一种分子标签的制备方法与流程

文档序号:11838380阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种分子标签的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)在DNA分子模板的5′接头端引入barcode序列;

(2)用DNA聚合酶延伸3′接头端,与barcode序列互补,得到补齐序列;

(3)向步骤(2)得到的所述补齐序列中加入DNA聚合酶,在所述补齐序列的3′接头端引入胸腺嘧啶,得到改造的接头;

(4)将待测DNA破碎成DNA短片段,用DNA连接酶连接所述DNA短片段与所述改造的接头,得到DNA连接产物;

(5)聚合酶链式反应扩增所述DNA连接产物,得到扩增产物;

(6)对所述扩增产物进行测序,然后比对到人类参考基因组,在多个DNA模板副本中选取碱基错误率最低的DNA序列,即为所述分子标签。

2.根据权利要求1所述的分子标签的制备方法,其特征在于:在步骤(1)中,所述barcode序列的长度为2-20bp。

3.根据权利要求1所述的分子标签的制备方法,其特征在于:在步骤(2)中,所述DNA聚合酶为TAQ DNA聚合酶或Klenow酶。

4.根据权利要求1所述的分子标签的制备方法,其特征在于:在步骤(3)中,所述DNA聚合酶为TAQ DNA聚合酶或Klenow酶。

5.根据权利要求1所述的分子标签的制备方法,其特征在于:在步骤(4)中,所述DNA短片段的长度为150-300bp。

6.根据权利要求1所述的分子标签的制备方法,其特征在于:在步骤(4)中,所述DNA连接酶为T4DNA连接酶或E·coli DNA连接酶。

7.根据权利要求1所述的分子标签的制备方法,其特征在于:在步骤(6)中,对所述扩增产物进行双端测序或单端测序。

8.根据权利要求1所述的分子标签的制备方法,其特征在于:所述分子标签用于基因变异检测。

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