专利名称：含有s－烷基异硫脲鎓衍生物的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及含磷酸类的S-烷基异硫脲鎓盐类，它们能够作用于动脉血压并具有氧保护活性，还涉及这类化合物在急性和慢性低血压(出血、创伤、休克、中毒)、尤其是急救以及氧中毒方面的用途。
大多数作用于动脉血压的药剂是通过刺激α-肾上腺素受体或者是直接作用于血管壁的内脏肌肉来起作用的。最常用的是拟肾上腺素药如肾上腺素、去甲肾上腺素、脱氧肾上腺素、苯肾上腺素(苯福林)、麻黄碱、乙基麻黄碱等以及多肽类如高血糖素、血管紧张素、苯赖加压素等。
苯福林是大家所熟知的拟肾上腺素药(M.D.Mashkovsky,Medicines，第12版，Moscow.,Medicine,1993，第1部分第303页)，它具有与本发明化合物相关的药物活性。苯福林(1-1-(间-羟基苯基)-2-甲基氨基乙醇盐酸盐)能够选择性刺激α1-肾上腺受体，引起动脉缩窄并且使收缩压和舒张压增加(反射性心动过缓)。实际上苯福林并不具有刺激心脏的作用。不象肾上腺素和去甲肾上腺素，苯福林不是一种儿茶酚胺(它在芳香母核上只含有一个羟基)并且不受儿茶酚酶即对甲基转移酶的影响，所以它更稳定并具有长期作用。苯福林的抗低血压作用通常在一次在血管内注射后大约持续20分钟。
包括苯福林在内的拟肾上腺素药有一些共同的缺点，即当它们增加组织的氧消耗时，引起代谢性酸中毒，引起心率失常(特别是在常规麻醉期间)，并且还对中枢神经系统具有兴奋的影响(O.M.Avakyan，肾上腺素受体功能的药物调节，M.,Medicine,1988，第8页；V.G.Kulinsky,A.N.Kovalevsky，试验性生物药学公报，1984，第9页)。第二次低血压的出现是它们的共同特征。拟肾上腺素药不能矫正肾上腺素阻断剂引起的动脉低血压，并且在代谢性酸中毒时只有轻度的抗低血压作用(Ckortanje,V.I.Mathy,R.Charldorp,Nuanyn-Schmiedeberg in Arch.Pharmacol.,330:3,187-192(1985))。
含有多肽结构的拟肾上腺素药只具有短期作用。为了用它们达到长期作用，将其以灌注液的形式注射(I.M.Autkunson,S.I.Dusting,V.I.Rand,Aust.J.Exp.Biol.Med.,50:847-869(1972))。
在氧中毒的发病机理中，作用于儿茶酚代谢的肾上腺能受体β1和β2起着主要的作用。在动物的氧过多试验中所用的化合物是etyron(溴化S-乙基异硫脲鎓)。在文献中曾描述过在增加氧压力下etyron具有保护的活性(E.A.Mukhin等，高血压药物1983,118-122)。
在现有技术中也曾描述过在含磷酸类的S-烷基异硫脲鎓盐类中的difetur(S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐))具有明显的辐射保护作用并且已经研究了它们的毒理学(P.G.Zherebchenko,Yu.D.Zilber,G.P.Pospekhov等，Radiobiologya,8:582-587(1968)；Zh.A.Goloschapova,T.N.Tuzhilkova,L.I.Mizrakh,Radiobiology,21:521-525(1981))。
本发明的目的是提供一种具有增加动脉血压作用的新药物。此外，本发明的目的还有提供一种具有氧保护活性的新药物。
上述目标的实现是通过使用通式Ⅰ的含磷酸类的S-烷基异硫脲鎓盐类来制备增加动脉血压或保护组织不受氧过多影响的药物
其中R是直链或支链的烷基，该烷基可任选用卤原子取代，而X是来自含磷酸的阴离子。
含磷的S-烷基异硫脲鎓盐可以通过已知的方法制备，例如通过用适当的三烷基磷酸酯(盐)或二烷基磷酸酯(盐)对硫脲烷基化，同时在有机溶剂中加热。
另一方面，本发明涉及增加动脉血压或保护组织不受氧过多影响的药物组合物，它含有有效量的通式Ⅰ的化合物。
本发明还提供了一种增加动脉血压或保护组织不受氧过多影响的方法，它包括给需要这种治疗的哺乳动物服用治疗量的通式Ⅰ化合物。
又一方面，本发明涉及一些新的S-烷基异硫脲鎓衍生物，即，S-甲基异硫脲鎓二甲基磷酸酯(盐)和S-异丁基异硫脲鎓异丁基亚磷酸酯(盐)。本发明还提供了以这些新化合物中至少一种作活性成分的新药物组合物。
术语“烷基”指的是含有1到12个碳原子的饱和烃链，优选1到6个碳原子如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、正己基等。这些烷基也可以含有卤原子。
通式Ⅰ的化合物可以用于与低血压(血压下降)或氧过多(系统中氧过剩)有关或由此引起的许多疾病的治疗。该治疗是通过给患者(人以及非人动物)给药来(ⅰ)预防疾病或紊乱，即，使疾病的临床症状停止而不是发展；(ⅱ)抑制疾病，即阻止临床症状的发展；和/或(ⅲ)消除疾病，即引起临床症状的消退。
术语“有效量”指的是足以能达到治疗效果的剂量。这是依赖于剂型、患者年龄、疾病的程度以及各种自身的其他已知因素所变化的。附图的解释
