.45g，8.8mmol)的乙酸乙酯溶液中通入气态HCl冒气泡，直到饱和。让反应温热至室温，并搅拌3小时。向反应中通入氮气冒气泡，将过量的HCl去除，接着真空浓缩。残留物悬浮于二氯甲烷(50mL)中，用DIEC(3.4mL，19.5mmol)，接着用苯甲酰氯(1.2mL，10.3mmol)处理，并让反应搅拌过夜。将反应真空浓缩，残留物吸收入EtOAc和水中。将不同的层分离，有机相用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和硫酸氢钾水溶液、盐水洗，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，给出3.45g化合物703。
((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)苄基氨基)乙酸(704)向化合物703(3.45g，8.8mmol)的甲醇(9mL)溶液中加入1N LiOH(9mL)，并将反应搅拌过夜。将反应真空浓缩，残留物吸收入EtOAc和水中。将不同的层分离，水层用1N HCl酸化。产物用EtOAc萃取(2x)。合并萃取液，用盐水洗，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，给出3.0g化合物704。
3(S)-(2-((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)苄基氨基)乙酰氨基)-4-氧代-丁酸叔丁酯半卡巴腙(705)向3(S)-(1-芴基甲氧羰基氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯半卡巴腙(678mg，1.5mmol；用相似于其苄氧基羰基类似物的方式制备，Graybill等，Int.J.Protein Res.，44，第173-82页(1994))的乙腈(5.0mL)溶液中加入二乙胺(780μl，7.5mmol)并让反应在室温下搅拌1小时。将反应真空浓缩，并将残留物与甲苯(3x)一起真空共浓缩。在0℃下，向该残留物、化合物704(555mg，1.5mmol)和HOBT(224mg，1.66mmol)在1∶1的CH2Cl2∶DMF(10mL)的悬浮液中，加入EDC(318mg，1.66mmol)。将反应温热至室温，搅拌过夜。反应用乙酸乙酯和水稀释。将不同的层分离，有机相用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和硫酸氢钾水溶液、盐水洗，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。残留物在硅胶上(用2-6％MeOHCH2Cl2洗脱)色谱分离，给出600mg化合物705。
3(S)-(2-((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)苄基氨基)乙酰氨基)-4-氧代-丁酸(706)向化合物705(600mg，1.04mmol)在二氯甲烷(10mL)的悬浮液中加入TFA(4.0mL)，并将反应搅拌4小时。将反应真空浓缩，并将残留物与甲苯(3x)共浓缩。残留物溶解于甲醇(10mL)中，用乙酸(2.0mL)，接着用甲醛(2.0mL)处理。在室温下搅拌3小时后，将反应真空浓缩。制备HPLC给出89mg化合物7061H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.34-8.21(m)，7.80-7.69(m)，7.51-7.02(m)，4.99-4.81(m)，4.73-4.59(m)，4.57-4.56(m)，4.35-4.12(m)，4.07-3.96(m)，3.93-3.84(m)，2.64-2.51(m)，2.49-2.31(m)，2.29-2.13(m)，1.02-0.80(m).
3(S)-(烯丙氧基羰基)-氨基-4-((2，6-二氯-苯基)-噁唑-2-基)-4-羟基-丁酸叔丁酯(707)。在氮气氛下，将5-(2，6-二氯-苯基)噁唑(2.71g，12.7mmol；用描述于Tet.Lett.[四面体通讯]2369(1972)中的类似方法制备))的THF(65mL)溶液冷却至-78℃。向此溶液中加入正丁基锂(1.5M己烷溶液，8.5mL，13.3mmol)。30分钟后，加入溴化镁醚合物(3.6g，13.9mmol)，让此溶液升温至-45℃ 15分钟。反应冷却到-78℃，并滴加3(S)-(1-烯丙氧基羰基氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯(3.26g，12.7mmol；Graybill等，Int.J.Protein Res.，44，173-182(1993))的THF(65mL)溶液。将反应搅拌25分钟，之后让之升温至-40℃，搅拌3小时，之后在室温下搅拌1小时。将反应用5％碳酸氢钠(12mL)骤止，并搅拌3小时。真空去除THF，所得的残留物用二氯甲烷萃取。有机层用盐水洗，并经硫酸镁干燥，过滤，并真空浓缩，产生6.14g。纯化给出4.79g化合物707。
3(S)-(2-((2-(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)苄基氨基)乙酰基氨基)-4-(4-(2，6-二氯苯基)-噁唑-2-基)-4-羟基丁酸叔丁酯(708)向化合物704(318mg，0.86mmol)和化合物707(370mg，0.78mmol)的1∶1 CH2Cl2∶DMF(8.0mL)的悬浮液中加入双(三苯膦)二氯化钯(10mg)，接着滴加入三正丁基氢化锡(320μL，1.19mmol)。加毕，加入HOBT(212mg，1.57mmol)和反应冷却至0℃。加入EDC(180mg，0.94mmol)，让反应升温到室温，并搅拌过夜。反应真空浓缩，残留物吸收入乙酸乙酯和饱和的硫酸氢钠水溶液。将不同的层分离，有机相用饱和碳酸钾水溶液、盐水洗，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。在硅胶上(用2％MeOH∶CH2Cl2洗脱)色谱，给出150mg化合物708。
3(S)-(2-((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)苄基氨基)乙酰基氨基)-4-(4-(2，6-二氯苯基)-噁唑-2-基)-4-氧代丁酸叔丁酯(709)向Dessmarten(259mg，0.61mmol)在CH2Cl2(4.0ml)中的悬浮液滴加入化合物708(150mg，0.20mmol)的CH2Cl2(2.0mL)溶液。在室温下搅拌1小时后，将反应真空浓缩。残留物溶解于乙酸乙酯中，用1∶1的饱和硫代硫酸钠水溶液∶饱和碳酸氢钠水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、盐水洗，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。在硅胶上(用2-5％甲醇∶二氯甲烷洗脱)色谱，给出74mg化合物709。
3(S)-(2-((2-(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)苄基氨基)乙酰基氨基)-4-(4-(2，6-二氯苯基)-噁唑-2-基)-4-氧代丁酸(710)向化合物709的二氯甲烷(4.0mL)溶液中加入TFA(2.0mL)，并将反应在室温下搅拌1小时。将反应真空浓缩，残留物用甲苯共浓缩。制备-HPLC给出35mg化合物7101H NMR(500MHz，CD3OD)δ 8.90(m)，8.52(m)，8.35(m)，7.83(m)，7.62-7.39(m)，7.38-7.16(m)，5.52(m)，5.01(m)，5.01(m)，4.99-4.53(m)，4.42(m)，4.33-3.82(m)，3.16-2.93(m)，2.91-2.48(m)，2.24(m)，1.09-0.85(m).
