专利名称：一种啤酒花多糖的提取和脱蛋白方法
技术领域：
本发明涉及一种啤酒花多糖的提取和脱蛋白的方法。更具体地，本发明涉及一种采用液态CO2、亚临界CO2、超临界CO2或低级醇(包括甲醇、乙醇、丙醇)萃取后的啤酒花萃余物为原料，采用微波辅助水提醇析法，经离心、干燥后提取分离啤酒花粗多糖；对啤酒花粗多糖，经脱杂质、脱色和酶-化学法联用脱除蛋白质后，经醇析、离心、干燥后得到精制的啤酒花多糖；对精制后的啤酒花多糖，进一步采用DEAE-纤维素柱层析，收集含有多糖组分的溶液，浓缩后经透析袋透析、醇析、离心分离，干燥后得到高纯度的啤酒花多糖，属于植物活性成分提取领域。
背景技术：
啤酒花，学名蛇麻(Jlmmlus Lupulus L.)，是桑科律草属多年蔓生草本植物，主要用于啤酒酿造。近年来的研究发现，啤酒花中除含有影响啤酒风味质量的挥发性成分和苦味树脂类成分外，其中的多酚和类黄酮类物质还具有非常重要的药理活性作用，已从中分离和鉴定出了数百种化合物。研究表明，多糖类物质在生物体内不仅是能量来源或结构材料，更重要的是它参与了各种重要的生命活动，具有可与蛋白质、核酸相比拟的信息功能， 与蛋白质、核酸一样，糖类也是涉及生命活动本质的三类生物大分子之一。早期人们普遍认为多糖类物质本身没有活性，但随着研究的深入，多糖类物质的结构和活性逐渐被研究人员揭示，植物多糖类物质均展现出了很强的生物活性，如降血脂、降血糖、抗肿瘤、增强免疫力、抗氧化和抑菌等作用，部分已被医学界在临床上用于肿瘤、肝炎和心血管疾病等的辅助和康复治疗，因此，对植物多糖的研究已成为当今国内外研究热点之一。我们在对啤酒花活性成分的研究中发现，啤酒花中的多糖类物质也具有很强的抗氧化等生物活性，但目前的研究中尚未有对啤酒花中多糖类的分离提取研究。此外，在啤酒花的生产加工中，通常仅提取其中的脂溶性的苦味树脂类成分、挥发性的精油类组分以及其中的黄酮类组分，而啤酒花中的多糖类成分通常仍然残留在提取后的废渣中而弃去，并未得到有效利用。目前，大多数植物及真菌多糖的提取分离中，传统的方法为水提醇析法，该方法具有廉价、方便的特点，但提取时间较长，多糖提取率效率较低。大多数脱蛋白方法可以分为生物酶法和化学法，生物酶法主要是控制一定的条件采用蛋白酶处理，化学法主要Skvag 法、盐酸法、三氯乙酸法或先经盐酸、三氯乙酸处理后，再用正丁醇处理等方法。如中国专利 200510012557. 8,92109345. 4,02114216. 5,200810142918. 4 等均公开了对不同植物或真菌多糖的提取、分离和精制方法。但由于酶的专一性特点，使得蛋白脱除率因原料的不同而有差异，效果也不稳定，蛋白脱除率并不理想。化学法具有较高的蛋白脱除率，但在脱除过程中需要使用大量的有机溶剂反复处理，并且过程复杂，多糖的损失率较大。
发明内容
针对啤酒花多糖组分在正常的加工中未得到有效利用，现有技术中存在的多糖提取时间长，生物酶法处理蛋白质脱除率低、化学法处理溶剂使用量大，处理次数多，且多糖
4损失率高等技术缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种啤酒花多糖的提取和脱蛋白的方法。本发明的目的是以液态CO2、亚临界CO2、超临界CO2或低级醇(包括甲醇、乙醇、丙醇)萃取后的啤酒花废渣为原料，采用微波辅助提取啤酒花中的多糖类组分，并采用醇析、 过滤或离心分析、干燥后得到啤酒花粗多糖；对啤酒花粗多糖进行脱色，酶-化学法联用脱除其中的蛋白质，再次醇析、过滤或离心分离、干燥后得到精制啤酒花多糖；将啤酒花精制多糖溶于少量蒸馏水或去离子水中，经过DEAE-纤维素柱层析，收集含有多糖组分的溶液， 浓缩后经透析袋透析、醇析、离心、干燥后得到高纯度的啤酒花多糖。为达到上述目的，本发明是采用如下技术方案予以实现的
一种从啤酒花中提取啤酒花多糖并脱除蛋白的方法，其特征在于包括以下步骤