图1表示以5mg/kg的剂量单独静脉注射S-甲基异硫脲鎓甲基亚磷酸酯(盐)单独静脉注射对动脉血压、心率和呼吸率的影响；图2表示以5mg/kg的剂量单独静脉注射S-甲基异硫脲鎓二甲基磷酸酯(盐)对动脉血压、心率和呼吸率的影响；图3表示以5mg/kg的剂量单独静脉注射S-乙基异硫脲鎓偏磷酸酯(盐)单独静脉注射对动脉血压、心率和呼吸率的影响；图4表示以5mg/kg的剂量单独静脉注射S-乙基异硫脲鎓乙基亚磷酸酯(盐)对动脉血压、心率和呼吸率的影响；图5表示以5mg/kg的剂量单独静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)对动脉血压、心率和呼吸率的影响；图6表示以5mg/kg的剂量单独静脉注射S-丙基异硫脲鎓丙基亚磷酸酯(盐)对动脉血压、心率和呼吸率的影响；图7表示以5mg/kg的剂量单独静脉注射S-异丙基异硫脲鎓偏磷酸酯(盐)对动脉血压、心率和呼吸率的影响；图8表示以5mg/kg的剂量单独静脉注射S-异丙基异硫脲鎓异丙基亚磷酸酯(盐)对动脉血压、心率和呼吸率的影响；图9表示以5mg/kg的剂量单独静脉注射S-丁基异硫脲鎓二丁基磷酸酯(盐)对动脉血压、心率和呼吸率的影响；图10表示以5mg/kg的剂量单独静脉注射S-异丁基异硫脲鎓异丁基亚磷酸酯(盐)对动脉血压、心率和呼吸率的影响；图11表示以不同剂量单独静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)给狗后动脉血压的变化(增长的百分数与原始数据有关)；图12表示以5mg/kg的剂量单独静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)给狗后动脉血压的变化(增长的百分数是相对于原始数据)；和图13表示单独静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)对低血压和正常血压的狗的影响。
用于本发明优选的化合物是S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)(difetur)，它在下列所述的试验中表明是最有活性的化合物(表2-5，图11-13)。该化合物不消极地影响酸碱平衡(表6,7)，不引起第二次低血压(图11-13)，在α-肾上腺阻滞的条件下能够保持其活性(表3)，实际上在代谢酸中毒的情况下都没有丧失它的功效(表4)，并且在出血休克的条件下能够改善系统的血液动力指数(表4)。此外，我们发现在氧保护活性(表15和16)、改善血浆生化指数(表17)和在增加氧压下有效保护肺(表18)方面difetur都胜过etyron。
现已用下列方式发现S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)影响全身血液的动力指数外周血管阻力增加、心搏排血量和中枢血容量增加和左心室工作的改善(表4)。
在休克(中风)条件下(创伤、出血)肌肉内注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)能够在药物缓解住院前的状态(表4)，这是用常规药物所不能实现的。
在文献中描述了S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)具有辐射保护活性(放射学，21:521-525(1981))。但是，按照本发明，正如下列所示的试验证实的，我们发现S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)具有新的活性，并且能够作为药物在手术、创伤、中毒、休克、出血；与腹膜外麻醉有关；神经节阻断剂过量(表5)α-肾上腺阻断剂(表3)、抑制神经剂及麻醉剂过量；以及在肾上腺模拟药是禁忌的或无效的(表6,7)的其他情况下引起的急性动脉低血压的情况下增加动脉血压。我们也发现difetur具有氧保护的活性，由此，能够用作药物来保护组织不受由氧过多所引起的氧中毒条件的损害。
值得注意的是S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)对低血压动物的影响大于对正常血压动物的影响(图12,13)。
通式Ⅰ的化合物开辟了治疗急性和可能是慢性动脉低血压以及对受外伤患者急救情况的新的可能性。
S-烷基异硫脲鎓的含磷盐类可以用不同的方法制成制剂。举例讲有胶囊、片剂和非肠道的注射制剂如肌肉内或静脉内注射剂。但是，也可以使用其他剂型如液体口服剂、栓剂。在紧急情况，可以使用含1％-10％(W/V)活性成分的可注射用制剂的非肠道注射剂。非肠道给药剂量一般是0.1-20mg/kg体重，优选0.2-5mg/kg。在固体剂型中，一般使用大约4到400mg的活性成分的单位剂量。
含有S-烷基异硫脲鎓的含磷衍生物具有较低的毒性(LD50为100-1000mg/kg)。
参考下列一些非限定性的实施例将更详细地说明本发明。实施例A．S-烷基异硫脲鎓的含磷盐类的合成1．S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)把36.6g(0.2M)的磷酸三乙酯和15.2g(0.2M)的硫脲细粉的混合物加热到132-135℃同时搅拌并在该温度保持直到硫脲完全溶解(大约3-5分钟)。继续搅拌的同时停止加热，并把混合物冷却。当反应混合物冷却到50-60℃时，加入40ml的丙酮。在温度逐渐下降时产物结晶开始出现并在3小时内完成。过滤结晶，用10ml丙酮洗涤，并干燥到恒重。分离得到26.6g的S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)粗品并用丙酮重结晶。得到24.6g(47.7％理论含量)的S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)，熔点144-146℃。(按照文献数据，该熔点是145℃(J.B.Parker,1961))。物质含量为99.6％。
