用于制备手性2-芳基吗啉的方法与流程

本发明涉及用于制备下式的手性2-(4-氨基苯基)吗啉的新方法

其中r¹是氢或氨基保护基。

式i的手性2-(4-氨基苯基)吗啉是用于制备与痕量胺相关受体(taar)，尤其是如例如在pct公开wo2012/016879和wo2012//126922中所述的taar1，具有良好亲和性的化合物的关键中间体。

本发明因此还涉及本发明的方法在用于制备式xx的化合物或其药用酸加成盐的方法中的用途

其中

r²是芳基或杂芳基，其中的芳环任选被一个或两个取代基取代，所述取代基选自c1-7-烷基、卤素、cf3、ocf3、och2cf3、c1-7-烷氧基或氰基，

或本发明的方法在用于制备式xxx的化合物或其药用酸加成盐的方法中的用途

其中

r²是芳基或杂芳基，其中的芳环任选被一个或两个取代基取代，所述取代基选自c1-7-烷基、卤素、cf3、ocf3、och2cf3、c1-7-烷氧基或氰基。

本发明的目的是发现能够在工业规模上进行的方法。

该目的可以利用如下所示的方法达到。

用于制备式i的手性2-(4-氨基苯基)吗啉的方法

其中r¹是氢或代表氨基保护基pg，所述方法包括以下步骤

a)利用氧化还原酶酶促还原式ii的酮

其中x是卤素原子，以形成式iiia的手性醇

b)形成式iva的n-保护的乙醇胺化合物

其中pg是氨基保护基；

c)环化式iva的n-保护的乙醇胺化合物以形成式v的2-(4-硝基苯基)吗啉

其中pg如以上所限定；和

d)还原硝基以形成式i的手性2-(4-氨基苯基)吗啉，并且

e)任选地除去氨基保护基pg。

阐述以下定义以说明和定义用于描述本文中发明的不同术语的意义和范围。

术语“c1-7-烷基”涉及一至六个碳原子，优选一至四个，更优选一至两个碳原子的支链或直链单价饱和脂肪烃基。该术语的进一步的例子是如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基或叔丁基、戊基及其异构体、己基及其异构体和庚基及其异构体的基团。

术语“c1-7-烷氧基”是指与氧原子相连的如以上所限定的c1-7-烷基。

术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘，尤其是氯和溴。

术语“芳基”涉及芳族碳环如苯环或萘环，优选苯环。

术语“杂芳基”是指可以包含1、2或3个选自氮、氧和/或硫的杂原子的芳族5至6元单环或9至10元二环，如吡啶基、吡唑基、嘧啶基、苯并咪唑基、喹啉基和异喹啉基。

术语″药用酸加成盐″包括无机和有机酸的盐，所述酸如盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、柠檬酸、甲酸、富马酸、马来酸、乙酸、琥珀酸、酒石酸、甲磺酸、对甲苯磺酸等。

术语“氨基保护基”是指常用于阻碍氨基的反应性的酸或路易斯酸敏感性取代基。合适的酸或路易斯酸敏感性氨基保护基描述于greent.，“protectivegroupsinorganicsynthesis(有机合成中的保护基)”，第4版，wileyinterscience，2007，chapter7，696ff.。适合于pg的氨基保护基可以因此选自boc(叔丁氧基羰基)、苄基、4-甲氧基苄基、二苯甲基、fmoc(芴基甲氧基羰基)、cbz(苄氧基羰基)、moz(对甲氧基苄基羰基)、troc(2，2，2-三氯乙氧基羰基)、teoc(2-(三甲代甲硅烷基)乙氧基羰基)、adoc(金刚烷氧基羰基)、甲酰基、乙酰基或环丁氧基羰基。更特别地，使用boc或苄基。

螺旋形的键代表或由此指示分子的手性。

当在化学结构中存在手性碳时，预期的是所述结构包括与所述手性碳相关的所有立体异构体，其作为纯的立体异构体及其混合物。

步骤a)

步骤a)需要式ii的酮的酶促还原。

式ii的酮是市售的或可以根据本领域技术人员已知的方法合成。

2-溴-1-(4-硝基-苯基)乙酮是特别使用的式ii的酮。

不对称还原由氧化还原酶催化，通常在原位再生的作为辅因子的nadh或nadph存在下。

氧化的辅因子通常利用作为共底物的仲醇连续再生。典型的共底物可以选自2-丙醇、2-丁醇、戊-1，4-二醇、2-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-庚醇、己-1，5-二醇、2-庚醇或2-辛醇，优选2-丙醇。优选地，辅因子在同样催化靶反应的相同酶处借助共底物再生。在进一步优选的实施方案中，将在使用2-丙醇作为共底物时形成的丙酮从反应混合物中连续除去。

还已知的是经由氧化其天然底物并且提供还原的辅因子的另外的酶的辅因子再生。例如，仲醇脱氢酶/醇；葡萄糖脱氢酶/葡萄糖；甲酸脱氢酶/甲酸；葡萄糖-6-磷酸脱氢酶/葡萄糖-6-磷酸；亚磷酸脱氢酶/亚磷酸；氢化酶/分子氢等。此外，电化学再生方法是已知的，并且包括金属催化剂和还原剂的化学辅因子再生方法是合适的。

优选的微生物氧化还原酶来源于酵母、细菌或哺乳动物细胞。

氧化还原酶可以以分离的酶或全细胞的形式施用，任选地通过文献中描述的多种常规方法以固定的形式施用。

在本发明特别的实施方案中，不对称还原在含水基质中在有机助溶剂存在下进行，所述有机助溶剂可以选自例如甘油、2-丙醇、二乙醚、叔丁基甲基醚、二异丙醚、二丁醚、乙酸乙酯、乙酸丁酯、庚烷、己烷或环己烯或其混合物。

