用于在结晶过程中使用表面活性剂回收琥珀酸晶体的方法及所产生的晶体与流程

发明领域本发明的主题是一种用于回收琥珀酸晶体的改进方法，该方法的独创性之一在于双重结晶以及在第一结晶步骤过程中使用表面活性剂。非常有利地，最终获得具有参考系统(l，a，b)中颜色指数b小于或等于1.00的晶体，其是具有优异稳定性的产物的保证，这些产物可以用于生产高分子材料，而不损害其颜色。现有技术琥珀酸(或丁二酸)是具有半展开化学式cooh-ch2-ch2-cooh的具有两个羧基的有机酸，其现今在化妆品、食品加工、制药、和纺织领域、以及在塑料工业中具有许多应用。作为后一种应用的实例，它可以用作1,4-丁二醇、四氢呋喃、和γ-丁内酯生产中的合成中间体。最初，琥珀酸是以化石来源的原材料为中心的工艺合成的产品。然后开发了这些方法的替代方案，涉及生物基产品。在这方面，今天琥珀酸可以由可再生原材料生产：在这种情况下，通过发酵工艺的方法。已知各种微生物能够根据这一途径产生琥珀酸，例如，琥珀酸放线杆菌(actinobacillussuccinogenes)、产琥珀酸曼氏杆菌(mannheimiasucciniciproducens)、大肠杆菌(escherichiacoli)、或黑曲霉(aspergillusniger)和酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)。情况就是这样，发酵产物含有大量的杂质(生物质碎片、糖、氨基酸、微量元素、盐等)，它们是着色前体，这些前体通过它们的存在(即使在终产物中处于痕量)能够影响经纯化的琥珀酸的品质，从而影响由经纯化的琥珀酸合成的聚合物的品质。今天本领域技术人员知道许多使用各种纯化和/或脱色步骤用于生产琥珀酸的方法。可以提及使用溶剂的方法。即，例如，使用描述于文献us6265190中的方法的例子，该方法传授了通过将硫酸铵添加至具有高浓度的琥珀酸离子的发酵培养基中来回收琥珀酸。然后使用甲醇来纯化所获得的琥珀酸。纳滤也是一种用于纯化琥珀酸晶体的公认的技术：文献cn101475464是它的一个实例。使用离子交换树脂或活性炭的方法也是已知的。因此，文献us5168055传授了硫酸与富含琥珀酸钙的发酵培养基之间的反应，从而共同产生硫酸钙和琥珀酸。后者利用强阳离子型树脂和弱阴离子型树脂进行纯化。文献wo2013/169447描述了使用非功能化的树脂。文献wo2009/082050提出在结晶之前，用活性炭来处理发酵培养基。由本申请人公司提交的以下两份专利申请也阐述了在前一段提及的方法：专利申请wo2011/064151和wo2013/144471。应当指出，这里描述的方法结合了活性炭的使用与树脂的使用，同时依赖于双重结晶。还存在结合了纳滤和基于离子交换树脂和/或活性炭的技术的现有技术的领域。在这个集合中，可以提及的是文献us2012/0289742、cn101215583、us2010/0317891、和wo2014/106532。情况就是这样，据本申请人公司所知，用于生产琥珀酸的现有方法都不能产生具有足够低的着色杂质水平的产品，从而最终获得其颜色未被改变的聚合物。更具体地，本申请人公司在专利申请wo2013/144471中已经表明，适当的比色测量完全反映了负责琥珀酸变色的杂质的水平，该变色完全与用这种琥珀酸生产的最终聚合物的变色有关。回顾了任何比色测量都是基于相反的颜色理论，该理论规定当由视神经传递给大脑时，将网膜锥体(负责色觉的人眼视网膜的细胞)对红色、绿色、和蓝色的颜色的反应重新组合成相反的“黑白”、“红绿”、和“黄蓝”信号。这种测量特别是基于在食品工业和聚合物工业中广泛使用的颜色标度，称为亨特(hunter)“l”、“a”、“b”标度。