(1)以采用CO2、有机溶剂为提取剂提取过啤酒花浸膏的废渣为原料，控制萃取温度为 25、5°C、用水提取广3次，料液比为1:3 1:20，萃取时间为广10小时，使得啤酒花中的可溶性糖类组分溶解在水中，在萃取期间，采用微波辅助萃取5 30min ；
(2)过滤或离心，分离出水溶液，滤渣重复上述步骤(1)的操作一次，合并两次的提取溶液，并浓缩到原提取液总体积的109Γ30%，向浓缩液中加入一定体积的高浓度乙醇，使溶液的乙醇浓度达到309Γ85%，静置12l4h，其中的多糖类组分从溶液中沉淀析出，过滤或离心分离出其中的沉淀；溶液经适度浓缩后再次加入一定体积的高浓度乙醇溶液，使其中的乙醇溶液达到30、5% ；静置12 24h，再次过滤或离心分离出其中的沉淀；溶液弃去，合并两次得到的沉淀；
(3)上述步骤(2)中得到的沉淀再次溶解到一定体积的蒸馏水或去离子水中，过滤或离心分离出其中的不溶物，溶液再次加入高浓度的乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到30-85%， 静置过夜后，离心分离出其中的沉淀；沉淀用少量高浓度的乙醇洗涤后，在低于50°C的温度下真空干燥或冷冻干燥，得到啤酒花多糖的粗品；
(4)上述步骤(3)中得到的啤酒花多糖的粗品，溶解在蒸馏水或去离子水中，先用活性炭或过氧化氢脱色，然后采用酶-化学法联用进行脱蛋白处理，脱除了蛋白质的多糖溶液， 再经醇析，离心分离，少量高浓度乙醇洗涤，真空干燥或冷冻干燥后，得到啤酒花多糖的精制品；
(5)上述步骤中得到的啤酒花多糖的精制品，用少量蒸馏水或去离子水溶解，再经DEAE-纤维素柱柱层析后，收集含有多糖组分的溶液，浓缩后再经透析袋透析、醇析、离心分离，在低于50°C的温度真空干燥或冷冻干燥后，得到高纯度的啤酒花多糖。所述的一种从啤酒花中提取啤酒花多糖并脱除蛋白的方法，优选的提取温度为 8(T90°C，提取时间为Hh ；微波作用时间为12 15min ；
所述的一种从啤酒花中提取啤酒花多糖并脱除蛋白的方法，高浓度的乙醇为含量大于 90%的乙醇溶液或无水乙醇；
所述的一种从啤酒花中提取啤酒花多糖并脱除蛋白的方法，酶-化学法联用脱除蛋白的方法为将啤酒花多糖的粗品溶解在蒸馏水或去离子水中，先采用0. 5-3. Omg/mL菠萝蛋白酶或木瓜蛋白酶处理，控制溶液的温度为35飞5°C、酶底比为0. 5 5. 0%、ρΗ值为5. (Γ9. 0， 酶解时间为0. 5^4h ；待反应完成后，用盐酸调节溶液的pH值至2. (Γ4. O之间，低温下静置过夜，离心，弃去沉淀收集清液；清液中加入相当于溶液体积1/3 1/5的正丁醇试剂，搅拌 20-30min后，离心分离，弃去正丁醇层，水层即为脱除了蛋白质的多糖溶液。
所述的一种从啤酒花中提取啤酒花多糖并脱除蛋白的方法，酶-化学法联用脱除蛋白的方法为将啤酒花多糖的粗品溶解在蒸馏水或去离子水中，先采用0. 5-3. Omg/ mL菠萝蛋白酶或木瓜蛋白酶处理，控制溶液的温度为35飞50C、酶底比为0. 5^5. 0%、pH值为5. (Γ9. 0、酶解时间为0. 5 4h ；待反应完成后，用三氯乙酸调节溶液的pH值至2. (Γ3. 0 之间，低温下静置过夜，离心，弃去沉淀收集清液；然后在清液中加入相当于溶液体积 1/3^1/5的正丁醇试剂，搅拌20-30min后，离心分离，弃去正丁醇层，水层即为脱除了蛋白质的多糖溶液。所述的一种从啤酒花中提取啤酒花多糖并脱除蛋白的方法，当采用lmg/mL菠萝蛋白酶时，所述优化的脱蛋白工艺为菠萝蛋白酶的酶底比为4. 5%，pH值为5. 5，酶解温度为 45°C、酶解时间为0. 5h ；当酶解完成后，采用三氯乙酸调节溶液的pH值为2.0，在41静置过夜后，离心分离，弃去沉淀，收集清液；然后在清液中加入相当于溶液体积1/5的正丁醇试剂，搅拌20min后，离心分离，弃去正丁醇层，水层即为脱除了蛋白质的多糖溶液；经此处理后，啤酒花粗多糖的蛋白脱除率为90%左右，多糖保留率为80%左右。所述的一种从啤酒花中提取啤酒花多糖并脱除蛋白的方法，当采用lmg/mL木瓜蛋白酶时，所述优化的脱蛋白工艺为木瓜蛋白酶的酶底比为4. 