2-氯-4-氟-6-硝基苯酚(711)在0℃下，向2-氯-4-氟苯酚(25g，0.171mol)在水(100mL)和乙醚(300mL)中的混合物中滴加入浓硝酸(25mL)。加毕，将反应升温至室温，并搅拌3小时。将不同的层分离，有机相用1∶1盐水∶水、盐水洗，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩至成淤浆。将此淤浆用己烷稀释，收集黄色固体，并干燥，给出23.6g化合物711。
2-氯-4-氟-6-氨基苯酚盐酸盐(712)将化合物711(23.4g，0.122mol)和氧化铂(2.3g)在无水乙醇(120ml)中的混合物置于1个大气压的氢气下，并搅拌直到还原完毕。用氮气置换氢气，并将反应经Celite(硅藻土)过滤。滤液用乙醚(300mL)稀释，向溶液中通入盐酸气冒气泡，给出白色沉淀物。收集固体，并真空干燥，给出17.1g化合物712，为白色固体。
6-氯-4-氟苯并噁唑(713)将化合物712(17.0g，86.3mmol)和原甲酸三甲基酯(18.9mL，0.173mol)在无水甲醇(90mL)中的混合物加热至回流，之后形成溶液。回流搅拌24小时后，将反应冷却，浓缩，给出橙色固体。此固体溶解入乙醚中，用1N NaOH、盐水洗，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩，给出橙黄色固体。迅速冷却，由热乙醇水溶液重结晶，并过滤，给出10.0g化合物713，为白色针状物。值得说明的是，在乙醇水溶液中长时间放置会造成化合物713的分解。
3(S)-(烯丙氧基羰基)-氨基-4-(6-氯-4-氟苯并噁唑-2-基)-4-羟基-丁酸叔丁酯(714)向化合物713(2.06g，12.0mmol)的THF(24mL)溶液在-78℃下滴加入丁基锂(1.6M，己烷中，7.0mL，12.1mmol)，并将反应搅拌1小时。反应用溴化镁溶液(1M，于苯乙醚1∶4中，13.2mL)处理，将反应升温至-40℃。搅拌1小时后，将反应冷却至-78℃，并用3(S)-(1-烯丙氧基羰基氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯(2.57g，10mmol)的THF(12mL)溶液处理。让反应缓慢升至室温，并搅拌过夜。反应用饱和的氯化铵水溶液骤止，用乙酸乙酯稀释，加入足够量的水，使水相清澈。将不同的层分离，有机相用盐水洗，经硫酸镁干燥，过滤和真空浓缩。残留物在硅胶上(用15-45％乙酸乙酯∶己烷洗脱)色谱，给出2.0g化合物714。
2，4-二氟-6-氨基苯酚盐酸盐(715)将2，4-二氟-6-硝基苯酚(28.4g，0.162mol；用类似于711的方法制备，除了用2，4-二氟苯酚替代2-氯-4-氟苯酚)和10％的碳载钯(3.5g)在无水甲醇(120mL)中的混合物放置于1个大气压的H2下，并搅拌，直到还原完毕。将H2用氮气置换，反应经Celite过滤。气态HCl通入滤液中冒气泡，将所得的反应浓缩。残留物吸收入水中，用乙醚(2x)洗，用固体碳酸氢钠中和，将产物用乙醚萃取。合并的萃取液经硫酸镁干燥，并过滤。滤液用气态HCl处理，收集所得的沉淀物，并真空干燥，给出12.9g化合物715，为米色固体。
4，6-二氟苯并噁唑(716)将化合物715(12.8g，70.7mmol)和原甲酸三甲基酯(23mL，0.212mol)在无水甲醇(90mL)中的混合物加热至回流，之后形成溶液。回流下搅拌24小时后，将反应冷却，并浓缩。残留物溶解入乙醚中，用1N氢氧化钠、盐水洗，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。减压下蒸馏，给出5.0g化合物716，为清澈液体，它在静置时固化。
3(S)-(烯丙氧基羰基)-氨基-4-(4，6-二氟苯并噁唑-2-基)-4-羟基-丁酸叔丁酯(717)如对化合物714描述的那样制备717，除了用化合物716代替化合物713。
3(S)-(烯丙氧基羰基)-氨基-4-(4，6-二氯苯并噁唑-2-基)-4-羟基-丁酸叔丁酯(718)用与制备化合物714相似的方法制备718，除了用2，4-二氯-6-硝基苯酚代替化合物711。
3(S)-(2-((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)苄基氨基)乙酰基氨基)-4-(6-氯-4-氟苯并噁唑-2-基)-4-氧代丁酸(719)采用与制备化合物710相似的方法制备718，除了在制备708时用化合物714代替化合物7071H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.70-8.54(m)，8.48-8.35(m)，8.34-8.08(m)，7.98-7.87(m)，7.75-7.67(m)，7.63(m)，7.58(m)，7.51-7.44(m)，7.43-7.29(m)，7.28-7.03(m)，6.97(m)，5.51(m)，4.99-4.66(m)，4.65-4.26(m)，4.25-3.61(m)，3.42(m)，3.13-2.83(m)，2.68-2.42(m)，2.23-2.00(m)，1.02-0.69(m).