有机助溶剂的存在是尤其有利的，因为可以形成均质悬浮液，这允许通过过滤简单地分离所需的式ii的酮。

反应温度通常被保持在1℃至50℃，优选20℃至40℃。

反应浓度(式ii的酮和式iiia的手性醇在反应混合物中的浓度)通常被保持在1％至25％，优选10％至20％。

在反应终止后(通常＞90％转化率)，通过萃取或优选通过过滤对产物进行常规后处理(workup)。

取决于酮底物，优选的催化剂/辅因子/共底物系统有所不同。

通常选择这样的氧化还原酶，所述氧化还原酶有能力将式ii的酮转化为98％以上对映体过量的所需的式iiia的手性醇。

对于(s)-2-溴-1-(4-硝基-苯基)-乙醇的形成，以下氧化还原酶被证明是有用的。

nadph依赖性氧化还原酶可以选自以下类型：kred-y1、kred-nadph-p1a04、kred-nadph-p2h07、kred-nadph-p1b10、kred-nadph-107、kred-nadph-135、kred-nadph-136、kred-nadph-147或kred-nadph-162c，其都可获得自codexisinc.，redwoodcity，ca，usa。

尤其有用的是nadph依赖性氧化还原酶kred-y1，其是来自codexisinc.，redwoodcity，ca，usa的一种源自高加索酸奶乳杆菌(lactobacilluskefir)的工程改造的酮还原酶，如在pct国际公开号wo2008103248a1中公开的，并且其被鉴定为具有另外的e145a置换的seq.id.no.124。

nadh依赖性氧化还原酶可以选自：皆来自codexisinc.，redwoodcity，ca，usa的kred-nadh-110和kred-nadh-124类型，来自almacgroupltd.craigavon，unitedkingdom的a161、a291和a401类型，来自johnsonmatthey，london，unitedkingdom的a11类型以及来自evocatalgmbh，monheimamrhein，germany的1.1.200，来自enzysource，hangzhou，china的es-kred-120。尤其有用的是来自codexisinc.，redwoodcity，ca，usa的nadh依赖性氧化还原酶kred-nadh-110和来自johnsonmatthey，london，unitedkingdom的a11。

不对称还原可以应用基于葡萄糖作为最终还原剂的酶偶联的辅因子再生或使用2-丙醇作为最终还原剂的底物偶联的再生来进行。在利用葡萄糖作为最终还原剂的还原期间，必须通过有控制地加入碱以中和形成的葡糖酸(在1/10至1/2000(酶/底物比)的范围内使用葡萄糖脱氢酶(gdh105[codexis])的还原的烟酰胺辅因子再生的氧化的副产物)来保持ph。反应温度可以被保持在20℃至40℃。反应可以在悬浮液中在达25％的浓度进行以将式ii的酮转化为式iiia的手性醇。产物的后处理可以通过常规萃取程序实现，例如利用tbme或乙酸乙酯。产物优选通过过滤来分离-如果有利的话-在在前的有机助溶剂的蒸发后。

对于(r)-2-溴-1-(4-硝基-苯基)-乙醇的形成，以下氧化还原酶已被证明是有用的。

nadph依赖性氧化还原酶可以选自：皆来自codexisinc.，redwoodcity，ca，usa的kred-nadph-104、kred-nadph-130或kred-nadph-148类型。尤其有用的是来自codexisinc.，redwoodcity，ca，usa的nadph依赖性氧化还原酶kred-nadph-104。

nadh依赖性氧化还原酶可以选自：皆来自codexisinc.，redwoodcity，ca，usa的kred-y2、kred-nadh-117、kred-nadh-126类型，来自johnsonmatthey，london，unitedkingdom的x1类型以及来自enzysource，hangzhou，china的127类型和来自almacgroupltd.craigavon，unitedkingdom的a131类型。

尤其有用的是nadh依赖性氧化还原酶kred-y2，其是来自codexisinc.，redwoodcity，ca，usa的一种源于novosphingobiumaromaticivorans的工程改造的酮还原酶，如在pct国际公开号wo2011/005527a2中公开的，并且其被鉴定为seq.id.no.2.。

不对称还原可以应用基于葡萄糖作为最终还原剂的酶偶联的辅因子再生来进行。在反应期间，通过有控制地加入碱如氢氧化钠水溶液以中和形成的葡糖酸(使用葡萄糖脱氢酶(来自codexis的gdh105)的还原的烟酰胺辅因子再生的氧化的副产物)来保持ph。反应温度可以被保持在20℃至40℃。反应可以在悬浮液中在达20％的浓度进行以将式ii的酮转化为式iiia的手性醇。产物的后处理可以通过常规萃取程序实现，例如利用tbme或乙酸乙酯。优选的产物分离通过简单的产物过滤来进行-如果有利的话-在有机助溶剂的蒸发之后。

步骤b)

步骤b)要求形成式iva的n-保护的乙醇胺化合物。

在特别的实施方案中，获自步骤a)的式iiia的手性醇可以直接地，在不将其从反应混合物分离的情况下，用于该步骤b)。

通常，式iva的n-保护的乙醇胺化合物的形成如下进行：

i)分三步进行，在第一步中，在碱存在下将式iiia的手性醇转化为式iiib的环氧化物

在进一步的步骤中，利用乙醇胺将式iiib的环氧化物转化为式ivb的未保护的乙醇胺化合物

并且在最后一步中引入氨基保护基pg；

ii)分两步进行，在第一步中，利用乙醇胺将式iiia的手性醇转化为式ivb的未保护的乙醇胺化合物，并且在之后的步骤中引入氨基保护基pg，或

iii)在一步中进行，利用下式的n-保护的乙醇胺转化式iiia的手性醇

其中pg代表氨基保护基。

程序i)中的环氧化物形成可以通过以下方式完成：用碱水溶液如氢氧化钠水溶液在有机溶剂如四氢呋喃、甲基四氢呋喃、叔丁基甲基醚、环戊基甲基醚、1，2-二乙氧基乙烷存在下或用低级脂肪醇如乙醇处理式iiia的手性醇。式iiib的环氧化物可以通过蒸发溶剂而与有机层分离。