元素分析，实测值，％C-32.57,H-7.43,N-10.75,P-11.87,S-12.47。C7H19N2O4PS。理论值，％C-32.56,H-7.36,N-10.85,P-12.01,S-12.40。2．S-异丙基异硫脲鎓异丙基亚磷酸酯(盐)在一个备有搅拌器和带有氯化钙干燥管的冷凝器的三颈烧瓶中把13.7g(0.082M)的亚磷酸二异丙酯和6.2g(0.082M)的硫脲加热到135℃。在加热期间使硫脲溶解并形成了均匀的团块。在该温度加热持续60-75分钟直到反应混合物变得微红。把混合物冷却到40-50℃并倒入50ml丙酮，30分钟后，得到10g(50.8％)所要的产物。结晶后，得到6gS-异丙基异硫脲鎓异丙基亚磷酸酯(盐)，熔点169-171℃。按照文献数据，熔点是164℃(V.V.Orlovsky,B.A.Vovsy，有机化学杂志，39:1259-1260(1969))。3．S-乙基异硫脲鎓偏磷酸酯(盐)把8.65g(0.05M)的二乙基氯代磷酸酯(盐)和3.8gm(0.05M)的硫脲细粉加热到145℃同时搅拌大约1.5小时。把反应混合物在该温度下保持10分钟，冷却，加入乙醇-丙酮(3∶2)，并放置过夜。过滤沉淀，用乙醇-丙酮洗涤并干燥过夜。从含水醇结晶后，得到6.0g(65％)的S-乙基异硫脲鎓偏磷酸酯(盐)，熔点224-225℃。
元素分析(％)C-19.57,H-4.90,P-16.73,S-17.32；C7H19N2O4PS。理论值为(％)C-19.55,H-4.90,P-16.85,S-17.40。
如下所示，该物质也可以用下示的另一方法制备。
搅拌下，把4.25g间磷酸乙酯和3.0g硫脲混合物于1.5小时内加热到145℃，在该温度保持10分钟，然后冷却，并如上所述处理。得到5.0g(6.9％)的S-乙基异硫脲鎓偏磷酸酯(盐)，熔点223-224℃。
用相同方法制备下列混合物S-甲基异硫脲鎓甲基亚磷酸酯(盐)，产率73％，熔点119-120℃。按照文献数据，熔点为120℃(V.V.Orlovsky,1969)；S-甲基异硫脲鎓二甲基磷酸酯(盐)，产率54％；S-乙基异硫脲鎓乙基亚磷酸酯(盐)，产率62％，熔点109-110℃。按照文献数据，熔点为112℃(V.V.Orlovsky,1969)；S-丙基异硫脲鎓丙基亚磷酸酯(盐)，产率40％，熔点99-100℃。按照文献数据，熔点为102℃(V.V.Orlovsky,1969)；S-异丙基异硫脲鎓偏磷酸酯(盐)，产率21％，熔点257-259℃。按照文献数据，熔点为259℃；S-丁基异硫脲鎓丁基磷酸酯(盐)，产率38％，熔点96-98℃。按照文献数据，熔点为98℃(V.V.Orlovsky,1969)；S-异丁基异硫脲鎓异丁基亚磷酸酯(盐)，产率43％，熔点162-164℃。
用IR谱证实所得到化合物的结构所有化合物在γPO1195-1207cm-1、γCN1680-1695cm-1和γNH1568-1590cm-1的区间都具有特征吸收带；UV谱在λMAX-201-203nm和223-225nm处有特征吸收。B．含磷酸的S-烷基异硫脲鎓对动脉血压影响的生物研究对52只麻醉过(以45mg/kg腹膜内注射戊巴比妥钠)的体重为2.8-4.2kg的两种性别的猫进行试验。用水银压力计测定动脉压力；也用ECG进行测定。同时记录呼吸频率。以相对于心脏收缩动脉压(SAP)的初始水平的百分数增长来测定升高血压的作用。观察期为1-3小时；在ECG的基础上计算心率。所得到的结果用图的形式显示在图1-10中并在表1中加以总结。
表1静脉内给予S-烷基异硫脲鎓的含磷衍生物对猫的动脉血压、心血管系统和呼吸频率的影响
S-甲基异硫脲鎓甲基亚磷酸酯(盐)使动脉血压增加了20％。升高血压的作用持续了1小时。该化合物不影响HR(图1)。
S-甲基异硫脲鎓二甲基磷酸酯(盐)是最有活性的化合物之一。它使SAP增加了40％。该化合物增加了呼吸频率(RR)(图2)。
S-乙基异硫脲鎓偏磷酸酯(盐)使动脉血压增加了25mmHg，它是初始水平的15％。(图3)。
S-乙基异硫脲鎓乙基亚磷酸酯(盐)使动脉血压增加了15％。作用期间是1.5小时。该化合物能够引起心动过缓但不影响RR(图4)。
S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)(difetur)是最有活性的化合物之一。使动脉血压增加了20％。升高血压的作用持续了1小时。该化合物不影响HR(图5)。
S-丙基异硫脲鎓丙基亚磷酸酯(盐)使动脉血压增加了24％。升高血压的作用持续了1小时(图6)。
S-异丙基异硫脲鎓偏磷酸酯(盐)缓慢增加SAP。仅在15分钟后观察到了最大作用，但是该作用持续了2小时和更长时间。它不影响RR(图7)。
S-异丙基异硫脲鎓异丙基亚磷酸酯(盐)是最有活性的化合物之一。它使SPA几乎增加了30％，在注射两分钟后就已经达到最大作用并持续了至少1小时。可看到短暂的心动过缓。该化合物不影响RR(图8)。
S-丁基异硫脲鎓二丁基亚磷酸酯(盐)使动脉血压微微增加。升高血压的作用持续了1小时(图9)。
S-异丁基异硫脲鎓异丁基亚磷酸酯(盐)具有中度升高动脉血压的作用并且该作用持续了大约2小时(图10)。
下列试验结果证实了S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)作为影响血压的药物的较高潜力。
用腹膜内给药方法(1-1.2g/kg)进行麻醉。为了测定该制剂的最大作用期间和作用期间，在以5mg/kg的剂量给药前(原始数据)和给药后第2分钟、第15分钟、第30分钟和第60分钟测定血循环的大多数参数。
在下列指数的基础上估计系统的血液动力学动脉血压(AP)、心率(HR)、每分钟的血循环容量(MVC)、心搏动容量(SV)、总的血管周围阻力(PR)和左心室的工作(Alv)。
用水银压力剂测定猫头部左动脉的动脉压。为了防止血液凝固，静脉注射0.2-0.3ml(1000-1500单位)的肝素。按照心电图的R-R间隔计算心率。通过两个通道的心电图进行记录。按照Ramirez A.A.等(1956)计算MVC。用C.G.Wiggers公式(1947)从MVC、AP、中心血容量和HR计算SV、ARV和PR。用Student t-试验对试验中所得到的定量数据进行统计学分析。结果列于表2。
表2单独静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)(5mg/kg)对猫全身血液动力学指数的影响(平均值±SD,n=8)<
