专利名称：一种枸杞多糖的纯化新方法
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种枸杞多糖的纯化方法，特别是涉及一种利用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合法纯化枸杞多糖的新方法。
背景技术：
枸杞,学名Lycium chinense,别名苟起子、枸杞红实、甜菜子、西枸杞、狗奶子、红青椒、枸蹄子、枸杞果、地骨子、枸茄茄、红耳坠、血枸子、枸地芽子、枸杞豆、血杞子、津枸杞， 是爺科枸杞属植物枸杞的果实。含甜菜碱(betane),阿托品(aTCMLIBopine),天仙子胺 (gyoscyamine),枸杞多糖,又含玉蜀黍黄质,酸衆果红素，隐黄质(cryptosxanthin),东莨菪素(scopo-letin)，胡萝卜素，硫胺素，核黄素，烟酸，维生素C等，具有滋阴明目、除肝火、 利于睡眠、壮阳、美白养颜、延缓衰老等功效。
枸杞多糖是从枸杞中提取而得的一种水溶性多糖。已明确该多糖系蛋白多糖，由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6种单糖成分组成。经研究表明，枸杞多糖是枸杞子调节免疫、延缓衰老的主要活性成分，可改善老年人易疲劳、食欲不振和视力模糊等症状，并具有降血脂、抗脂肪肝、抗衰老等作用。近年来，人们发现天然植物枸杞中含有大量的枸杞多糖，由于其原料枸杞来源较广，从中提取枸杞多糖已取得了可喜进展，名称为 “一种枸杞多糖的提取分离方法”的专利申请中便公开了将枸杞用烘干、粉碎、过筛处理，超声辅助提取并精制枸杞多糖的方法。上述专利文献中的枸杞多糖提取工艺主要是经过原料预处理、超声波辅助萃取、醇沉法分离等步骤精制而成，虽然最后的枸杞多糖纯度很高，但其工艺本身耗费大，实际应用效果远远不如大孔吸附树脂耦合硅胶层析法分离的效果。发明内容
本发明目的在于提供一种枸杞多糖的纯化新方法；本发明目的还在于提供一种方便快捷、原料来源丰富、生产成本低廉、分离效果明显、提取纯度高的利用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合法富集纯化枸杞多糖的方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的。
本发明枸杞多糖的纯化新方法包括如下步骤
将枸杞果粉碎成粗粉，加入粗粉质量15 20倍量的85% 100%甲醇回流提取 120 180分钟，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至3 5波美得浓缩液，然后用体积比1:1 的盐酸水溶液将浓缩液pH值调至2. 5 3，放置20 40分钟后滤过；滤液上HPD400、 HPD100、DM-130或AB-8广谱型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5% 20%的甲醇洗杂质，然后用50% 80%的甲醇洗脱，得 多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮甲醇的体积比为I 3 I的丙同与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮甲醇的体积比为5 7 I的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液；将多糖洗脱液进行精制得枸杞多糖，其含量在70% 以上。
本发明枸杞多糖的纯化新方法包括如下步骤
称取粉碎成粗粉的枸杞果，加入粗粉质量20倍量的85%甲醇回流提取180分钟， 滤过；滤液回收甲醇后浓缩至5波美得浓缩液，然后用体积比1:1的盐酸水溶液将浓缩液PH值调至3，放置40分钟后滤过；滤液上HPD400型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5 %的甲醇洗杂质，然后用50 %的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮甲醇的体积比为1:1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮甲醇的体积比为5 I的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液；将多糖洗脱液进行精制得枸杞多糖。
所述大孔树脂吸附步骤采用湿法装柱，保留液面，将调pH值后的滤液通过吸附柱，流速每分钟O. 05ml/g树脂。
所述硅胶层析步骤采用湿法装柱，保留液面，将半成品按重量1:1拌活化后硅胶，并将拌好的混合物至于硅胶柱上方，洗脱流速每分钟O. lml/g硅胶。硅胶活化条件为， 110摄氏度30分钟。
本发明中采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制。按4g/100ml洗脱液加入针剂活性炭，25 40摄氏度搅拌20 40分钟，滤过；滤液，回收混合试剂,浓缩干燥得中间体；中间体用7 9倍甲醇40摄氏度热溶，滤过滤液放凉析出晶体，抽滤得枸杞多糖成品。
本发明中精制过程包括如下步骤