程序i)中式iva的未保护的乙醇胺化合物的形成可以通过以下方式进行：利用乙醇胺，在有机碱如三乙胺、n，n-二异丙基乙胺或n-甲基吗啉存在下，在合适的有机溶剂如醚、四氢呋喃、二烷或叔丁基甲基醚中，在0℃至60℃的温度处理式iiib的环氧化物。

通常，使用化学计量过量的2至30当量，优选过量的约10当量的乙醇胺。

式iva的未保护的乙醇胺化合物与反应混合物的分离可以通过用合适的溶剂如乙酸乙酯和水的混合物萃取以及之后的对有机相的浓缩而发生。

程序i)中的氨基保护基pg的引入可以应用本领域技术人员已知的方法进行。在特别的实施方案中，选择boc基团并且其引入利用boc酸酐在合适的有机溶剂如醚、四氢呋喃、二烷或叔丁基甲基醚存在下在0℃至40℃的温度完成。可以通过蒸发溶剂将式iva的n-保护的乙醇胺化合物自有机层分离。

根据程序ii)，用乙醇胺在合适的有机溶剂如醚、四氢呋喃、二烷或叔丁基甲基醚存在下在0℃至60℃的温度处理式iiia的手性醇。

通常，使用化学计量过量的2至30当量，优选过量的约10当量的乙醇胺。

式iva的未保护的乙醇胺化合物与反应混合物的分离可以通过用合适的溶剂如乙酸乙酯和水的混合物萃取以及之后的对有机相的浓缩而发生。

氨基保护基pg的引入可以如以上对于程序i)所述的那样完成。

根据程序iii)，式iva的n-保护的乙醇胺化合物也可以通过以下方式获得：用n-保护的乙醇胺，优选用苄基保护的乙醇胺，在合适的溶剂如正丙醇和有机碱如三乙胺、n，n-二异丙基乙胺或n-甲基吗啉存在下，在40℃至溶剂回流温度的温度处理式iii的手性醇。

备选地，程序iii)也可以自式iiib的环氧化物开始应用如以上对于程序iii)所述的反应条件来完成。

步骤c)

步骤c)要求环化式iva的n-保护的乙醇胺化合物以形成式v的2-(4-硝基苯基)吗啉。

该反应通常通过以下方式分步进行：将式iva的n-保护的乙醇胺化合物与下式的磺酰卤反应

其中r³和x如上所限定，以形成式vi的中间体磺酸酯

其中pg是如以上所限定的并且r³是c1-4烷基或任选地被c1-4烷基、硝基或卤素原子取代的苯基。合适的磺酰卤是甲磺酰氯(r¹＝甲基，x＝氯)。反应在有机碱如三乙胺、n，n-二异丙基乙胺或n-甲基吗啉(特别是三乙胺)和合适的有机溶剂如醚、四氢呋喃、二烷或叔丁基甲基醚(更特别地，四氢呋喃)存在下在0℃至40℃的温度进行。

中间体磺酸酯可以使用本领域技术人员已知的方法分离，但是通常通过用非亲核性碱处理直接对反应混合物进行环化。

合适的碱是非亲核性碱如碱金属醇盐如叔丁醇钾或2-甲基-2-叔丁醇钾，由此在基本上无水的环境中利用合适的非质子有机溶剂如醚、四氢呋喃、二烷或叔丁基甲基醚起作用。

备选的非亲核性碱是相转移催化剂如季铵或盐，四烷基铵盐如例如四丁基硫酸氢铵、苄基三甲基氯化铵、乙基十六烷基二甲基溴化铵或四丁基溴化当使用该类型的碱时，通常存在含水无机碱如含水氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂，并且还存在合适的非质子极性有机溶剂如醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃或甲苯。

环化的反应温度在0℃至40℃选择。

形成的式v的2-(4-硝基苯基)吗啉可以通过用水和合适的有机溶剂如叔丁基甲基醚进行萃取并且之后对有机相进行浓缩来分离。

步骤d)

步骤d)要求还原硝基以形成式i的手性2-(4-氨基苯基)吗啉，其中r¹是pg。

还原可以通过以下方式实现：在常压或升高的压力下，利用金属氢化催化剂如pto2、pd/c、pt/v或雷尼镍(raneyni)催化剂，在质子溶剂如甲醇、乙醇、2-丙醇、水或其混合物中，在0℃至40℃的温度，用氢进行氢化。

式i的手性2-(4-氨基苯基)吗啉(其中r¹是pg)的分离可以通过过滤反应混合物并浓缩滤液而发生。

步骤e)

步骤e)包括任选的去除保护基pg。

用于去除氨基保护基的方法是本领域技术人员已知的。

bocn-保护基的去除可以利用含水无机酸如盐酸、h2so4或h3po4或有机酸如三氟乙酸、氯乙酸、二氯乙酸、乙酸、甲磺酸或对甲苯磺酸在溶剂如二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、甲醇、乙醇、1-丙醇、乙腈或水中在0℃至80℃的反应温度实现。

在优选的实施方案中，bocn-保护基的去除可以通过以下方式实现：利用三氟乙酸在含水乙腈中在约60℃达2小时，或利用25％盐酸水溶液在1-丙醇中在约60℃达2小时。

