血管生成抑制剂的制作方法

专利名称：血管生成抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有RGD模拟活性的非肽化合物，也涉及具有RGD模拟活性的非肽化合物的合成和生物学活性。尤其是涉及硝基芳基的RGD模拟物及它们的合成和生物活性。
背景技术：
整合蛋白是一类促进细胞-细胞和细胞-间质附着的胞外蛋白质(Cheresh，D.A.；Mecham.R.P.Eds.；Academic PressNew York，1994；Stromblad，S.；Cheresh，D.A.Chem.Bio.1996，3，881)。这些重要的生物学目标物是由α-亚基和更小的β-亚基组成的膜结合杂二聚糖蛋白。配体结合的相对亲合力和特异性可通过不同α-和β-亚基的特殊组合确定。在这些受体家族的成员中，αIIbβ3、α5β1、αvβ3和αvβ5研究得最多。与这些整合蛋白结合的许多天然配体，如粘连蛋白(与α5β1结合)、纤维蛋白原(与αIIbβ3结合)和晶体蛋白(与αvβ3结合)，在其天然序列中包含主要肽序列Arg-Gly-Asp(RGD)，该序列被多数整合蛋白认可。对于抑制血小板聚集，αIIbβ3已经显示出是一个优良的目标物，一些资料已经公开了包含肽和非肽结构的有效结合剂的设计和合成(Ojima et al.Bioorg.Med.Chem.，1995，337；Engleman et al.Ann.Rep.Med.Chem.1996，31，191)。
在血管生成过程中，αvβ3和αvβ5的功能已经显示出是致命的。Ceresh及其同事已经表明，这些整合蛋白通过抗体或环肽对含RGD配体的结合的体内抑制影响血管生成并诱导肿瘤消退(Brooks et al.Science 1994 et al.Rosenfeld et al.Cell 1994，79，1157)。除了对血管生成适当之外，人们也已公知αvβ3在调节破骨细胞与骨基质的附着及在移植平滑肌细胞中起着重要的作用。
由此αvβ3的拮抗剂被预想成治疗各种疾病(如糖尿病性视网膜病、癌症、骨质疏松症和再狭窄)的有效治疗剂(Van der Pluijm etal.Bone Mineral Res.1994，9，1021；Helfrich et al.J.BoneMineral Res.1992，7，335；Horton et al.Exp.Cell Res.1991，195，368；Robey et al.Ann.Rep.Med.Chem.1993，28，227；Choiet al.Surgery 1994，19，125；Matsuno et al.Circulation 1994，90，2203；Hammes et al.Nature Med.1996，2，529；Friedlanderet al.Proc.Natl.Acad.Sci.，USA 1996，93，9764)。
Kessler et al.报道了αvβ3的第一小分子拮抗剂(实施例1，

图1；Gurrath et al.Eur.J.Biochem.1992，210，911；Mulleret al.Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1992，31，326；Aumailleyet al.FEBS Lett.1991，291，50；Pfaff et al.J.Bio.Chem.1994，269，20233；Haubner et al.J.Am.Chem.Soc.1996，118，7461)。接着，来自Dupont-Merck(实施例2，图1)和SmithKlineBeecham(SKB)(实施例3，图1)出版了他们在该领域的研究成果。另外，其它含RGD的环肽4和5(图1)也分别被Burgess et al.和Goodman et al.合成出来了，它们显示出很活跃(Bach et al.J.Am.Chem.Soc.1996，118，293；Peishoff et al.J.Med.Chem.1992，35，3962；Burgess et al.J.Med.Chem.1996，39，4520；Tranet al.Bioorg.Med.Chem.Lett.1997，7，997)。
最近，许多研究小组报道他们的研究成果，对αvβ3结构具有高亲合力的配体明显地改变了传统的肽结构(实施例6至9，图2)。这些αvβ3结构包含中心支架(如苯、苯并二氮类或脲骨架)，带有羧酸盐和胍基基团的附属物与中心支架相连(Duggan et al.Abstracts of Papers，21th ACS National Meeting，New Orleans，LA，March 24-28，1996；American Chemical SocietyWashington，DC，1996，MEDI 234；Keenan et al.J.Med.Chem.1997，40，2289；Corbett et al.Bioorg.Med.Chem.Lett.1997，7，1371；Gadeket al.Abstracts of Papers，21th ACS National Meeting，NewOr1eans，LA，March 24-28，1996；American Chemical SocietyWashington，DC，1996，MEDI 235；Hirschmann et al.J.Am.Chem.Soc.1996，115，12550)。
人们所需要的就是合成可使用的RGD模拟物，该模拟物具有体内稳定性且对各种整合蛋白目标物具有高活性和选择性；另外就是研制出制备这类化合物的有效通用方法。
发明概要本发明涉及设计、化学合成和生物学评价一系列含硝基芳基的RGD模拟物。更具体地，本发明涉及将新的硝基芳基体系与1998年4月21日出版的美国专利5,741,796中公开的芳基醚/α-氨基酸/胍类结构相结合的化合物，即“Merck化合物”，上述专利文献在此引作参考。
本发明一方面涉及由下列通式表示的RGD模拟物 在上述结构中，R1选自下列基团 其中X选自硫、-NH-和氧。R2选自-CO2-叔丁基、-CO-芳基和-SO2-芳基。优选的芳基包括苯基、1-萘基和2-萘基。优选的R2为-SO2-芳基。优选的RGD模拟物有下列结构表示 其它优选的RGD模拟物有下列一组结构式表示 本发明另一方面涉及制备上述RGD模拟物的方法。首先提供由下列结构式表示的含有与硝基芳基环共价相连的氟基团的硝基芳基前体 在上述结构中，R3为酸保护基团。然后，通过亲核芳族取代，利用含被护胍基团的亲核试剂取代氟基团，生成被护RGD模拟物。最后，利用酸将被护RGD模拟物脱保护。
本发明的另一方面涉及由下列结构式表示的RGD模拟物 在上述结构中，R2选自-CO2-叔丁基和-SO2-芳基。优选的芳基包括苯基、1-萘基和2-萘基。
为了确定结合选择性，本发明测试了上述RGD模拟物对各种整合蛋白(αvβ3、αIIbβ3和αvβ5)抑制细胞附着的能力。选择的化合物还在CAM(小鸡绒膜尿囊膜)测定中测试了其体内抑制血管生成的能力。所有化合物均被证实具有对上述目标物具有抑制活性和选择性，与其作为血管生成抑制剂的活性相一致。
本发明另一方面涉及对αIIbβ3调节的细胞附着与αvβ3调节的细胞附着的差示抑制。表达αIIbβ3的细胞与含有选择RGD模拟物的溶液相接触。溶液中这类RGD模拟物的浓度足以抑制αIIbβ3调节的细胞附着。结果被抑制的αIIbβ3调节的细胞附着至少大约为αvβ3调节的细胞附着的100倍。可用于本发明这一方面的优选RGD模拟物如下 附图描述图1说明了基于RGD肽序列的αvβ3拮抗剂的选择结构。
图2说明了具有高αvβ3亲合力的选择非肽RGD模拟物。
图3说明了作为RGD模拟物和苯并咪唑22的目标硝基芳基醚(10-21)。
图4说明了硝基芳基醚RGD模拟物的一般结构和反合成分析。
图5说明了氨基酯26、29a和29b在下列试剂和条件下的合成(a)1.1当量Boc2O，1.0当量Na2CO3，1，4-二噁烷，25℃，88％；(b)i)20％Cs2CO3水溶液，H2O∶MeOH(1∶2.5)，25℃，4小时，100％，ii)1.1当量BnBr，DMF，25℃，14小时，88％；(c)1.5当量PhI(OCOCF3)2，DMF∶H2O(1∶1)，2.0当量吡啶，25℃，3.5小时，41％；(d)1.1当量ArSO2Cl，2.25当量NaOH，二噁烷∶H2O(1∶2)，0至25℃，3小时，[27a为71％，27b为66％]；(e)1.3当量Br2，9.2当量NaOH，H2O，0至99℃，[28a为75％，28b为81％]；(f)异丁烯，2.8当量浓H2SO4，DME，-78至25℃，48小时，[29a为55％，29b为51％]。DME＝二甲氧基乙烷；DMF＝二甲基甲酰胺；pH＝苯基；2-萘基。
图6说明了在下列试剂和条件下合成化合物10-13(a)5.0当量MeC(OMe)3，PhMe，80℃，8小时，98％；(b)1.1当量N3(CH2)2OTBS，0.1当量TBAF，4 MS，DMF，25℃，4小时，73％；(c)2.0当量LiOH·H2O，3∶1 二噁烷∶H2O(3∶1)，25℃，4小时，99％；(d)1.0当量DCC，0.2当量4-DMAP，CH2Cl2，25℃，4小时，82％；(e)50％TFA于CH2Cl2溶液，25℃，2小时，84％；(f)1.1当量PhSO2Cl，或1-Naphso2cl，1.3当量i-Pr2NEt，CH2Cl2，25℃，4小时，38a(78％)或38b(57％)；(g)2.0当量Ph3P，44当量H2O，THF，25℃，12小时，80％，大约1∶1 35a∶35b；80％，大约1∶1 39a∶41a；81％，大约1∶1 39b∶41b；(h)2.0当量LiOH·H2O，THF∶H2O(3∶1)，25℃，4小时，93-99％ 36ab、40ab、42a；(i)1.1当量1H-吡唑-1-羧基脒·HCl，1.1当量i-Pr2NEt，DMF，25℃，16小时，13-15％ 10、11、13；50℃，16小时，5％ 12，在RP-HPLC之后。TFA＝三氟乙酸；TBAF＝四正丁基氟化铵；DDC＝1，3-二环己基碳化二亚胺。
图7说明了在下列试剂和条件下合成胍衍生物51-56(a)1.0当量BtBMTP，2.0当量Et3N，1.0当量HgCl2，DMF，25℃，4小时，98％；(b)1.0当量BtBMTP，DMF，25℃，14小时，95％；(c)1.0当量BtBCT，DMF，25℃，14小时，60％；(d)0.2当量BtBMTP，0.4当量Et3N，0.2当量HgCl2，DMF，25℃，4小时，51％；(e)0.66当量o-NH2C6H4NH2，5.5N HCl水溶液，回流，24小时，73％；(f)1.0当量DmPD·HBr，iPr2NEt，DMF，25℃，11小时，51％。Boc＝叔丁氧基羰基；BtBCT＝N，N′-二-叔丁氧基羰基硫脲；BtBMTP＝1，3-二(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫假脲；DmPD·HBr＝2-(3，5-二甲基吡唑基)-4，5-脱氢咪唑氢溴化物。
图8说明了在下列试剂和条件下合成化合物11和14-19(a)1.2当量(COCl)2，PhH，DMF，0℃，6小时，99％；(b)1.0当量29a或29b，1.2当量Et3N，CH2Cl2，0℃，2小时，58(98％)或59(96％)；(c)对于602.2当量NaH，2.2当量51，DMF，25℃，8小时，66％；对于634.0当量NaH，1.2当量51，DMF，25℃，4小时，69％；(d)1.1当量53，DMF，25℃，4小时，73％；对于641.9当量53，NMP，25℃，99％；(e)对于652.2当量NaH，2.5当量54，DMF，25℃，12小时，23％；(f)1.1当量52，DMF，25℃，6小时，83％；对于662.0当量52，DMF，25℃，20小时，99％；(g)50％TFA于CH2Cl2，25℃，30分钟，90-99％ 11、14-19，在RP-HPLC之后。Boc＝叔丁氧基羰基；TFA＝三氟乙酸；NMP＝N-甲基-2-吡咯烷酮；DMF＝二甲基甲酰胺。
图9说明了在下列试剂和条件下合成化合物20和21(a)1.0当量55，2.2当量Et3N，DMF，25℃，16小时，92％；(b)50％ TFA于CH2Cl2中，25℃，4小时，97％；(c)1.0当量56，2.2当量Et3N，DMF，12小时，120％(粗收率)；(d)50％ TFA于CH2Cl2中，25℃，4小时，83％，在RP-HPLC之后。TFA＝三氟乙酸；DMF＝二甲基甲酰胺。
图10说明了在下列试剂和条件下合成化合物22(a)NH3，DMF，25℃，5小时，93％；(b)10％ Pd/C，H2，MeOH，25℃，8小时，90％；(c)1.1当量PhNCS，EtOH，14小时，69％；(d)1.0当量HgCl2，1.0当量Et3N，DMF，4小时，81％；(e)50％TFA于CH2Cl2中，30分钟，88％(收率)，在RP-HPLC之后。TFA＝三氟乙酸；DMF＝二甲基甲酰胺。
