N-9-芴甲氧羰基肼基树脂及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了N-9-芴甲氧羰基肼基树脂及其制备方法和应用。其中，该N-9-芴甲氧羰基肼基树脂具有如式1所示的结构：本发明的N-9-芴甲氧羰基肼基树脂合成简便、取代度较高、便于长期保存、不易变质。
【专利说明】N-9-芴甲氧羰基肼基树脂及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明属于固相多肽合成【技术领域】，具体地，涉及N-9-芴甲氧羰基肼基树脂及其制备方法，以及制备多肽酰肼的方法。
【背景技术】
[0002]蛋白质的化学全合成能够在原子水平调控蛋白质的组成结构，从而有希望回答有关蛋白质在生命过程中起功能的一系列问题。高效的蛋白质全合成技术特别具有学术价值与商业价值。合成蛋白质的常用策略是首先在固相上合成多肽片段，其次在水溶液中实现多肽片段的连接。目前使用最成功的多肽片段连接方法是Stephen Kent教授报道的自然化学连接NCL。自然化学连接策略的基本原理是利用多肽I的C端硫酯单元与多肽2的N端半胱氨酸单元发生化学选择性反应，从而将多肽I和多肽2拼接为一个肽片段。不幸的是，该策略需要用到的C端硫酯单元只能通过Boc固相合成法直接获得。而Boc固相合成法需要使用剧毒试剂氟化氢HF，且操作复杂，对环境不友好。最近发现利用Fmoc固相合成法可以得到C端酰肼单元，而酰肼单元可以在水溶液中迅速转化成C端硫酯单元参与自然化学连接NCL，称之为酰肼参与的自然化学连接NCL。随后酰肼参与的自然化学连接NCL被用于多段多肽拼接反应、环蛋白合成等。目前多肽C段酰肼的合成主要通过第一代肼基Wang树月旨(Angew.Chem.1nt.Ed.2011，50，7645-7649.;中国专利 ZL201110062686.3)和第二代肼基 2-Cl-Trityl-Cl 树脂(Lett.Pept.Sc1.1995，2，315-318;ChemBioChem2012, 13，542-546;Acta Chim.Sinica2012, 70, 1471-1476.)。第二代相比第一代树脂制备酰肼的产率和纯度有所提高。但上述两种树脂保存期较短，容易变质。
[0003]因而，目前用于固相多肽酰肼合成的树脂仍有待改进。
【发明内容】
`[0004]本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此，本发明的一个目的在于提出一种合成简便、取代度较高、便于长期保存的固相多肽酰肼合成用树脂。
[0005]在本发明的一个方面，本发明提供一种N-9-芴甲氧羰基(Fmoc)肼基树脂。根据本发明的实施例，所述N-9-芴甲氧羰基肼基树脂具有如式I所示的结构:
[0006]
【权利要求】
1.一种N-9-芴甲氧羰基肼基树脂，其特征在于，具有如式I所示的结构:
2.根据权利要求1所述的N-9-芴甲氧羰基肼基树脂，其特征在于，具有如式2所示的结构:
3.一种制备N-9-芴甲氧羰基肼基树脂的方法，其特征在于，包括: 将载体树脂在有机溶剂中进行溶胀处理，以便得到经过溶胀的载体树脂； 于预定温度条件下，向所述经过溶胀的载体树脂中加入碱和N-9-芴甲氧羰基肼盐酸盐，振荡混合，并反应预定时间，以便得到反应混合物； 向所述反应混合物中加入甲醇处理10分钟以上，并将经过甲醇处理的反应混合物抽干，以便得到树脂； 将所述树脂依次用二氯甲烷、N，N- 二甲基甲酰胺、水、N，N- 二甲基甲酰胺、甲醇、乙醚分别洗3次，并抽干，以便得到经过洗涤的树脂； 将所述经过洗涤的树脂真空干燥至少2小时，以便得到N-9-芴甲氧羰基肼基树脂。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述载体树脂为三苯甲基氯树脂、4-甲基三苯甲基氯树脂、4-甲氧基三苯甲基氯树脂或2-氯三苯甲基氯树脂， 任选地，所述载体树脂的取代度为0.3mmol/g~1.4mmol/g,优选0.58mmol/g。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂为选自N，N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷和N-甲基吡咯烷酮的至少一种， 任选地，所述溶胀是在0摄氏度冰浴条件下进行的。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述预定温度为4摄氏度-37摄氏度，优选25摄氏度， 任选地，所述预定时间为6小时-24小时，优选12小时。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，振荡混合的方式为水平平摇、垂直翻转或磁子搅拌，优选为磁子搅拌。
8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述N-9-芴甲氧羰基肼盐酸盐的摩尔用量为所述载体树脂取代度的2-6倍，优选4倍。
9.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述碱为二异丙基乙基胺、三乙胺或吡啶， 任选地，所述碱的摩尔用量为所述载体树脂取代度的5-15倍，优选10倍。
10.一种制备多肽酰肼的方法，其特征在于，包括: 利用权利要求3-9任意一项所述的方法制备N-9-芴甲氧羰基肼基树脂； 脱除所述N-9-芴甲氧羰基肼基树脂上的Fmoc保护基团； 利用脱除Fmoc保护基团的N-9-芴甲氧羰基肼基树脂，通过Fmoc固相多肽合成方法制备多肽酰肼。
【文档编号】C08F8/30GK103755843SQ201310675781
【公开日】2014年4月30日 申请日期:2013年12月11日 优先权日:2013年12月11日
【发明者】刘磊, 黄轶超, 高帅 申请人:清华大学