专利名称：从瞿麦中提取多糖的方法
技术领域：
本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种从瞿麦中提取多糖的超声提取方法。
背景技术：
瞿麦，又名野麦、石桂花、巨句麦等，为石竹科植物，分布于朝鲜、蒙古、俄罗斯、中国东北，华北，西北，华东，四川，贵州等地。瞿麦味苦，性寒、钝、轻、稀，凉血，止痛，解毒。瞿麦治血热，血热刺痛，肝热，“宝日”热寒兼杂期，痧症，产后发热，具有利尿通淋、破血通经的作用。临床疗效广泛，复方或者单独使用均可，系常用中药。多糖广泛分布于动物、植物和微生物中，是一类结构复杂的天然高分子化合物，对动植物的生命至关重要。大量的药理和临床研究表明，多糖具有广泛的药理及生物活性，如免疫促进、抗肿瘤、抗病毒、降血糖、降血脂、抗衰老等，且作为药物其毒副作用极小。所以中蒙药中多糖的研究不仅成为热门领域，亦成为当今中蒙药的研发方向之一。为此，研究瞿麦中多糖的提取、分离、纯化方法对后续研究其生物活性具有重要意义。要从瞿麦中充分地获得多糖，应当尽可能地破坏瞿麦细胞结构。在提取阶段用超声波法提取多糖类物质，是一种创新，其原理是超声波可在液体中产生“空穴作用”，而“空穴作用”产生的冲击波和射流可以破坏植物细胞和细胞膜结构，从而增加细胞内容物通过细胞膜的穿透能力，有助于多糖类化合物的释放与溶出，超声波使提取液不断震荡，有助于溶质扩散，同时超声波的热效应对原料有水浴作用。目前，在提取阶段采用超声波从瞿麦中提取多糖的研究尚未报道。`
发明内容
本发明提供了一种从瞿麦中提取多糖的超声提取方法，以瞿麦为原料，利用超声波提取，可高得率地获得较高纯度的瞿麦多糖。本发明提供了一种从瞿麦中提取多糖的超声提取方法，包括:称取瞿麦粉末，加入95%乙醇超声，静置，离心15min，弃去上清液加入蒸馏水超声提取，后将提取液离心15min，弃去沉淀，将提取液浓缩，加入95%乙醇静置，离心15min，沉淀用蒸馏水溶解，即得。作为一种具体实施方式
，本发明提供一种从瞿麦中提取多糖的超声提取方法，包括:称取瞿麦粉末5.0g,加入100ml95%乙醇超声60min，静置，离心15min，弃去上清液加A IOOml蒸馏水超声提取，后将提取液离心15min，弃去沉淀，将提取液浓缩至10ml，加入30ml95%乙醇静置，离心15min，沉淀用蒸馏水溶解定容至100ml，精密吸取上述溶液1.0ml置50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。优选地,料液比为1:10 (g/mL)到1:30 (g/mL)之间，优选1:20 (g/mL)。“料液比”，指固态的“料”的质量与作为浸提液的“液”的体积的比。“料”的单位用g、mg，“液”的单位用L、mL,于是“料液比”的单位有g/L、mg/L、g/mL、mg/mL等。本发明所采用的单位为g/mL0优选地，超声提取温度为50-90°C，更优选为60°C。优选地，超声提取时间为20-60分钟，更优选30分钟。优选地，超声提取次数1-5次，更优选为2次。超声波作为一种物理能对瞿麦进行处理，更有利于瞿麦中多糖的提取，一方面，能通过空化作用产生极大的压力，造成被破碎物的细胞壁甚至整个生物体破裂而使胞内物质释放、扩散或溶解出来；另一方面，适宜强度的超声波能够使多糖分子的构象发生正向转化，从而提闻多糖的活性。本发明利用超声对瞿麦中的多糖进行了提取，通过超声波处理破碎的瞿麦细胞，对瞿麦细胞中多糖进行提取，同时在提取前加入乙醇以脱脂，即可高得率地获得纯度较高的瞿麦多糖。该法具有使用溶剂少、工艺简便、条件温和、易于控制、安全可靠等特点；该法提取效率更高，操作时间短，提 取得率和产物纯度均较高。
图1:对照品和供试品的吸收光波长扫描图谱，上端曲线为对照品，下端曲线为供试品;图2:绘制的葡萄糖标准曲线。
具体实施例方式下面对本发明的实施例进行描述:实施例11、供试品溶液的制备称取瞿麦粉末5.0g,加入100ml95%乙醇超声60min，静置，离心15min，弃去上清液加入IOOml蒸馏水超声提取，后将提取液离心15min，弃去沉淀，将提取液浓缩至10ml，加入30ml95%乙醇静置，离心15min，沉淀用蒸馏水溶解定容至100ml，精密吸取上述溶液1.0ml置50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。2、对照品溶液的制备称取干燥至恒重的葡萄糖对照品5.0g,置250ml容量瓶中用蒸馏水稀释至刻度，量取上述葡萄糖溶液2ml置250ml容量瓶中用蒸馏水稀释至刻度摇匀，即得。