图11表示汇总数据，表明硝基芳基醚对与RGD相关的配体和整合蛋白的相互作用。该图表示了配体结合一半最大抑制所需的浓度(IC50)。为了参考，包括了肽GRGDSPK和化合物1。通过对αvβ3的IC50，储存了数据。‘cQ’值表示NPE相对于化合物1的活性。‘＞’表示IC50没有达到测试的最大浓度10μM。
图12表示汇总数据，表明硝基芳基醚对与RGD相关的细胞和静止配体附着的作用。该图表示了配体结合一半最大抑制所需的浓度(IC50)。在存在这里所描述的本发明硝基芳基醚的条件下，允许25000个细胞附着于静止配体。图12表示了在一半最大抑制细胞附着所得到的浓度(IC50)。通过对αvβ3的IC50(由低到高)，储存了数据。
详细描述实施例1非肽整合蛋白拮抗剂的设计、合成和生物学评价在该实施例中，我们描述了一系列含硝基芳基RGD模拟物的设计、化学合成和生物学评价。图3显示了目标化合物(10-22)。导致其设计的考虑包括(a)指向胍/芳基磺酰胺官能团的重要性的Merck发现(Duggan et al.Abstracts of Papers，211thACSNational Meeting，New Orleans，LA，March 24-28，1996；AmericanChemical SocietyWashington，DC，1996，MEDI 234)；以及(b)正如图4所示，容易从o-硝基-芳基氟化物得到这类结构。设计的分子属于通式(I)结构(图4)，该分子可通过偶合中心硝基氟代芳族系II和片断III(亲核试剂)及IV(氨基酸成分)而衍生。
对于合成化合物10-22(图3)，需要氨基酸衍生物26、29a和29b。这些中间体可由图5所示的L-天冬酰胺酸(23)得到。由此，在标准条件下将23转化成Boc衍生物(24，88％)可在生成苯甲酯(Cs2CO3-BnBr)而得到25(收率88％)之后进行。利用PhI(OCOCF3)2还原伯酰胺，可得到衍生物26，收率为41％。磺酰胺29a和29b可通过下述方法制得磺酰化氨基酸，得到27a，接着进行Hoffmann重组，利用异丁烯酯化所得氨基酸(28a和28b)(图5)。
图6概述了制备化合物10-13的初始方法。由此，在80℃下，利用原乙酸三甲酯处理，将4-氟-o-硝基苯甲酸(30)转化成其甲酯(31，98％)，然后，在催化剂量TBAF存在下，于DMF中与N3(CH2)2OTBS反应，结果生成化合物32(73％；收率不是最佳)。皂化32(LiOH，收率为99％)，得到羧酸33，在存在DCC和4-DMAP条件下，利用积木块26浓缩羧酸33，得到主要中间体34(收率为82％)。为了合成10，在存在H2O条件下，利用Ph3P还原化合物34，得到胺35a以及重组产物35b(合并收率为80％)，其中侧链杂原子具有互换位置(通过内部亲核攻击，参见结构35a)。当放置在环境温度下时，伯胺35a经历着定量转变成伯醇36b。但是，通过碱性水解(LiOH)和脒基化反应(1H-吡唑-1-羧基脒·HCl)，可迅速处理化合物，以低收率获得目标化合物10(在RP-HPLC纯化后收率为15％)。
为了合成磺酰胺化合物11-13，常用中间体34脱保护(TFA，84％)，无约束的胺(37)与适当得磺酰氯反应，得到化合物38a(78％)和38b(57％)。利用Ph3P-H2O还原叠氮官能团38a和38b，再得到相应伯胺(39a和39b)及其重组伯醇(41a和41b)，总收率为80％。碱性水解39a和39b，生成相应的羧酸(40a和40b，收率为93-99％)，如上文进行脒基化反应，分别得到所需的化合物11和13(收率为13-15％)。类似地，水解41a(LiOH，收率为96％)，接着进行脒基化反应，通过化合物42以低收率得到化合物12。
在还原侧链叠氮基团过程中观察到的重组可引导我们探求合成目标硝基芳基醚化合物的另一种方法。根据新的计划，包含完全保护胍部分的亲核试样可在中心硝基芳基体系中取代氟化物。为此，亲核试剂51-56(Poss et al.Tetrahedron Lett.1992，33，5933；Iwanowicz et al.Synth.Commun.1993，23，1443；Cherkaoui etal.Bull.Soc.Chim.Fr.1991，255)可由容易得到的起始原料并通过图7所示的标准化学方法制备。通过亲核芳族取代将这些片段掺入到分子主结构的方法以及最终目标物的合成如图8(11、14-19)和图9(21和22)所示。由此，在存在Et3N的条件下，将酰氯57(由羧酸30衍生而得)与胺29a和29b偶合，分别得到酰胺58(98％)和59(99％)。在DMF中，于存在NaH的条件下，将58与亲核试剂51偶合，得到产物60，收率为66％。类似地，通过偶合59与51，可得到63(收率为69％)。通过在环境温度下，于DMF中与胺53反应，可由58和59以收率为73％和99％分别得到氨基化合物61和64。将58暴露在硫醇54和NaH中(DMF，25℃，收率为23％)，可得到硫醚62。在室温下，于CH2Cl2中利用TFA处理化合物60-64，可以优良的收率(在RP-HPLC之后为90-99％)得到胍和羧酸基二者伴随脱保护。分别由58和59，可通过类似的方式制备哌嗪化合物16和19，首先利用亲核试剂52取代氟化物，接着如图8概述的方法对所得衍生物65和66进行TFA诱导脱保护。
化合物20和21的合成如图9所示。在存在Et3N条件下，于25℃下，在DMF中，将58与55反应，生成化合物67(收率为92％)，将其在25℃下暴露于TFA∶CH2Cl2(1∶1)中，得到目标苯并咪唑20(收率为97％)。类似地，化合物21可通过由58与56反应(Et3N，DMF，25℃，94％)得到的中间体68制备，接着再脱保护(RP-HPLC纯化后收率为83％)。
最后，化合物22的制备如图10所示。由此，在DMF中将主要中间体57与氨反应，以收率93％得到硝基苯胺69。在存在10％Pd/C催化剂条件下，于MeOH中利用H2还原69，得到1，2-二胺70(90％)，再在EtOH中与苯基异硫氰酸酯反应，得到硫脲71(收率为69％)。在环境温度下，于DMF中，利用HgCl2和Et3N处理71，得到胍72(收率为81％)。在72中利用于CH2Cl2中的TFA裂解叔丁酯，然后得到目标化合物22(收率为80％，RP-HPLC纯化之后)。
实验记录一般性除非另外指明，所有反应均在含有不含水并在无水条件下新蒸的溶剂的氩气气氛下进行。四氢呋喃(THF)和乙醚从钠-苯甲酮中蒸出，二氯甲烷(CH2Cl2)、苯(PhH)和甲苯从氢化钙中蒸出。无水溶剂也可通过将其通过市购的活化矾土柱制得。除非另外说明，收率是指利用色析法和光谱法(1H NMR)纯化的均相物质。除非另外指明，所有试剂均以最高商业质量购得，在使用时无需进一步纯化。
所有反应均通过薄层色谱分析法检测。所述薄层色谱分析法在下述条件下进行0.25mm E.Merck硅胶板(60F-254)，利用UV光作为显影剂，磷钼酸或对甲氧基苯甲醛的7％乙醇溶液作为展开剂。E.Merck硅胶(60，粒度为0.040-0.063mm)用于快速柱色谱纯化。制备性薄层色谱分离可在0.25、0.50或1mm E.Merck硅胶板(60F-254)上进行。反相HPLC在Waters Model 600E HPLC仪器上进行，该仪器使用Vydac 218TP1022柱，在40分钟内，利用90∶10 & 40∶60 H2O∶CH3CN+0.1％ TFA梯度溶液在254nm处检测。
利用Bruker DRX-600、AMX-500、AMX-400或AC-250仪器记录NMR光谱，利用残留不含重氢的溶剂作为内部参照进行校验。下列缩略语用于解释峰裂数s为单峰；d为双峰；t为三峰；q为四峰；m为多重峰；band为几个重叠信号；b为宽峰。利用Perkin-Elmer 1600系列FT-IR分光计记录IR光谱。在快速原子轰击(FAB)条件下，利用VG ZAB-ZSE质谱仪记录高分辨率质谱。利用Perkin Elmer ScienceAPI III质谱仪记录电喷质谱。如图5所示，合成氨基酸衍生物25。
化合物25向叔丁氧基羰基-(L)-天冬酰胺酸(12.6g，50mol；Aldrich)的MeOH(200ml)溶液中加入水(20ml)。利用20％ Cs2CO3水溶液(57ml)中和溶液，然后蒸发至干。所得残留物收集在DMF(50ml)中，然而通过蒸发至干而共沸干燥。将铯盐收集在DMF(125ml)中，接着加入苄基溴(6.5ml，55mol)。在室温下搅拌混合物6小时，蒸发至干，利用水(500ml)研磨残留物。加固体溶解在乙酸乙酯(150ml)中，利用水(75ml)洗涤有机相，在Na2SO4上干燥，减压除去溶剂。油乙酸乙酯/己烷重结晶初酯，得到25(15.1g，88％)，为无色固体。
IR(KBr)nmax3401，3349，3204，2982，2935，1741，1688，1657，1524，1293，1169，1055 cm-1；1HNMR(500MHz，CDCl3)d 7.36-7.32(m，5小时，Ph)，5.73(d，J＝8.5Hz，1H，NHCO2)，5.59(bs，1H，CONHH)，5.40(bs，1H，CONHH)，5.20(d，J＝12.5Hz，1H，CHHPh)，5.17(d，J＝12.5Hz，1H，CHHPh)，4.56(ddd，J＝4.0，5.0，8.5Hz，1H，CHCH2)，2.95(dd，J＝5.0，16.5Hz，1H，CHCHH)，2.76(dd，J＝4.0，16.5Hz，1H，CHCHH)，1.42(s，9H，tBu)；13C NMR(150MHz，CDCl3)d 171.9，171.2，155.7，135.4，128.5，128.3，128.2，80.1，67.4，50.3，37.4，28.3；FAB-HRMS(M+Na+)计算值345.1426，实测值345.1421.
如图5所示，合成化合物26在室温下，向二(三氟乙酰氧基)苯基碘(2.0g，4.7mmol)的DMF∶H2O(24ml，1∶1 v/v)搅拌溶液中加入化合物25(1.0g，3.1mmol)。15分钟后，加入吡啶(0.5ml，6.2mmol)，持续搅拌3小时。减压蒸发溶剂，将残留物溶解在水(30ml)中。利用水洗涤溶液，利用1N NaOH碱化水层，利用二氯甲烷萃取。减压除去溶剂，得到油状残留物。通过快速柱色谱纯化(10％MeOH，于CH2Cl2中)，得到胺26，为黄色油状物(0.37g，41％)。Rf＝0.11(2.5％甲醇，于乙酸乙酯中)；IR(薄膜)nmax3366，3313，3064，2979，2934，1688，1518，1501，1456，1393，1368，1324，1254，1204，1166，1055，1002，838，800，743，692cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 7.36-7.28(m，5H，Ph)，6.36(bm，2H，NH2)，6.06(d，J＝7.5Hz，1H，NHCO2)，5.18(d，J＝12.0Hz，1H，CHHPh)，5.13(d，J＝12.0Hz，1H，CHHPh)，4.52-4.43(bm，1H，CHCH3)，3.35(bdd，J＝12.5Hz，1H，CHCHH)，3.24(bdd，J＝6.5，12.5Hz，1H，CHCHH)，1.32(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 170.0，155.9，134.8，128.5，128.4，128.3，80.6，67.7，52.9，41.6，28.0；FAB-HRMS(M+H+)计算值295.1658，实测值295.1650.
如图5所示，合成化合物27a。在0℃下向(L)-天冬酰胺酸(23)(10.00g，75.7mmol)的H2O∶二噁烷(50ml∶50ml)的溶液中加入NaOH(3.40g，85.0mmol)。在0℃下15分钟后，加入苯基磺酰氯(10.6ml，84.0mmol)，，接着在0下加入NaOH(3.40g，85.0mmol)的H2O(50ml)溶液。30分钟后，撤去冷却浴，减压浓缩溶液至大约50ml。利用乙酸乙酯(2×50ml)萃取水相。在0℃下利用浓HCl(pH≈1)酸化水相，沉淀出被护氨基酸，通过过滤收集所得固体，利用水(20ml)洗涤。在大约50℃下烘干过夜，得到27a，为无色固体(14.6g，71％)。粗产物可在无需进一步纯化下使用。
IR(KBr)nmax3495，3338，3260，1723，1648，1578，1449，1325，1261，1202，1166，1086cm-1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 7.88-7.86(m，2H，Ph)，7.60-7.57(m，1H，Ph)，7.54-7.51(m，2H，Ph)，4.23(t，1H，J＝6.0Hz，CHCO2H)，2.66(dd，1H，J＝6.0，15.5Hz，CHH(C＝O)NH2)，2.60(dd，J＝6.0，15.5Hz，CHH(C＝O)NH2)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 174.3，173.6，142.1，133.7，130.0，128.2，53.9，39.6；FAB-HRMS (M+H+)计算值273.0545，实测值273.0540.