按4g/100ml洗脱液加入针剂活性炭，25摄氏度搅拌40分钟，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体；中间体用9倍甲醇40摄氏度热溶，滤过；滤液放凉析出晶体， 抽滤得枸杞多糖成品。
本发明中精制过程中成品用7倍甲醇重结晶，过滤母液，回收甲醇，浓缩干燥得多糖半成品。
本发明应用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合法富集纯化枸杞多糖，对枸杞多糖的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量45%以上的多糖半成品和含量70%以上的多糖终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附多糖，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
本发明选用硅胶层析法纯化并结合活性炭与重结晶精制，分离效果更佳。
具体实施例方式
实施例1 :
称取枸杞果10kg，粉碎成粗粉，加18倍量90%的甲醇回流提取140分钟，滤过；滤液，回收甲醇，浓缩至4波美，用体积比1:1的盐酸水溶 液将浓缩液pH值调至2. 8，放置 40分钟，滤过；滤液上HPD100型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用15%的甲醇洗杂质，然后用70%的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮甲醇的体积比为2 I的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮甲醇的体积比为6 I的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液2L ;加入80g针剂活性炭，30摄氏度搅拌30分钟，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体35g ;中间体用8倍甲醇40摄氏度热溶，滤过滤液放凉析出晶体，抽滤得枸杞多糖成品20g，含量78%。
实施例2:
称取枸杞果15kg，粉碎成粗粉，加20倍量95%的甲醇回流提取160分钟，滤过；滤液，回收甲醇，浓缩至5波美，用体积比1:1的盐酸水溶液将浓缩液pH值调至3，放置40 分钟，滤过；滤液上HPD400型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用10%的甲醇洗杂质，然后用60%的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮甲醇的体积比为1:1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮甲醇的体积比为7 I的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液3. 5L ;加入140g针剂活性炭，40摄氏度搅拌40分钟，滤过；滤液，回收混合试剂， 浓缩干燥得中间体60g ;中间体用9倍甲醇40摄氏度热溶，滤过滤液放凉析出晶体，抽滤得枸杞多糖成品32g，含量76. 3%。
实施例3
称取枸杞果20kg，粉碎成粗粉，加15倍量87%的甲醇回流提取120分钟，滤过；滤液，回收甲醇，浓缩至3波美，用体积比1:1的盐酸水溶液将浓缩液pH值调至2. 5，放置 40分钟，滤过；滤液上AB-8型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5%的甲醇洗杂质，然后用80%的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮甲醇的体积比为3 I的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮甲醇的体积比为5 I的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液5L ;加入200g针剂活性炭，25摄氏度搅拌20分钟，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体70g ;中间体用8倍甲醇40摄氏度热溶，滤过滤液放凉析出晶体，抽滤得枸杞多糖成品36g，含量77. 5%。
实施例4
称取枸杞果5kg，粉碎成粗粉，加20倍量98%的甲醇回流提取160分钟，滤过；滤液，回收甲醇，浓缩至3波美，用体积比1:1的盐酸水溶液将浓缩液pH值调至2. 6，放置 40分钟，滤过；滤液上DM-130型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5%的甲醇洗杂质，然后用50%的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮甲醇的体积比为1:1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮甲醇的体积比为7 I的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液1200ml ;加入48g针剂活性炭，40摄氏度搅拌25分钟，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体20g ;中间体用7倍甲醇40摄氏度热溶，滤过滤液放凉析出晶体，抽滤得枸杞多糖成品12g，含 量78. 2%。