苄基保护基可以优选地在氢解条件下利用金属氢化催化剂如pd/c去除。

在本发明另外的实施方案中并且如以上所述的，本发明的方法可以应用于用于制备式xx的化合物或其药用酸加成盐的方法中

其中

r²是芳基或杂芳基，其中的芳环任选被一个或两个取代基取代，所述取代基选自c1-7-烷基、卤素、cf3、ocf3、och2cf3、c1-7-烷氧基或氰基，

或者可以应用于用于制备式xxx的化合物或其药用酸加成盐的方法中

其中

r²是芳基或杂芳基，其中的芳环任选被一个或两个取代基取代，所述取代基选自c1-7-烷基、卤素、cf3、ocf3、och2cf3、c1-7-烷氧基或氰基。

式xx的化合物可以例如通过式i的手性2-(4-氨基苯基)吗啉

其中r¹是氨基保护基，

利用下式的酯的转化来制备，

r²coor⁴

其中r²如上所述并且r⁴是c1-7-烷基。

在本发明的特别的实施方案中，酰胺形成可以通过将式i的手性2-(4-氨基苯基)吗啉与下式的羧酸偶联来完成

r²cooh

其中r²如上所述，

其中采用丙基膦酸酐作为偶联剂。发现三乙胺是合适的碱并且发现乙酸乙酯是合适的溶剂。反应温度可以在0℃至50℃选择。

在本发明更特别的实施方案中，酰胺形成可以通过以下方式完成：在合适的碱金属醇盐如叔丁醇钠或叔丁醇钾和合适的有机溶剂如醚性溶剂像四氢呋喃、2-甲基-四氢呋喃、叔丁基甲基醚或环戊基甲基醚存在下，将上述式的酯与式i的手性2-(4-氨基苯基)吗啉偶联。反应温度通常在-10℃至30℃选择。

在随后的步骤中，可以应用以上在步骤e)下描述的方法来去除氨基保护基。

在本发明另外的实施方案中，式xx的化合物也可以通过利用下式的酯转化式i的手性2-(4-氨基苯基)吗啉(其中r¹是氢)来制备，

r²coor⁴

其中r²如上所述并且r⁴是c1-7-烷基。

r⁴特别地是甲基。

所述转化通常在碱金属六甲基二硅氮烷如六甲基二硅氮烷锂、钠或钾和合适的有机溶剂如醚性溶剂像四氢呋喃、2-甲基-四氢呋喃、环戊基甲基醚或叔丁基甲基醚存在下发生。反应通常在约-50℃至-78℃进行。

式xxx的化合物可以例如通过式i的手性2-(4-氨基苯基)吗啉

其中r¹如上所限定，

利用下式的卤化物的转化来制备

r²x

其中r²如上所述并且x是卤素。

x特别地表示氯。

该反应通常在合适的叔胺如三乙胺、n，n-二异丙基乙胺等和极性非质子溶剂如四氢呋喃、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺或极性质子溶剂如脂肪醇(特别是叔醇如2-甲基-2-丁醇等)存在下进行。该反应通常在回流条件下进行。

在随后的步骤中，氨基保护基可以应用以上在步骤e)下所述的方法去除。

实施例

简写：

cpme＝环戊基甲基醚

dipea＝二异丙基乙胺

etoh＝乙醇

ipc＝过程中控制

hplc＝高压液相色谱

tea＝三乙胺

tfa＝三氟乙酸

tbme＝叔丁基甲基醚

thf＝四氢呋喃

2-me-thf＝2-甲基四氢呋喃

rt＝室温

实施例1

(r)-2-溴-1-(4-硝基-苯基)-乙醇

将底物，100g2-溴-1-(4-硝基-苯基)-乙酮，悬浮在600ml含水缓冲液(2.45g磷酸二氢钾(30mm)，1.29g乙酸镁四水合物(10mm)，100gd-葡萄糖一水合物和100mgnad)和200ml正庚烷的两相反应混合物中。在搅拌下将温度升至30℃并将ph调节至7.2(15.7ml1nnaoh)。通过添加氧化还原酶kred-y2[codexis](1.0g)和辅因子再生酶-葡萄糖脱氢酶(1.0ggdh105[codexis])开始还原，形成良好的浅黄色悬浮液。在18h反应时间期间，通过添加403ml1mnaoh将ph保持在ph7.2，实现几乎完全转化(ipc：0.8面积％ii)。在冷却至室温后将产物过滤，用118ml水和118ml庚烷洗涤两次并在真空20mbar和30℃在移动下干燥，从而产生97.7g的标题化合物。gc-ei-ms：245(m+h)⁺；手性hplc：ee99.9％[268nm；chiraceloz-h；250*4.6mm，等度90％正庚烷，5％etoh，5％正庚烷，含0.4％tfa]；12℃：1ml/min含相应的2.6％(r)-环氧化物iiib，ee99.9％。

实施例2

(s)-2-溴-1-(4-硝基-苯基)-乙醇

在激烈搅拌下形成100g2-溴-1-(4-硝基-苯基)-乙酮在300ml含水缓冲液(100mm磷酸二氢钾ph7.2；2mm氯化镁)和100ml2-丙醇中的浅黄色悬浮液。将反应溶液加热至30℃并搅拌15min并且实际ph为7.7。随后通过添加氧化的辅因子nadp(200mg[roche]和氧化还原酶(500mgkred-y1[codexis])开始还原。在23h内的反应过程期间，ph下降至ph6.5，实现几乎完全转化(ipc：1.6面积％ii)。在冷却至室温后将反应混合物转移-包括用100ml水清洗4颈平底反应烧瓶三次-到圆底烧瓶中，在100-50mbar、40℃、在30min内蒸发有机溶剂2-丙醇和丙酮(形成的)。在冷却至室温后，将产物过滤，用200ml水和200ml庚烷洗涤，并在应用高真空的情况下进行干燥，从而产生96.6g的标题化合物。gc-ei-ms：245(m+h)⁺；手性hplc：ee99.5％[268nm；chiraceloz-h；250*4.6mm，等度90％正庚烷，5％etoh，5％正庚烷，含0.4％tfa]；12℃：1ml/min包含相应的1.2％(s)-环氧化物iiib，ee＞99.5％。