如图5所示，合成化合物27b。通过与合成27a相同的方法制备化合物27b，只是使用2-萘磺酰氯代替苯基磺酰氯。粗收率16.06g(66％)。
IR(KBr)nmax3424，3289，2925，1851，1713，1673，1502，1399，1333，1258，1223，1191，1159，1127，1075，1023，964，866，822，794，714，669，638，548，477cm-1；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)d8.40(d，J＝1.0Hz，1H，萘基)，8.15(d，J＝9.0Hz，1H，NHSO2)，8.12(d，J＝8.0Hz，1H，萘基)，8.07(d，J＝9.0Hz，1H，萘基)，8.01(d，J＝8.0Hz，1H，萘基)，7.81(dd，J＝1.5，8.8Hz，1H，萘基)，7.68(ddd，J＝1.5，6.8，7.5Hz，1H，萘基)，7.64(ddd，J＝1.5，6.8，7.5Hz，1H，萘基)，7.33(bs，1H，CONHH)，6.87(bs，1H，CONHH)，4.16(bm，1H，CHCH2)，2.47(dd，J＝7.0，15.5Hz，1H，CHCHH)2.28(dd，J＝6.5，15.5Hz，1H，CHCHH)；13C NMR(125MHz，DMSO-d6)d 172.0，170.5，138.4，134.1，131.6，129.2，129.0，128.6，127.8，127.4，127.1，122.6，52.5，38.0；FAB-HRMS(M+H+)计算值323.0702，实测值 323.0708.合成化合物55(b)，其中化合物55的-NH取代基被-OH取代。
步骤A在25℃下，向3-羟基丙酸(0.073g，0.16mmol，1.0当量)溶液中加入DMF(0.5ml，0.32M)、咪唑(26.0mg，0.38mmol，2.4当量)he TBDPSCl(0.046ml，0.19mmol，1.2当量)，允许搅拌2.5小时。然后，利用乙醚(10ml)稀释溶液，再用5％氯化氢饱和溶液(2×10ml)、水(2×10ml)、盐水(1×5ml)洗涤，在MgSO4上干燥。通过快速柱色谱纯化化合物(硅石，80％乙醚，于石油醚中)，将其应用到下列步骤中步骤B在室温下，将于5.5N HCl(10ml)中的苯二胺(1.08g，0.01mol)溶液加入到由步骤A得到的被护中间体(1.125g，0.015mol)中。回流反应混合物24小时，然后允许冷却至室温。真空蒸发溶剂，得到沉淀，过滤并利用乙醚洗涤，然后，步骤C按照下列方法去除TBDPS基团将由步骤B得到的中间体(7.481mmol)的THF(0.1M)溶液冷却至0℃，利用共沸干燥的(苯，3×50ml)TBAF(22.44mmol)处理。在0℃下搅拌搅拌反应混合物10小时，利用饱和水合NH4Cl骤冷。分离两层，利用乙酸乙酯和乙醚的混合物萃取水相。利用盐水洗涤合并的有机相，干燥并浓缩。通过硅胶柱色谱纯化，得到纯化合物55(b)，其中化合物55的-NH2取代基被-OH取代。合成化合物55(c)，其中化合物55的取代基-NH2被-SH取代。
在室温下，向于5.5N HCl(10ml)中的苯二胺(1.08g，0.01mol)溶液中加入3-巯基丙酸(1.125g，0.015mol)。回流反应混合物24小时，然后允许冷却至室温。真空蒸发溶剂，过滤并利用乙醚洗涤，得到纯化合物55(c)，其中化合物55的取代基-NH2被-SH取代。
合成化合物67(b)和(c)，其中-NH-基团被-S-或-O-二价基团取代(-NH-的情况如图9所示)。在室温下，向57(0.10g，0.20mmol；如上合成)的DMF(8ml)溶液中加入55(b)或(c)(0.038g，0.22mmol；如上合成)和三乙胺(0.06ml，0.44mmol)。在25℃下搅拌16小时之后，利用EtOAc(10ml)和水(10ml)稀释反应混合物。分层，利用乙酸乙酯(2×10ml)萃取水层。收集有机萃取物，利用水(2×10ml)和盐水(20ml)洗涤，在Na2SO4上干燥。再过滤并减压蒸发之后，通过快速色谱纯化残留物(硅石，乙酸乙酯)，得到67(b)和(c)。
合成化合物20(b)或(c)，其中-NH-基团被-S-或-O-二价基团取代(-NH-的情况如图9所示)。在室温下，向67(b)或(c)(0.068g，0.11mmol；如上合成)的CH2Cl2(2ml)溶液中加入三氟乙酸(2ml)。4小时之后，真空蒸发溶剂，得到油状物，在RP-HPLC之后(C-18)，得到20(b)或(c)。
如图5所示，合成化合物28a。向安装有磁性搅拌棒的圆底烧瓶中加入NaOH(11.15g，280.0mmol)的水(50ml)溶液，冷却至0℃。在5分钟内滴加溴(2.60ml，50.0mmol)，反应混合物在此温度下再搅拌5分钟。在0℃下，一次加入被护氨基酸27a(10.44g，38.0mmol)的NaOH(3.10g，70.0mmol，30ml水)溶液。在此温度下继续搅拌20分钟，撤去冷却浴，加热至90℃30分钟。在冷却至0℃后，利用1M浓盐酸将反应混合物的pH值调至7。通过过滤收集所得无色沉淀。利用水洗涤残留物，在大约50℃下烘干过夜，得到28a，为无色固体(6.95g，75％)。粗产物在无需进一步纯化下使用。
IR(KBr)nmax3509，3299，3058，2936，1636，1596，1522，1446，1413，1355，1340，1300，1246，1163，1094，1028，924cm-1；1HNMR(500MHz，DMSO-d6)d 7.84-7.82(m，2H，Ph)，7.66-7.63(m，1H，Ph)，7.60-7.56(m，2H，Ph)，7.58(bm，1H，NHSO2Ph)，3.35(bs，2H，NH2)，3.17(dd，J＝4.5，9.5Hz，1H，CHCH2)，3.01(dd，J＝2.5，12.0Hz，1H，CHH)，2.80(dd，J＝9.5，12.0Hz，1H，CHH)；13C NMR(125MHz，DMSO-d6)d 169.4，139.1，132.7，129.2，126.8，52.7，41.7；FAB-HRMS(M+Na+)计算值245.0596，实测值245.0599.
如图5所示，合成化合物28b。根据制备28a相同的方法制备化合物28b，使用27b替代27a。初收率11.88g(81％)，为浅褐色固体。
IR(KBr)nmax3338，3241，3056，2831，2601，1651，1604，1513，1463，1404，1382，1335，1151，1076，1039，985，955，931，913，855，814，787，7 49，657，618，550，480Cm-1；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)d 8.48(br.s，1H，萘基)，8.16-8.10(2bd，2H，萘基)，8.04(d，J＝8.5Hz，1H，萘基)，7.85(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H，萘基)，7.70(ddd，J＝1.5，7.0，8.0Hz，1H，萘基)，7.66(ddd，J＝1.0，7.0，8.0Hz，1H，萘基)，7.45(bm，1H，NHSO2)，3.54-3.19(bm，2H，NH2)，3.23(dd，重叠，J＝4.5，9.5Hz，1H，CHCH2)，3.04(dd，J＝4.5，12.00Hz，1H，CHCHH)，2.83(dd，J＝9.5，12.00Hz，1H，CHCHH)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)d 169.3，136.1，134.3，131.6，129.4，129.2，128.9，128.0，127.8，127.6，122.5，52.7，41.6；FAB-HRMS(M+H+)计算值295.0753，实测值295.0761.
如图5所示，合成化合物29a。安装有磁性搅拌棒的密封试管中充填有28a(4.88g，20.0mmol)和75ml无水二甲氧基乙烷。在加入3.0ml浓硫酸之后，在氩气气氛中将反应混合物冷却至-78℃，将40.0ml异丁烯充入到密封试管中。在密闭后，撤去冷却浴，反应混合物在室温下搅拌48小时。将反应混合物注入到100ml冰水中。利用乙醚(40ml)萃取水溶液，利用6N NaOH水溶液将pH调节至12-13。利用乙酸乙酯(4×50ml)萃取游离胺，利用NaHCO3饱和水溶液(50ml)、5％KHSO4水溶液(50ml)和盐水(50ml)顺序地洗涤合并的有机萃取液。有机相在MgSO4上干燥，减压病真空除去溶剂，得到29a(10.9g，55.5％)，为灰白色固体。粗产物在无需进一步纯化下使用。Rf＝0.27(硅胶，乙酸乙酯)；IR(KBr)nmax3372，3295，2981，2932，1726，1452，1337，1261，1161，1094，945，898，845，753cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 7.86-7.84(m，2H，Ph)，7.58-7.54(m，1H，Ph)，7.51-7.48(m，1H，Ph)，3.76(dd，J＝4.0，5.5Hz，1H，CHCH2)，3.02(dd，J＝9.0，13.0Hz，1H，CHH)，2.88(dd，J＝5.5，13.0Hz，1H，CHH)，1.27(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 169.3，139.7，132.8，129.1，127.2，82.8，58.8，44.9，27.7；FAB-HRMS(M+H+)计算值301.1222，实测值301.1211.
如图5所示，合成29b。根据制备29a相同的方法制备化合物29b，使用28b替代28a。初收率4.56g(51％)，为灰白色固体。Rf＝0.25(硅胶，乙酸乙酯+2％v/v Et3N)；IR(KBr)nmax3360，3264，3057，2981，2935，2873，2747，1731，1588，1501，1455，1339，1254，1220，1157，1076，952，926，823，782，747，663，619，552，481cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.40(bs，1H，萘基)，7.92(bd，J＝8.5Hz，2H，萘基)，7.86(d，J＝8.0Hz，1H，萘基)，7.82(dd，J＝1.5，8.5Hz，1H，萘基)，7.64-7.55(2×ddd，重叠，J＝1.0，7.0，8.5Hz，2H，萘基)，3.84(dd，J＝4.2，5.8Hz，1H，CHCH2)，3.30-2.60(bm，superimposed，2H，NH2)，3.03(dd，J＝4.2，13.4Hz，1H，CHCHH)，2.88(dd，J＝5.8，13.4Hz，1H，CHCHH)，1.08(s，9H，t-Bu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 169.2，136.3，134.9，132.0，129.5，129.2，128.9，128.6，127.8，127.5，122.4，82.9，58.6，44.6，27.5；FAB-HRMS(M+H+)计算值351.1379，实测值351.1371.
如图6所示，合成化合物31。向酸30(5.0g，27mmol；Aldrich)的甲苯悬浮液中加入原乙酸三甲酯(17ml，135mmol)。将混合物加热至80℃ 12小时，减压除去溶剂，得到31，为无色固体(5.26g，98％)。Rf＝0.46(硅胶，25％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(KBr)nmax3061，2960，1714，1614，1542，1438，1351，1297，1262，1233，1130，871，755cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.74(dd，J＝4J(1H-1H)＝2.0Hz，4J(1H-19F)＝7.0Hz，1H，2-Ar-H)，8.32(ddd，4J(1H-1H)＝2.0Hz，4J(1H-19F)＝4.5Hz，3J(1H-1H)＝9.0，1H，6-Ar-H)，7.39(dd，3J(1H-1H)＝9.0Hz，3J(1H-13F)＝10.5Hz，1H，5-Ar-H)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 164.1，159.1，156.9，136.5，127.8，118.8，118.7，52.9；FAB-HRMS(M+H+)计算值200.0281，实测值200.0286.
如图6所示，合成化合物32。在室温下，向31(4.0g，20mmol)的DMF(10ml)溶液中加入大约4g 4分子筛和4.46g(0.22mmol)N3(CH2)2OTBS。10分钟后，加入2ml(2.0mmol)1M TBAF的THF溶液。混合物在室温下搅拌4小时，然后通过一小段硅藻土(celite)过滤。滤液收集在乙酸乙酯(100ml)中，利用水、饱和NaCO3水溶液和盐水顺序地洗涤。有机萃取液在MgSO4上干燥，过滤并减压除去溶剂，得到黄色油状物。经快速柱色谱纯化(硅胶，40％乙酸乙酯，于己烷中)，得到32，微黄色固体(3.85g，73％)。Rf＝0.35(硅胶，40％乙酸乙酯，于己烷中)；
IR(KBr)nmax2950，2938，2114，1713，1620，1536，1438，1349，1303，1276，1247，1161，1136，918，760cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.54(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，8.22(dd，J＝2.0，9.0Hz，1H，Ar)，7.13(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.32(t，J＝5.0Hz，2H，OCH2)，3.94(s，3H，OCH3)，3.71(t，J＝5.0Hz，2H，CH2N3)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 164.7，154.7，135.3，127.3，123.3，114.0，68.8，52.5，49.7；FAB-HRMS(M+Na+)计算值289.0549，实测值289.0553.
如图6所示，合成化合物33。向32(3.85g，14.0mmol)的1，4-二噁烷∶水(90ml∶30ml)溶液中加入LiOH·H2O(1.2g，28mmol)。反应混合物在室温下搅拌4小时，然后加入40ml饱和NH4Cl溶液。减压除去有机溶剂，得到黄色淤泥状物，将该淤泥状物溶解在水中，利用1M KHSO4水溶液酸化。然后利用CH2Cl2(3×70ml)萃取。合并的有机萃取液在MgSO4上干燥，过滤，减压除去溶剂，得到33，为黄色固体(3.50g，99％)。Rf＝0.10(硅胶，60％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(KBr)nmax3087，2964，2877，2659，2539，2120，1699，1616，1534，1429，1359，1282，1163，1138，1079，1039，1002，929，847，763，687，642，546cm-1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.40(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，8.22(dd，J＝2.0，9.0Hz，1H，Ar)，7.37(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.37(t，J＝4.5Hz，2H，OCH2)，3.67(t，J＝5.0Hz，2H，CH2N3)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 167.4，156.0，140.9，136.4，127.9，124.9，115.7，70.3，51.1；FAB-HRMS(M+Na+)计算值275.0392，实测值275.0395.