3(S)-(2-((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)-3-甲基吡啶氨基)乙酰基氨基)-4-(4，6-二氯苯并噁唑-2-基)-4-氧代丁酸(720)采用与制备化合物710相似的方法制备720，除了在制备701时用3-吡啶甲醛代替苯甲醛，在制备708时用化合物718代替7071H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.88-8.44(m)，8.42-8.20(m)，7.91-7.58(m)，7.55-7.30(m)，5.51(m)，4.72-4.11(m)，3.92-3.52(m)，3.26-2.92(m)，2.72-2.51(m)，2.32-1.91(m)，1.46-1.21(m)，1.11-0.68(m).
N-茚满-2-基甘氨酸叔丁酯(721)向2-氨基1，2-二氢化茚盐酸盐(5.0g，29.5mmol)和粉状碳酸钾(8.3g，60.0mmol)在无水乙醇(30mL)中的悬浮液中加入溴乙酸叔丁酯(4.4mL，29.5mmol)。在室温下搅拌10分钟后，将反应加热到45℃，并搅拌2小时。反应冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，过滤并浓缩。在硅胶上(用20％乙酸乙酯己烷洗脱)色谱，给出4.7g化合物721，为白色晶状固体。
((2S)-芴基甲氧基羰基氨基-3-甲基丁酰基)-茚满-2-基氨基)乙酸叔丁酯(722)向N-Fmoc-缬氨酸(9.08g，26.8mmol)在含有DMF(100μ)的二氯甲烷(50mL)中的部分溶液缓慢加入草酰氯(3.5mL，40.2mmol)，此时产生气体，并形成黄色溶液。在搅拌30分钟后，将反应真空浓缩。残留物溶解于二氯甲烷(25mL)中，并用DIEA(2.3mL，13.4mmol)，接着用化合物721(3.31g，13.4mmol)的二氯甲烷溶液处理。搅拌过夜后，反应用乙酸乙酯稀释，用5％碳酸氢钠、盐水洗，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。残留物在硅胶上(用10-20％乙酸乙酯∶己烷洗脱)色谱，给出7.2g化合物722。
((2(S)-苯甲酰氨基-3-甲基丁酰基)茚满-2-基氨基)乙酸叔丁酯(723)向化合物722(50mg，0.88mmol)的乙腈(6.0mL)溶液中加入二乙胺(455μ，4.4mmol)，并将反应搅拌2小时。将反应浓缩，残留物用甲苯(2x)共浓缩，给出粘稠油状物。残留物溶解于含有DMF(2mL)的二氯甲烷(5mL)中，用苯甲酸(161mg，1.32mmol)，接着用EDC(252mg，1.32mmol)处理，将反应搅拌过夜。反应用乙酸乙酯稀释，用水洗。水层用乙酸乙酯再萃取。合并的萃取液用5％硫酸氢钾洗，过滤并真空浓缩。残留物在硅胶上(用10％乙酸乙酯∶己烷洗脱)色谱，给出240mg化合物723。
((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)茚满-2-基氨基)乙酸(24)向化合物723(240mg，0.53mmol)的二氯甲烷(4.0mL)溶液中加入TFA(2.0mL)，将反应在室温下搅拌1小时。将反应真空浓缩，残留物用甲苯共浓缩。此物质直接用于下一步，无需进一步纯化。
3(S)-(2-((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)茚满-2-基氨基)乙酰基氨基)-4-(4，6-二氯苯并噁唑-2-基)-4-氧代丁酸(725)采用与制备化合物710相似的方法制备化合物725，除了用化合物724代替化合物704和在制备708时用化合物718代替化合物7071H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.7-8.6(m)，8.6-8.4(m)，8.1(d)，8.0-7.8(m)，7.6-7.5(m)，7.5-7.4(m)，7.2-7.0(m)，7.0-6.9(m)，5.5-5.3(m)，5.3-5.2(m)，4.6-4.5(m)，4.5-4.3(m)，4.2-4.0(m)，3.8-3.6(m)，3.3(s)，3.2-3.1(m)，3.1-3.0(m)，3.0-2.8(m)，2.7-2.6(m)，2.4-2.0(m)，1.2-0.6(m).
3(S)-(2-(2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)茚满-2-基氨基)乙酰基氨基)-4-(4-(4，6-二氟苯并噁唑-2-基)-4-氧代丁酸(726)采用与制备化合物710相似的方法制备化合物726，除了用化合物724代替化合物704和在制备708时用化合物717代替化合物7071H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.7-8.6(m)，8.6-8.4(m)，8.1(d)，8.0-7.8(m)，7.6-7.5(m)，7.5-7.4(m)，7.2-7.0(m)，7.0-6.9(m)，5.5-5.3(m)，5.3-5.2(m)，4.6-4.5(m)，4.5-4.3(m)，4.2-4.0(m)，3.8-3.6(m)，3.3(s)，3.2-3.1(m)，3.1-3.0(m)，3.0-2.8(m)，2.7-2.6(m)，2.4-2.0(m)，1.2-0.6(m).
3(S)-(2-((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)茚满-2-基氨基)乙酰基氨基)-4-(4-(3，5-二氯苯基)噁唑-2-基)-4-氧代丁酸(727)采用与制备化合物710相似的方法制备化合物727，除了在制备708时用化合物724代替化合物7041H NMR(500MHz，CD3OD)δ 8.73(d)，8.38-8.21(m)，8.20-8.11(m)，7.81-7.72(m)，7.50-7.32(m)，7.14-6.93(m)，5.52-5.40(m)，5.22-5.13(m)，5.08(m)，4.96(d)，4.56(d)，4.48-4.37(m)，4.21-4.10(m)，3.98(t)，3.82(d)，3.26-3.11(m)，3.10-2.88(m)，2.25-2.12(m)，1.04-0.83(m).