实施例3

实施例3.1

制备(s)-2-(4-硝基苯基)氧杂环丙烷

将2.46g(10.0mmol)的(s)-2-溴-1-(4-硝基苯基)乙醇溶解在12.0mlthf中，在室温加入10.0ml2mnaoh，将反应混合物在室温搅拌1h。将深褐色浑浊溶液用玻璃纤维滤器过滤，用20mltbme洗涤，将有机层分离并用20ml1mkh2po4洗涤，用na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩(40℃/20mbar/1h)，从而获得1.60g的标题产物，为黄色固体。

ms-esi^-：mh^-164.035

采用手性hplc用chiralpakia-3柱确定手性。对映异构体比：99.8/0.2％(s/r)

实施例3.2

制备(r)-2-(4-硝基苯基)氧杂环丙烷

在室温向(r)-2-溴-1-(4-硝基苯基)乙醇(2.46g，10mmol，当量：1.00)在thf(10.9g，12.3ml)中的溶液加入naoh(10.0ml，20.0mmol，当量：2)并将混合物在室温搅拌1h。

将混合物过滤并将滤饼用20mltbme洗涤。将滤液萃取并分离，将有机层用20ml的1mkh2po4洗涤，用na2so4干燥，过滤并将滤液在真空中浓缩(40℃/20mbar/1h)从而获得1.5g的标题产物，为黄色固体。

ms-esi^-：mh^-164.035

采用手性hplc用chiralpakia-3柱确定手性。对映异构体比：99.95/0.05(r/s)

实施例4

实施例4.1

制备(s)-2-(2-羟基乙基氨基)-1-(4-硝基苯基)乙醇

用30分钟的时间向124.0g(2.02mol)2-氨基乙醇逐滴加入50.0g(202mmol)(s)-2-溴-1-(4-硝基苯基)乙醇在50mlthf中的溶液。将混合物用水浴冷却以保持温度＜30℃。将混合物在室温搅拌16h。将溶液用500ml乙酸乙酯和500ml水萃取。将水层用250ml乙酸乙酯再萃取。将水层用160gnacl饱和并且再次用500ml乙酸乙酯再萃取。将合并的有机层用na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩(20mbar/40℃/2小时)，从而获得粗的45.05g(s)-2-(2-羟基乙基氨基)-1-(4-硝基苯基)乙醇，为褐色油状物，其在不进行进一步纯化的情况下用于实施例5.1中。

ms-esi⁺：mh⁺227.3

实施例4.2

制备(r)-2-(2-羟基乙基氨基)-1-(4-硝基苯基)乙醇

类似于实施例4.1，将(r)-2-溴-1-(4-硝基苯基)乙醇与2-氨基乙醇反应。获得110g标题产物，为粗的褐色油状物，其在不进行进一步纯化的情况下用于实施例5.2中。

ms-esi⁺：mh⁺227.3

实施例5

实施例5.1

制备(s)-2-羟基-2-(4-硝基苯基)乙基(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯

向45.0g(199mmol)(s)-2-(2-羟基乙基氨基)-1-(4-硝基苯基)乙醇(45g，199mmol，当量：1.00)在thf(399g，450ml，5.51mol，当量：27.7)中的混合物加入boc酸酐(43.8g，46.6ml，201mmol，当量：1.01)。温度升至35℃。在15分钟后再次加入boc酸酐(6.95g，31.8mmol，当量：0.16)并将反应在室温搅拌30分钟。加入650mltbme和650ml1mna2co3溶液并搅拌10分钟。将有机层分离并用na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过与2x100mltbme的共沸真空蒸馏除去水。将红色的粘性油状物在40℃/12mbar干燥4小时，从而获得粗的75.26g(s)-2-羟基-2-(4-硝基苯基)乙基(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯，为褐色油状物，其在不进行进一步纯化的情况下用于实施例6.1和7.1。

ms-esi^-：mhcoo^-371.1

实施例5.2

制备(r)-2-羟基-2-(4-硝基苯基)乙基(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯

类似于实施例5.1，将(r)-2-(2-羟基乙基氨基)-1-(4-硝基苯基)乙醇与boc酸酐反应。获得55.6g的标题产物，其在不进行进一步纯化的情况下用于实施例6.2和7.2。

ms-esi：(m+hcoo)^-371.1

实施例5.3

制备(s)-2-(苄基(2-羟基乙基)氨基)-1-(4-硝基苯基)乙醇(由(s)-2-溴-1-(4-硝基苯基)乙醇)

将24.6g(100mmol)(s)-2-溴-1-(4-硝基苯基)乙醇溶解在120ml2-丙醇中，加入13.9ml(100mmol)三乙胺和17.1ml(120mmol)2-(苄基氨基)乙醇并将反应混合物回流16h。将反应混合物冷却至室温；将2-丙醇在真空中除去(40℃/100-50mbar/1h)。将残余物用320ml的在盐水中的1.75mnh3(130ml25％氨水和870ml盐水的混合物)处理并用320mltbme萃取两次。将合并的有机层用na2so4干燥，过滤并将滤液在真空中浓缩(40℃/20mbar/2h)从而获得粗的30.5g(s)-2-(苄基(2-羟基乙基)氨基)-1-(4-硝基苯基)乙醇，为深红色油状物，其在不进行进一步纯化的情况下使用。

ms-esi⁺：mh⁺317.15

采用手性hplc用chiralpakay-3柱确定手性。对映异构体比：91.6/8.4(s/r)。

实施例5.4

制备(s)-2-(苄基(2-羟基乙基)氨基)-1-(4-硝基苯基)乙醇(由(s)-2-(4-硝基苯基)氧杂环丙烷)