5%，pH值为5. 5，酶解温度为 55°C、酶解时间为0. 5h ；当酶解完成后，采用三氯乙酸调节溶液的pH值为2.0，在41静置过夜后，离心分离，弃去沉淀收集清液；然后在清液中加入相当于溶液体积1/5的正丁醇试剂，搅拌20min后，离心分离，弃去正丁醇层，水层即为脱除了蛋白质的多糖溶液；经此处理后，啤酒花粗多糖的蛋白脱除率为90%左右，多糖保留率为80%左右。所述的一种从啤酒花中提取啤酒花多糖并脱除蛋白的方法，用于提取啤酒花多糖的原料为经液态CO2、亚临界CO2、超临界co2、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮为提取溶剂提取过的、 已分离掉啤酒花苦味树脂、挥发油或多酚类组分的废渣。由于在啤酒花的生产过程中所产生的废渣占到原料总量的80%左右，对其进行有效利用以提取啤酒花多糖，可提高啤酒花的综合利用价值，具有廉价、来源广泛、资源丰富等特点，可以作为一种生产植物活性多糖的新资源。本发明所取得的有益效果是
1.本发明采用微波辅助提取啤酒花多糖的方法，由于微波辐射加热效率高，对细胞壁的破碎作用大，因此，该方法与常规水提取相比，具有提取率高，多糖类组分易于溶出，提取时间短的优点。从啤酒花中分离提取啤酒花多糖为首次报道。2.本发明采用酶-化学法联用脱除啤酒花粗多糖中的蛋白质，即利用了酶法的选择性高，不易破坏多糖结构，多糖损失较少的优点，又利用的化学法的脱蛋白效率高的优势，同时，由于两种方法的结合，使得化学法的处理过程更为简单，处理次数少，溶剂使用量少，有效的提高了多糖的保留率。3.本发明所选用的提取原料为提取啤酒花浸膏的萃余物啤酒花废渣，提高了资源的再生利用价值，属于废物利用。
具体实施例方式下面采用实施例的方式具体地解释本发明，但本发明不局限于实施例。实施例1 取IOOg经液态(X)2萃取后的啤酒花废渣，加IOOOmL水，在90°C水浴中浸提池，期间采用微波辅助萃取12min，过滤，分离出水溶液，滤渣重复上述步骤操作一次，合并两次的提取溶液，并浓缩到IOOmL左右，向浓缩液中加入530mL95%的乙醇，使溶液的乙醇的浓度达到 80%，静置Mh，其中的多糖类组分从溶液中沉淀析出，离心分离出其中的沉淀；将此沉淀溶解到80mL的蒸馏水中，过滤分离出其中的不溶物，溶液再次加入430mL95%的乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到80%，静置过夜后，离心分离出其中的沉淀；沉淀用少量95%的乙醇洗涤后，在40°C的温度下真空干燥干燥，得到9. 24g啤酒花多糖的粗品，其多糖含量为31. 44%， 蛋白质含量为45. 5%。实施例2:
取500g经液态(X)2萃取后的啤酒花废渣，加6000mL水，在90°C水浴中浸提lh，期间采用微波辅助萃取15min，过滤，分离出水溶液，滤渣重复上述步骤操作一次，合并两次的提取溶液，并浓缩到1200mL左右，向浓缩液中加入6400mL95%的乙醇，使溶液的乙醇的浓度达到 80%，静置12h，其中的多糖类组分从溶液中沉淀析出，离心分离出其中的沉淀；将此沉淀溶解到250mL的蒸馏水中，过滤分离出其中的不溶物，溶液再次加入1330mL95%的乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到80%，静置过夜后，离心分离出其中的沉淀；沉淀用少量95%的乙醇洗涤后，在50°C的温度下真空干燥，得到51. 37g啤酒花多糖的粗品，其多糖含量为28. 55%，蛋白质含量为43. 78%。实施例3