还使用术语“参考系统(l，a，b)”。在以上提及的专利申请中，特别证明了指数“b”为1.1(在参考系统l，a，b中测量)是针对琥珀酸晶体的最佳实现，该琥珀酸晶体自身有可能产生pbs(聚丁二酸丁二酯)型聚合物，该聚合物具有“可接受的比色质量”，后者通过黄色指数“yi”(根据astm标准d1925)测量。然而，大量研究后，本申请人公司已经成功地开发了一种特别简单的方法，该方法的结果是如在参考系(l，a，b)中测得的具有比色指数“b”的琥珀酸晶体，其尚未实现，即小于或等于1.00，并且甚至在某些情况下小于或等于0.90，并且非常优选地小于或等于0.80。该方法特别基于在第一结晶步骤中引入表面活性剂。所述步骤后跟随将形成的晶体溶解，将获得的溶液纯化(特别是通过用活性炭和/或离子交换树脂处理)的后续步骤，后跟随第二结晶步骤，并且然后将获得的这些晶体干燥和冷却。此外，根据本发明的方法实施2个结晶步骤。有利地，第一结晶步骤产生“球”形状的晶体，可见这改善了所讨论的方法的某些方面。术语“球”特别地与其中可以获得的琥珀酸晶体的另一最广泛形状的“针”相反来使用。然而，所述球可以通过“球形度”指数有利地定义。该指数贯穿本申请基于由里滕豪斯(rittenhouse)(工业中的附聚作(“agglomerationinindustry”)，w.皮奇(w.pietsch)，600页第2卷，2005威利-vch(wiley-vch))的形状的标准定义在视觉上确定，该定义在于将球形度指数与观察到的颗粒的形状的视觉评估相关联。图1具体示出了根据本测试用于评估和分配(assignment)等级的表格。在本发明的情况下，表面活性剂的使用导致在第一结晶步骤的水平上形成球形晶体，该形状随后在该过程中保留。术语“球”在此旨在意指具有如根据里滕豪斯测试进行测量，至少等于0.70、优先地至少等于0.75、非常优先地至少等于0.85的球形度指数的晶体。实际上，特别有利的是具有球形晶体而不是针状晶体，根据在离心或过滤步骤中更容易将前者从结晶母液中分离。具体地在文献“工业手性ii：光学活性化合物的商业制造和应用的发展”(“chiralityinindustryii:developmentsinthecommercialmanufactureandapplicationsofopticallyactivecompounds”)(a.n.柯林斯(a.n.ollins)，g.n.谢尔德雷克(g.n.sheldrake)，j.克罗斯比(j.crosby)，约翰威利父子(johnwiley&sons)，1997-p125)中对此进行了报道。还已知的是针状晶体在结晶以及所述晶体和母液流之间的分离之后更难冲洗：该冲洗步骤在于去除晶体表面上的残余母液。在此方面，可以参考文献“工业干燥指南”(“handbookofindustrialdrying”)(阿伦s.木具德(aruns.mujumdar)，第4版，crc出版社，1273页，64.1.5晶体纯度)以及晶形的增强：产品问题的解决方案(crystalshapeenhancement:aprocessingsolutiontoaproductproblem)(斯奈德r.c.(snyder,r.c.)，斯图迪娜，s.(studenar,s.)，多尔蒂，m.f.(doherty,m.f.)，aiche2006年会)。此外，针状晶体具有显示更多处于嵌入母液中形式的杂质的趋势，即母液被物理上捕获在该晶体中。这因此导致较差的表面活性剂有可能改善的纯化能力(工业结晶指南(handbookofindustrialcrystallization)，第2版，阿兰s迈尔森(allans.myerson)，259页)。