>注P值是相对于原始数据。
如表2中所总结的试验结果证实了以5mg/kg的剂量一次静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)能够引起AP的快速增长。在注射后的第2秒，AP相对于初始数值已经增长了41％并且把提高的水平维持较长时间。在第60分钟，AP水平低于第30分钟的水平但还比原始数据高(11％)。特征性AP水平的数值差异在1小时内在统计学上是显著的。AP增长的表现和持续主要取决于PR的增长并在MVC增长上程度较少(在第2分钟的药物活性)(表2)。
在S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)给药后的第2分钟，PR达到初始水平的135％并且在整个试验中维持较高水平。在第60分钟，它比初始水平高58％。这样在注射后血管阻力的总状况增加了(表2)。在药物注射后第2分钟，MVC增加了7％，而在第15分钟和30分钟分别下降了11％和22％。决定这种MVC变化的是药物影响下的变化特征-循环血容量、静脉血返回到心脏的量和造成的心脏的SV。从Alv比初始值超过89％和22％起第2分钟和第15分钟的Alv的增长是暂时的，并且在第30分钟它又返回到初始水平。试验结果表明在把S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)一次静脉注射后升高血压的作用和它持续的时间(长达1小时)主要取决于PR和对MVC增长的较低程度(主要在药物活性的初始期间)。
已知除了高剂量，拟肾上腺素能药不能抑制由肾上腺能阻断剂引起的低血压。这对研究S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)由注射已知的α1-阻断剂即哌唑嗪引起的低血压的影响有益。哌唑嗪以1mg/kg的剂量一次静脉内注射。结果列于表3中。
表3在由哌唑嗪(1mg/kg)引起的急性动脉低血压的背景下一次静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)(5mg/kg)对AP、HF和呼吸频率的影响(平均值±SD,n=6)<
由于哌唑嗪的作用，血管外周阻力实质上下降，结果也影响了AP的水平。在注射哌唑嗪后第5分钟，动脉血压降低了51mm Hg。在这种背景下，注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)在第2分钟就已经使AP增加了29mm Hg。在第15分钟和第30分钟AP的水平就比注射adversuten后第5分钟的AP水平高11.8％和9.4％。没有观察到HR和呼吸运动频率的变化具有显著性统计学意义(除当观察到心这缓时注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)后60分钟)。这样，可以得出结论尽管比没有α1-阻断剂的维持时间较低，在α1-阻断剂的背景下S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)也增加了AP。
选择在3-5分钟期间由45-47％的血循环量组成的猫的急性失血(体重的3.2％)作为与出血性休克非常相近的急性临床状态的试验模型。为了测定最大功效和有效期间，在血流出前和流出后30分钟以及在静脉注射药物后第2分钟、第10分钟、第30分钟和第60分钟，测定系统血循环的参数。结果列于表4中。
表4在出血性休克期间以5mg/kg的剂量一次静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)对系统血液流动指数的影响(平均值±SD,n=6)
注P1-相对于原始数据的P值；P2-相对于血流失的第30分钟所得到的数据的P值。
在对照组(8只猫)中，失血引起AP从140.0±3.9下降到65.0±4mmHg，它是初始水平的46％。失血开始后第30分钟HR增长了18％。MVC从102.8±4.5下降到44.0±5.2ml/分钟，即初始水平的57％。
急性失血开始后第30分钟AP的下降主要是由于MVC的下降引起的，MVC的下降依次取决于心搏动容量的下降(到36％)和中心血容量。这样出血后循环血容量的减少导致了MVC的下降，这是不能用PR和心率的增加所补偿的。
在注射等渗溶液第2分钟的系统血液流动指数稍微区别于急性失血开始后第30分钟时的。但是，在注射1ml氯化钠等渗溶液后第10和第30分钟，系统的血液流动学指数渐渐退化。这样在注射该溶液后第30分钟，AP比流血开始后30分钟下降了13％。HR下降了7％，同时MVC和SV分别下降了11％和8％。Alv下降了一半，同时PR增加了8％。而且由左心室生产力的减小所引起的MVC的下降导致了动物的死亡。
在出血性休克情况下，以5mg/kg的剂量一次静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)能够引起AP的迅速增加。这样注射药物后第2分钟AP增加了88％(相对于对照组中流血后第30分钟的)，并且这种作用能够在整个观察期间保持着。注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)后第2分钟，HR的下降是显著的。后者能够解释为AP的急剧下降所造成的对心脏的影响。S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)对MVC有两个阶段的影响。开始MVC增长19％，随后在注射药物第30分钟和第60分钟下降。但是，应当注意到在对照组中，注射1ml的等渗溶液后在第30分钟和第60分钟也观察到了MVC的相同的下降。SV仅在注射药物后第2分钟增加。Alv实际上在第2分钟和第10分钟增加。PR在整个观察期间都增加。