((2(S)-苯并(1，3)间二氧杂环戊烯-5-羰基氨基-3-甲基丁酰基)茚满-2-基氨基)乙酸(728)采用与制备化合物724相似的方法制备化合物728，除了在制备化合物723时用胡椒基酸代替苯甲酸。
3(S)-(2-((2(S)-((苯并(1，3)间二氧杂环戊烯5-羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)茚满-2-基氨基)乙酰基氨基)-4-(4-(3，5-二氨苯基)噁唑-2-基)-4-氧代丁酸(729)采用与制备化合物710相似的方法制备化合物729，除了在制备708时用化合物728代替化合物7041H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.36(m)，8.22-8.03(m)，7.58-7.37(m)，7.36-7.23(m)，7.22-7.01(m)，6.89(m)，6.00(s)，5.51(m)，5.29-5.04(m)，4.97(d)，4.61-4.49(m)，4.48-4.31(m)，4.27-4.19(m)，4.09-3.78(m)，3.28-3.19(m)，3.18-2.93(m)，2.90-2.59(m)，2.51(m)，2.22(m)，1.12-0.83(m).
((2-(S)-(3，4，5-三甲氧基苯甲酰基氨基)-3-甲基丁酰基)茚满-2-基氨基)乙酸(730)采用与制备化合物724相似的方法制备化合物730，除了在制备723时用3，4，5-三甲氧基苯甲酸代替苯甲酸。
3(S)-(2-((2(S)-(3，4，5-三甲氧基苯甲酰基氨基)-3-甲基丁酰基)茚满-2-基氨基)乙酰基氨基)-4-(4-(3，5-二氯苯基)噁唑-2-基)-4-氧代丁酸(731)采用与制备化合物710相似的方法制备化合物731，除了在制备708时用化合物730代替化合物7041H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.51-8.32(m)，8.31-8.22(m)，7.60-7.03(m)，5.62-5.49(m)，5.32-5.02(m)，4.97(m)，4.64-4.53(m)，4.48-4.21(m)，4.09-3.72(m)，3.28-2.89(m)，2.85-2.42(m)，2.25(m)，1.38-1.24(m)，1.11-0.83(m).
((2-(S)-(3，4，5-三甲氧基苯甲酰基氨基)-3-甲基丁酰基)茚满-2-基氨基)乙酸(732)采用与制备化合物724相似的方法制备化合物732，除了在制备化合物723时用4-氯苯甲酸代替苯甲酸。
3(S)-(2-((2(S)-(4-氯苯甲酰基氨基)-3-甲基丁酰基)茚满-2-基氨基)乙酰基氨基)-4-(4-(3，5-二氯苯基)噁唑-2-基)-4-氧代丁酸(733)采用与制备化合物710相似的方法制备化合物733，除了在制备化合物708时用化合物732代替化合物7041H NMR(500MHz，CD3OD)δ 8.99，6.4-6.2(m)，5.8-6.0(m)，5.7-5.4(m)，4.0-3.9(m)，3.7-3.6(m)，3.6-3.5(m)，3.5-3.4(m)，3.4-3.2(m)，3.0(m)，2.8(m)，2.7(m)，2.5-2.3(m)，1.8-1.6(m)，1.3-1.6(m)，1.2(m)，0.6(m).
((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)-(3-硝基苄基)氨基)乙酸乙酯(734)采用与制备化合物703相似的方法制备化合物734，除了在制备化合物701时用3-硝基苯甲醛代替苯甲醛。
((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)-(3-氨基苄基)氨基)乙酸乙酯(735)将化合物734(1.5g，3.4mmol)与10％Pd/C(150mg)在甲醇(35mL)中的混合物放置于氢气(1个大气压)下，搅拌直到还原完毕。将氢气用氮气置换，并过滤反应。将滤液浓缩，给出1.38g化合物735。
((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)-(3-Boc氨基苄基)氨基)乙酸乙酯(703)向化合物735(1.45g，3.5mmol)和DIEA(740μL，4.25mmol)在含有催化量的N，N-二甲基氨基吡啶的二氯甲烷(7.0mL)中的溶液中加入二叔丁基二碳酸酯(850mg，3.9mmol)。1小时后，反应用乙酸乙酯稀释，用水、饱和硫酸氢钾水溶液、盐水洗，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，给出1.78g化合物736。
3(S)-(2-((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)-(3-氨基苄基)氨基)乙酰基氨基)-4-氧代丁酸(737)采用与制备化合物706相似的方法制备化合物737，除了用化合物736代替化合物703。
((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)-(3-胍基苄基)氨基)乙酸乙酯(738)采用与制备化合物742相似的方法制备化合物738。
3(S)-(2-((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)-(3-胍基苄基)氨基)乙酰基氨基)-4-氧代丁酸(739)采用与制备化合物706相似的方法制备化合物739，除了用化合物738代替化合物703。
((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)-3-脲基苄基)氨基)乙酸乙酯(740)采用与制备化合物742相似的方法制备化合物740。
3(S)-(2-((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)-(3-脲基苄基)氨基)乙酰基氨基)-4-氧代丁酸(741)采用与制备化合物706相似的方法制备化合物741，除了用化合物740代替化合物703。
(3-乙酰基氨基苄基-(2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)-氨基)乙酸乙酯(742)向735(435.0mg，1.06mmol)的吡啶(3.0mL)溶液中加入乙酸酐(15μL，1.59mmol)，并让反应搅拌过夜。反应用乙酸乙酯和1N HCl稀释。将不同的层分离开，有机相用盐水洗，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩至干，给出480mg的742。
3(S)-(2-((3-乙酰基氨基苄基)-(2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)氨基)乙酰基氨基)-4-氧代丁酸(743)采用与制备化合物706相似的方法制备化合物743，除了用化合物742代替化合物703。
1H NMR(CD3OD)δ8.31-8.27(m)，7.82-7.73(m)，7.51-7.36(m)，7.28-7.13(m)，6.99(d)，6.91(d)，4.96-4.69(m)，4.66-4.46(m)，4.37-4.28(m)，4.11-3.98(t)，3.97-3.89(m)，3.31-3.19(m)，2.67-2.52(m)，2.48-2.32(m)，2.0(d)，1.01-0.86(m).