如图6所示，合成化合物34。在室温下，向胺26(0.33g，1.10mmol)和酸33(0.286g，1.10mmol)的CH2Cl2(30ml)溶液中加入催化剂量DMAP(0.03g，0.22mol)和DDC(0.26g，1.1mol)。反应混合物在该温度下搅拌4小时，过滤沉淀的二环己基脲，滤液利用水、饱和NaHCO3水溶液和盐水顺序地洗涤。减压除去有机溶剂，得到油状物，通过快速柱色谱纯化(硅胶，60％乙酸乙酯，于己烷中)后，得到酰胺34，为黄色固体(2.48g，82％)。Rf＝0.28(硅胶，60％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(KBr)nmax3343，2977，2933，2112，1738，1710，1619，1531，1498，1366，1333，1280，1161，1084，1047cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.23(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.98(dd，J＝2.0，11.0Hz，1H，Ar)，7.40(bt，1H，NHCO)，7.39-7.31(m，5H，Ph)，7.09(d，J＝11.0Hz，1H，Ar)，5.67(d，J＝8.0Hz，1H，NHCO2)，5.21(s，2H，CH2Ph)，4.60-4.50(bm，1H，CHCH2)，4.30(t，J＝6.0Hz，2H，OCH2)，3.95-3.85(bm，1H，CHCHH)，3.78-3.70(bm，重叠，1H，CHCHH)，3.70(t，J＝6.0Hz，2H，CH2N3)，1.43(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 170.0，164.9，153.8，139.8，135.0，133.0，128.7，128.6，126.9，124.6，114.3，81.0，68.8，67.9，49.8，33.8，28.2，25.5，24.8 ； FAB-HRMS(M+Cs+)计算值661.1023，实测值661.1050.
如图6所示，合成化合物35ab。向叠氮化物34(50mg，0.095mmol)的THF∶H2O(8ml THF∶0.04ml H2O)混合物的溶液中加入三苯基膦(50mg，0.19mmol)。反应混合物在室温下搅拌14小时，减压除去溶剂。通过快速柱色谱纯化(硅胶，20％甲醇，于二氯甲烷中)，得到两个主要馏分(总收率80％)。馏分117mg(淡黄色油状物，40％)，馏分217mg(淡黄色油状物，40％)。在茚三酮试验中，馏分1为阳性，馏分2为阴性。馏分1 35a Rf＝0.48(硅胶，20％甲醇，于二氯甲烷中)；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.22(m，1H，Ar)，7.94(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，7.43-7.30(m，6H)，7.07(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，5.80(d，J＝6.0Hz，1H，NHBoc)，5.19(s，2H，CH2Ph)，4.54(bm，1H，CHNHBoc)，4.21(bm，2H，CH2OAr)，3.87-3.76(m，2H)，3.19(s，2H，CH2NH2)，2.75(bs，2H，NH2)，1.41(s，9H，tBu)；FAB-HRMS(M+H+)计算值503.2142，实测值503.2162.馏分2 35b Rf＝0.86(硅胶，20％甲醇，于二氯甲烷中)；
1HNMR(500MHz，CDCl3)d＝8.46(m，1H，Ar)，8.42(t，J＝6.5Hz，1H，NHAr)，7.79(dd，J＝2.5，11.0Hz，1H，Ar)，7.38-7.28(m，5H，Ar)，7.21(m，1H，NHCO)，6.80(d，J＝11.0Hz，1H，Ar)，5.85(d，J＝9.0Hz，1H，NHBoc)，5.19(s，2H，CH2Ph)，4.53(m，1H，CHNHBoc)，3.92(t，J＝6.5Hz，2H，CH2OH)，3.88-3.73(m，2H，CH2NH(CO))，3.52-3.38(m，2H，CH2NHAr)，1.41(s，9H，tBu)； FAB-HRMS(M+Cs+)计算值635.118，实测值635.110.
如图6所示，合成化合物10。在室温下，向35a(0.023g，0.046mmol)的THF∶H2O(6ml∶2ml)混合物的溶液中加入LiOH·H2O(4ml，0.092mmol)。搅拌混合物4小时，然后利用乙酸酸化。减压除去溶剂，残留物在下一步使用中无需进一步纯化。向粗酸的2ml无水DMF溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(9ml，0.05mmol)和1H-吡唑羧基脒·HCl(8mg，0.05mmol)。16小时后，减压除去溶剂，残留物通过RP-HPLC(C-18)纯化，得到10(3.25mg，13％)，为浅黄色固体。Rt＝20.5分钟；1H NMR(500MHz，D2O)d 8.33(d，1H，J＝2.0Hz，Ar)，7.98(dd，1H，J＝2.0，9.0Hz，Ar)，7.30(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.42(m，1H，CHNHBoc)，4.34(t，J＝4.0Hz，2H，CH2NH(CO))，3.82(m，2H，NH2(C＝NH)NHCH2，3.63(t，2H，J＝4.0Hz，2H，CH2O)；FAB-HRMS(M+Cs+)计算值587.0866，实测值587.0895.
如图6所示，合成化合物37。在室温下，向34(0.10g，0.019mmol)的CH2Cl2(4ml)溶液中加入三氟乙酸(4ml)。搅拌混合物2小时。真空除去溶剂，得到浅黄色油状物，在快速色谱纯化后(硅石，5％甲醇，于二氯甲烷中)，得到37，为油状物(0.07g，84％)。Rf＝0.19(硅石，5％甲醇，于二氯甲烷中)；
1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.21(d，J＝2.0Hz，1H，2-Ar-H)，7.95(dd，J＝2.0，11.0Hz，1H，6-Ar-H)，7.39-7.29(m，5H，Ar)，7.21(bm，1H)，7.05(d，J＝9.0Hz，1H)，5.16(s，2H，CH2Ph)，4.27(t，J＝5.0Hz，2H，CH2OAr)，3.67(t，J＝5.0Hz，2H，CH2N3)，3.95-3.78(bm，1H，CHNH2)，3.65-3.52(bm，1H，CHCHH)，4.32-4.31(bm，1H，CHCHH)；13C(125MHz，CDCl3)d 164.9，153.7，139.2，135.1，133.1，128.6，128.5，128.4，127.0，124.6，114.2，68.7，67.4，49.7，33.8，25.5；FAB-HRMS(M+Cs+)计算值561.0499，实测值561.0507.
如图6所示，合成化合物38a。在室温下，向37(0.13g，0.30mmol)的CH2Cl2(10ml)中加入N，N-二异丙基乙胺(0.07ml，0.39mmol)和苯磺酰氯(0.034ml，0.33mmol)。4小时后，利用CH2Cl2(10ml)和水(10ml)稀释反应混合物。分层，利用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤有机层并干燥(MgSO4)。真空除去溶剂，得到油状物，在制备性薄层色谱纯化(硅石，60％乙醚，于己烷中)后得到38a，为油状物(0.13g，78％)。Rf＝0.43(硅石，60％乙醚，于己烷中)；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.26(d，J＝2.0Hz，1H，2-Ar-H)，7.98(dd，J＝2.0，9.0Hz，1H，6-Ar-H)，7.81(d，J＝8.0Hz，2H，Ar)，7.53(t，J＝8.0Hz，1H，p-苯基)，7.42(t，J＝8.0Hz，2H，m-苯基)，7.31-7.30(m，3H，Ar)，7.22-7.21(m，2H，Ar)，7.08(d，J＝9.0Hz，1H，5-Ar-H)，7.03(t，J＝5.5Hz，1H)，5.03(d，J＝12.0Hz，1H，PhCHH)，4.99(d，J＝12.0Hz，1H，PhCHH)，4.29(t，J＝4.5Hz，2H，CH2O)，4.16(dd，J＝4.0，7.5Hz，1H，CHCHH)，3.92-3.87(m，1H，CHCH2)，3.72-3.67(m，重叠，3H，CHCHH，CH2N3)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 169.2，165.2，153.7，139.3，138.7，134.3，133.1，132.9，129.1，128.4，128.3，126.9，126.5，124.9，114.1，68.7，68.1，55.4，49.7，42.4；FAB-HRMS(M+Cs+)计算值701.0431，实测值701.0442.
如图6所示，合成化合物38b。根据制备38a相同的方法制备化合物38b，使用1-萘磺酰氯替代苯磺酰氯。收率0.031g(57％)，为油状物。Rf＝0.18(5％甲醇，于二氯甲烷中)；IR(薄膜)nmax3277，2930，2112，1740，1652，1618，1523，1496，1348，1280，1162，1125，984，910，772cm-1.1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.60(d，J＝11.0Hz，1H，萘基)，8.21(dd，J＝2.0，9.3Hz，1H，萘基)，8.03(d，J＝2.9Hz，1H，2-Ar-H)，8.01(d，J＝10.4Hz，1H，萘基)，7.87(d，J＝9.3Hz，1H，萘基)，7.81(dd，J＝2.9，11.0Hz，1H，6-Ar-H)，7.62(ddd，J＝1.7，8.7，8.7Hz，1H，萘基)，7.54(ddd，J＝1.3，8.8，8.8Hz，1H，萘基)，7.47(dd，J＝9.4，10.1Hz，1H，萘基，7.28-7.22(m，3H，Ph)，7.12-7.07(m，2H，Ph)，6.98(d，J＝11.0Hz，1H，5-Ar-H)，6.69(dd，J＝7.5Hz，1H，NHCO)，6.22(d，J＝9.5Hz，1H，NHSO2)，4.89(d，J＝15.0Hz，1H，CHHPh)，4.83(d，J＝15Hz，1H，CHHPh)，4.25(t，J＝6.0Hz，2H，OCH2)，4.13(ddd，J＝5.4，9.4，9.5Hz，1H，CHCH2)，3.74(ddd，J＝5.4，7.4，17.5Hz，1H，CHCHH)，3.69(t，J＝6.1Hz，2H，CH2N3)，3.67(ddd，重叠，J＝7.5，9.0，17.5Hz，1H，CHCHH)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 169.3，165.1，153.7，139.1，134.8，134.4，134.0，13 3.5，132.9，129.9，129.0，128.6，128.5，128.3，127.7，126.3，124.8，124.1，114.0，68.7，67.9，55.7，49.8，42.2；FAB-HRMS(M+Cs+)计算值751.0587，实测值751.0599.
如图6所示，合成化合物39a和41a。根据制备35ab相同的方法制备化合物39a和41a，使用化合物38b替代38a。收率F1＝0.029g，F2＝0.028g；总收率80％。在茚三酮试验中，F2为阳性，而F1不是。Rf(F1)41a＝0.39(硅石，于二氯甲烷中10％甲醇)。
1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.35(bs，1H，2-Ar-H)，8.31(bs，1H，CH2NHAr)，7.76-7.60(m，重叠，3H，Ar)，7.50(bs，1H)，7.38(t，J＝9.0Hz，1H，Ar)，7.28(t，J＝9.0Hz，2H，Ar)，7.26-7.13(m，5H，Ar)，6.86(d，J＝11.0Hz，1H，Ar)，6.64(d，J＝11.0Hz，1H，NHSO2)，4.92(d，J＝15.0Hz，1H，PhCHH)，4.86(d，J＝15.0Hz，1H，PhCHH)，4.26-4.23(m，1H，CHCH2)，3.80-3.67(m，重叠，4H，HOCH2，CHCH2)，3.34-3.31(bm，CH2NHAr)，2.92(bs，CH2OH)；Rf(F2)39a＝0.16(硅石，20％甲醇，于二氯甲烷中)；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.24(bs，1H，Ar)，7.94(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，7.80(d，J＝8.0Hz，2H)，7.49(t，J＝8.0Hz，1H，Ph)，7.40(t，J＝8.0Hz，2H，ph)，7.30-7.28(m，3H，Ar)，7.19-7.18(m，重叠， 3H，Ar，NH(CO))，7.02(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，5.01(d，J＝12.5Hz，1H，PhCHH)，4.97(d，J＝12.5Hz，1H，PhCHH)，4.18-4.15(m，重叠， 3H，CHCH2，OCH2)，3.86-3.84(m，1H，CHCHH)，3.70-3.68(m，1H，CHCHH)，3.15-3.13(bm，2H，OCH2NH2)，2.82(bm，2H，NH2)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 169.5，165.4，154.4，139.9，138.8，134.4，133.0，132.8，129.0，138.5，128.4，127.0，126.3，125.0，114.1，71.4，68.0，55.4，42.3，40.7；FAB-HRMS(M+Cs+)计算值675.0526，实测值675.0546.
如图6所示，合成化合物11。根据制备化合物10相同的方法制备化合物11，使用40a替代36b。收率3.31g(13％)。
1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.26(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，8.04(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H，Ar)，7.82-7.80(m，2H，Ph)，7.47-7.36(m，4H，5-ArH，Ph)，4.35(t，J＝5.0Hz，2H，OCH2)，4.19(dd，J＝4.0，14.0Hz，1H，CHCH2)，3.75(dd，J＝4.0，14.0Hz，1H，CHCHH)，3.68(t，J＝5.0Hz，2H，CH2NH(C＝N))，3.47(dd，J＝11.0，14.0Hz，1H，CHCHH).