从现有技术的观点来看，这样的结果特别出人意料。确实，已知文献wo01/07389传授了在琥珀酸晶体形成时使用表面活性剂。在所述文献中清晰解释了表面活性剂的使用然后导致了针状晶体而非球形晶体的形成。本申请人公司还表明了表面活性剂的添加使得在第一结晶的顶部再循环部分结晶和洗涤母液，从而提高该琥珀酸回收产率，并且使获得根据本发明的“b”成为可能。回收产率被定义为干燥后获得的琥珀酸晶体的重量与包含在经酸化的发酵液中的琥珀酸的重量(步骤b)之前)的比率。该产率还可以被表示为百分比。因此，本申请人公司不仅必须从迄今为止可用的所有方法中特别选择在文献wo2011/064151和wo2013/144471中描述的基于双重结晶的起始过程，然后它与现有技术传授的：在琥珀酸结晶步骤中使用表面活性剂，以通过非常显着地减少着色杂质的数量来提高其品质相反，而且还为了有利于形成球形晶体而非针状晶体。还表明在第一结晶步骤过程中必须使用表面活性剂，而无需在第二结晶步骤过程中使用表面活性剂。在第二结晶步骤过程中使用表面活性剂实际上再次产生针状晶体和不令人满意的“b”值。最终，已经证明所获得的产物具有低于通过仅涉及单结晶以及基于离子交换树脂和活性炭的各种步骤的组合的现有技术方法获得的那些的“b”指数(在参考系统l，a，b中)。已经表明该指数小于或等于1.00，有利地小于或等于0.90，并且非常优先地小于或等于0.80。发明概述因此，本发明的第一主题由用于从含有琥珀酸的发酵培养基中生产琥珀酸晶体的方法组成，该方法包括以下步骤：a)使该发酵培养基的ph处于1.0和4.0之间，b)结晶由步骤a)得到的发酵培养基中的琥珀酸，从而形成琥珀酸晶体，从该结晶母液中分离这些琥珀酸晶体，并且然后用水洗涤所获得的晶体，c)将步骤b)之后所获得的琥珀酸晶体在30℃和70℃之间的温度下溶解在水中，从而获得含有溶解的琥珀酸的溶液，d)使用在活性炭和在离子交换树脂上的处理来纯化在步骤c)中所获得的琥珀酸溶液，e)将包含在由步骤d)中所获得的溶液中的琥珀酸结晶，从而形成琥珀酸晶体，随后从该结晶母液中分离这些琥珀酸晶体，并且然后用水洗涤所获得的晶体，f)将这些琥珀酸晶体干燥至小于0.5％的含水量，并且将其冷却至低于30℃的温度，其特征在于在步骤b)之前和/或在步骤b)过程中引入至少一种表面活性剂。优选地，所述表面活性剂在步骤b)过程中被引入。贯穿本申请，术语“表面活性剂”旨在意指改变两个表面之间的表面张力的化合物。所述表面活性剂优先地选自非离子的表面活性剂，并且优先地选自具有大于15的hlb的聚山梨醇酯，例如吐温20型的，选自基于氧化烯嵌段共聚物的表面活性剂，例如erol18(ouvriepmc)或suprans1342(hypro-food)型的，优先地氧化丙烯和氧化乙烯的嵌段共聚物，以及选自具有特别的消泡特性的那些，然而这个列表是无穷尽的。因此，根据本发明的方法的第一步骤a)在于使该发酵培养基的ph处于1.0和4.0之间。该ph可以特别地是处于1.5和3.5之间，并且优先地处于1.5和3.0之间的值。该发酵培养基典型地含有选自曼氏杆菌(mannheimia)、厌氧螺菌属(anaerobiospirillum)、芽孢杆菌属(bacillus)、或埃希氏菌属(escherichia)的细菌菌株，或选自真菌细胞。