((2(S)-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)-(3-甲磺酰基苄基)氨基)乙酸乙酯(744)向735(476.0mg，1.16mmol)的吡啶(3.0mL)溶液中加入甲磺酰氯(135μL，1.75mmol)，并让反应搅拌过夜。反应用乙酸乙酯和1N HCl稀释。将不同的层分离开，有机相用盐水洗，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩，给出550mg的744。
3(S)-(2-((2(S)-苯甲酰基氨基-甲基丁酰基)-(3-甲磺酰基苄基)氨基)乙酰基氨基)-4-氧代丁酸(745)采用与制备化合物706相似的方法制备化合物745，除了用化合物744代替化合物703。1HNMR(CD3OD)δ8.29(m)，8.02(m)，7.82-7.69(m)，7.51-7.32(m)，7.29-7.01(m)，6.98(d)，4.94-4.38(m).4.36(d)，4.34(d)，4.30-4.13(m)，4.04(d)，3.31-3.19(m)，2.88-2.77(m)，2.64-2.48(m)，2.44-2.32(m)，2.21(m)，1.00-0.83(m).
步骤A.401a/b的合成。TentaGel S NH2树脂(0.16mmol/g，10.0g)放置在烧结玻璃板漏斗中，用DMF(3×50mL)，10％(v/v)DIEA的DMF液(2×50mL)，最后用DMF(4×50mL)洗。向此树脂中加入足够量的DMF，以获得淤浆，接着加入713a(1.42g，2.4mmol，由(3S)3-(芴基甲氧羰基)-4-氧代丁酸叔丁酯制备，根据A.M.Murphy等，J.Am.Chem.Soc.[美国化学学会杂志]，114，3156-3157(1992))或713b((1.42g，2.4mmol，由(3R)3-(芴基甲氧羰基)-4-氧代戊酸叔丁酯制备，根据A.M.Murphy等，J.Am.Chem.Soc.[美国化学学会杂志]，114，3156-3157(1992))、HOBT(HOBT·H2O；0.367g，2.4mmol)、O-苯并三唑-N，N，N，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU；0.91g，2.4mmol)和DIEA(0.55mL，3.2mmol)。使用转臂震荡器，将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过吸滤在烧结玻璃板漏斗上分离出树脂，并用DMF洗(3×50mL)。之后通过使树脂与20％(v/v)乙酸酐/DMF(2×25mL)直接在漏斗中反应(10分钟/洗)，将未反应的氨基基团封端。树脂用DMF(3×50mL)和二氯甲烷(3×50mL)洗，之后在真空下干燥过夜。
步骤B.方法1761a/b和762a的合成。使用Advanced Chem Tech 396多功能肽合成仪，分别由树脂401a(0.24g，0.038mmol)与Fmoc-缬氨酸或Fmoc-t-亮氨酸制备树脂761a和762a，由树脂401b与Fmoc-缬氨酸制备树脂761b。自动循环由用DMF(3×1mL)洗树脂，用25％(v/v)哌啶的DMF(1mL)液脱保护3分钟，接着用新试剂(1mL)脱保护10分钟组成。树脂用DMF(3×1mL)和N-甲基吡咯烷酮(3×1mL)洗。之后将树脂用0.4MFmoc-1-缬氨酸或是Fmoc-t-亮氨酸和0.4M HOBT在N-甲基吡咯烷酮(1mL)中的溶液、0.4M HBTU在N-甲基吡咯烷酮(0.5mL)中的溶液和1.6M DIEA在N-甲基吡咯烷酮(0.35mL)中的溶液酰化，并将反应在室温下震荡2小时。重复酰化步骤。最后，树脂用DMF(3×1mL)洗。
步骤C.方法1.747、748、752、753和755的合成。如步骤B所述，将适宜的羧酸(0.4M的0.4M HOBt/NMP液)偶合到树脂上。将醛从树脂上裂解下来，并用95％TFA/5％水(v/v，1.5mL)在室温下处理30分钟来全局脱保护。树脂用裂解试剂(1mL)洗涤之后，合并的滤液加入至冷的1∶1乙醚∶戊烷(12mL)中，所得的沉淀物通过离心和滗析分离。将所得的沉淀溶解于10％乙腈/90％水/0.1％TFA(15mL)中，并冻干，获得粗制产物，为白色粉末。此化合物通过半制备RP-HPLC，在Rainin MicrosorbTMC18柱(5u，21.4×250mm)上，用含有0.1％ TFA(v/v)的线性乙腈梯度液(10％-60％)以12ml/分钟的速率洗脱45分钟来纯化。含有所需产物的级分收集于一处，并冻干。