3、测定波长的确定量取上述葡萄糖对照品溶液1.0ml，供试品溶液1.0ml，分别置于比色管中，用蒸馏水定容至2.0ml，加入5%苯酚溶液0.5ml，滴加浓硫酸至10ml，于40°C水浴中反应30min后置于冷水中冷却，在400nm 800nm进行波长扫描，结果如图1所示，吸收光谱显示对照品和供试品均在484nm处有最大吸收,故选择484nm作为测定波长。4、标准曲线的绘制分别精密量取上述葡萄糖对照品溶液0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2ml置具塞比色管中，用蒸懼水定容至2.0ml,加5%苯酹溶液0.5ml,滴加浓硫酸至IOml,于40°C水浴中反应30min后置于冷水中冷却。测定吸光度，结果如表I所示。以吸光度(A)和溶液浓度(C)进行回归分析，结果如图2所示，回归方程为A=0.0435C+0.0101 (n=7，r=0.9996)，结果表明浓度在1.618 ug.mr1 19.44 ug.mF1范围内与吸光度呈良好的线性关系。实施例21、多糖提取单因素实验按供试品溶液的制备方法进行不同料液比，提取温度，提取时间，提取次数的单因素实验，得出多糖提取效果与因素水平的关系。分别对料液比1:10，1:15，1:20，1:25，1:30的因素进行考察，结果发现增大料液比会增加多糖溶出量，到达一定比例后明显减少，结果如表2所示，因此选择料液比1:15，1: 20，1:25进行正交试验；分别对温度50°C，60°C，70°C，80°C，90°C的因素进行考察，结果发现温度升高会增加多糖溶出量，达到一定温度后继续升温反而减少，结果如表3所示，因此选择60°C，7(TC，8(rC进行正交试验；分别对提取时间20min，30min，40min，50min，60min的因素进行考察，结果发现提取时间增长会增加多糖溶出量，到达一定时间后明显下降，结果如表4所示，因此选择提取时间30min，40min, 50min进行正交试验；分别对提取次数I次、2次、3次、4次、5次的因素进行考察，结果发现随着提取次数增加多糖溶出量逐渐上升，在达到一定次数后基本不变，结果如表5所示，因此选择提取次数I次，2次，3次进行正交试验。表1多糖标准曲线试验数据
权利要求
1.一种从瞿麦中提取多糖的超声提取方法，包括: 称取瞿麦粉末，加入95%乙醇超声，静置，离心15min，弃去上清液加入蒸馏水超声提取，后将提取液离心15min，弃去沉淀，将提取液浓缩，加入95%乙醇静置，离心15min，沉淀用蒸馏水溶解，即得。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:料液比为1:10到1:30之间，优选1:20。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:超声提取温度为50-90°C，优选为60°C。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:两次超声提取时间分别为20-60分钟，优选30分钟。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:超声提取次数1-5次，优选为2次。
6.一种从瞿麦中提取多糖的超声提取方法，包括:称取瞿麦粉末5.0g，加入100ml95%乙醇超声60min，静置，离心15min，弃去上清液加入IOOml蒸馏水超声提取，后将提取液离心15min,弃去沉淀,将提取液浓缩至IOml,加入30ml95%乙醇静置,离心15min,沉淀用蒸懼水溶 解定容至100ml，精密吸取上述溶液1.0ml置50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
全文摘要
本发明提供了一种从瞿麦中提取多糖的超声提取方法，以瞿麦为原料，采用超声波处理破碎的瞿麦细胞，可高得率地获得纯度较高的瞿麦多糖。本实验运用超声技术提取瞿麦中的多糖，结果获得的最佳提取工艺条件为料液比1:20，提取温度60℃，提取时间30min，提取2次，并且在最佳工艺条件下，采用紫外可见分光光度计，运用苯酚-硫酸显色法测得蒙药瞿麦中多糖含量为5.463%，实验结果表明，该方法简便灵敏，精密度高，重现性好，稳定可靠，可作为瞿麦中多糖的含量测定方法。
文档编号C08B37/00GK103172758SQ20131008183
公开日2013年6月26日 申请日期2013年3月14日 优先权日2013年3月14日
发明者陈建平, 朱晓伟, 郭晓宇, 宋丽华, 汤化琪 申请人:内蒙古医科大学