如图6所示，制备化合物12。在室温下，向苄基酯41a(0.10g，0.22mmol)的THF∶H2O(3ml∶1ml)溶液中加入LiOH·H2O(18.5mg，0.44mmol)。在搅拌4小时之后，利用乙酸酸化反应混合物，真空除去溶剂，得到粗酸42a。向酸42a的DMF(5ml)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(38ml，0.22mmol)。在50℃下搅拌16小时之后，真空除去溶剂，得到油状物，在RP-HPLC(C-18)之后得到12(5.4mg，5％)，为浅黄色固体。Rt＝14.9分钟；
1H NMR(600MHz，CDCl3)d 8.26(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.67-7.65(m，2H，ph)，7.64(dd，J＝2.0，9.0Hz，Ar)，7.24-7.18(m，3H，Ph)，7.06(d，J＝9.0Hz，Ar)，4.49(t，J＝4.0Hz，2H，CH2OH)，4.15(dd，J＝6.0，10.0Hz，1H，CHCH2)，3.86(t，J＝4.0Hz，2H，CH2N(C＝NH)NH2)，3.70(dd，J＝6.0，14.0Hz，1H，CHCHH)，3.35(dd，J＝10.0，14.0Hz，1H，CHCHH)；13C NMR(150MHz，CDCl3)d 167.6，164.9，147.2，141.7，132.4，130.5，129.6，127.7，126.8，125.6，125.5，122.2，112.5，70.4，42.6，28.7，23.2. 电喷质谱 (M+H+)计算值495，实测值495.
如图6所示，合成化合物39b。向叠氮化物38b(0.031g，0.05mmol)的THF∶H2O(8ml∶0.04ml)溶液中加入三苯基膦(0.026g，0.1mmol)。在室温下搅拌12小时后，真空除去溶剂，得到白色固体。通过制备性薄层色谱纯化(硅石，20％甲醇，于二氯甲烷中)固体后，得到39b，为油状物(0.013g，44％)。Rf＝0.1(硅胶，10％甲醇，于二氯甲烷中)；IR(薄膜)nmax3361，3282，3070，2922，2851，1742，1650，1620，1527，1456，1349，1322，1280，1162，1126，989，910 cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d＝8.63(d，J＝10.8Hz，1H，萘基)，8.17(dd，J＝1.0，9.1Hz，1H，naphthyl)，8.02(d，J＝2.5Hz，1H，Ar)，7.92(d，J＝10.3Hz，1H，萘基)，7.77(d，J＝10.3Hz，1H，萘基)，7.72(dd，J＝2.6，11.0Hz，1H，Ar)，7.58(dd，J＝8.3，8.3Hz，1H，萘基)，7.49(dd，J＝7.3，7.3Hz，1H，萘基)，7.41(dd，J＝7.5，7.5Hz，1H，萘基)，7.23-7.16(m，3H，Ph)，7.09-7.04(m，2H，Ph)，6.84(d，J＝11.1Hz，1H，Ar)，4.83(d，J＝15.2Hz，1H，CHHPh)，4.76(d，J＝15.2Hz，1H，CHHPh)，4.23(dd，J＝5.8，9.1Hz，1H，CHCH2)，4.10-4.04(bm，2H，OCH2)，3.95-3.61(bm，5H，CH2NH2，CHCHH)，3.18-3.05(bm，1H，CHCHH)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 169.6，165.3，154.2，146.9，134.6，134.5，134.0，13 3.9，133.2，129.8，129.0，128.6，128.5，128.4，128.2，127.8，127.0，125.9，124.9，124.2，124.1，114.3，67.6，55.9，42.0，40.5，29.6；FAB-HRMS(M+Cs+)计算值725.0682，实测值725.0695.
如图6所示，合成化合物13。根据制备化合物10相同的方法制备化合物13，使用40b替代36b。收率1.8mg(15％)，为浅黄色固体。
Rt＝21.2分；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.63(d，J＝9.0Hz，1H，萘基)，8.17(dd，J＝1.5，7.5Hz，1H，萘基)，7.94(d，J＝8.5Hz，1H，萘基)，7.88(d，J＝2.5Hz，1H，Ar)，7.76-7.70(m，重叠，2H，6-Ar-H，萘基-)，7.57(ddd，J＝1.0，6.5，9.3Hz，1H，萘基)，7.47(dd，J＝7.5，8.0Hz，1H，萘基)，7.42(ddd，J＝1.0，7.0，7.5Hz，1H，萘基)，7.25(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.36(t，J＝5.0Hz，1H，CH2O)，4.18(dd，J＝4.5，9.5Hz，1H，CHCHH)，3.72(t，J＝5.0Hz，2H，CH2NH)，3.65(dd，J＝4.5，13.5Hz，1H，CHCHH)，3.41(dd，J＝9.5，13.5Hz，1H，CHCHH)； 电喷质谱 计算值(M+H+)545，实测值545.
如图7所示，制备化合物51。在室温下，向氨基乙醇(43)(1.0ml，16.0mmol)的DMF(30ml)溶液中加入1，3-二-(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲(48)(4.81g，16.0mmol)、三乙胺(4.63ml，32.0mmol)和二氯化汞(II)(4.48g，16.0mmol)。4小时后，利用乙酸乙酯稀释反应混合物，通过一小段硅藻土(celite)过滤。利用水(2×20ml)、盐水(20ml)顺序地洗涤滤液，在MgSO4上干燥。在过滤并加压蒸发溶剂后，粗化合物通过快速柱色谱纯化，得到51，为无色固体(4.95g，98％)。Rf＝0.43(硅胶，50％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(KBr)nmax3329，3142，2977，2934，2870，1724，1644，1443，1412，1360，1299，1103，1052，1027，864，809，778cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 11.48(bs，1H，NHCO2)，8.66(m，1H，CH2NH)，4.54(bs，1H，OH)，3.74(t，J＝4.5Hz，2H，CH2OH)，3.54(dt，J＝5.5，5.5Hz，2H，CH2NH)，1.47(s，9H，tBu)，1.45(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 162.8，157.4，153.1，83.5，79.2，63.1，44.4，28.2，28.0； FAB-HRMS(M+H+)计算值304.1872，实测值304.1878.
如图7所示，合成化合物52。在室温下，向哌嗪(44)(3.45ml，12.0mmol)的DMF(10ml)溶液中加入1，3-二-(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲(48)(0.87g，3.00mmol)。14小时后，利用乙酸乙酯和水稀释反应混合物。分层，利用水(2×20ml)、盐水(20ml)顺序地洗涤有机层，在Na2SO4上干燥。减压除去溶剂，得到52，为无色固体(0.93g，95％)。Rf＝0.34(硅胶，10％甲醇，于二氯甲烷中)；IR(KBr)nmax3294，2980，2931，2856，1749，1664，1605，1527，1448，1367，1305，1230，1149，1116，1019，893，842，730，682cm-1.1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 3.48(t，J＝5.0Hz，4H，(CH2)2N(C＝N)，2.83(t，J＝5.0Hz，4H，(CH2)2NH)，1.46(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，甲醇 -d4)d154.4，81.4，48.2，46.0，28.6；FAB-HRMS(M+Na+)计算值341.1226，实测值341.1235.
如图7所示，制备化合物53。在室温下，向氨基己烷硫醇(45)(114mg，1.00mmol)的DMF(5ml)溶液中加入N，N′-二-叔丁氧基羰基硫脲(49)(276mg，1.00mmol)和三乙胺(2.79ml，2.00mmol)。14小时后，利用5ml水稀释反应混合物，利用乙酸乙酯(3×10ml)萃取。利用盐水洗涤合并的萃取液，在MgSO4上干燥。过滤并减压蒸发溶剂后，粗化合物通过快速柱色谱纯化(硅胶，25％乙醚，于己烷中)，得到53，为对空气敏感的无色固体(191mg，59.8％)。Rf＝0.16(硅石，25％乙醚，于己烷中)；IR(KBr)nmax3327，3132，2978，2931，1726，1643，1565，1431，1363，1329，1280，1227，1133，1088，1058，855，809，760，606cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 11.45(bs，1H，(C＝N)NH(C＝O))，8.61(bt，J＝5.9Hz，1H，CH2NH)，3.74(bdt，J＝6.0，6.5Hz，2H，CH2NH)，2.85(t，J＝6.5Hz，2H，CH2SH)，1.47(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 163.4，156.1，153.1，83.2，79.3，39.2，37.0，28.3，28.1；FAB-HRMS 计算仅实测到S-S二聚物！如图7所示，合成化合物54。在室温下，向乙二胺(54)(3.45ml，51.6mmol)的DMF(50ml)溶液中加入1，3-二-(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲(48)(3.00g，10.33mmol)、三乙胺(2.88g，20.7mmol)和氯化汞(II)(2.81g，10.3mmol)。4小时后，利用20ml乙酸乙酯稀释反应化合物，通过一小段硅藻土(celite)过滤。利用水(2×50ml)、盐水(50ml)顺序地洗涤滤液，在MgSO4上干燥。快速柱色谱纯化(硅胶，20％MeOH，于乙酸乙酯中，+2％v/v Et3N)，得到54，为无色固体(1.60g，51.2％)。Rf＝0.30(硅胶，20％ MeOH，于乙酸乙酯中，+2％v/v Et3N)；IR(KBr)nmax3446，3389，3259，2978，2819，1728，1706，1656，1626，1521，1485，1365，1253，1171，1093，1049，888，802，738，699，562 cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 11.38(bs，1H，(C＝N)NH(C＝O))，8.61(bt，1H，CH2NH(C＝N))，3.45(bdt，J＝5.5，5.5Hz，2H，CH2NH)，2.85(t，J＝5.5Hz，2H，CH2NH2)，1.46(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 163.4，156.4，153.1，83.1，79.2，41.8，40.9，28.2；FAB-HRMS(M+H+)计算值303.2032，实测值303.2037.
如图7所示，合成化合物55。在室温下，向苯二胺(1.08g，0.01mol)的5.5N HCl(10ml)溶液中加入b-丙氨酸(1.125g，0.015mol)。回流反应混合物24小时，然后允许冷却至室温。真空除去溶剂，得到沉淀，过滤该沉淀并利用乙醚(1.70g，73％)洗涤。Rf＝0.12(20％甲醇，于二氯甲烷中)；
1H NMR(500MHz，D2O)d7.73-7.72(m，2H，Ar)，7.55-7.53(m，2H，Ar)，3.61-3.55(m，4H，CH2CH2)；13C NMR(125MHZ，D2O)d FAB-HRMS(M+H+)计算值162.1031，实测值162.1029.
如图7所示，合成化合物56。在室温下，向乙二胺(46)(1.0ml，0.015mol)的DMF(10ml)溶液中加入2-(3，5-二甲基吡唑基)-4，5-脱氢咪唑氢溴酸盐(50)(3.67g，0.015mol)和N，N-二异丙基胺(2.61ml，0.015mol)。搅拌11小时后，向反应化合物中加入乙醚(12ml)，生成白色沉淀。过滤该沉淀并利用乙醚洗涤，得到56(1.59g，51％)。
IR(KBr)nmax3164，1681，1599，1484，1287，1211，1137，1069，952cm-1；1H NMR(500MHz，D2O)d 3.54(bs，4H，NHCH2CH2NH)，3.17(t，J＝6.0Hz，CH2NH)，2.65(t，J＝6.0Hz，CH2NH2)；13C NMR(125MHz，D2O)d 160.9，45.3，43.6，40.3；FAB-HRMS(M+H+)计算值129.1140，实测值129.1134.
如图8所示，合成化合物58。在0℃下，向3-硝基-4-氟苯甲酸(30)(1.59g，8.57mmol；Aldrich)的苯(40ml)溶液中加入DMF(0.03ml，0.40mmol)和草酰氯(3.73ml，20.2mmol)。6小时后，真空除去溶剂。将所得黄色粘稠油状物(1.73g，8.57mmol)溶解在CH2Cl2(20ml)中。将溶液冷却至0℃，加入三乙胺(1.28ml，9.20mmol)。加入被护叔丁酯2-氨基丙氨酸29a(2.32g，7.70mmol)的CH2Cl2(40ml)溶液。4小时后，利用水稀释反应化合物。分层后，利用二氯甲烷(2×50ml)萃取水相。利用饱和NaHCO3-水溶液洗涤合并的有机萃取液，在MgSO4上干燥。过滤并减压蒸发溶剂后，该粗化合物通过快速柱色谱纯化(硅胶，45％乙酸乙酯，于己烷中)，得到58，为黄色泡沫状物(3.90g，98％)。Rf＝0.19(硅胶，40％乙酸乙酯，于己烷中)；
IR(KBr)nmax3286，2980，2936，1730，1653，1619，1537，1493，1448，1349，1314，1159，1131，1092cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.56(dd，4J(1H-1H)＝2.5Hz，4J(1H-19F)＝7.5Hz，1H，2-Ar-H)，8.12(ddd，4J(1H-1H)＝2.5Hz，4J(1H-19F)＝4.0Hz，3J(1H-1H)＝9.0Hz，1H，6-Ar-H)，7.84(d，J＝7.5Hz，2H，o-苯基)，7.58(d，J＝7.5Hz，1H，p-苯基)，7.50(t，J＝7.5Hz，2H，m-Ar)，7.34(dd，3J(1H-1H)＝9.0Hz，3J(1H-19F)＝10.0Hz，Ar-H)，7.13(t，J＝5.5Hz，1H，(C＝O)NH)，5.89(d，J＝8.0Hz，1H，CHNHSO2Ph)，3.97-3.92(m，2H，CHH，CHCH2)，3.60-3.54(m，1H，CHH)，1.29(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 168.1，164.5，158.1，156.0，138.6，134.2，134.1，133.2，130.9，129.2，127.2，125.6，118.9，118.7，84.2，55.8，42.5，27.6；FAB-HRMS(M+Cs+)计算值600.0217，实测值600.0195.
