专利名称：一种从柳蒿芽中制备多糖的方法
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种多糖的制备方法，特别是涉及一种利用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合法从柳蒿芽中制备多糖的方法。
背景技术：
柳蒿别名柳蒿菜、水蒿、白蒿等，为菊科多年生草本植物，其嫩茎叶可食用。柳蒿每 100克鲜品中含蛋白质37克、脂肪O. 7克、碳水化合物9克、粗纤维2.1克、胡萝卜素4. 4毫克、维生素B20. 3毫克、烟酸1. 3毫克、维生素C 23毫克。每100克干品中含钾1960毫克、 隹丐950晕克、续260晕克、憐415晕克、钠38晕克、铁13. 9晕克、猛11. 9晕克、锋2. 6晕克、 铜1. 7毫克。有破血行淤，下气通络之疗效。
柳蒿多糖为柳蒿中碳水化合物，经科学研究及临床应用证明，柳蒿多糖具有免疫抑制作用，能减少我们通常使用的免疫抑制剂的诸如细胞毒性、机体抗感染能力下降、对骨髓造血细胞的繁殖抑制等副作用，还具有抗病毒及抗癌作用。人们发现天然植物柳蒿芽中含有大量的碳水化合物，从中提取柳蒿多糖并且取得了可喜进展，原料柳蒿芽来源较广。发明内容
本发明目的在于提供一种从柳蒿芽中制备多糖的方法；本发明目的还在于提供一种方便快捷、原料来源丰富、生产成本低廉、分离效果明显、提取纯度高的利用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合法富集纯化柳蒿芽多糖的方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的。
本发明从柳蒿芽中制备多糖的方法包括如下步骤
将柳蒿芽洗净，加入粗粉质量15 20倍量的85% 100%甲醇回流提取120 180min，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至3 5波美得浓缩液，然后用体积比1:1的盐酸水溶液将浓缩液PH值调至2. 5 3，放置20 40min后滤过；滤液上HPD400、HPD100、DM-130 或AB-8广谱型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5% 20%的甲醇洗杂质，然后用50% 80%的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮甲醇的体积比为I 3 I的丙酮与甲醇混合物洗杂质，
然后用丙酮甲醇的体积比为5 7 :1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液；将多糖洗脱液进行精制得柳蒿芽多糖，其含量在96%以上。
本发明从柳蒿芽中制备多糖的方法包括如下步骤
称取洗净的柳蒿 芽，加入粗粉质量20倍量的85%甲醇回流提取180min，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至5波美得浓缩液，然后用体积比1:1的盐酸水溶液将浓缩液pH值调至3，放置40min后滤过；滤液上HPD400型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用 5%的甲醇洗杂质，然后用50%的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮甲醇的体积比为1:1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮甲醇的体积比为5 I的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液；将多糖洗脱液进行精制得柳蒿芽多糖。
所述大孔树脂吸附步骤采用湿法装柱，保留液面，将调pH值后的滤液通过吸附柱，流速每minO. 05ml/g树脂。
所述硅胶层析步骤采用湿法装柱，保留液面，将半成品按重量1:1拌活化后硅胶，并将拌好的混合物至于硅胶柱上方，洗脱流速每minO. lml/g硅胶。硅胶活化条件为， IlO0C 30min。
本发明中采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制。按4g/100ml洗脱液加入针剂活性炭，25 40°C搅拌20 40min，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体；中间体用 7 9倍甲醇40°C热溶，滤过滤液放凉析出晶体,抽滤得柳蒿芽多糖成品。
本发明中精制过程包括如下步骤
按4g/100ml洗脱液加入针剂活性炭，25°C搅拌40min，滤过；滤液，回收混合试剂， 浓缩干燥得中间体；中间体用9倍甲醇40°C热溶，滤过；滤液放凉析出晶体，抽滤得柳蒿芽多糖成品。
本发明中精制过程中成品用7倍甲醇重结晶，过滤母液，回收甲醇，浓缩干燥得多糖半成品。
本发明应用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合法富集纯化柳蒿芽多糖，对柳蒿芽多糖的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量45%以上的多糖半成品和含量96%以上的多糖终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附多糖，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
本发明选用硅胶层析法纯化并结合活性炭与重结晶精制，分离效果更佳。
具体实施例方式
实施例1 :
称取洗净的柳蒿芽10kg，粉碎成粗粉，加18倍量90%的甲醇回流提取140min，滤过；
滤液，回收甲醇，浓缩至4波美，用体积比1:1的盐酸水溶液将浓缩液pH值调至2. 8，放置40min，滤过；滤液上HPDlOO型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用 15%的甲醇洗杂质，然后用70%的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮甲醇的体积比为2 I的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮甲醇的体积比为6 I的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液2L ;加入80g针剂活性炭，30摄氏度 搅拌30min，滤过；滤液， 回收混合试剂，浓缩干燥得中间体35g ;中间体用8倍甲醇40°C热溶，滤过滤液放凉析出晶体，抽滤得柳蒿芽多糖成品20g，含量73%。
实施例2
称取洗净的柳蒿芽15kg，粉碎成粗粉，加20倍量95%的甲醇回流提取160min，滤过；
滤液，回收甲醇，浓缩至5波美，用体积比1:1的盐酸水溶液将浓缩液pH值调至3，放置40min，滤过；滤液上HPD400型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用10% 的甲醇洗杂质，然后用60%的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮甲醇的体积比为 1 1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮甲醇的体积比为7 1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液3. 5L ;加入140g针剂活性炭，40°C搅拌40min，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体60g ;中间体用9倍甲醇40°C热溶，滤过滤液放凉析出晶体，抽滤得柳蒿芽多糖成品328，含量71，3%。