步骤C.方法1A.751的合成。根据相似于方法1的程序，用4-(1-芴基甲氧羰基氨基)苯甲酸酰化树脂761a，并重复。如步骤C所描述的方法，去除Fmoc基团，游离的胺用20％(v/v)乙酸酐的DMF(1mL)液和1.6MDIEA的N-甲基吡咯烷酮(0.35mL)液在室温下乙酰化2小时。重复乙酰化步骤。将醛由树脂上裂解掉，给出751。
分析HPLC方法(1)Waters DeltaPak C18，300A(5u，3.9×150mm)。
含0.1％TFA(v/v)的线性乙腈梯度液(10％-60％)，以1mL/分钟的速率历时14分钟。
用下列组合方法制备化合物746-755。
3(S)-(2-((2-(S)-苯甲酰基氨基-3，3-二甲基丁酰基)苄基氨基)乙酰基氨基)-4-氧代丁酸(746)0.7mg(4％)，为白色固体Rt(1)＝11.14分钟(87％)；(M+H)+＝482(C26H31N3O6理论值481.6)。
3(S)-(2-(S)-(苄基-(2-((异喹啉-1-羰基)氨基)-3，3-二甲基丁酰基)氨基)乙酰基氨基)-4-氧代丁酸(747)2.0mg(8％)，为白色固体Rt(1)＝12.27分钟(98％)；(M+H)+＝533(C29H32N4O6理论值532.6)。
3(S)-(2(S)-(苄基-(2-((异喹啉-1-羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)氨基)乙酰基氨基)-4-氧代丁酸(748)9.2mg(38％)，为白色固体Rt(1)＝11.05分钟(98％)；(M+H)+＝519(C28H30N4O6理论值518.6)。
3(S)-(2(S)-(苄基-(2-((萘-1-羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)氨基)乙酰基氨基)-4-氧代丁酸(749)7.9mg(40％)，为白色固体Rt(1)＝11.78分钟(98％)；(M+H)+＝518(C29H31N3O6理论值517.6)。
3(S)-(2-((2(S)-(4-氯苯甲酰基)氨基-3-甲基丁酰基)苄基氨基)乙酰基氨基)-4-氧代丁酸(750)5.9mg(31％)，为白色固体Rt(1)＝11.63分钟(98％)；(M+H)+＝502(C25H28C1N3O6理论值501.5)。
3(S)-(2-((2(S)-(4-乙酰基氨基苯甲酰基)氨基-3-甲基丁酰基)苄基氨基)乙酰基氨基)-4-氧代丁酸(751)3.8mg(19％)，为白色固体Rt(1)＝8.50分钟(98％)；(M+H)+＝525(C27H32N4O7理论值524.6)。
3(S)-(2(S)-(苄基(3-甲基-2-(2-氧代-2-(3，4，5-三甲氧基乙酰基氨基)丁酰基)氨基)乙酰基氨基)-4-氧代丁酸(752)5.0mg(22％)，为白色固体Rt(1)＝11.09分钟(97％)；(M+Na)+＝608(C29H35N3O10理论值585.6)。
3(S)-(2(S)-(苄基(3-甲基-2-(2-氧代-2-苯基乙酰基氨基)丁酰基)氨基)乙酰基氨基)-4-氧代丁酸(753)3.0mg(16％)，为白色固体Rt(1)＝11.02分钟(96％)；(M+Na)+＝518(C26H29N3O7理论值495.5)。
4(R)-(2(S)-((2-苯甲酰基氨基-3-甲基丁酰基)苄基氨基)乙酰基氨基)-5-氧代戊酸(754)3.5mg(19％)，为白色固体Rt(1)＝9.56分钟(94％)；(M+H)+＝482(C26H31N3O6理论值481.6)。
4(R)-(2(S)-(苄基-(2-((异喹啉-1-羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)氨基)乙酰基氨基)-5-氧代戊酸(755)6.0mg(24％)，为白色固体Rt(1)＝10.53分钟(93％)；(M+H)+＝533(C29H32N4O6理论值532.6)。
3(S)-(2-((2(S)-(苯甲酰基)氨基-3-甲基丁酰基)-(1，3-二氢异氮茚-2-基)氨基)乙酰基氨基)-4-氧代丁酸(756)采用与制备化合物724和化合物706相似的方法制备化合物756，除了用2-氨基异二氢氮茚代替2-氨基1，2-二氢化茚(制备方法描述于Eloy，F.，Moussebois，C.，Bull.Soc.Chim.Belg.[比利时化学学会报告]，68，第409-421页(1959))。
3(S)-(2-((2(S)-(苄氧羰基氨基-3-甲基丁酰基)-茚满-2-基)氨基)乙酰基氨基)-4-氧代丁酸(757)采用与制备化合物706相似的方法，由((2(S)-(苄氧羰基-3-甲基丁酰基)-茚满-2-基)氨基)乙酸制备化合物7571H NMR(CD3OD)δ7.4-7.5(m)，7.1-7.2(m)，5.0-5.2(m)，4.8-4.95(dd)，4.5-4.7(m)，3.8-4.4(m)，3.5(m)，2.9-3.4(m)，2.4-2.8(m)，2.0-2.2(m)，0.90-1.15(m).