如图8所示，合成化合物59。根据制备化合物58相同的方法制备化合物59，只是使用2-萘磺酰氯替代苯磺酰氯。收率985mg(96％)，为灰白色固体。Rf＝0.24(硅胶，50％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(KBr)nmax3395，3297，3083，2981，2937，1734，1671，1620，1534，1494，1460，1345，1264，1156，1128，1079，977，918，833，750，661，617，549，479 cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.46(dd，4J(1H-1H)＝2.5Hz，4J(1H-19F)＝7.0Hz，1H，2-Ar-H)，8.38(d，J＝2.0Hz，1H，萘基)，8.02(ddd，4J(1H-1H)＝2.5Hz，4J(1H-19F)＝4.0Hz，3J(1H-1H)＝8.8Hz，1H，6-Ar-H)，7.90(bd，重叠，J＝8.5Hz，1H，萘基)，7.88 (bd，重叠，J＝8.5Hz，1H，萘基)，7.83(bd，J＝8.0Hz，1H，萘基)，7.79(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H，萘基)，7.62(ddd，J＝1.0，7.5，8.5Hz，1H，萘基)，7.58(ddd，J＝1.0，7.5，8.5Hz，1H，萘基)，7.27(br.dd，J＝6.0，8.5Hz，1H，CONH)，7.18(bdd，3J(1H-1H)＝9.0Hz，3J(1H-19F)＝10.0Hz，1H，5-Ar-H)，6.15(d，J＝8.0Hz，1H，NHSO2)，4.06(ddd，J＝4.0，5.5，8.0Hz，1H，CHCH2)，3.93(ddd，J＝4.0，6.0，11.0Hz，1H，CHCHH)，3.57(ddd，J＝5.5Hz，8.5Hz，1H，CHCHH)，1.17(s，9 H，tBu)；13C NMR (125MHz，CDCl3)d 168.3，164.3，158.0，155.8，135.5，134.7，134.1，134.0，131.8，130.5，129.5，129.1，128.6，127.7，125.4，122.0，118.6，118.4，83.9，55.9，42.3，27.4；FAB-HRMS(M+Cs+)计算值650.0373，实测值650.0358.
如图8所示，合成化合物60。在0℃下，向安装有磁性搅拌棒的圆底烧瓶中放入NaH(60％悬浮液，于矿物油中)(0.16g，3.96mmol)和THF(10ml)。向搅拌悬浮液中加入51(0.55g，1.80mmol)的THF(5ml)溶液。在此温度下再继续搅拌30分钟，所的灰色悬浮液备用。将安装有磁性搅拌棒的圆底烧瓶中充填芳族氟化物58(0.1g，0.30mmol)和DMF(10ml)。冷却溶液至0℃，通过注射器将先前制备好的5.5ml悬浮液加入。在0℃下8小时后，通过加入水(10ml)使反应停止，利用乙酸乙酯稀释。分离水相并利用乙酸乙酯(3×25ml)萃取。利用水(2×10ml)和盐水(10ml)顺序地洗涤合并的有机萃取液，在MgSO4上干燥。过滤并减压蒸发溶剂后，残留物通过快速柱色谱纯化(硅石，60％乙酸乙酯，于己烷中)，得到60，为浅黄色泡沫状物(0.15g，66％)。Rf＝0.1 8(硅石，50％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(KBr)nmax3331，2978，2951，1733，1645，1619，1532，1367，1319，1277，1144，1051，1025cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 11.43(bs，1H，(C＝N)NH(C＝O))，8.76(bt，J＝5.5Hz，1 H，CH2NH(C＝N))，8.32(d，J＝2.5Hz，1H，Ar)，8.00(dd，J＝2.5，9.0Hz，1H，Ar)，7.85-7.84(m，2H，Ph)，7.58(t，J＝8.0Hz，1H，Ph)，7.49(t，J＝8.0Hz，2H，Ph)，7.20(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，6.95(t，J＝8.0Hz，1H，NHCO)，5.84(d，J＝7.5Hz，1H，HNSO2)，4.28(t，J＝5.5Hz，2H，CH2O)，3.96-3.87(m，重叠，4H，CHCH2，CH2NH(C＝N))，3.60-3.54(m，1H，CHCH2)，1.50(s，9H，tBu)，1.48(s，9H，tBu)，1.28(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 168.2，165.0，163.3，156.5，154.5，154.1，150.9，139.4，138.8，133.1，132.7，129.2，127.2，126.5，125.0，114.5，84.0，83.4，68.1，55.9，42.4，39.4，28.3，28.0，27.6；FAB-HRMS(M+Cs+)计算值883.1949，实测值883.1970.
如图8所示，合成化合物11。向60(30.0mg，0.04mmol)的CH2Cl2(2ml)溶液中滴加三氟乙酸(2ml)。反应混合物在25℃下搅拌2小时。减压除去溶剂，残留物通过RP-HPLC(C-18)纯化，得到11，为浅黄色固体(22.0mg，92％)。Rt＝12.2分钟；IR(KBr)nmax3418，1679，1529，1433，1354，1319，1278，1198，1161，1092，1046，932，837，802，756，688cm-1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.26(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，8.04(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H，Ar)，7.82-7.80(m，2H，Ph)，7.47-7.36(m，4H，Ar)，4.35(t，J＝5.0Hz，2H，OCH2)，4.19(dd，J＝4.0，14.0Hz，1H，CHCH2)，3.75(dd，J＝4.0，14.0Hz，1H，CHCHH)，3.68(t，J＝5.0Hz，2H，CH2NH(C＝N))，3.47(dd，J＝11.0，14.0Hz，1H，CHCHH)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 167.7，155.0，142.2，140.7，134.5，133.6，130.0，128.2，125.9，115.7，69.8，43.3，41.8，25.2；FAB-HRMS(M+H+)计算值495.1298，实测值495.1311.
如图8所示，合成化合物61。向58(100mg，0.20mmol)的DMF(10ml)溶液中加入53(68mg，0.22mmol)。在室温下搅拌4小时后，利用水(10ml)稀释反应混合物，利用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水相。利用水(2×10ml)和盐水(20ml)顺序地洗涤合并的有机萃取液，在Na2SO4上干燥。过滤并减压蒸发，残留物通过快速柱色谱(硅胶，50％乙酸乙酯，于己烷中)纯化，得到61，为浅黄色泡沫状物(110mg，73％)。Rf＝0.48(硅胶，60％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(film)nmax3318，2925，1723，1623，1517，1412，1324，1158cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 11.47(bs，1H，(C＝N)NH(C＝O))，8.59(d，J＝2.5Hz，1H，Ar)，8.56(t，J＝10.0Hz，1H，NH)，8.43(t，J＝10.0Hz，1H，NH)，7.93(dd，J＝2.5Hz，10.0Hz，1H，Ar)，7.84(d，J＝9.0Hz，2H，Ph)，7.53(t，J＝10.0Hz，1H，Ph)，7.46(t，J＝10.0Hz，2H，Ph)，7.21(d，J＝10.0Hz，1H，Ar)，6.81(t，J＝10.0Hz，1H，CONH)，5.87(d，J＝10.0Hz，1H，NHSO2)，3.98-3.93(m，1H，CHCH2)，3.87-3.82(m，1H，CHCHH)，3.72-3.55(m，5H，CHCHH，NHCH2，CH3NH(C＝N))，1.52(s，9H，tBu)，1.47(s，9H，tBu)，1.27(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 168.4，165.7，163.3，156.6，153.2，146.9，139.1，134.7，133.0，131.4，129.1，127.2，126.2，121.0，114.4，83.7，83.5，79.5，56.2，42.4，42.2，39.0，28.3，28.0，27.6；FAB-HRMS(M+Cs+)计算值882.2109，实测值882.2129.
如图8所示，合成化合物14。根据制备化合物11相同的方法制备化合物14，只是使用61替代60。收率33.2g(92％)，为黄色固体。Rt＝15.9分钟；IR(KBr)nmax3364，3245，2998，2584，1669，1624，1555，1520，1433，1313，1198，1161，923，756，722cm-1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.61(d，J＝2.5Hz，1H，Ar)，7.92(dd，J＝2.5，9.0Hz，1H，Ar)，7.81(d，J＝7.0Hz，2H，Ph)，7.47-7.40(m，3H，Ph)，7.11(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.19(dd，J＝5.0，9.0Hz，1H，CHCH2)，3.72(dd，J＝5.0，13.5Hz，1H，CHCHH)，3.67(t，J＝6.0Hz，2H，NHCH2)，3.52(t，J＝6.0Hz，2H，NHCH2)，3.46(dd，J＝9.0，13.5Hz，1H，CHCHH)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 168.3，159.0，148.0，142.1，135.8，133.6，132.9，130.0，127.8，125.0，122.3，114.8 43.2，42.5，41.1，31.1； FAB-HRMS(M+H+)计算值494.1458，实测值494.1444.
如图8所示，合成化合物62。在0℃下，向54(1.60mg，5.0mmol)的THF(50ml)溶液中加入NaH(60％悬浮液，于矿物油中)(200mg，5.00mmol)。15分钟后，将所得硫醇盐溶液备用。通过注射器，向58(100mg，0.20mmol)的DMF(10ml)溶液中加入硫醇盐溶液(5.0ml，0.5mmol)。在室温下12小时后，通过加入水(10ml)使反应停止，利用乙酸乙酯稀释。分相后利用乙酸乙酯(3×25ml)萃取水相。利用水(2×10ml)和盐水(10ml)顺序地洗涤合并的有机萃取液，在MgSO4上干燥。过滤并减压蒸发后，残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，40％乙酸乙酯，于己烷中)，得到62，为浅黄色泡沫状物(35mg，23％)。Rf＝0.32(硅胶，40％乙酸乙酯，于己烷中)；Rf＝0.32(silica gel，40％ ethyl acetate in hexanes)；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 11.45(bs，1H，(C＝N)NH(C＝O))，8.65(bt，重叠，J＝4.5Hz，1H，CH2NH(C＝N))，8.63(d，重叠，J＝2.0Hz，1H，Ar)，8.22(d，J＝8.5Hz，1H，Ar)，8.15(dd，J＝2.0，8.5Hz，2H，Ar)，7.84(d，J＝8.0Hz，2H，Ph)，7.56(t，J＝7.5Hz，1H，Ph)，7.48(bdd，J＝7.0，8.0Hz，2H，Ph)，6.98(t，J＝5.5Hz，1H，CONH)，5.72(d，J＝7.0Hz，1H，NHSO2)，3.99-3.93(bm，1H，CHCH2)，3.88(ddd，J＝4.5，5.5，13.5Hz，1H，CHCHH)，3.70-3.58(m，3H，CHCHH，CH2NH(C＝N))，3.26(t，J＝8.0Hz，2H，SCH2)，1.57(s，9H，tBu)，1.50(s，9H，tBu)，1.30(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 168.2，165.1，163.4，156.3，153.1，145.3，141.0，138.9，133.1，132.3，130.3，129.2，127.7，127.2，124.7，84.0，83.5，79.6，55.9，42.4，39.2，30.1，28.4，28.0，27.6；FAB-HRMS(M+Cs+)计算值899.1720，实测值899.1753.
如图8所示，合成化合物15。根据制备化合物11相同的方法制备化合物15，只是使用62替代60。收率23.0g(92％)，为黄色固体。Rt＝16.0分钟；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.58(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，8.06(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H，Ar)，7.82(d，J＝7.0Hz，2H，Ph)，7.71(d，J＝8.5Hz，1H，Ph)，7.48-7.41(m，3H，Ar)，4.23(dd，J＝5.0，9.0Hz，1H，CHCH2)，3.80-3.76(m，1H，CHCHH)，3.56(t，J＝6.5Hz，2H，CH2NH(C＝N))，3.50-3.43(m，1H，CHCHH)，3.34(t，J＝6.5Hz，2H，SCH2)；13CNMR(125MHz，甲醇-d4)d 167.6，155.2，142.1，140.7，133.5，133.3，132.5，128.3，128.0，126.0，43.4，40.7，32.3；FAB-HRMS(M+H+)计算值511.1070，实测值511.1058.