当分析在S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)的影响下系统血液流动学指数的变化时，可以得出结论该物质在初期由于MVC和HR的增加和在后期由于PR的增加都能使得AP增加。
用猫研究在由已知神经节阻断剂-六甲铵引起的动脉低血压的背景下S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)的影响。以10mg/kg的剂量把六甲铵静脉内注射。用电动的搏动式人工呼吸器进行迷走神经和schiatic神经的刺激，其中电动的搏动式人工呼吸器带有上述阈矩形脉冲电极，该电极有1毫秒的周期、10秒的刺激时间和20脉冲/秒的频率(迷走神经的外周截面)和300脉冲/秒的频率(schiatic神经的中心端)。结果列于表5中。
表5在由六甲铵给药引起的动脉低血压的背景下以5mg/kg的剂量一次静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)对AP、HF的影响(平均值±SD,n=6)
注P1-相对于原始数据的P值；P2-相对于注射六甲铵的第2分钟所得到的数据的P值。
注射六甲铵后2分钟，AP降低46％。注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)后第2分钟就已经使AP增加了61mm Hg，并且在观察期间保持着AP的增加。HR的变化表现为心动过缓，但是，这些变化并不显著。呼吸频率不变化。当注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)时，完全维持了神经节阻断特性，这可被试验所证实，当在第2分钟、第15分钟、第30分钟和第60分钟时反复刺激迷走神经的外周截面和schiatic神经的中心端时不出现AP水平的变化。
可以得出结论，在神经节阻断剂引起低血压时S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)能够迅速恢复AP水平并且维持较长时间。
以5mg/kg的剂量研究S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)对出血性休克中血液酸碱状态(AAS)和气含量的主要指数的影响。用40mg/kg剂量的戊巴比妥钠(nembutal)腹膜内注射来麻醉小鼠。从共同的颈动脉以动物体重的3.2％(大约相应于血循环容量的45-47％)流血来引起失血。流血进行3-5分钟。用Astrup的显微方法研究动脉(PaO2,PaCO2)中氧和二氧化碳的压力特性和混合过的静脉(PvO2,PvCO2)血液、pHa和pH。用cianohemoglobin方法测定血红蛋白(Hb)的含量。用Severignhause规则的帮助来计算碳酸氢根离子的含量/HCO3。在CM-1403-02计算机用Forhtran语言程序进行计算。研究初始状态、急性失血后第30分钟以及注射药物后第2分钟、第10分钟、第30分钟和第60分钟的酸碱平衡和血液气容量的指数。在失血后第30分钟把该物质一次静脉内注射。
在对照组(n=8)中，给猫注射1ml的氯化钠等渗溶液。
试验结果表示在流血30分钟的急性失血的对照组猫动脉血液的酸碱平衡变化有两种特点。七只猫中的五只患有代谢和呼吸的酸中毒，两只患有用呼吸碱中毒抵消的代谢酸中毒。动脉血液的pH值从初始状态的7.313±0.015平均下降到失血开始后第30分钟的7.284±0.072。在流血后的第40分钟和第60分钟，分别记录进一步下降到7.242±0.056和7.152±0.072的pHa。在静脉血液中记录到表示pH的更多下降。这样，在八只猫的七只中，pH下降到了失血后的第30分钟而在一只猫中pH几乎没有变化。在流血后第30分钟、第40分钟和第60分钟pHv从初始状态的7.284±0.011分别下降到7.184±0.028、7.127±0.049和7.081±0.049(P＜0.05)。
急性失血后，动脉和静脉的酸碱平衡代谢指数在整个观察期间下降。在第30分钟、第40分钟和第60分钟相对于初始数值动脉血液中的碳酸氢根离子含量分别减少了25％、27％和40％(P＜0.001)。与此相类似，发现BE从初始状态的6.97±0.70mmol/l下降到失血第30分钟的10.61±0.86(P＜0.01)。进一步从失血开始的第30分钟和第60分钟，该指数分别下降了87.7％和143％。在静脉血液中发现了[HCO3]和[BE]的相同变化。这样失血后的第30分钟，碳酸氢根离子的含量[pHCO3]比对照组低14.6％。
与最初指数相比，碱不足在急性失血后的第30分钟、第40分钟和第60分钟分别增加了55％、99％和130％(P＜0.01)。这样，按照我们的结果，在大量急性失血后的较早阶段酸碱平衡分布的最普通的形式是代谢酸中毒。
急性失血后第30分钟，PaCO2的下降和PvCO2的微微增加是显著的，这导致了与初始水平相比动脉-静脉PCO2梯度的增加。很明显，在急性失血动力学中所观察到梯度下降使肺和组织中气交换的条件显著性恶化，并且造成代谢的急剧增加和呼吸的酸中毒。在对照组中动脉血液氧化的程度非常高，同时静脉的PO2下降。
在试验组中(n=6)，以5mg/kg的剂量注射S-乙基异硫脲二乙基磷酸酯(盐)。
表6证实了在出血性休克的猫中S-乙基异硫脲二乙基磷酸酯(盐)能够纠正失血引起的代谢酸中毒；注射S-乙基异硫脲二乙基磷酸酯(盐)后，动脉血液的pH从流血第30分钟的7.230±0.015分别增加到了第10分钟的7.252±0.018和第30分钟的7.310±0.064。
表6以5mg/kg的剂量一次静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)对出血性休克条件下动脉血液中酸碱平衡和气的组份主要指数的影响(平均值±SD,n=6)<