取木瓜蛋白酶0. 10g，用蒸馏水溶解，定容至IOOmL,得到酶液最终浓度为lmg/mL，pH值为7.0 ；将IOOmL粗多糖溶液(2g/100mL)放入37°C水浴锅中预热lOmin，在温度为55°C、pH 值为5. 5时加入4. 5mL木瓜蛋白酶，酶解0. ，离心，取上清液。在此清液中加入2 mol/ L的盐酸溶液调节pH值至3.0，4° C静置过夜。次日3000r/min离心20min，弃去沉淀收集清液，再向清液中加入正丁醇20mL，磁力搅拌20min，3000r/min离心5min，弃去蛋白质层，取清液，此清液为脱除了蛋白质的多糖溶液，其蛋白质脱除率为82. 81%，多糖保留率为 77. 45%。将上述溶液浓缩、醇析、离心分离沉淀并在50°C的温度下真空干燥后，得到啤酒花精制多糖0. 78g，经分析，此样品中含多糖55. 32%，蛋白质12. 15%。实施例4:
取菠萝蛋白酶0. 05g，用蒸馏水溶解，定容至50mL，得到酶液最终浓度为lmg/mL，pH值为7. 0。将500mL粗多糖溶液(2g/100mL)放入37°C水浴锅中预热lOmin，在温度为45°C、 PH值为5. 5时加入25mL菠萝蛋白酶，酶解0. 5h，离心，取上清液。在此清液中加入5%的盐酸溶液调节pH值至2. 0，4° C静置过夜。次日3000r/min离心20min，弃去沉淀收集清液， 向清液中加入正丁醇IOOmL,磁力搅拌20min，3000r/min离心5min，弃去蛋白质层，收集清液，此清液为脱除了蛋白质的多糖溶液，其蛋白质脱除率为90. 06%，多糖保留率为79. 23%。 将上述溶液浓缩、醇析、离心分离沉淀并在50°C的温度下真空干燥后，得到啤酒花精制多糖 3. 22g，经分析，此样品中含多糖65. 32%，蛋白质2. 31%。实施例5:
取木瓜蛋白酶0. 10g，用蒸馏水溶解，定容至IOOmL,得到酶液最终浓度为lmg/mL，pH值为7.0 ；将IOOmL粗多糖溶液(2g/100mL)放入37°C水浴锅中预热lOmin，在温度为55°C、PH 值为5. 5时加入4. 5mL木瓜蛋白酶，酶解0. ，离心，取上清液。在此清液中加入2 mol/L的三氯乙酸溶液调节PH值至3.0，4° C静置过夜。次日3000r/min离心20min，弃去沉淀收集清液，再向清液中加入正丁醇20mL，磁力搅拌20min，3000r/min离心5min，弃去蛋白质层，取清液，此清液为脱除了蛋白质的多糖溶液，其蛋白质脱除率为76. 81%，多糖保留率为 91. 45%。将上述溶液浓缩、醇析、离心分离沉淀并在50°C的温度下真空干燥后，得到啤酒花精制多糖1. 05g，经分析，此样品中含多糖48. 25%，蛋白质16. 39%。实施例6
取菠萝蛋白酶0. 05g，用蒸馏水溶解，定容至50mL，得到酶液最终浓度为lmg/mL，pH值为7. 0。将500mL粗多糖溶液(2g/100mL)放入37°C水浴锅中预热lOmin，在温度为45°C、pH 值为5. 5时加入25mL菠萝蛋白酶，酶解0. 5h，离心，取上清液。在此清液中加入5%的三氯乙酸溶液调节pH值至2. 0，4° C静置过夜。次日3000r/min离心20min，弃去沉淀收集清液， 向清液中加入正丁醇IOOmL,磁力搅拌20min，3000r/min离心5min，弃去蛋白质层，收集清液，此清液为脱除了蛋白质的多糖溶液，其蛋白质脱除率为80. 06%，多糖保留率为85. 23%。 将上述溶液浓缩、醇析、离心分离沉淀并在50°C的温度下真空干燥后，得到啤酒花精制多糖 3. 58g，经分析，此样品中含多糖57. 69%，蛋白质7. 15%。实施例7:
取菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶各0. 05g，用蒸馏水溶解，定容至50mL，得到含量均为 0. 5mg/mL混合酶液。将150mL粗多糖溶液(2g/100mL)放入37°C水浴锅中预热lOmin，在温度为50°C、pH值为6. O时加入7. OmL的菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶的混合液，酶解lh，离心， 取上清液。在此清液中加入5%的盐酸溶液，调节pH值至3.0，4° C静置过夜。次日3000r/ min离心20min，弃去沉淀收集清液，向清液中加入正丁醇30mL，磁力搅拌20min，3000r/min 离心5min，弃去蛋白质，收集清液，此清液即为脱除了蛋白质的多糖溶液，其蛋白质脱除率为86. 34%，多糖保留率为80. 12%。将上述溶液浓缩、醇析、离心分离沉淀并在50°C的温度下真空干燥后，得到啤酒花精制多糖1. 09g，经分析，此样品中含多糖59. 77%，蛋白质4. 57%。实施例8
取菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶各0. 05g，用蒸馏水溶解，定容至50mL，得到含量均为 0. 5mg/mL混合酶液。将300mL粗多糖溶液(2g/100mL)放入37°C水浴锅中预热lOmin，在温度为50°C、pH值为6. O时加入15mL的菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶的混合液，酶解lh，离心，取上清液。在此清液中加入5%的三氯乙酸溶液调节pH值至2. 0,4° C静置过夜。次日3000r/ min离心20min，弃去沉淀收集清液，向清液中加入正丁醇70mL，磁力搅拌20min，3000r/min 离心5min，弃去蛋白质，收集清液，此清液为脱除了蛋白质的多糖溶液，其蛋白质脱除率为 83. 45%，多糖保留率为90. 12%。将上述溶液浓缩、醇析、离心分离沉淀，并在50°C的温度下真空干燥后，得到啤酒花精制多糖2. 27g，经分析，此样品中含多糖63.沈％，蛋白质2. 65%。实施例9
取啤酒花多糖的精制品2g，用少量蒸馏水溶解，经DEAE-纤维素柱柱层析后，收集含有多糖组分的溶液，浓缩后用透析袋透析，再经醇析、离心分离后，沉淀冷冻干燥，得到高纯度的啤酒花多糖0. 34g。经分析，此啤酒花多糖的多糖含量为91. 88%。
权利要求
1.一种从啤酒花中提取啤酒花多糖并脱除蛋白的方法，其特征在于包括以下步骤(1)以采用CO2、有机溶剂为提取剂提取过啤酒花浸膏的废渣为原料，控制萃取温度为 25、5°C、用水提取广3次，料液比为1:3 1:20，萃取时间为广10小时，使得啤酒花中的可溶性糖类组分溶解在水中，在萃取期间，采用微波辅助萃取5 30min ；(2)过滤或离心，分离出水溶液，滤渣重复上述步骤(1)的操作一次，合并两次的提取溶液，并浓缩到原提取液总体积的109Γ30%，向浓缩液中加入一定体积的高浓度乙醇，使溶液的乙醇浓度达到309Γ85%，静置12l4h，其中的多糖类组分从溶液中沉淀析出，过滤或离心分离出其中的沉淀；溶液经适度浓缩后再次加入一定体积的高浓度乙醇溶液，使其中的乙醇溶液达到30、5% ；静置12 24h，再次过滤或离心分离出其中的沉淀；溶液弃去，合并两次得到的沉淀；(3)上述步骤(2)中得到的沉淀再次溶解到一定体积的蒸馏水或去离子水中，过滤或离心分离出其中的不溶物，溶液再次加入高浓度的乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到30-85%， 静置过夜后，离心分离出其中的沉淀；沉淀用少量高浓度的乙醇洗涤后，在低于50°C的温度下真空干燥或冷冻干燥，得到啤酒花多糖的粗品；(4)上述步骤(3)中得到的啤酒花多糖的粗品，溶解在蒸馏水或去离子水中，先用活性炭或过氧化氢脱色，然后采用酶-化学法联用进行脱蛋白处理，脱除了蛋白质的多糖溶液， 再经醇析，离心分离，少量高浓度乙醇洗涤，真空干燥或冷冻干燥后，得到啤酒花多糖的精制品；(5)上述步骤中得到的啤酒花多糖的精制品，用少量蒸馏水或去离子水溶解，再经 DEAE-纤维素柱柱层析后，收集含有多糖组分的溶液，浓缩后再经透析袋透析、醇析、离心分离，在低于50°C的温度真空干燥或冷冻干燥后，得到高纯度的啤酒花多糖。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于优选的提取温度为8(T90°C，提取时间为 1 2h ；微波作用时间为12 15min。