如图8所示，合成化合物65。向58(100mg，0.20mmol)的DMF(10ml)溶液中加入52(68mg，0.22mmol)。6小时后，利用水(25ml)和乙酸乙酯稀释反应混合物。分相后利用乙酸乙酯(3×30ml)萃取水相。利用水(2×20ml)和盐水(20ml)顺序地洗涤合并的有机萃取液，在Na2SO4上干燥。过滤并减压蒸发后，残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，40 & 50％乙酸乙酯，于己烷中)，得到65，为浅黄色泡沫状物(120mg，83％)。Rf＝0.30(硅胶，40％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(膜)nmax3266，2977，1743，1621，1520，1451，1367，1304，1158，1130，1094，1014cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 10.22(bs，1H，(C＝N)HN(C＝O))，8.29(d，J＝2.5Hz，1H，Ar)，7.92(dd，J＝2.5，9.0Hz，1H，Ar)，7.85-7.84(m，2H，Ph)，7.83-7.82(m，1H)，7.56(t，J＝7.0Hz，1H，Ph)，7.48(t，J＝7.0Hz，2H，Ar-H)，7.08(d，J＝9.0Hz，1H，Ar-H)，6.93(t，J＝6.0Hz，1H，CO(NH))，5.85(d，J＝8.0Hz，1H，NHSO2)，3.96-3.87(m，2H，CHCH2，CHCHH)，3.80-3.70(bm，4H，NH(CH2)2)，3.59-3.54(m，1H，CHCHH)，3.23-3.21(m，4H，N(CH2)2)，1.48(s，18H，tBu)，1.26(s，9H，tBu)；13C NMR(500MHz，CDCl3)d 168.3，165.3，155.2，147.5 140.9，138.8，133.1，132.0，129.2，127.2，126.3，126.0，119.9，84.0，56.0，50.3，42.2，28.1，27.6； FAB-HRMS(M+Cs+)计算值908.2265，实测值908.223 3.
如图8所示，合成化合物16。根据制备化合物11相同的方法制备化合物16，只是使用66替代65。收率15.0g(93％)，为黄色固体。Rt＝15.3分钟；
IR(KBr)nmax3367，3239，2925，2857，1662，1613，1523，1449，1388，1320，1199，1173，113 5，1093，992，837，802，721cm-1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.22(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.95(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H，Ar)，7.79(m，2H，Ph)，7.47-7.38(m，3H，Ph)，7.32(d，J＝8.5Hz，1H，Ar)，4.21(dd，J＝5.0，9.0Hz，1H，CHCH2)，3.74(dd，J＝5.0，10.0Hz，1H，CHCHH)，3.67-3.65(m，4H，N(CH2)2)，3.49-3.44(m，1H，CHCHH)，3.31-3.29(m，4H，N(CH2)2)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 172.6，167.9，158.4，148.3，142.8，142.2，129.9，56.6，50.9，46.3，43.3；FAB-HRMS(M+H+)计算值520.1614，实测值520.1630.
如图8所示，合成化合物63。在0℃下，向51(130mg，0.43mmol)的THF(5.0ml)溶液中加入NaH(60％悬浮液，于矿物油中)(70mg，1.74mmol)。在此温度下再继续搅拌15分钟，所的灰色悬浮液备用。向59(200mg，0.39mmol)的DMF(20ml)溶液中加入烷醇(2.5ml)。在0℃下搅拌1小时后，加入剩余的2.5ml烷醇。在0℃下3小时后，通过加入10ml饱和NH4Cl溶液使反应停止，利用乙酸乙酯稀释。分相后利用乙酸乙酯(3×25ml)萃取水相。利用水(2×10ml)和盐水(10ml)顺序地洗涤合并的有机萃取液，在MgSO4上干燥。过滤并减压蒸发后，残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50％乙酸乙酯，于己烷中)，得到63，为黄色固体(211mg，69％)。Rf＝0.16(硅胶，50％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(KBr)nmax3330，2979，2934，1728，1620，1570，1531，1416，1329，1281，1156，1079，1023，970，916，816，753，660，618，552，477cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 11.45(bs，1H，(C＝N)NH(C＝O))，8.78(bt，1H，CH2NH(C＝N))，8.37(s，1H，Ar)，8.26(d，J＝2.0Hz，1H，萘基)，7.92-7.87(2×d，J＝8.0Hz，2H，萘基)，7.90(d，J＝8.5Hz，1H，Ar)，7.83(d，J＝8.5Hz，1H，
萘基)，7.79(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H，萘基)，7.64-7.55(2×br.dd，2H，萘基)，7.07(d，J＝8.5Hz，1H，Ar)，6.90(dd，J＝5.5，5.5Hz，1H，CH2NH(C＝O))，5.95(d，J＝7.5Hz，1H，NHSO2)，4.22(t，J＝5.3Hz，2H，OCH2)，4.02(ddd，J＝4.0，7.5，8.5Hz，1H，CHCH2)，3.93-3.83(m，重叠，3H，CHCHH，CH2NH(C＝N))，3.55(ddd，J＝5.5，8.5，13.5Hz，1H，CHCHH)，1.50(s，9H，tBu)，1.47(s，9H，tBu)，1.17(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 168.3，164.9，156.4，154.0，152.9，139.3，135.6，134.9，132.6，132.0，129.6，129.2，129.1，128.7，127.8，127.7，127.6，126.3，125.0，122.1，114.4，84.0，83.5，68.0，56.1，42.3，39.5，28.3，28.0，27.5；FAB-HRMS(M+Cs+)计算值933.2105，实测值933.2116.
如图8所示，合成化合物17。根据制备化合物11相同的方法制备化合物17，只是使用63替代60。收率32.7g(99％)，为灰白色至浅褐色固体。Rt＝14.5分钟；IR(KBr)nmax＝3421，2999，2898，1657，1635，1528，1383，1351，1322，1276，1198，1157，1132，1080，1046，979，823，754，660，550cm-1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.15(s，1H，萘基)，7.93(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.72(d，J＝8.0Hz，1H，萘基)，7.69-7.58(m，4H，萘基，Ar)，7.42-7.35(2×ddd，superimposed，2H，萘基)，6.92(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.21(dd，J＝4.5，9.8Hz，1H，CHCH2)，4.13(t，J＝5.0Hz，2H，OCH2)，3.61(dd，J＝4.5，13.5Hz，1H，CHCHH)，3.57(t，J＝4.5Hz，2H，CH2NH(C＝N))，3.28(dd，J＝9.8Hz，13.5Hz，1H，CHCHH)；13CNMR(125MHz，甲醇-d4)d 172.8，167.1，159.3，154.9，140.1，139.5，13 5.9，134.1，133.4，130.3，130.2，129.5，128.8，128.7，128.4，127.3，125.7，123.5，115.3，69.7，56.8，43.1，41.8；FAB-HRMS(M+H+)计算值545.1455，实测值545.1471.
如图8所示，合成化合物64。在室温下，向59(50mg，0.10mmol)的1-甲基-2-吡咯烷酮(1ml)溶液中加入53(58mg，0.19mmol)。4小时后，利用水(10ml)稀释反应混合物，利用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水相。利用水(2×5ml)和盐水(5ml)顺序地洗涤合并的有机萃取液，在MgSO4上干燥。过滤并减压蒸发后，残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，50％乙酸乙酯，于己烷中)，得到64，为黄色固体(76mg，99％)。Rf＝0.22(硅胶，50％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(KBr)nmax3300，3065，2975，2931，1734，1660，1620，1535，1497，1347，1261，1159，1129，1079，972，917，817，751，661，551，477cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 11.49(bs，1H，(C＝N)NH(C＝O))，8.58(bt，1H，CH2NH(C＝N))，8.47(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，8.41(dd，J＝5.5Hz，1H，NHCH2)，8.37(d，J＝2.0Hz，1H，萘基)，7.90-7.84(m，重叠，3H，萘基)，7.86(dd，J＝2.0，9.0Hz，1H，Ar)，7.79(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H，萘基)，7.59(ddd，J＝1.5Hz，7.0，7.0Hz，1H，萘基)，7.54(ddd，J＝1.5Hz，7.0，7.0Hz，1H，萘基)，7.12(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，6.69(t，J＝5.5Hz，1H，CH2NH(C＝O))，5.89(d，J＝8.0Hz，1H，NHSO2)，4.03(ddd，J＝4.0，8.0，8.5Hz，1H，CHCH2)，3.85(ddd，J＝4.0，6.0，14.0Hz，1H，CHCHH)，3.70(bdt，J＝5.5，5.5Hz，2H，NHCH2)，3.61-3.50(m，3H，CHCHH，CH2NH(C＝N))，1.52(s，9H，tBu)，1.47(s，9H，tBu)，1.18(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 168.5，165.6，156.6，153.2，146.9，136.0，134.8，134.6，132.0，131.3，129.6，129.2，128.9，128.6，127.8，127.6，126.0，122.2，120.8，114.3，83.8，83.6，56.4，42.4，42.2，39.1，28.3，28.0，27.6；FAB-HRMS(M+Cs+)计算值932.2265，实测值932.2285.
如图8所示，合成化合物18。根据制备化合物11相同的方法制备化合物18，只是使用64替代60。收率81.7g(90％)，为桔黄色固体。Rt＝12.4分钟；IR(KBr)nmax3364，1676，1624，1556，1520，1426，1315，1241，1200，1158，1133，1076，1025，999，824，757，719，660，549，479cm-1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.17(bs，1H，萘基)，8.14(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.72(d，J＝8.0Hz，1H，萘基)，7.68-7.65(m，2H，萘基)，7.57(bd，重叠， J＝9.5Hz，1H，萘基)，7.55(dd，重叠，J＝2.0，9.0Hz，1H，Ar)，7.41(ddd，J＝1.5，7.0，8.0Hz，1H，萘基)，7.36(ddd，J＝1.5，7.0，8.0Hz，1H，萘基)，6.74(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.25(dd，J＝4.5，10.0Hz，1H，CHCH2)，3.62(dd，J＝4.5，14.0Hz，1H，CHCHH)，3.52(t，J＝6.0Hz，2H，NHCH2)，3.41(t，J＝6.0Hz，2H，NHCH2)，3.30(dd，J＝10.0，14.0Hz，1H，CHCHH)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 173.0，167.8，147.8，139.5，135.9，135.3，133.4，130.3，130.2，129.3，128.7，128.6，128.3，127.2，123.5，121.5，114.5，57.0，42.9，42.5，41.5；FAB-HRMS(M+Na+)计算值566.1434，实测值566.1453.
如图8所示，合成化合物66。在室温下，向59(150mg，0.29mmol)的DMF(5ml)溶液中加入52(190mg，0.58mmol)。20小时后，利用水(25ml)和乙酸乙酯稀释反应混合物。分相后，利用乙酸乙酯(3×30ml)萃取。利用水(2×20ml)和盐水(20ml)顺序地洗涤合并的有机萃取液，在MgSO4上干燥。过滤并减压蒸发后，残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，40％乙酸乙酯，于己烷中)，得到66，为黄色固体(240mg，99％)。Rf＝0.33(硅胶，50％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(KBr)nmax3397，2979，2933，1741，1610，1524，1454，1367，1303，1239，1157，1015，975，834，752，661，615，552，477cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 11.49(bs，1H，(C＝N)NH(C＝O)，8.38(bs，1H，萘基)，8.24(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.90(bd，J＝7.5Hz，1H，萘基)，7.87(brd，J＝9.0Hz，1H，萘基)，7.83(dd，superimposed，J＝2.0，8.5Hz，1H，Ar)，7.82(d，superimposed，J＝8.0Hz，1H，萘基)，7.79(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H，萘基)，7.64-7.55(2×bddd，重叠，2H，萘基)，7.13(bm，1H，NH(C＝O))，6.98(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.01(ddd，J＝3.5，8.0，9.0Hz，1H，CHCH2)，3.88(ddd，J＝4.0，6.0，13.5Hz，1H，CHCHH)，3.73(bm，4H，NCH2)，3.55(ddd，J＝5.5，8.5，13.5Hz，1H CHCHH)，3.18(bm，4H，NCH2)，1.48(s，18H，tBu)，1.15(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 168.6，165.1，155.2，147.3，140.9，135.6，134.9，132.0，129.6，129.2，129.0，128.7，127.8，127.7，126.2，126.0，122.1，119.8，119.7，83.9，56.1，50.3，42.2，28.2，28.0，27.3；FAB-HRMS(M+Cs+)计算值958.2422，实测值958.2458.
如图8所示，合成化合物19。根据制备化合物11相同的方法制备化合物19，只是使用66替代60。收率31.9g(93％)，为浅黄色固体。Rt＝11.1分钟；IR(KBr)nmax3401，3297，3251，2996，2928，1659，1613，1523，1451，1385，1323，1199，1157，1138，1078，992，808，753，720，660，549cm-1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.19(bs，1H，萘基)，7.93(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.76(bd，J＝9.0Hz，1H，萘基)，7.71-7.61(m，重叠，3H，萘基，Ar)，7.55(dd，J＝2.0Hz，8.8Hz，1H，萘基)，7.44-7.36(2×ddd，重叠，2H，萘基)，6.91(d，J＝8.5Hz，1H，Ar)，4.21(dd，J＝4.5，9.5Hz，1H，CHCH2)，3.61(dd，J＝4.5，13.5Hz，1H，CHCHH)，3.55(m，4H，NCH2)，3.29(dd，J＝9.5，13.5Hz，1H，CHCHH)，3.15-3.09(m，4H，NCH2)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d167.6，158.5，148.2，142.1，139.4，136.0，133.5，133.3，130.4，130.3，129.7，128.9，128.5，127.3，126.7，123.6，121.2，50.9，49.6，48.6，46.4；FAB-HRMS(M+Cs+)计算值702.0747，实测值702.0784.