<p>注P1-是相对于原始数据的P值；P2-是相对于休克的第30分钟所得到的数据的P值。
注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)后第10分钟和30分钟动脉血液的碳酸氢根离子含量分别比初始值增加了5％和16％(表6)。
在混合的静脉血液的酸碱平衡的多数指数中观察到了相似的变化，但是，这些变化在统计学上不具有显著性差异。
也可以推测S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)能够通过从代谢最终产物尤其是乳酸释放有机物来影响血液酸碱平衡的主要指数，这是由于其更活跃地参与Cori和Crebs循环，支持氧化和磷化的结合。
注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)后第10分钟和30分钟动脉血液和静脉血液中二氧化碳的部分压力比失血后第30分钟的下降。这样，在第10分钟，它下降了9％(表6，表7)。在S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)的影响下动脉血液和静脉血液中氧的部分压力有不同的变化在动脉血液中它有增加的趋势而在静脉血液中它有下降的趋势。但是，这些变化在统计学上不具有显著性差异。
表7以5mg/kg的剂量一次静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)对出血性休克条件下混合的静脉血液中酸碱平衡和气的组份主要指数的影响(平均值±SD,n=6)
注P1-是相对于原始数据的P值；P2-是相对于休克的第30分钟所得到的数据的P值。
在下列试验中，研究S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)对狗心血管系统的影响。用两种方法测定AP用piezosensor(Ugo Bazile压力计)记录尾动脉上的AP并用填充肝素的导尿管插入股动脉。以三个标准分支记录心电图。
图11表示了静脉注射该制剂的理想剂量。以1mg/kg(n=5)、5mg/kg(n=18)和100mg/kg(n=8)的剂量注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)。如图11所示，S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)在所用的全部剂量都有一种显著的升高血压作用，5-10mg/kg可能是理想的剂量。在上述剂量心电图未显示任何病理变化。心动过缓的作用被观察到，在注射后1分钟就已经开始，且达到平均初始水平的25-30％。在试验开列后第30-40分钟观察到了最大的心动过缓值并且维持到观察的第60分钟。
注意到低动脉血压水平(低血压)的狗中升高血压反应的表现程度高于最初高动脉血压水平(高血压)的狗。由于这种事实，分别对正常血压和低血压进行试验。
图12和13表示了注射不同剂量的S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)的AP指数。在这些图中的数据证实了对低动脉血压的狗升高血压作用是较强的并且是较长的。静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)的理想剂量为5-10mg/kg。
在慢性和急性试验中评估S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)对身体组成的作用。在F1(C57B1×CBA)系的小鼠进行这些试验并且在以100mg/kg(在慢性试验中)和500mg/kg(在急性试验中)的剂量一次静脉内注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)后进行生化试验。结果列于表8和9中加以总结。
表8以500mg/kg的剂量一次静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)对小鼠血浆的生化指数影响(平均值±SD,n=5)
注P值指相对于原始数据的差异。
表9以100mg/kg的剂量一次静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)对小鼠血浆生化指数的影响(平均值±SD,n=5)
注P1-相对于原始数据的P值。
在急性试验中，取给药后30、60和75分钟的血液。在慢性试验中(持续30天)，每天注射1小时后检测血液。研究时间为1、7、14和21天。用常规方法测定小鼠血浆中总蛋白、总胆固醇和葡萄糖的浓度。用biuret方法测定总蛋白，用Ilke方法测定总胆固醇，用葡萄糖氧化酶方法测定葡萄糖。
快速斩首后获取小鼠血液。在同一季节、同一天的相同时间取样试验物质。
将血浆样品装入离心试管中，放入恒温器30-40分钟；用针画出血块的轮廓，然后将它放入4℃的冰箱1小时。冷却后，把它以3000RPM离心10-15分钟。取没有溶血迹象的血浆放入一只干净的试管中。用色谱测量器得到所有血液生化特征的定量指数。构建测定总蛋白和胆固醇用的Calibration曲线。
如图8所示，以500mg/kg的剂量注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)后30分钟，观察到总蛋白、胆固醇和葡萄糖浓度的增长，它们随后具有正常化的趋向。
在慢性试验(以100mg/kg的剂量)中，显示出所研究的参数波动没有超出生理波动的范围并且在生化指数上没有引起可观察到的变化(表9)。