权利要求
1.一种枸杞多糖的纯化新方法，其特征在于该方法包括如下步骤将枸杞果粉碎成粗粉，加入粗粉质量15 20倍量的85% 100%甲醇回流提取120 180分钟，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至3 5波美得浓缩液，然后用体积比1:1的盐酸 水溶液将浓缩液PH值调至2. 5 3，放置20 40分钟后滤过；滤液上HPD400、HPD100, DM-130或AB-8广谱型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5% 20%的甲醇洗杂质，然后用50% 80%的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮甲醇的体积比为 I 3 :1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮甲醇的体积比为5 7 I的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液；将多糖洗脱液进行精制得枸杞多糖。
2.如权利要求1所述的枸杞多糖的纯化新方法，其特征在于该方法包括如下步骤称取粉碎成粗粉的枸杞果，加入粗粉质量20倍量的85%甲醇回流提取180分钟，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至5波美得浓缩液，然后用体积比1:1的盐酸水溶液将浓缩液pH 值调至3，放置40分钟后滤过；滤液上HPD400型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5%的甲醇洗杂质，然后用50%的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮甲醇的体积比为1:1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮甲醇的体积比为5 I的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液；将多糖洗脱液进行精制得枸杞多糖。
3.如权利要求1或2所述的枸杞多糖的纯化新方法，其特征在于该方法中所述大孔树脂吸附步骤采用湿法装柱，保留液面，将调PH值后的滤液通过吸附柱，流速每分钟O. 05ml/ g树脂。
4.如权利要求1或2所述的枸杞多糖的纯化新方法，其特征在于该方法中所述硅胶层析步骤采用湿法装柱，保留液面，将半成品按重量1:1拌活化后硅胶，并将拌好的混合物至于硅胶柱上方，洗脱流速每分钟O. lml/g硅胶。硅胶活化条件为，110摄氏度30分钟。
5.如权利要求1或2所述的枸杞多糖的纯化新方法，其特征在于该方法中采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制，按4g/100ml多糖洗脱液加入针剂活性炭，25 40摄氏度搅拌 20 40分钟，滤过；滤液回收混合试剂后浓缩干燥得中间体；中间体用7 9倍甲醇40摄氏度热溶，滤过滤液放凉析出晶体，抽滤得枸杞多糖成品。
6.如权利要求5所述的枸杞多糖的纯化新方法，其特征在于该方法中精制过程包括如下步骤按4g/100ml洗脱液加入针剂活性炭，25摄氏度搅拌40分钟，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体；中间体用9倍甲醇40摄氏度热溶，滤过滤液放凉析出晶体，抽滤得枸杞多糖成品。
7.如权利要求6所述的枸杞多糖的纯化新方法，其特征在于该方法中成品用7倍甲醇重结晶，过滤母液，回收甲醇，浓缩干燥得多糖半成品。
全文摘要
本发明公开一种枸杞多糖的纯化新方法，该方法为将枸杞果粉碎成粗粉，加15倍量85％的甲醇回流提取120分钟，滤过；滤液，回收甲醇，浓缩至3波美，用体积比1∶1的盐酸∶水将浓缩液pH值调至2.5，放置20分钟，滤过；滤液上广谱型大孔树脂吸附柱，收集洗脱液，回收甲醇，浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并以体积比3∶1的丙酮∶甲醇洗杂质，继用体积比7∶1的丙酮∶甲醇洗脱，收集洗脱液；将所收集到的多糖洗脱液进行精制得枸杞多糖成品，其含量在70％以上。本发明方法的最大特点是利用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合方便快捷、原料来源丰富、生产成本低廉、分离效果明显、提取纯度高。
文档编号C08B37/00GK103030708SQ201210595559
公开日2013年4月10日 申请日期2012年12月13日 优先权日2012年12月13日
发明者姚德坤, 姚德利, 张亚红, 姚航, 黄运生, 吴海龙 申请人:大兴安岭林格贝有机食品有限责任公司