先天性肾上腺皮质增生症基因筛查试剂盒、筛查方法及其应用与流程

技术特征：

1.一种先天性肾上腺皮质增生症基因筛查试剂盒，其特征在于，包括：

1)用于检测CYP21A2基因

位点突变92C→TIVS2-13A/C→G332-339del8bp518T→A704indel9bp710T→A713T→A719A→T844G→T923-924insT955C→T968A→G1069C→T1294G→A1360C→T1447C→T1450C→T

共17个突变位点的PCR扩增引物混合液；

2)针对上述17个突变位点的延伸引物混合液；

3)dNTP；

4)10×PCR缓冲液；

5)25mM Mg²⁺离子；

6)Fast StartTaq酶；

7)由SAP酶、Exon I酶与配套缓冲液组成的纯化试剂；

8)SNaPshot Multiplex混合液；

9)单个位点纯合、杂合突变的阳性和阴性对照DNA；

10)去离子水。

2.根据权利要求1所述的先天性肾上腺皮质增生症基因筛查试剂盒，其特征在于：所述PCR扩增引物混合液的引物序列如SEQ ID No.1至SEQ ID No.14所示。

3.根据权利要求1所述的先天性肾上腺皮质增生症基因筛查试剂盒，其特征在于：所述延伸引物混合液的引物序列如SEQ ID No.15至SEQ ID No.31所示。

4.根据权利要求1所述的先天性肾上腺皮质增生症基因筛查试剂盒，其特征在于：针对所述CYP21A2基因92C→T位点，IVS2-13A/C→G位点，332-339del8bp，518T→A位点，704indel9bp，710T→A位点，713T→A位点，719A→T位点，844G→T位点，923-924insT位点，955C→T位点，968A→G位点，1069C→T位点，1294G→A位点，1360C→T位点，1447C→T位点，1450C→T位点而设计的延伸引物的终浓度分别为0.1μM、0.16μM、0.4μM、1.6μM、0.8μM、1.3μM、0.8μM、0.4μM、0.1μM、0.2μM、0.65μM、1.3μM、1.1μM、2.6μM、2.1μM、2.6μM、1.3μM。

5.根据权利要求1所述的先天性肾上腺皮质增生症基因筛查试剂盒的筛查方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以所述PCR扩增引物对CYP21A2基因进行巢式PCR扩增，并对扩增产物进行纯化；

(2)以所述延伸引物针对步骤(1)所获纯化产物进行延伸标记反应和二次纯化；

(3)对步骤(2)所获二次纯化产物进行毛细管电泳，并对毛细管电泳结果进行数据采集和分析，一次性获得17个位点的筛查结果。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述试剂盒在先天性肾上腺皮质增生症基因突变筛查中的应用。