在对狗的试验中，以每天10mg/kg的剂量静脉注射10％的S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)溶液后机体的功能状况可以用生化试验评估。在当天的相同时间进行该试验。在把该制剂给药后连续3天和注射后第4天、第5天和第10天检测血液1小时。用常规方法测定狗血浆中总蛋白、白蛋白、球蛋白、总胆固醇和葡萄糖的浓度。用biureth方法测定总蛋白的含量，用Ilke方法总胆固醇，用葡萄糖-氧化酶方法测定葡萄糖。结果总结在表10-14。
表10每天静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)(3×10mg/kg)对狗血浆中总蛋白浓度的影响
表11每天静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)(3×10mg/kg)对狗血浆中白蛋白含量(g/l)的影响
<p>表12每天静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)(3×10mg/kg)对狗血浆中球蛋白含量(g/l)的作用
表13每天静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)(3×10mg/kg)对狗血浆中总胆固醇含量(mmol/l)的影响
表14每天静脉注射S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)(3×10mg/kg)对狗血浆中葡萄糖含量(mmol/l)的影响<
把该制剂给药后总蛋白的含量有波状起伏，在第4天和第5天有下降的趋势。白蛋白和球蛋白的含量也有波状变化。总胆固醇和葡萄糖的含量有轻微的起伏，但没有超出健康狗的波动范围。
在3天的试验中测定全身毒性和生化参数，在该试验中每天以10mg/kg的剂量静脉注射10％的该制剂溶液。以上述试验的结果为基础，可能得出结论，该制剂对健康狗不具有显著性作用；在试验得出的参数和原始数据之间没有发现毒性的或任何偏离的迹象；也没有发现动物对静脉注射该制剂的个体敏感性。
动物(鼠、狗)内部器官暴露于平均致死和亚致死剂量的S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)的病理试验，得出下列结果该制剂能够在动脉和静脉床的小和中等血管、主要在肝脏、心肌、肺、脾脏的多血症以及早期阶段较小程度肾脏中以差距扩大和多血症形式引起血液动力学分布的中等显著迹象。血液循环的分布具有可逆特性并且按照一定规律，它在该制剂不再有任何作用的7-10天内正常化。在这些试验中没有观察到显著的内部器官的炎症、营养缺乏或细胞坏死的变化。在一些情况下，肝脏的补偿-适应反应(Kupfer细胞增生、肝细胞胞质核的血红蛋白过多)的迹象是显著的。C．与etyron比较S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)(difetur)的氧保护活性的生物学研究在高压室《Mana-2》增加压力下把动物暴露于氧来治疗1岁以上的婴儿，其用于调节动物试验。该高压室设计为能够产生多达3个大气压的额外压力并且能够从外面观察动物的行为。
对F1(CBAx57B1)小鼠系的雄性和Wistar大鼠系的雄性进行该试验。把动物放在塑料盒中的高压室中并把空气用氧气替代。压缩-解压缩时间为10分钟。暴露于3个大气压的氧气压力2小时的动物仅引起它们的一些运动性的增加。而且处在这些条件下的大鼠和小鼠造成运动活性的下降、兴奋的短期内窒息以及痉挛。2.5-3个小时后记录一些动物的死亡，4小时后50％,5小时后75％的小鼠和100％的大鼠死亡。
当研究difetur和etyron的影响时，如果没有其它详细说明把动物暴露在3个大气压的氧气压下5小时。在这段时间之前5-10分钟注射该制剂。试验结果显示在表15中。
这段时间后，把死亡动物进行尸体解剖，取出它们的肺，确定指数《肺重g/体重g×100》(即肺的系数)。
这种高压条件导致了小鼠肺的系数增加到1.43±0.08和大鼠肺的系数增加到达1.45±0.08。主要以5、10和20mg/kg的剂量注射difetur引起肺的系数分别下降到0.95±0.09、0.97±0.09和0.88±0.08。这样，difetur表现出了显著性的保护肺组织的功效。
在高压室C-203相似地对大白鼠在6个大气压下进行氧毒性作用的试验50分钟。以20mg/kg剂量腹膜内注射该制剂。在对照组中，腹膜内注射2ml/kg的水作注射液。解压后，把大鼠的头切断并且测定血浆中葡萄糖的含量、尿素的含量和尿素氮的含量，以及指数《肺重g/体重g×100》(即肺的系数)。结果总结在表16至18中。
表16中显示6个大气压的氧压引起病例的90.5％痉挛；最终状态(旁边位置)-占病例的40.1％；窒息的占53.7％并且死亡的动物占26.9％。氧中毒伴随着血浆中葡萄糖、血红蛋白、尿素氮和尿素含量的增加。S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)(difetur)实际上对血红蛋白不起作用但能够显著改善其它指数。与未处理过的动物相比，该制剂显著性降低了《肺重g/体重g×100》的指数。应当注意到difetur完全预防了动物的死亡并且降低了氧中毒的其它可见结果。
表15S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)(difetur)和etyron对暴露在3个大气压的氧压下的动物的影响<
>表16S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)和etyron对暴露在6个大气压的氧压下的大鼠的影响<
<p>表17S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)对血浆生化指数的影响