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的高浓度的乙醇为含量大于90%的乙醇溶液或无水乙醇。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的酶-化学法联用脱除蛋白的方法为将啤酒花多糖的粗品溶解在蒸馏水或去离子水中，先采用0. 5-3. Omg/mL菠萝蛋白酶或木瓜蛋白酶处理，控制溶液的温度为35飞5°C、酶底比为0. 5^5. 0%、pH值为5. (Γ9. 0，酶解时间为0. 5^4h ；待反应完成后，用盐酸调节溶液的pH值至2. (Γ4. O之间，低温下静置过夜，离心，弃去沉淀收集清液；清液中加入相当于溶液体积1/3 1/5的正丁醇试剂，搅拌20-30min 后，离心分离，弃去正丁醇层，水层即为脱除了蛋白质的多糖溶液。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的酶-化学法联用脱除蛋白的方法为将啤酒花多糖的粗品溶解在蒸馏水或去离子水中，先采用0. 5-3. Omg/mL菠萝蛋白酶或木瓜蛋白酶处理，控制溶液的温度为35飞5°C、酶底比为0. 5 5. 0%、ρΗ值为5. (Γ9. O、酶解时间为0. 5^4h ；待反应完成后，用三氯乙酸调节溶液的pH值至2. (Γ3. O之间，低温下静置过夜， 离心，弃去沉淀收集清液；然后在清液中加入相当于溶液体积1/3 1/5的正丁醇试剂，搅拌 20-30min后，离心分离，弃去正丁醇层，水层即为脱除了蛋白质的多糖溶液。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于当采用lmg/mL菠萝蛋白酶时，所述优化的脱蛋白工艺为菠萝蛋白酶的酶底比为4. 5%，pH值为5. 5，酶解温度为45°C、酶解时间为证；当酶解完成后，采用三氯乙酸调节溶液的pH值为2.0，在4°C静置过夜后，离心分离， 弃去沉淀，收集清液；然后在清液中加入相当于溶液体积1/5的正丁醇试剂，搅拌20min后， 离心分离，弃去正丁醇层，水层即为脱除了蛋白质的多糖溶液；经此处理后，啤酒花粗多糖的蛋白脱除率为90%左右，多糖保留率为80%左右。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于当采用lmg/mL木瓜蛋白酶时，所述优化的脱蛋白工艺为木瓜蛋白酶的酶底比为4. 5%，pH值为5. 5，酶解温度为55°C、酶解时间为 0.证；当酶解完成后，采用三氯乙酸调节溶液的pH值为2.0，在4°C静置过夜后，离心分离， 弃去沉淀收集清液；然后在清液中加入相当于溶液体积1/5的正丁醇试剂，搅拌20min后， 离心分离，弃去正丁醇层，水层即为脱除了蛋白质的多糖溶液；经此处理后，啤酒花粗多糖的蛋白脱除率为90%左右，多糖保留率为80%左右。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于提取啤酒花多糖的原料为经液态CO2、亚临界CO2、超临界C02、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮为提取溶剂提取过已分离掉啤酒花苦味树脂、挥发油或多酚类组分的废渣。
全文摘要
本发明提供了一种用啤酒花废渣提取啤酒花多糖的方法。本发明采用微波辅助，水提醇沉的方法从生产CO2啤酒花浸膏或溶剂浸提啤酒花浸膏后的啤酒花废渣中提取啤酒花粗多糖，对得到的粗多糖经脱除杂质、脱色、酶-化学法联用脱蛋白处理后得到啤酒花精制多糖，对啤酒花精制多糖还可采用DEAE纤维素柱层析，收集其中含有多糖的部分，经醇析、离心、干燥处理后得到高纯度的啤酒花多糖。
文档编号C08B37/00GK102558379SQ20121000724
公开日2012年7月11日 申请日期2012年1月11日 优先权日2012年1月11日
发明者乔茜茜, 刘玉梅, 祁英 申请人:新疆大学