将0.16gg(1.0mmol)(s)-2-(4-硝基苯基)氧杂环丙烷溶解在0.65ml2-丙醇中，加入0.14ml(1.0mmol)三乙胺和0.18ml(1.2.0mmol)2-(苄基氨基)乙醇并将反应混合物回流16h。将反应混合物冷却至室温；将2-丙醇在真空中除去(40℃/100-50mbar/1h)。将残余物用3.5ml的在盐水中的1.75mnh3(130ml25％氨水和870ml盐水的混合物)处理并用3.5mlmtbe萃取两次。将合并的有机层用na2so4干燥，过滤并将滤液在真空中浓缩(40℃/20mbar/2h)从而获得粗的0.34g(s)-2-(苄基(2-羟基乙基)氨基)-1-(4-硝基苯基)乙醇，为深红色油状物，将其在不进行进一步纯化的情况下使用。

ms-esi⁺：mh⁺317.15

采用手性hplc用chiralpakay-3柱确定手性。对映异构体比：99.7/0.3(s/r)。

实施例6

实施例6.1

制备(s)-2-甲磺酰氧基-2-(4-硝基苯基)乙基(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯

向0.32g(1.0mmol)(s)-2-羟基-2-(4-硝基苯基)乙基(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯在3.3mlthf中的溶液加入0.15ml(1.1mmol)三乙胺，将溶液冷却至0-5℃。

然后用5分钟的时间加入82μl，1.05mmol甲磺酰氯在82μl，1.05mmolthf中的溶液(温度0-5℃)。将混合物在0-5℃搅拌15min，在hplc分析后，留下23％离析物。向白色悬浮液缓慢加入42μl，0.30mmol三乙胺和20μl，0.25mmol甲磺酰氯。将悬浮液在0-5℃搅拌15min，过滤并用预冷的(0-5℃)thf洗涤。将含有在溶液中的粗的(s)-2-甲磺酰氧基-2-(4-硝基苯基)乙基(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯的母液存储在-20℃(产物本质上不稳定，在溶液中稳定达数日)。

ms-esi^-：(m+hcoo)^-449.12

实施例6.2

制备(r)-2-甲磺酰氧基-2-(4-硝基苯基)乙基(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯

类似于实施例6.1，将(r)-2-羟基-2-(4-硝基苯基)乙基(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯与甲磺酰氯反应。将含有在溶液中的粗的(r)-2-甲磺酰氧基-2-(4-硝基苯基)乙基(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯的母液存储在-20℃。

ms-esi^-：(m+hcoo)^-449.12

实施例7

实施例7.1

制备(s)-2-(4-硝基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯

向18.0g(55.2mmol)(s)-2-羟基-2-(4-硝基苯基)乙基(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯在180mlthf中的溶液加入8.50ml(60.7mmol)三乙胺并冷却至0-5℃。用15分钟的时间加入4.5ml(57.9mmol)甲磺酰氯在4.5.0mlthf中的溶液(温度0-5℃)。将混合物在0-5℃搅拌15min。在hplc分析后，留下18％离析物。向悬浮液缓慢加入2.3ml(16.5mmol)三乙胺和0.86ml(11.0mmol)甲磺酰氯。将悬浮液在0-5℃搅拌15min，将浅黄色悬浮液过滤并用50ml预冷的thf(0-5℃)洗涤。向含有中间体(s)-2-甲磺酰氧基-2-(4-硝基苯基)乙基(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯的冷却的溶液加入27.5ml(110mmol)4mnaoh和0.38g(1.1mmol)四丁基硫酸氢铵。将混合物在室温充分搅拌16h，然后用140ml水和170mltbme萃取，将分离的有机层用na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩(40℃/10mbar/2h)。将粗产物17.7g粗产物用53mlmeoh处理，回流5min，在1h内冷却至室温，并将悬浮液在0-5℃搅拌16h，过滤并将滤饼用13ml预冷的meoh洗涤，将晶体干燥(40℃/10mbar/2h)从而获得12.0g的(s)-2-(4-硝基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯，为白色晶体。

gc-ei-ms：m308^.+。

采用手性hplc用chiralpakad-h柱确定手性。对映异构体比：99.92/0.08％(s/r)。

实施例7.2

制备(r)-2-(4-硝基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯

类似于实施例7.1，将(r)-2-羟基-2-(4-硝基苯基)乙基(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯环化。获得44.3g的标题产物，为灰白色晶体。

gc-ei-ms：m308^°+。

采用手性hplc用chiralpakad-h柱确定手性。对映异构体比：99.95/0.05(r/s)。

实施例7.3

制备(s)-4-苄基-2-(4-硝基苯基)吗啉盐酸盐

将30.2g(95.5mmol)(s)-2-(苄基(2-羟基乙基)氨基)-1-(4-硝基苯基)乙醇溶解在330mlthf中，加入29.3ml(210mmol)三乙胺并将溶液冷却至0-5℃。然后在20min时间内在0-5°逐滴加入11.9ml(153mmol)甲磺酰氯在12mlthf中的溶液。将悬浮液在0-5℃搅拌30min，过滤并用100ml预冷的thf洗涤。向合并的母液(含主要甲磺酰氧基-中间体)加入95ml4mnaoh和0.65g(1.91mmol)四丁基硫酸氢铵。将反应混合物在室温搅拌2h，用300ml水和300ml叔丁基甲基醚(tbme)萃取，将分离的有机层用na2so4干燥，过滤并将滤液在真空中浓缩(40℃/10mbar/5h)从而获得粗的35.9g(s)-4-苄基-2-(4-硝基苯基)吗啉，为深褐色油状物。将粗产物溶解在50ml乙酸乙酯中，加入24.0ml在乙醇中的4mhcl(利用在乙醇中的乙酰氯原位制备)。将形成的悬浮液回流5min，加入50ml乙酸乙酯并再次回流5min。将悬浮液在1h内冷却至室温并在室温搅拌1h，过滤并用25ml乙酸乙酯和乙醇4/1的溶剂混合物洗涤。将晶体在真空中干燥(40℃/10mbar/2h)从而获得11.8g(s)-4-苄基-2-(4-硝基苯基)吗啉盐酸盐，为灰白色晶体。