表18S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)对《肺重g/体重g×100》的指数的影响
D．S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯(盐)(difetur)的临床试验(体内)在Moldova的第一人民医院的全身麻醉部进行该试验。该临床试验的目的是评估相对于已知的肾上腺素药物麻黄素，difetur作为升高血压药物的能力。在100名年龄在20到80之间的患者在脊柱硬膜外麻醉下经受泌尿科手术进行该试验。difetur出现下列情况1．在硬膜外麻醉之前把difetur给药能够预防患者血压的下降。当通过输注的方式缓慢给药时，能够最好实现它的给药。2．difetur的升高血压作用能够持续40-60分钟。在90分钟内血压达到初始值。3．没有观察到第二次高血压的病例。4．没有观察到血液循环或呼吸的过敏型的并发症。5．difetur给药后，患者的血压保持稳定。
就上述结果可以看到，可以估计difetur(S-乙基异琉脲二乙基磷酸酯(盐))是一种具有潜力的升高血压的药物，它对动脉血压具有快速和长效作用。当在硬膜外麻醉前提供difetur时，它改善和校正血循环的损伤。
权利要求
1．通式为Ⅰ的化合物在制备用于增加动脉血压或在氧过多状态下保护组织的药剂方面的用途
其中R是直链或支链烷基，任选被卤原子取代，X是源于含磷酸的阴离子。
2．按照权利要求1所述的用途，其中通式Ⅰ的化合物选自于下列组中S-甲基异硫鎓脲甲基亚磷酸酯；S-甲基异硫脲鎓二甲基磷酸酯；S-乙基异硫脲鎓甲基间磷酸酯；S-乙基异硫脲鎓乙基亚磷酸酯；S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯；S-丙基异硫脲鎓丙基亚磷酸酯；S-异丙基异硫脲鎓丙基间磷酸酯；S-异丙基异硫脲鎓异丙基亚磷酸酯；S-丁基异硫脲鎓二丁基磷酸酯；和S-异丁基异硫脲鎓异丁基亚磷酸酯。
3．按照权利要求1或2所述的用途，制备含有大约1％和大约10％之间的通式Ⅰ的活性化合物的注射药剂。
4．按照权利要求1-3中任一所述的用途，制备单位剂量大约4到大约400mg之间的通式Ⅰ的活性化合物的注射药剂。
5．一种增加动脉血压的药物组合物，它含义有效量的权利要求1中所限定的通式Ⅰ的化合物。
6．按照权利要求5所述的药物组合物，其中通式Ⅰ的化合物选自于下列组中S-甲基异硫脲鎓甲基亚磷酸酯；S-甲基异硫脲鎓二甲基磷酸酯；S-乙基异硫脲鎓甲基间磷酸酯；S-乙基异硫脲鎓乙基亚磷酸酯；S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯；S-丙基异硫脲鎓丙基亚磷酸酯；S-异丙基异硫脲鎓丙基间磷酸酯；S-异丙基异硫脲鎓异丙基亚磷酸酯；S-丁基异硫脲鎓二丁基磷酸酯；和S-异丁基异硫脲鎓异丁基亚磷酸酯。
7．按照权利要求5所述的药物组合物，其中通式Ⅰ的化合物为S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯。
8．按照权利要求5所述的药物组合物，其中通式Ⅰ的化合物为S-异丙基异硫脲鎓异丙基亚磷酸酯。
9．按照权利要求5-8中任一所述的用于急救的药物组合物，其中该组合物是通式为Ⅰ的注射溶液形式。
10．按照权利要求9所述的药物组合物，其中该溶液含有大约1％和大约10％之间的通式Ⅰ的活性化合物。
11．按照权利要求5-8中任一所述的药物组合物，其中该组合物是片剂或胶囊。
12．按照权利要求10所述的药物组合物，给药剂型的剂量为大约0.1mg/kg和大约20mg/kg之间。
13．一种权利要求1所限定的通式Ⅰ的化合物，它可用作增加动脉血压或保护组织不受氧过多危害的药剂。
14．按照权利要求13所述的化合物，是S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯。
15．按照权利要求13所述的化合物，是S-异丙基异硫脲鎓异丙基亚磷酸酯。
16．权利要求1中通式Ⅰ的化合物，是S-甲基异硫脲鎓二甲基磷酸酯或S-异丁基异硫脲鎓异丁基亚磷酸酯。
17．一种药物组合物，它含有有效量的如权利要求16所定义的通式Ⅰ的化合物。
18．一种增加动脉血压或保护组织不受氧过多危害的方法，它包括给需要这种治疗的哺乳动物服用治疗有效量的权利要求1中所给出的通式Ⅰ的化合物。
19．按照权利要求18所述的方法，它可以治疗选自于下列组中的疾病或紊乱由于手术干扰引起的急性动脉张力减退、创伤或中毒、氧中毒、中风状况、出血、由硬膜外麻醉造成的张力减退和类肾上腺素能作用是相反指示或无效的状况。
20．按照权利要求18或19所述的方法，其中通式Ⅰ的化合物选自于S-甲基异硫脲鎓甲基亚磷酸酯；S-甲基异硫脲鎓二甲基磷酸酯；S-乙基异硫脲鎓甲基间磷酸酯；S-乙基异硫脲鎓乙基亚磷酸酯；S-乙基异硫脲鎓二乙基磷酸酯；S-丙基异硫脲鎓丙基亚磷酸酯；S-异丙基异硫脲鎓丙基间磷酸酯；S-异丙基异硫脲鎓异丙基亚磷酸酯；S-丁基异硫脲鎓二丁基磷酸酯；和S-异丁基异硫脲鎓异丁基亚磷酸酯。
21．权利要求18-20任一的方法，其中活性化合物以01mg/kg至20mg/kg的剂量给予。
全文摘要
本发明涉及含磷酸类的S－烷基异硫脲鎓盐类,它包括几个新化合物,它们可用作增加动脉血压或保护组织不受氧过多危害的药剂。这些化合物能够用于治疗急性低血压如休克状态、慢性动脉低血压或氧中毒。
文档编号C07F9/00GK1234737SQ97199137
公开日1999年11月10日 申请日期1997年9月25日 优先权日1996年9月26日
发明者I·L·米滋塔克, I·V·吉卡伟, V·V·滋纳门斯基, V·E·阿扎马斯特斯夫, B·L·沙加洛, V·柯夫顿, H·V·加萧恩斯基, V·V·达楚克, G·M·科切特克瓦, I·G·伯达里瓦, A·C·特克霍瓦 申请人:美迪特药物有限公司