专利名称：一种利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法
技术领域：
本发明涉及白灵菇多糖的制备エ艺，特别是涉及ー种利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法。
背景技术：
白灵燕(Pleurotus eryngii var. nebroden-sis),又称白阿魏蘑，隶属于伞菌目、侧耳科、侧耳属，为刺芹侧耳白色变种，因其菇体洁白、形似灵芝而得名，其肉质肥厚、细腻脆嫩、味道鲜美、个头大、ロ感好、商品性强，是继金针菇、香菇、猴头菇及竹荪之后又ー种优质珍稀食用菌。据分析，白灵菇含蛋白质14. 7%，脂肪4. 31%，粗纤维15. 4%，氨基酸总量为
10.6%，此外还含有亚油酸、不饱和脂肪酸、多糖类、钙、铁、锌、锰等多种矿质元素和丰富的维生素C、E等，是ー种食用和药用价值都很高的珍稀食用菌。所含丰富的真菌多糖，具有增强人体免疫力、调节人体生理平衡的作用。在国内外市场上十分畅销，属世界十大名菇之一，为天然緑色保健食品，开发前景非常广阔。现代药理学研究表明，白灵侧耳中所含的真菌多糖能增强人体免疫功能，具有抗病毒、抗肿瘤、降低胆固醇含量、防止动脉硬化的作用。由于培养环境条件与白灵菇生理特殊要求不相适应等原因，产生了ー些白灵菇畸形菇，如菇体萎縮形，菇体偏黄变色等，降低了产品等级，畸形菇出现，究其原因关键在于出菇期温、湿、光、气协调不好，又由于长菇期管理不善等原因，导致菇蕾出现后逐步分化成子实体，在长菇期间常因温、光、气调节不好，导致菇体发育倚斜侧长，或驼背或盖面凹陷，或斑点麻脸、色变，以及采收过期，菇体超大，不符合等级，甚至失去商品价值，影响了栽培者的经济效益。随着白灵菇产业发展，白灵菇加工业也取得了一定进展，主要产品包括白灵菇保鲜产品、干品(干片)、速冻产品、罐头产品、盐溃产品、方便食品等。但是对于加工过程中的废弃物的开发应用目前国内还没有涉及，这是ー种资源上的极大浪费。以往的白灵菇多糖提取技术国内涉及很少，而传统的酸提、碱提、热水浸提等方法虽然都是提取多糖的经典方法，但热水浸提法时间长、效率低；而酸碱法又极易导致多糖的立体结构破坏及生物活性改变，因此，为探索更为高效、经济、可靠的提取方法具有现实意义。白灵菇子实体、菌丝体中除多糖外，还含有一定量的蛋白质、胶质和粗纤维等成分，如能采用有关酶类对白灵菇菌丝体和子实体进行预处理，将会有利于其糖类物质的溶出和分离，从而提高多糖的提取率。但是截至目前，利用复合酶解法提取白灵菇多糖的研究还没有报告，并且传统的提取方法提取率太低，活性成分损失较大，已经不能满足市场需求。
发明内容
本发明的目的克服现有技术的缺点，提供一种低耗能、高效的利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法。本发明以白灵菇为原料，尤其是以白灵菇畸形菇、白灵菇加工中的废弃物，主要是生产中破碎的老边缘部、柄，以及采摘后剰余的白灵菇根等为原料，通过原料浸泡处理、复合酶解、分离纯化以及干燥技术，得到一种低耗能、高效的提取白灵菇多糖的方法。提取到的白灵菇多糖，既可单独作为ー种产品，还可以作为基料，辅以其它食品开发多种功能食
品O本发明的目的通过如下技术方案实现ー种利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法，包括如下步骤和エ艺条件(I)原料处理将原料白灵菇洗浄，浙干后，真空干燥，粉碎成80-100目白灵菇粉；(2)纤维素酶和果胶酶复合酶解白灵菇干粉与蒸馏水按质量比为I : l(Tl 30混和，浸泡3(T60min后，pH调至5. 0-7. 0，加所述白灵菇粉质量O. 5 2%的复合酶，所述复合酶由纤维素酶和果胶酶按质量比为1:1-3:1混合；置50°C _70°C保温反应I. 5_3h后， 升温至95 100°C灭酶，并继续于95 100°C水浴中浸提O. 5 2h ；(3)分离将白灵菇多糖提取液于转速为300(T5000r/min离心15 30min，取上清液，真空浓缩至上清液体积的1/5 1/10 ；(4)纯化用Sevage法去除蛋白质3次,3000 5000r/min离心15 20min,取上清液，得脱蛋白酶解浓缩液，无水こ醇沉淀、真空干燥或喷雾干燥得白色白灵菇多糖。为进ー步实现发明目的，所述原料白灵菇包括白灵菇、白灵菇加工中的废弃物，所述废弃物主要是生产中破碎的老边缘部、柄，以及采摘后剩余的白灵菇根。纤维素酶和果胶酶的质量比为1:1-2:1;所述无水こ醇沉淀是用4倍无水こ醇沉淀白灵菇多糖。所述纤维素酶的酶活为3. O X 104u/go所述果胶酶的酶活为I. O X 104u/go相对于现有技术，本发明具有如下优点和有益效果(I)本发明以白灵菇为原料，通过原料浸泡处理、复合酶解、分离纯化以及干燥技术提取白灵菇多糖；提取エ艺合理有效，开创了从白灵菇以及加工废弃物提取多糖的エ艺路线，极大限度地将白灵菇多糖提取出来；(2)本发明采用酶处理提取白灵菇多糖，细胞破碎率高，多糖提取率高，反应条件温和，缩短了提取时间，确保了提取出的白灵菇多糖的生物活性，使最終白灵菇多糖营养性和功能性同时兼具；(3)本发明的エ艺路线不仅可以用以白灵菇为原料，而且能够用白灵菇加工中的废弃物，如白灵菇畸形菇、生产中破碎的老边缘部、柄，以及采摘后剩余的白灵菇根等，提高了经济效益，同时减少了环境的负担；(4)本发明提取到的白灵菇多糖，即可单独作为ー种产品，还可以作为基料，辅以其它食品开发多种功能性食品，使保健食品的功能性日益多元化。