权利要求
1.一种由下述化学式代表的化合物，
其中n＝0、1或2；R11是
m是1或2；R12和R13独立地选自-R7、-C(O)-R7和-C(O)-N(H)-R7，或是R12和R13一起形成4-8元饱和环状基团；R2是-H或任选由Ar、-OH、-OR7、-C(O)-OH、C(O)-NH2或-OR5取代的-C1-6直链或支链烷基；R7选自-Ar、任选由-Ar取代的-C1-6直链或支链烷基、任选由Ar取代的-C1-6直链或支链链烯基和任选由Ar取代的-C2-6直链或支链炔基；R5选自下列-C(O)-R7，-C(O)-OR9，-C(O)-N(R9)(R10)，-S(O)2-R7，-C(O)C(O)-R7，-R7，和-H；每一Ar是独立地选自下列的环状基团苯基、1-萘基、2-萘基、茚基、奥基、芴基和蒽基，和选自下列的杂环芳基2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基(pyraxolyl)、2-吡唑啉基、吡唑烷基、异噁唑基、异三唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，3-三唑基、1，3，4-噻二唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、1，3，5-三噻烷基、中氮茚基、吲哚基、异氮茚基、3H-吲哚基、二氢吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、1H-吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、喹啉基、1，2，3，4-四氢异喹啉基、异喹啉基、1，2，3，4-四氢异喹啉基、肉啉基、2，3-二氮杂萘基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-二氮杂萘基、哌啶基(peridinyl)、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基和吩噁嗪基，并且所述芳基任选由下列基团单或多取代-F、-Cl、-Br、-I、-OR14、-NO2、-S(O2)-N(R9)(R10)、-C(O)-N(R9)(R10)、-N(H)-C(O)-N(R9)(R10)、-N(R9)(R10)、-C(O)-OR9、-CF3、-OCF3、C1-6直链或支链烷基、1，2-亚甲二氧基、-CN、或-N(H)C(NR9)N(R9)(R10)；每一R14是-H或C1-6直链或支链烷基；每一R9和R10独立地选自-H、-Ar和任选由-Ar取代的C1-5直链或支链烷基；每一R4是任选由-Ar或-W取代的-C1-5直链或支链烷基；W是-OR9、-SR9、-N(H)C(NR9)N(R9)(R10)、-C(O)-OR9或-N(R9)(R10)；R3是-CH2Ar或5至15元非芳族环状基团，它含有1至3个环，且任选含有0至2个桥环氧原子、硫原子或氮原子，其中该环状基团任选与Ar稠合；其前提是，当-Ar是由含有R9或R10的基团取代，而R9或R10又包含一或多个另外的-Ar基团时，则这些-Ar基团不被含有R9或R10的基团取代。
2.根据权利要求1的化合物，其中R5是-C(O)-R7或-C(O)C(O)-R7；每一R4是任选由Ar取代的C1-5直链或支链烷基；m是1；n是1；R3是-CH2Ar或
E是CH或N；每一D独立地是N或C，其中C任选由下列基团取代-OR14、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-S(O)2-N(R9)(R10)、-C(O)-N(R9)(R10)、-N(H)-C(O)-N(R9)(R10)、-N(R9)(R10)、-C(O)-OR9、-CF3、-OCF3、C1-6直链或支链烷基、1，2-亚甲二氧基、-CN、或-N(H)C(NR9)N(R9)(R10)；每一R9和R10独立地选自下列基团-H、-Ar和任选由-Ar取代的-C1-5直链或支链烷基。
3.一种由下述化学式代表的化合物
其中m是1或2；n是0、1或2；R1选自下列基团-CN，-C(O)-H，-C(O)-CH2XR6，-C(O)-CH2F，-C＝N-O-R7，和-C(O)-R8；X选自O、S、S(O)和S(O)2；R6独立地选自-H、-(CH2)p-Ar，和-C(O)-Ar；p是0、1、2或3；R7选自-Ar、任选由-Ar取代的-C1-6直链或支链烷基、任选由Ar取代的-C1-6直链或支链链烯基和任选由Ar取代的-C2-6直链或支链炔基；R8选自下列基团，其中任一环可以任选由下列基团单或多取代-NH2、-C(O)-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-NO2、-CN、-全氟烷基C1-3烷基、-R5、-OR5、-OR7、-N(H)-R5、-N(H)-R7、1，2-亚甲二氧基和-SR7
其中Y独立地选自O和S；每一Ar是一环状基团，独立地选自下列碳环芳基苯基、1-萘基、2-萘基、茚基、奥基、芴基和蒽基，和选自下列的杂环芳基2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基(pyraxolyl)、2-吡唑啉基、吡唑烷基、异噁唑基、异三唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，3-三唑基、1，3，4-噻二唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、1，3，5-三噻烷基、中氮茚基、吲哚基、异氮茚基、3H-吲哚基、二氢吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、1H-吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、喹啉基、1，2，3，4-四氢异喹啉基、异喹啉基、1，2，3，4-四氢异喹啉基、肉啉基、2，3-二氮杂萘基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-二氮杂萘基、哌啶基(peridinyl)、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基和吩噁嗪基，且环状基团任选由下列基团单或多取代-OR14、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-S(O)2-N(R9)(R10)、-C(O)-N(R9)(R10)、-N(H)-C(O)-N(R9)(R10)、-N(R9)(R10)、-C(O)-OR9、-CF3、-OCF3、C1-6直链或支链烷基、1，2-亚甲二氧基、-CN、或-N(H)C(NR9)N(R9)(R10)；每一R9和R10独立地选自-H、-Ar和任选由Ar取代的-C1-5直链或支链烷基；每一R14是-H或C1-6直链或支链烷基；R5选自下列-C(O)-R7，-C(O)-OR9，-C(O)-N(R9)(R10)，-S(O)2-R7，-C(O)C(O)-R7，-R7，和-H；R4是任选由Ar或W取代的-C1-5直链或支链烷基；W是-OR9、-SR9、-N(H)C(NR9)N(R9)(R10)、-C(O)-OR9和-N(R9)(R10)；R3是-CH2Ar或5至15元非芳族环状基团，它含有1至3个环，且任选含有0至2个桥环氧原子、硫原子或氮原子，其中该环状基团任选与Ar稠合；R2是-H、或C1-6直链或支链烷基，其中烷基任选由Ar、-OH、-OR7、-C(O)-OH、C(O)-NH2或-OR5取代；其前提是，当-Ar是由含有R9或R10的基团取代，而R9或R10又包含一或多个另外的-Ar基团时，则这些-Ar基团不被含有R9或R10的基团取代。