真菌菌株可以选自酿酒酵母(saccharomycescervisiae)、葡萄汁酵母(saccharomycesuvarum)、贝酵母(saccharomycesbayanus)、粟酒裂殖酵母(schizosaccharomycespombe)、黑曲霉(aspergillusniger)、产黄青霉(penicilliumchrysogenum)、辛普利克姆青霉(p.symplissicum)、树干毕赤酵母(pichiastipidis)、马克思克鲁维酵母(kluyveromycesmarxianus)、乳酸克鲁维酵母(k.lactis)、耐温克鲁维酵母(k.thermotolerans)、解脂耶罗维亚酵母(yarrowialipolytica)、萨纳瑞西斯假丝酵母(candidasonorensis)、光滑念珠菌(c.glabrata)、多形汉逊酵母(hansenulapolymorpha)、德尔布有孢酵母(torulasporadelbrueckii)、布鲁科伦斯酒香酵母(brettanomycesbruxellensis)、稻根霉菌(rhizopusorizae)、东方伊萨酵母(issatchenkiaorientalis)、或拜耳结合酵母(zygosaccharomycesbailii)。细菌菌株可以选自产琥珀酸曼氏杆菌(mannheimiasucciniciproducens)、产琥珀酸厌氧螺菌(anaerobiospirillumsucciniciproducens)、艾米洛菲勒斯芽胞杆菌(bacillusamylophylus)、鲁米克拉芽胞杆菌(b.ruminucola)、或大肠杆菌。发酵培养基由任何能够产生琥珀酸的发酵培养基组成。它可以特别地含有碳源，例如葡萄糖、果糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、蔗糖、乳糖、棉子糖、或甘油。如在文献wo2009/083756中描述的，发酵可以是需氧的或厌氧性质的，或者在特定的氧缺乏条件下，或者由这些条件的组合而产生。通常，然后将中和剂(例如氢氧化钾或氢氧化钠)引入该发酵培养基中。在所希望的区域中对ph的调节(即在1.0和4.0之间、优先地在1.5和3.5之间，非常优先地在2.0和3.0之间)可以通过本领域技术人员可获得的并且能够在这个区域引起ph的变化的任何手段进行。可以提及的是双极电渗析与强或弱阳离子型树脂(对应地，例如，二乙烯苯聚苯乙烯(dvb)型与磺酸基的树脂，或基于马来酸和延胡索酸的树脂)组合，单独使用弱或强阳离子型树脂，或通过直接添加盐酸或硫酸酸化。在步骤a)结束时，该酸化的发酵液典型地具有按重量计在5％和10％之间的干物质含量。然后将该发酵液通过蒸发浓缩至按重量计在15％和50％之间，优先地在20％和40％之间，非常优先地按重量计在30％和35％之间的干物质含量。根据本发明的该方法的第二个步骤b)在于将由步骤a)得到的发酵培养基中的琥珀酸结晶，从而形成琥珀酸晶体，然后在于从该结晶母液中分离这些琥珀酸晶体，并且最后在于用水洗涤这些酸性晶体。根据任何对于本领域技术人员是熟知的方法，分批地或连续地通过冷却，特别是通过与结晶介质直接接触或通过闪蒸冷却来进行该结晶。可以通过本领域普通技术人员熟知的任何技术来进行晶体与母液之间的分离，并且特别是通过过滤或离心。洗涤就其本身而言是用水，优先地用脱矿物质水，在15℃和25℃之间的温度(优先地在大约20℃)下进行。另外，有利的是将该结晶和洗涤母液的一部分进行再循环至步骤b)的顶部。该再循环涉及这些总母液和冲洗液的按重量计的至多70％，更优先地涉及20％至60％，更优先地涉及其按重量计的30％至50％。特别地，该步骤的特征在于在该步骤过程中和/或在该步骤之前引入至少一种表面活性剂，即在结晶之前将其直接引入发酵培养基中。通过计量泵分批地或连续地引入一种或多种表面活性剂。相对于来源于步骤a)并且到达步骤b)的顶部的琥珀酸溶的重量，表面活性剂的量优先地在100ppm和5000ppm之间，优选地在500ppm和3000ppm之间，更优先地在1000ppm和2000ppm之间。