ms-esi⁺：mh⁺299.1393。

采用手性hplc用chiralpakad-3柱确定手性。对映异构体比：93.40/6.60％(s/r)。

实施例8

实施例8.1

制备(s)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯

在氩气下，向6.0g(19.5mmol)(s)-2-(4-硝基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(6.0g，44.1mmol，当量：1.00)在60mlmeoh中的悬浮液加入0.23gpd/c(10％)并将混合物与氢气(1.1bar)一起在0-5℃搅拌2h，然后在室温搅拌16h。将悬浮液过滤并将滤液在真空中浓缩(40℃/10mbar/2h)从而获得5.4g(s)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯，为无色树脂(其在静置后结晶)。

gc-ei-ms：m278^.+。

采用手性hplc用chiralpakia-3柱确定手性。对映异构体比：99.65/0.35％(s/r)。

实施例8.2

制备(r)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯

类似于实施例8.1，将(r)-2-(4-硝基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯还原以形成47.8g的标题产物，为浅黄色油状物(其在静置后结晶)。

gc-ei-ms：m278^.+

采用手性hplc用chiralpakia-3柱确定手性。对映异构体比：99.99/0.01(r/s)。

实施例9

实施例9.1

制备(s)-2-(4-氨基苯基)吗啉(由(s)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯)

将16.7g(60.0mmol)(s)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯溶解在85ml甲醇中，加入47ml(360mmol)25％盐酸，并将反应混合物回流1.5h，冷却至0-5℃，在5min内逐滴加入42ml(386mmol)9.2mnaoh。为了去除甲醇，将悬浮液在真空中浓缩(40℃/150-50mbar)，将含水的悬浮液用100ml乙酸乙酯萃取三次并用100mlthf萃取三次，将合并的有机层用na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩(40℃/150-10mbar)从而获得10.65g粗产物，为红色固体，用100mltbme使其结晶，加热至回流以蒸馏出70mltbme，将黄色悬浮液在室温搅拌1h，过滤并用10mltbme洗涤，将浅粉色晶体干燥(40℃/10mbar/2h)从而获得9.24g(s)-2-(4-氨基苯基)吗啉。

gc-ei-ms：m178^.+。

实施例9.2

制备(s)-2-(4-氨基苯基)吗啉(由(s)-4-苄基-2-(4-硝基苯基)吗啉盐酸盐)

将11.8g(35.2mmol)(s)-4-苄基-2-(4-硝基苯基)吗啉盐酸盐悬浮在118ml甲醇中，加入1.18gpd/c10％，充氩气并且然后充氢气(1.1bar)，在室温氢化20h。加入12ml水并再氢化4h。将黑色的悬浮液加热至60℃达10min，用玻璃纤维滤器过滤，用100ml甲醇洗涤。将滤液在真空中浓缩(40℃/10mbar/5h)从而获得7.50g粗的(s)-2-(4-氨基苯基)吗啉盐酸盐，为黄色固体。将5.37g(25mmol)的粗产物用35ml1mnaoh/盐水溶液(用500ml盐水和500ml2mnaoh制备)和50ml的thf/tbme1/1混合物萃取。将水层用50mlthf/tbme1/1再萃取5次。将合并的有机层用na2so4干燥，过滤并将滤液在真空中浓缩(40℃/10mbar/5h)从而获得4.25g(s)-2-(4-氨基苯基)吗啉，为浅黄色晶体。

gc-ei-ms：m178^.+。

实施例10

制备(s)-2-(4-(2-(三氟甲基)异烟酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯

将2.78g(10.0mmol)(s)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯溶解在27ml乙酸乙酯中，加入1.91g(10.0mmol)2-(三氟甲基)异烟酸和2.80ml(20.0mmol)三乙胺。在室温加入7.70ml(13.0mmol)正丙基膦酸酐(环状三聚体)50％在乙酸乙酯中的溶液，将反应混合物在室温搅拌15h，用45ml水和45ml1mnahco3溶液萃取。将有机层用na2so4干燥，过滤并在真空中在40℃浓缩从而获得4.57g浅黄色泡沫状物。

ms-esi^-：(m-h)^-450.16

实施例11

制备(s)-2-(4-(2-(三氟甲基)异烟酰胺基)苯基)吗啉盐酸盐

将4.01g(8.88mmol)(s)-2-(4-(2-(三氟甲基)异烟酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(4.01g，8.88mmol，当量：1.00)用16.6ml1-丙醇处理，加入3.50ml26.6mmol25％盐酸，将溶液在60℃搅拌30min。将溶液在真空中浓缩(40℃/50mbar)以蒸馏去10ml溶剂混合物，然后加入10ml1-丙醇并再次蒸馏掉10ml溶剂混合物，将该程序重复三次。将形成的悬浮液加热至60℃达10min，在室温搅拌1h，过滤并用5ml1-丙醇洗涤，将白色晶体干燥(40℃/10mbar/2h)从而获得3.11g(s)-2-(4-(2-三氟甲基)异烟酰胺基)苯基)吗啉盐酸盐。

ms-esi⁺：(mh)⁺352.12

采用手性hplc用chiralpakay-3柱确定手性。对映异构体比：99.50/0.50(s/r)。

实施例12

实施例12.1

制备(r)-2-(4-(6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基氨基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯

向2.78g(10mmol)(r)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯在8.4ml2-甲基-2-丁醇中的溶液加入2.62ml(15.0mmol)dipea和1.58ml(11.0mmol)4，6-二氯-2-(三氟甲基)嘧啶，并将混合物回流1h。将混合物用45mltbme稀释并用45ml水洗涤两次。将有机层用na2so4干燥，过滤并将滤液在真空中浓缩(40℃/20mbar/1h)。获得5.13g的标题产物，为黄色泡沫状物，将其在不进行进一步纯化的情况下用于实施例12.2。

ms-esi⁺：(mh)⁺459.14

实施例12.2

制备(r)-2-(4-(2-(三氟甲基)嘧啶-4-基氨基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯

向3.7g(8.06mmol)(r)-2-(4-(6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基氨基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯在37.0ml2-丙醇和1.35ml(9.68mmol)tea中的溶液加入0.19gpd/c10％并将混合物在h2气氛下在搅拌下放置1h。

将悬浮液过滤，将滤饼用2-丙醇洗涤并将滤液在真空中浓缩(40℃/20mbar/2h)。将粗物质溶解在35ml乙酸乙酯中并用35ml的0.25mhcl溶液洗涤。将有机层用na2so4干燥，过滤并将滤液在真空中浓缩(40℃/20mbar/1h)。将粗物质在4.5mlmeoh中在室温搅拌并缓慢地逐滴加入1.5ml水。形成浅色的悬浮液，将其搅拌16h。将悬浮液过滤并将滤饼用1.5mlmeoh/水洗涤并在真空中干燥(40℃/20mbar/3h)。获得2.82g白色晶体形式的标题产物，将其在不进行进一步纯化的情况下用于实施例12.3。

ms-esi⁺：(mh)⁺425.18

实施例12.3

制备(r)-2-(4-(2-(三氟甲基)嘧啶-4-基氨基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯

向2.80g(6.60mmol)(r)-2-(4-(2-(三氟甲基)嘧啶-4-基氨基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯在28.0mlmeoh中的溶液加入5.15ml(39.6mmol)25％hcl并将混合物在60℃搅拌1.5h。将混合物在真空中浓缩(40℃/200-20mbar/30min)。

向固体缓慢加入40mlna2co3(1m)和5ml水(气体释放)并将混合物用25ml乙酸乙酯萃取，用5mletoh处理。将水层用10ml乙酸乙酯再萃取。将合并的有机层用na2so4干燥，过滤并将滤液在真空中浓缩。

将粗物质在4mltbme中搅拌，用200uletoh在56℃处理20min直至形成均质悬浮液。然后将混合物冷却至室温并搅拌2h，之后将其过滤，将滤饼用1mltbme洗涤并在真空中干燥(40℃/20mbar/1h)。获得1.9g白色晶体形式的标题产物。

ms-esi⁺：(mh)⁺325.13

采用手性hplc用chiralpakic-3柱确定手性。对映异构体比：99.89/0.11(r/s)。

实施例13

制备(s)-2-(4-(2-(三氟甲基)异烟酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯

将27.8g(10.0mmol)(s)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯和22.6g(110mmol)2-(三氟甲基)异烟酸甲酯溶解在110mlthf中。将黄色溶液冷却至0-5℃。在30min的时间内逐滴加入22.9g(200mmol)叔丁醇钾在160mlthf中的溶液。将深黄色溶液在0-5℃搅拌1h。在20min在0-5℃，加入140ml水并在0-5℃搅拌30min。在0-5℃，在30min时间内，用97ml(194mmol)2mhcl水溶液中和反应混合物以获得ph7-8。将反应混合物用200mlmtbe萃取。将有机层分离，用na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩从而获得49.8g粗的(s)-2-(4-(2-(三氟甲基)异烟酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯，为含有一些有机溶剂的黄色泡沫状物，其在不进行进一步纯化的情况下用于实施例14。

ms-esi^-：(m-h)^-450.16

实施例14

制备(s)-2-(4-(2-(三氟甲基)异烟酰胺基)苯基)吗啉盐酸盐

将作为黄色泡沫状物的粗的49.8g(100.0mmol)(s)-2-(4-(2-(三氟甲基)异烟酰胺基)苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(来自实施例13)与100ml1-丙醇一起蒸发两次从而获得用170ml1-丙醇溶解的57.2g的溶液，加入39.0ml(300mmol)25％盐酸。将混合物加热至55-60℃达2.5小时。将悬浮液用50ml1-丙醇转移至500ml圆底烧瓶，并将悬浮液在真空中浓缩(40℃/60-30mmbar)。除去总计140ml溶剂混合物。加入150ml1-丙醇并在真空中再次除去。将该程序重复三次。将悬浮液用150ml1-丙醇稀释并加热至60-65℃达10min，在1小时内冷却至室温并在室温搅拌18小时，将黄色悬浮液过滤并将滤饼用总计50ml1-丙醇逐份洗涤。将白色晶体在40℃/15mbar干燥3小时从而获得35.1g(s)-2-(4-(2-三氟甲基)异烟酰胺基)苯基)吗啉盐酸盐。

ms-esi⁺：(mh)⁺352.12。

采用手性hplc用chiralpakay-3柱确定手性。对映异构体比：99.60/0.40(s/r)。

实施例15

制备(s)-2-(4-(2-(氯)异烟酰胺基)苯基)吗啉

将178mg(1.0mmol)(s)-2-(4-氨基苯基)吗啉溶解在4.0mlthf中并加入172mg(1.0mmol)6-氯烟酸甲酯。将黄色溶液冷却至-70至-78℃。在30min的时间内，向所述黄色悬浮液加入在thf中的2.0ml1m六甲基二硅氮烷锂溶液，在-70至-78℃搅拌1h。加入2.0ml1mhcl并将有机层分离，将水层再次用2.0ml乙酸乙酯萃取，将合并的有机层用na2so4干燥，过滤并在真空中在40℃浓缩从而获得粗的290mg产物，为浅黄色固体。将粗产物用3.0ml加热至回流的甲苯处理，然后冷却至室温。在室温搅拌2h，过滤并用1.0ml甲苯洗涤，干燥(40℃/2h)从而获得270mg白色晶体。

ms-esi⁺：(mh)⁺318.10。

采用手性hplc用chiralpakay-3柱确定手性。对映异构体比：94.77/5.23(s/r)。