图I为不同葡萄糖浓度的吸光值标准曲线图。
具体实施例方式以下结合实施例对本发明做进ー步说明，但本发明要求保护的范围并不局限于实施例表达的范围。
采用苯酚-硫酸法测定总糖含量苯酚硫酸法是测定总糖的常用方法。其基本原理是选用こ醇除去样品中的单糖、低聚糖等干扰成分，然后用去离子水提取样品中所含的多糖类成分。多糖在浓硫酸作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，然后用比色法测定其多糖含量。标准曲线的制作准确称取25mg葡萄糖于250mL容量瓶中加水至刻度线，摇匀，然后分别吸取O. 4、0. 6、0. 8、I. O、I. 2、I. 4、I. 6、I. 8 (mL)于8支试管中，各加水补至2. OmL,然后缓慢地加入质量浓度为6%的苯酚液I. OmL及5. OmL浓硫酸，静置10分钟，摇匀，室温放置20分钟，以蒸馏水为对照，于495nm处测吸光值，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，图I所示。其中该线性方程中y是函数(因变量吸光值)，x是自变量(葡萄糖浓度)，R是线性相关系数。R2=O. 9971表明该线性方程高度线性相关。实验测定结果列入表I。表I葡萄糖标准曲线的测定表
权利要求
1.一种利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法，其特征在于包括如下步骤和工艺条件 (1)原料处理将原料白灵菇洗净，浙干后，真空干燥，粉碎成80-100目白灵菇粉； (2)纤维素酶和果胶酶复合酶解白灵菇干粉与蒸馏水按质量比为I: l(Tl 30混和，浸泡3(T60min后，pH调至5. 0-7. 0，加所述白灵菇粉质量0. 5 2%的复合酶，所述复合酶由纤维素酶和果胶酶按质量比为I : 1-3 I混合；置50°C-70°C保温反应1.5-3h后，升温至95 100°C灭酶，并继续于95 100°C水浴中浸提0. 5 2h ； (3)分离将白灵菇多糖提取液于转速为300(T5000r/min离心15 30min，取上清液，真空浓缩至上清液体积的1/5 1/10 ； (4)纯化用Sevage法去除蛋白质3次,300(T5000r/min离心15 20111；[11,取上清液,得脱蛋白酶解浓缩液，无水乙醇沉淀、真空干燥或喷雾干燥得白色白灵菇多糖。
2.根据权利要求I中所述利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法，其特征在于所述原料白灵菇包括白灵菇、白灵菇加工中的废弃物，所述废弃物主要是生产中破碎的老边缘部、柄，以及采摘后剩余的白灵菇根。
3.根据权利要求I中所述的利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法，其特征在于纤维素酶和果胶酶的比例为I :1-2:1;
4.根据权利要求I中所述的利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法，其特征在于所述无水乙醇沉淀是用4倍无水乙醇沉淀白灵菇多糖。
5.根据权利要求I中所述的利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法，其特征在于所述纤维素酶的酶活为3. 0 X 104u/g。
6.根据权利要求I中所述的利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法，其特征在于所述果胶酶的酶活为1.0 X 104u/g。
全文摘要
本发明公开了一种利用复合酶解技术生产白灵菇多糖的方法。该方法将新鲜白灵菇原料切片、真空干燥、磨碎成干粉；干粉与蒸馏水按质量比为1∶10~1∶30混和，浸泡后，加白灵菇粉质量05~2%的复合酶，复合酶由纤维素酶和果胶酶按质量比为1∶1-3∶1混合，置50℃-70℃保温反应后，灭酶，于95~100℃水浴中浸提0.5~2h；离心，取上清液，浓缩，去除蛋白质，得脱蛋白酶解浓缩液，沉淀、干燥得白色白灵菇多糖。本发明从白灵菇采摘、加工中的废弃物中提取多糖，充分利用废弃物，不仅有利于规模化工业生产，而且找到了一种低耗能、高效的提取白灵菇多糖的方法。
文档编号C08B37/00GK102675479SQ20121015465
公开日2012年9月19日 申请日期2012年5月17日 优先权日2012年5月17日
发明者廖劲松, 齐军茹 申请人:华南理工大学, 濮阳市味博生物技术有限公司