早在此步骤b)时，应当注意的是获得的琥珀酸晶体总体上具有如根据里滕豪斯测试测量的至少等于0.70，优先地至少等于0.75，并且非常优先地至少等于0.85的球形度指数。根据本发明的该方法的第三步骤c)在于将步骤b)后所获得的琥珀酸晶体在30℃和70℃之间的温度下溶解于水中，优选地是脱矿物质水中，从而获得含有溶解的琥珀酸的溶液。将该琥珀酸溶解，从而获得按所述溶液的总重量的重量计在5％和50％之间的干物质含量，优先地在10％和20％之间。根据本发明的该方法的第四步骤d)在于使用在活性炭和在离子交换树脂上的处理来纯化在步骤c)中获得的琥珀酸溶液。所讨论的碳可以在如固定床或移动床运行的柱上处于粉末形式、或颗粒形式，更优先地处于颗粒形式。这些离子交换(iex)树脂可以是强阳离子树脂，例如具有磺酸基的强阳离子型的以及具有季或叔胺基团的弱阴离子型的二乙烯苯聚苯乙烯(dvb)树脂。第五步骤e)在于将包含于在步骤d)中获得的溶液中的琥珀酸结晶，以便于回收处于晶体形式的琥珀酸，并且在于将琥珀酸晶体与结晶母液分离，以及用水洗涤这些获得的琥珀酸晶体。可以根据如针对第一结晶步骤的相同的建议进行结晶、分离、和洗涤步骤。另外，有利的是将步骤e)的所有结晶和洗涤母液再循环至步骤b)的顶部。第六步骤f)在于，将这些琥珀酸晶体干燥至相对于琥珀酸的干重，按重量计小于0.5％，优先地小于0.4％，非常优先地小于0.3％的水的含水量，并且在于将它们冷却至低于30℃，优先地低于25℃的温度。根据本发明的方法使获得在下文中描述的琥珀酸晶体成为可能。因此，本发明的另一个主题由从含有琥珀酸的发酵培养基中获得的琥珀酸晶体组成，其特征在于它们具有小于或等于1.00，优先地小于或等于0.90，非常优先地小于或等于0.80的在参考系统l，a，b，中测量的颜色指数b。该组合物可以特别地是由具有以上提及的指数“b”值的琥珀酸晶体组成的粉末。贯穿本申请，参数“b”测量如下：1)制备具有至少1％的残余水含量的琥珀酸的晶体粉末，特别地通过以获得该含量的此方式来干燥该粉末，2)将所述晶体粉末的样品放置在220℃的烘箱中2h，3)将如此处理的该晶体粉末碾磨和过筛，以此方式使得如在莱驰(retsch)振动筛上测定的其粒度分布如下：-按重量计从0％至10％，优选地从4％至6％的具有大于500μm的粒度的颗粒，-按重量计从20％至40％，优选地从25％至35％的具有在200μm和500μm之间的粒度的颗粒，-按重量计从50％至75％，优选地从55％至70％的具有小于200μm的粒度的颗粒，4)在光谱色度计上测量经碾磨和过筛的粉末的颜色，并且确定指数“b”的平均值。在同一样品上该测量进行10次，从而给出结果的+/-0.05的不确定性。在使得能在400nm和700nm之间的波长的反射被测量的，例如由datacolor公司出售的dataflash100的光谱色度计上进行所述测量。(测量孔径：直径9mm；读取光源：c2deg)。这些晶体可以特别地具有如根据里滕豪斯测试进行测量的至少等于0.70，优先地至少等于0.75，并且非常优先地至少等于0.85的球形度指数。根据本发明的该组合物可以包括按数量计至少50％，有利地至少70％，优先地至少90％的所述琥珀酸晶体。最优先地，该组合物基本上由根据本发明的晶体组成。有利地，相对于无水晶体的总重量，这些晶体还具有少于20ppm，优先地少于10ppm的还原糖含量。该含量通常高于0.1ppm。典型地发现的糖是葡萄糖、甘露糖、海藻糖、异麦芽糖、麦芽糖、麦芽酮糖、龙胆二糖、和潘糖。