实施例3
称取洗净的柳蒿芽20kg，粉碎成粗粉，加15倍量87%的甲醇回流提取120min， 滤过；滤液，回收甲醇，浓缩至3波美，用体积比1:1的盐酸水溶液将浓缩液pH值调至2.5，放置40min，滤过；滤液上AB-8型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5%的甲醇洗杂质，然后用80%的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮甲醇的体积比为3 1 的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮甲醇的体积比为5 1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液5L ;加入200g针剂活性炭，25°C搅拌20min，滤过；滤液，回收混合试剂， 浓缩干燥得中间体70g ;中间体用8倍甲醇40°C热溶，滤过滤液放凉析出晶体，抽滤得柳蒿芽多糖成品36g，含量72. 5%。
实施例4
称取洗净的柳蒿芽5kg，粉碎成粗粉，加20倍量98%的甲醇回流提取160min，滤过；滤液，回收甲醇，浓缩至3波美，用体积比1:1的盐酸水溶液将浓缩液pH值调至2.6，放置40min，滤过；滤液上DM-130型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5% 的甲醇洗杂质，然后用50%的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮甲醇的体积比为 1 1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮甲醇的体积比为7 1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液1200ml ;加入48g针剂活性炭，40°C搅拌25min，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体20g ;中间体用7倍甲醇40°C热溶，滤过滤液放凉析出晶体，抽滤得柳蒿芽多糖成品12g，含量73. 2%。
权利要求
1.一种从柳蒿芽中制备多糖的方法，其特征在于该方法包括如下步骤将柳蒿芽洗净，加入粗粉质量15 20倍量的85% 100%甲醇回流提取120 180min，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至3 5波美得浓缩液，然后用体积比1:1的盐酸水溶液将浓缩液PH值调至2. 5 3，放置20 40min后滤过；滤液上HPD400、HPD100、DM-130 或AB-8广谱型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5% 20%的甲醇洗杂质，然后用50% 80%的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成晶；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮甲醇的体积比为I 3 I的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮甲醇的体积比为5 7 I的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液；将多糖洗脱液进行精制得柳蒿芽多糖。
2.如权利要求1所述的从柳蒿芽中制备多糖的方法，其特征在于该方法包括如下步骤洗净的柳蒿芽，加入粗粉质量20倍量的85%甲醇回流提取180min，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至5波美得浓缩液，然后用体积比1:1的盐酸水溶液将浓缩液pH值调至3， 放置40min后滤过；滤液上HPD400型大孔树脂吸附柱,吸附完毕用水洗杂质，再用5%的甲醇洗杂质，然后用50%的甲醇洗脱，得多糖半成品洗脱液，多糖半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并用丙酮甲醇的体积比为1:1 的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮甲醇的体积比为5 I的丙酮与甲醇混合物洗脱，得多糖洗脱液；将多糖洗脱液进行精制得柳蒿芽多糖。
3.如权利要求1或2所述的从柳蒿芽中制备多糖的方法，其特征在于该方法中所述大孔树脂吸附步骤采用湿法装柱，保留液面，将调PH值后的滤液通过吸附柱，流速每分钟O.05ml/g 树脂。
4.如权利要求1或2所述的从柳蒿芽中制备多糖的方法，其特征在于该方法中所述硅胶层析步骤采用湿法装柱，保留液面，将半成品按重量1:1拌活化后硅胶，并将拌好的混合物至于硅胶柱上方，洗脱流速每分钟O. lml/g硅胶。硅胶活化条件为，110°C 30min。
5.如权利要求1或2所述的从柳蒿芽中制备多糖的方法，其特征在于该方法中采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制，按4g/100ml多糖洗脱液加入针剂活性炭，25 40°C搅拌 20 40min，滤过；滤液回收混合试剂后浓缩干燥得中间体；中间体用7 9倍甲醇40°C热溶,滤过,滤液放凉析出晶体,抽滤得柳蒿芽多糖成品。
6.如权利要求5所述的从柳蒿芽中制备多糖的方法，其特征在于该方法中精制过程包括如下步骤按4g/100ml洗脱液加入针剂活性炭，25°C搅拌40min，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体；中间体用9倍甲醇40°C热溶，滤过滤液放凉析出晶体，抽滤得柳蒿芽多糖成品。
7.如权利要求6所述的从柳蒿芽中制备多糖的方法，其特征在于该方法中成品用7倍甲醇重结晶，过滤母液，回收甲醇，浓缩干燥得多糖半成品。
全文摘要
本发明公开一种从柳蒿芽中制备多糖的方法，该方法为将柳蒿芽洗净，加15倍量85％的甲醇回流提取120分钟，滤过；滤液，回收甲醇，浓缩至3波美，用体积比1∶1的盐酸∶水将浓缩液pH值调至2.5，放置20分钟，滤过；滤液上广谱型大孔树脂吸附柱，收集洗脱液，回收甲醇，浓缩干燥得多糖半成品；将所得多糖半成品上硅胶层析柱，并以体积比3∶1的丙酮∶甲醇洗杂质，继用体积比7∶1的丙酮∶甲醇洗脱，收集洗脱液；将所收集到的多糖洗脱液进行精制得柳蒿芽多糖成品，其含量在70％以上。本发明方法的最大特点是利用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合方便快捷、原料来源丰富、生产成本低廉、分离效果明显、提取纯度高。
文档编号C08B37/00GK103030709SQ20121059558
公开日2013年4月10日 申请日期2012年12月13日 优先权日2012年12月13日
发明者姚德坤, 姚德利, 张亚红, 姚航, 黄运生, 吴海龙 申请人:大兴安岭林格贝有机食品有限责任公司