4.根据权利要求3的化合物，其中R1是-C(O)-H；R5是-C(O)-R7或-C(O)C(O)-R7；R4是任选由-Ar取代的-C1-5直链或支链烷基；m是1；n是1；R3是-CH2Ar或
E是CH或N；每一D独立地是N或C，其中C任选由下列基团取代-OR14、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-S(O)2-N(R9)(R10)、-C(O)-N(R9)(R10)、-N(H)-C(O)-N(R9)(R10)、-N(R9)(R10)、-C(O)-OR9、-CF3、-OCF3、C1-6直链或支链烷基、1，2-亚甲二氧基、-CN、或-N(H)C(NR9)N(R9)(R10)；每一R9和R10独立地选自下列-H、-Ar和任选由-Ar取代的-C1-5直链或支链烷基。
5.根据权利要求4的化合物，所述的化合物选自
6.根据权利要求3的化合物，其中R1是-C(O)-R8；R5是-C(O)-R7或-C(O)C(O)-R7；R4是任选由-Ar取代的-C1-5直链或支链烷基；m是1；n是1；R3是-CH2Ar或
E是CH或N；每一D独立地是N或C，其中C任选由下列基团取代-OR14、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-S(O)2-N(R9)(R10)、-C(O)-N(R9)(R10)、-N(H)-C(O)-N(R9)(R10)、-N(R9)(R10)、-C(O)-OR9、-CF3、-OCF3、C1-6直链或支链烷基、1，2-亚甲二氧基、-CN、或-N(H)C(NR9)N(R9)(R10)；每一R9和R10独立地选自下列-H、-Ar和任选由-Ar取代的-C1-5直链或支链烷基。
7.根据权利要求6的化合物，所述的化合物选自
8.根据权利要求3的化合物，其中R1是-C(O)-CH2XR6。
9.一种药用组合物，所述的药用组合物包含用于治疗或预防IL-1-介导的疾病有效量的权利要求1-8中任一项的ICE抑制剂和可药用的载体。
10.一种药用组合物，所述的药用组合物包含用于治疗或预防编程性细胞死亡介导的疾病有效量的权利要求1-8中任一项的ICE抑制剂和可药用的载体。
11.根据权利要求9的药用组合物，其中IL-1-介导的疾病是选自下列的炎性疾病骨关节炎、胰腺炎、哮喘和成人呼吸窘迫综合征。
12.根据权利要求11的药用组合物，其中炎性疾病是骨关节炎或急性胰腺炎。
13.根据权利要求9的药用组合物，其中IL-1-介导的疾病是选自下列的自身免疫疾病肾小球性肾炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮病、慢性甲状腺炎、格雷夫斯病、自身免疫胃炎、胰岛素依赖性糖尿病(I型)、自身免疫溶血性贫血、自身免疫中性白细胞减少症、血小板减少症、慢性活动性肝炎、重症肌无力、炎性肠病、节段性回肠炎、牛皮癣和移植物抗宿主疾病。
14.根据权利要求13的药用组合物，其中自身免疫疾病是类风湿性关节炎、炎性肠病、节段性回肠炎或牛皮癣。
15.根据权利要求9的药用组合物，其中IL-1-介导的疾病是骨破坏性疾病，其中该疾病是骨质疏松症或多发性骨髓瘤相关的骨疾病。
16.根据权利要求9的药用组合物，其中IL-1-介导的疾病是选自下列的增生性疾病急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、转移黑素瘤、卡波西肉瘤、多发性骨髓瘤。
17.根据权利要求9的药用组合物，其中IL-1-介导的疾病是选自下列的传染性疾病脓毒症、败血症性休克和志贺菌病。
18.根据权利要求9的药用组合物，其中IL-1-介导的疾病是选自下列的变性或坏死性疾病阿尔茨海默病、帕金森病、大脑缺血和心肌缺血。
19.根据权利要求18的药用组合物，其中变性疾病是阿尔茨海默病。
20.根据权利要求10的药用组合物，其中编程性细胞死亡介导的疾病是选自下列的变性疾病阿尔茨海默病、帕金森病、大脑缺血、心肌缺血、棘肌萎缩、多发性硬化、与AIDS相关的脑炎、与HIV相关的脑炎、衰老、脱发和由于中风引起的神经损害。
21.一种用于抑制ICE介导的功能的药用组合物，所述的药用组合物包含权利要求1-8中任一项的ICE抑制剂和可药用的载体。
22.一种治疗或预防患者的所患疾病的方法，所患的疾病选自IL-1-介导的疾病、编程性细胞死亡介导的疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、增生性疾病、传染性疾病、变性疾病、坏死性疾病、骨关节炎、胰腺炎、哮喘、成人呼吸窘迫综合征、肾小球性肾炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮病、慢性甲状腺炎、格雷夫斯病、自身免疫胃炎、胰岛素依赖性糖尿病(I型)、自身免疫溶血性贫血、自身免疫中性白细胞减少症、血小板减少症、慢性活动性肝炎、重症肌无力、炎性肠病、节段性回肠炎、牛皮癣、移植物抗宿主疾病、骨质疏松症、多发性骨髓瘤相关的骨疾病、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、转移黑素瘤、卡波西肉瘤、多发性骨髓瘤、脓毒症、败血症性休克、志贺菌病、阿尔茨海默病、帕金森病、大脑缺血、心肌缺血、棘肌萎缩、多发性硬化、与AIDS相关的脑炎、与HIV相关的脑炎、衰老、脱发和由于中风引起的神经损害，所述的方法包含向所述的患者施用权利要求9-21中任一项的药用组合物的步骤。
全文摘要
本发明涉及一类新的化合物,它们是白介素－1β转化酶的抑制剂。本发明还涉及包含这些化合物的药用组合物。本发明的这些化合物和药用组合物适合于抑制ICE活性,且因此可以有利地作为对抗白介素－1－和编程性细胞死亡—介导的疾病,包括炎性疾病、自身免疫疾病、增生性疾病、传染性疾病和变性疾病。本发明还涉及抑制ICE活性的方法和使用本发明化合物和组合物用于处理白介素－1介导的疾病的方法。
文档编号A61P1/00GK1207743SQ9619973
公开日1999年2月10日 申请日期1996年12月20日 优先权日1995年12月20日
发明者G·W·比密斯, J·P·杜费, W·H·夫里德曼, J·M·C·格莱克, D·J·利温格斯顿, M·D·穆里肯, M·A·穆科, R·泽尔 申请人:沃泰克斯药物股份有限公司