根据戴安(dionex)公司2004年技术手册“通过脉冲安培检测(hpae-pad)的高效阴离子交换色谱分析碳水化合物”(“analysisofcarbohydratesbyhigh-performanceanion-exchangechromatographywithpulsedamperometricdetection(hpae-pad)”)进行测量。下列实施例使得更好地说明本申请成为可能，然而并不限制其范围。实例实例1发酵在文献wo2011/064151的实例1的严格条件下制备发酵培养基。唯一不同的是使用的装置：预培养步骤在puntbus6l反应器上进行，生长阶段在7m3发酵罐中进行，并且生产阶段在两个70m3发酵罐中进行。发酵液流速然后是大约1.5m3/h。通过微量过滤进行生物质与发酵液的分离。后者在80℃的温度下分批进行，随后进行透析过滤步骤。该模块配备了25m2的具有等于0.1μm的孔隙度的2个“kerasep”陶瓷外壳。平均渗透流速是大约2m3/h，具有大约1bar的跨膜压。酸化步骤a)在安柏莱特irc747型的弱阳离子型树脂上以2bv/h的流速，在60℃下处理发酵液，以实现小于5ppm的二价离子浓度。树脂在经过30与40倍之间的树脂体积的发酵液体积之后再生。然后将获得的溶液在由eurodia公司出售的的edbmeur40bped(双极电渗析)模块上，在大约3.5的ph下进行酸化。然后将该溶液在purolitec150型的强阳离子型树脂上，以2bv/h的流速，并且在40℃的温度下进行处理，以实现2.0的ph。树脂在经过15与20倍之间的树脂体积的发酵液体积之后再生。第一结晶：步骤b)将经酸化的溶液在由阿法拉伐(alfalaval)公司出售的强制循环真空板式蒸发器中浓缩至按干物质计浓度为35％，并且温度是80℃。然后通过瞬时冷却在两个阶段上进行连续结晶，每个阶段由geakestner公司出售的外部环真空结晶皿组成。将结晶皿中的真空固定，从而获得在第一个阶段40℃的温度，以及在第二个阶段20℃的温度。停留时间是大约5h。在使用表面活性剂的情况下，通过计量泵的方式，相对于供给结晶皿的溶液的流速，以等于1200ppm的流速将后者连续地引入。所选择的表面活性剂是由pmcouvrie公司出售的erol18。然后在由罗巴代尔公司(robatel)出售的sc1200型分批离心机上分离该结晶物质，以回收琥珀酸晶体。在该步骤过程中，用脱矿物质水在20℃以等于1kg/kg的量的晶体来洗涤这些晶体。将在离心机上回收的按重量计在0％与70％之间的结晶和洗涤母液再循环至该蒸发器的顶部。晶体溶解步骤c)在45℃的温度下，用脱矿物质水将这些琥珀酸晶体溶解，从而获得具有10％干物质含量的溶液。纯化步骤d)用chemvironcpglf12x40型的碳粒在如固定床运行的柱上进行在活性炭上处理的步骤。将柱中溶液的流速固定在0.5bv/h，并且在床的更新之前处理的溶液体积根据操作条件和所希望的品质而变化。其体积是在柱的碳的体积的40与500倍之间。以2bv/h的流速，在60℃下，在dowex88型的强阳离子型树脂上，然后在lanxesslewatits4528型的弱阴离子型树脂上进行离子交换树脂上的处理的步骤。树脂在经过等于40倍的树脂体积的溶液体积之后再生。第二结晶：步骤e)将经纯化的琥珀酸溶液在由威甘德(wiegand)公司出售的降膜真空蒸发器上浓缩至按干物质计30％的浓度，并且是在80℃的温度。然后通过瞬时冷却在两个阶段进行连续结晶，每个阶段由杰亚凯特纳(geakestner)公司出售的外部环真空结晶皿组成。将结晶皿中的真空固定，从而获得在第一个阶段40℃的温度，以及在第二个阶段20℃的温度。停留时间是大约7h。然后在由罗巴代尔公司(robatel)出售的sc1200型分批离心机上分离该结晶物质，以回收琥珀酸晶体。