如图9所示，合成化合物67。在室温下，向57(0.10g，0.20mmol)的DMF(8ml)溶液中加入55(0.038g，0.22mmol)和三乙胺(0.06ml，0.44mmol)。在25℃下搅拌16小时后，利用EtOAc(10ml)和水(10ml)稀释反应混合物。分层，利用乙酸乙酯(2×10ml)萃取水层。收集有机萃取液，利用水(2×10ml)和盐水(20ml)洗涤，在Na2SO4上干燥。过滤并减压蒸发后，残留物通过快速柱色谱纯化(硅胶，乙酸乙酯)，得到67，为浅黄色固体(110mg，92％)。Rf＝0.43(硅胶，乙酸乙酯)；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.57(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.96(bm，1H，Ar)，7.83(dd，J＝2.0，9.0Hz，1H，Ar)，7.80-7.78(m，2H，Ar)，7.48-7.39(m，4H，Ar)，7.18(dd，J＝4.0，6.0Hz，2H)，7.06(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.12(dd，J＝6.0，8.0Hz，1H，CH2CH)，3.89(t，J＝7.0Hz，2H，CH2Ar)，3.65(dd，J＝5.0，14.0Hz，1H，CHHCH)，3.46(dd，J＝8.0，14.0Hz，1H，CHHCH)，3.26(t，J＝7.0Hz，2H，CH2NH)，1.22(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 170.4，168.1，164.8，153.6，147.9，142.2，135.6，133.6，132.6，132.4，130.1，128.1，127.7，123.5，121.8，114.9，83.3，57.3，43.2，42.3，27.9； 电喷质谱(M+H+)计算值609，实测值609.
如图9所示，合成化合物20。在室温下，向57(0.068g，0.11mmol)的CH2Cl2(2ml)溶液中加入三氟乙酸(2ml)。4小时后，真空除去溶剂，得到油状物，在RP-HPLC(C-18)之后，得到20，为黄色固体(0.056g，97％)。1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.65(d，J＝1.0Hz，1H，Ar)，7.93(dd，J＝1.0，9.0Hz，1H，Ar)，7.81(d，J＝8.0Hz，2H，Ph)，7.74(dd，J＝3.0，6.0Hz，2H，Ar)，7.58(dd，J＝3.0，6.0Hz，Ar)，7.48(t，J＝7.0Hz，1H，Ph)，7.43(t，J＝8.0Hz，2H，Ph)，7.16(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.20(dd，J＝5.0，9.0Hz，1H，CHCHH)，4.04(t，J＝6.5Hz，2H，CH2Ar)，3.74(dd，J＝5.0，14.0Hz，1H，CHCHH)，3.54(t，J＝6.5Hz，2H，CH2NH)，3.45(dd，J＝9.0，14.0Hz，1H，CHCHH)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 172.6，168.1，152.6，147.3，142.0，135.7，133.5，133.1，132.4，132.3，130.0，127.9，127.8，127.4，122.5，114.8，114.6，56.8，43.2，41.2，27.2；FAB-HRMS(M+Cs+)计算值685.0482，实测值685.0461.
如图9所示，合成化合物68。在室温下，向57(0.06g，0.13mmol)的DMF(10ml)溶液中加入56(0.03g，0.14mmol)和三乙胺(0.04ml，0.29mmol)。12小时后，真空除去溶剂，得到68，为粗黄色油状物(0.09g，110％)。Rf＝0.23(40％甲醇，于二氯甲烷中)；
1HNMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.63(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.93(dd，J＝2.0，9.0Hz，1H，Ar)，7.82(d，J＝6.5Hz，2H，Ph)，7.48-7.42(m，3H，Ph)，7.09(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.08-4.06(m，1H，CHCHH)，3.68-3.62(m，重叠，5H，NHCH2CH2NH，CHCHH)，3.50-3.44(m，1H，CHCHH)，3.30(t，J＝3.5Hz，2H，CH2NHAr)，1.24(s，9H，tBu)；电喷质谱计算值(M+H+)573，实测值573.
如图9所示，合成化合物21。在室温下，向68(0.09g，0.14mmol)的CH2Cl2(5ml)溶液中加入三氟乙酸(5ml)。4小时后，真空除去溶剂，得到油状物，在RP-HPLC(C-18)之后，得到21，为黄色固体(0.07g，83％)。Rt＝14.0分钟；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.64(bs，1H，Ar)，7.94(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，7.82(d，J＝7.0Hz，2H，Ph)，7.48(t，J＝7.0Hz，1H，Ph)，7.43(t，J＝7.0Hz，1H，Ph)，7.12(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.20(dd，J＝5.0，9.0Hz，1H，CHCH2)，3.73(dd，J＝5.0，14.0Hz，1H，CHCHH)，3.70-3.66(m，重叠，7H，NCH2CH2N，CH2N(C＝N))，3.52(t，J＝6.0Hz，2H，CH2NHAr)，3.45(dd，J＝9.0，14.0Hz，1H，CHCHH)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 172.7，168.3，161.6，148.0，142.1，135.8，133.5，132.9，130.0，128.0，127.7，122.3，114.9，56.7，44.1，43.2，42.9，42.7；FAB-HRMS(M+H+)计算值520.1614，实测值520.1630.
如图10所示，合成化合物69。在室温下，向氟化物57(0.10g，0.20mmol)的无水DMF(10ml)溶液中吹入NH3(g)蒸汽1小时。4小时后，利用乙酸乙酯和水稀释反应混合物。分层并利用水(2×10ml)、盐水(20ml)洗涤有机层，干燥(Na2SO4)。真空除去溶剂，得到61，为浅黄色油状物(0.09g，93％)。Rf＝0.25(硅胶，50％乙酸乙酯，于己烷中)；
IR(薄膜)nmax3359，1729，1631，1516，1308，1258，1158，1093cm-1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.54(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.83-7.81(m，2H，Ar)，7.74(dd，J＝2.0，9.0Hz，1H，Ar)，7.52-7.43(m，3H，Ar)，6.97(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.12(dd，J＝6.0，8.0Hz，1H，CH)，3.64(dd，J＝6.0，13.5Hz，1H，CHH)，3.47(dd，J＝8.0，13.5Hz，1H，CHH)，1.25(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d170.5，168.3，149.4，142.2，134.8，133.6，131.7，130.1，128.1，127.1，122.2，119.9，83.4，57.3，43.2，27.9；FAB-HRMS 计算值(M+Cs+)597.0420，实测值597.0439.
如图10所示，合成化合物70。在室温下，于氩气气氛中，向胺69(0.23g，0.50mmol)的甲醇(15ml)溶液中加入10％Pd/C(0.10g)。烧瓶然后安装有含H2(g)的气球。8小时后，通过一小段硅藻土(celite)过滤反应混合物，真空除去溶剂，得到70，为浅褐色油状物(0.19g，90％)。Rf＝0.11(硅胶，80％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(薄膜)nmax3360，2979，1729，1625，1582，1542，1508，1447，1369，1310，1248，1160，1093，758，721，688，590cm1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 7.82-7.80(m，2H，Ar)，7.53-7.49(m，1H，Ar)，7.46-7.43(m，2H，Ar)，7.11(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.05(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，6.64(d，J＝8.5Hz，1H，Ar)，4.08(dd，J＝7.5，14.5Hz，1H，CH)，3.61(dd，J＝6.0，13.5Hz，1H，CHH)，3.47(dd，J＝8.0，13.5Hz，1H，CHH)，1.22(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 170.8，170.6，142.1，141.2，134.8，133.7，130.1，128.1，124.5，120.6，116.5，115.5，83.3，57.5，43.1，28.0； FAB-HRMS计算值(M+Na+)435.1702，实测值434.1727.
如图10所示，合成化合物71。向二胺70(0.092g，0.20mmol)的乙醇(20ml)溶液中加入三乙胺(0.032ml，0.22mmol)和异硫氰酸苯基酯(0.028ml，0.22mmol)。14小时后，真空除去溶剂，得到为褐色残留物，通过制备性薄层色谱(硅胶，5％甲醇，于二氯甲烷中)纯化，得到71，为褐色固体(0.082g，69％)。Rf＝0.16(硅胶，5％甲醇，于二氯甲烷中)；IR(薄膜)nmax3316，3061，2978，1729，1624，1504，1448，1368，1309，1252，1159，1092，837，733 cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.15(bs，1H，NH)，7.81(d，J＝7.5Hz，2H，Ar)，7.56-7.03(m，14H)，6.78(bs，1H，NHC＝O)，6.58(d，J＝8.0Hz，1H，HNSO2Ph)，4.51(bs，1H)，4.05(bs，1H)，3.67(bs，1H)，1.20(s，9H，tBu)；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 180.3，168.6，167.4，147.0，143.3，139.6，137.6，132.7，129.0，128.4，127.1，126.6，125.4，123.5，116.1，83.2，60.3，56.5，42.0，27.5；FAB-HRMS 计算值(M+Cs+)702.0821，实测值702.0797.
如图10所示，合成化合物72。在室温下，向硫脲71(0.077g，0.14mmol)的DMF(10ml)溶液中加入三乙胺(0.02ml，0.14mmol)和氯化汞(II)(0.04g，0.14mmol)。4小时后，通过一小段硅藻土(celite)过滤并浸在乙酸乙酯中。真空除去溶剂，得到72褐色残留物(0.05g，81％)，将其带入下一步骤。Rf＝0.32(硅胶，5％甲醇，于二氯甲烷中)；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 7.98(m，2H，Ar)，7.53-6.90(m，15H，Ar)，4.16(m，1H，CH)，3.83(bs，1H，CHH)，3.62(bs，1H，CHH)，1.25(bs，9H，tBu)；FAB-HRMS计算值(M+Cs+)668.0944，实测值668.0923.
如图10所示，合成化合物22。根据制备化合物10相同的方法制备化合物22，只是使用72替代36b。收率0.04g(88％)。Rt＝14.8分钟；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 7.85-7.82(m，3H，Ar)，7.75(dd，J＝1.5，8.5Hz，1H，Ar)，7.56-7.41(m，9H，Ar)，4.22(dd，J＝5.0，9.0Hz，1H，CH)，3.78(dd，J＝5.0，13.5Hz，CHH)，3.48(dd，J＝9.0，13.5Hz，CHH)；13C NMR(150MHz，甲醇-d4)d171.9，169.2，150.7，141.6，136.2，133.1，131.2，130.9，130.6，129.5，128.3，127.5，124.6，124.1，111.9，111.8，56.1，42.8；FAB-HRMS计算值(M+H+)480.1342，实测值480.1352.
权利要求
1.由下列通式表示的RGD模拟物 其中R1选自下列基团之一 以及X选自硫、-NH-和氧的二价基团；R2选自-CO2-叔丁基、-CO-芳基和-SO2-芳基。
2.根据权利要求1所述的RGD模拟物，其中芳基选自苯基、1-萘基和2-萘基。
3.根据权利要求2的RGD模拟物，其中R2为-SO2-芳基。
4.根据权利要求1所述的RGD模拟物，其中该模拟物由下列结构式表示
5.根据权利要求1所述的RGD模拟物，其中该模拟物由下列结构式表示
6.根据权利要求1所述的RGD模拟物，其中该模拟物由下列结构式表示
7.根据权利要求1所述的RGD模拟物，其中该模拟物由下列结构式表示
8.根据权利要求1所述的RGD模拟物，其中该模拟物由下列结构式表示
9.根据权利要求1所述的RGD模拟物，其中该模拟物由下列结构式表示
10.根据权利要求1所述的RGD模拟物，其中该模拟物由下列结构式表示
11.根据权利要求1所述的RGD模拟物，其中该模拟物由下列结构式表示
12.根据权利要求1所述的RGD模拟物，其中该模拟物由下列结构式表示
13.根据权利要求1所述的RGD模拟物，其中该模拟物由下列结构式表示
14.根据权利要求1所述的RGD模拟物，其中该模拟物由下列结构式表示
15.根据权利要求1所述的RGD模拟物，其中该模拟物由下列结构式表示
16.制备由下列通式表示的RGD模拟物的方法， 其中R1选自下列基团之一 以及X为选自硫、-NH-和氧的二价基团；R2选自-CO2-叔丁基、-CO-芳基和-SO2-芳基，该方法包括下列步骤步骤1提供由下列结构式表示的含有与硝基芳基环共价相连的氟基团的硝基芳基前体 其中R3为酸保护基团；然后，步骤2通过亲核芳族取代，利用含被护胍基团的亲核试剂取代氟基团，生成被护RGD模拟物；最后，步骤3利用酸将被护RGD模拟物脱保护。
17.由下列通式表示的RGD模拟物 其中R2选自-CO2-叔丁基和-SO2-芳基。
18.根据权利要求17所述的RGD模拟物，其中芳基选自苯基、1-萘基和2-萘基。
19.对αiibβ3调节的细胞附着与αvβ3调节的细胞附着的不同抑制的方法，该方法包括步骤表达αiibβ3的细胞与含有选择RGD模拟物的溶液相接触，所述模拟物选自权利要求5、7、9、11、14或15的化合物，其中所述溶液中RGD模拟物的浓度足以抑制αiibβ3调节的细胞附着，其中被抑制的αiibβ3调节的细胞附着至少大约大于αvβ3调节的细胞附着的100倍。
全文摘要
RGD模拟物其中硝基芳基部分与芳基醚/α－氨基酸/胍结构的结合显示出了各种整合蛋白拮抗剂和血管生成抑制剂的活性。
文档编号C07C247/04GK1308534SQ99808280
公开日2001年8月15日 申请日期1999年7月6日 优先权日1998年7月6日
发明者K·C·尼科劳, J·特鲁吉洛, K·奇巴勒, B·延德莱特, S·古德曼 申请人:斯克里普斯研究学院