一种测定重组人钙调蛋白磷酸酶B亚基纯度的方法与流程

文档序号:14748264发布日期:2018-06-22 05:05阅读:来源:国知局
技术特征:

1.一种测定重组人钙调蛋白磷酸酶B亚基纯度的方法,其特征在于,包括如下步骤:

步骤1:取rhCNB原液制备获得供试品溶液;

步骤2:取所述供试品溶液经反相高效液相色谱法测定rhCNB的纯度;

所述反相高效液相色谱法的流动相包括:

A相:0.1%(v/v)三氟乙酸-水;B相:0.1%(v/v)三氟乙酸-乙腈;

所述流动相梯度洗脱配比为:

A相:65%→5%、B相:35%→95%。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述反相高效液相色谱法的流动相梯度洗脱的流速为1.2~1.5mL/min。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述反相高效液相色谱法的流动相梯度洗脱在24分钟内B相从35%→95%。

4.根据权利要求1至3任一项所述的方法,其特征在于,所述反相高效液相色谱法的检测波长为214-280nm。

5.根据权利要求1至4任一项所述的方法,其特征在于,所述反相高效液相色谱法的检测温度为25℃~30℃。

6.根据权利要求1至5任一项所述的方法,其特征在于,所述反相高效液相色谱法的固定相为丁基硅烷键合硅胶。

7.根据权利要求1至6任一项所述的方法,其特征在于,所述供试品溶液的蛋白质含量为2.0mg/ml。

8.根据权利要求1至7任一项所述的方法,其特征在于,所述反相高效液相色谱法的空白对照溶液为枸橼酸盐溶液;所述枸橼酸溶液的制备方法为称取枸橼酸0.252g、枸橼酸钠2.59g,加水适量溶解,再加水稀释至1000ml。

9.根据权利要求1至8任一项所述的方法,其特征在于,所述反相高效液相色谱法中重组人钙调蛋白磷酸酶B亚基峰理论塔板数不低于5000。

10.根据权利要求1至9任一项所述的方法,其特征在于,所述反相高效液相色谱法的所述流动相A相溶液的制备方法为量取1.0mL三氟乙酸加水\t至1000mL;所述流动相B相溶液的制备方法为量取1.0mL三氟乙酸加入色谱纯乙腈至1000mL。

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