在该步骤过程中，用脱矿物质水在20℃下以等于1kg/kg的量的晶体洗涤这些晶体。将所有的结晶和洗涤母液在离心机上回收，并且以步骤b)的水平再循环至该蒸发器的顶部。干燥步骤f)将产物在旋转式干燥器上干燥，从而获得相对于产物的总重量按重量计等于0.3％的水的残余含水量，然后在流化床上在25℃的温度下进行冷却。实例2发酵在文献wo2011/064151的实例5的严格条件下制备发酵培养基。唯一不同的是使用的装置：预培养步骤在puntbus6l反应器上进行，生长阶段在7m3发酵罐中进行，并且生产阶段在两个70m3发酵罐中进行。通过微量过滤进行生物质与发酵液的分离。后者在80℃的温度下分批进行，随后进行透析过滤步骤。该模块配备了25m2的具有等于0.1μm的孔隙度的2个“kerasep”陶瓷外壳。平均渗透流速是大约2m3/h，具有大约1bar的跨膜压。酸化步骤a)然后将该发酵液在purolitec150型的强阳离子型树脂上，以2bv/h的流速，并且在40℃的温度下进行处理，以实现2.0的ph。树脂在经过15与20倍之间的树脂体积的发酵液体积之后再生。如在实例1中的描述进行所有其他的步骤b)至f)。实例3该实例对应于根据本发明或本发明以外的双重结晶过程中的测试(使用或不使用表面活性剂)的进行。进行了六个测试，从而评价2个参数的影响：处理的溶液的体积与在步骤c)(“床体积”或bv＝溶液体积/活性炭体积)的碳的体积的比率的值，以及在步骤b)的水平下结晶母液再循环的％。根据在实例1中给出的方案，并且不使用表面活性剂来进行测试编号1至3。根据在实例2中给出的方案，并且不使用表面活性剂来进行测试编号4至6。根据在实例1中给出的方案，使用1200ppm的erol18作为表面活性剂来进行测试编号7和8。根据在实例2中给出的方案，使用1200ppm的erol18作为表面活性剂来进行测试编号9至11。指数“b”的测量是在平均试样上进行的：每12小时取一次样品，该过程持续15天，并且然后将所有这些样品混合在一起。表1表2在表1与2之间的比较清楚地揭示了该表面活性剂对指数“b”的值有积极影响。另外，通过第一结晶母液的全部或部分的再循环，调节该指数的值和就琥珀酸而言的方法的产率二者是可能的。最终，图2揭示了不使用表面活性剂(测试编号1)获得的晶体的形貌，其是针状的，而图3(测试编号7)揭示了具有远高于0.70的指数的球形。这些照片是在leicaez4hd显微镜上拍摄的。特别出人意料的是从文献wo01/07389已知，在琥珀酸结晶过程中使用表面活性剂导致针状琥珀酸晶体的形成。如所发生的，成功地实现这种球形晶体是特别有利的，因为如前所述，由于各种原因然后改进了琥珀酸的纯化；而且，这些晶体流动更好并且具有较低的结块倾向。不受任何理论的束缚，本申请人解释了在结晶过程中，通过从发酵培养基获得的琥珀酸的杂质表现的根本性差异，该差异不同于文献wo01/07389的基于石油的琥珀酸的那些。实例4该实例对应于本发明以外的单结晶过程中测试(使用或不使用表面活性剂)的进行。在不同的测试中，在先前的实例中的一些测试中，在溶解步骤c)之前对晶体进行取样。然后将这些晶体在莱驰(retsch)实验室流化床上进行干燥直到获得相对于产物的总重量按重量计0.3％的水的含水量。测试指数“b”1a9.017a5.054a8.279a4.39表3表3的结果表明，任选地在表面活性剂存在下，使用单结晶方法没有产生令人满意的“b”值。实例5针对测试编号1、4、8、和10，通过连续操作数天来测试该方法的稳定性。将样品间隔24小时取样用于分析。由此确定的“b”值在下面的表4中再现。表4该表清楚地确定了根据本发明的方法的稳定性，与现有技术的情况相比，这些测量是更可再现的。当前第1页12