血液吸附用细菌纤维素的制备方法与流程

本发明属于医用材料，主要用于尿毒症血液净化的血液吸附材料，具体涉及一种血液吸附材料的细菌纤维素的制备方法。

背景技术：

尿毒症严重威胁着人们的生命健康，目前，治疗末期尿毒症主要采取肾移植和血液净化方法。由于全球肾源不足或患者自身原因，肾移植只能在特殊情况下得以应用，全球每年100万以上患者将依赖血液透析、血液吸附等血液净化来维持生命。血液透析是尿毒症最常用的替代治疗方法，对清除小分子水溶性毒素十分有效，而对中分子毒素清除效果不佳。因此研制高效的中分子物质吸附剂，通过血液灌流方式将尿毒症患者体内滞留的中分子毒物清除，可有效地控制和治疗尿毒症。提高患者生存质量，无疑具有重要的意义。

多糖类吸附材料近年来显示了较快的发展势头。由醋酸杆菌属细菌合成的纤维素可产生大量的膜表面，纤维单元之间的氢键赋予它很大的机械强度，纯度高，细菌纤维素表面具多孔性。培养基采用不同的单糖或多糖作为碳源，通过调节木醋杆菌的糖代谢途径，达到产物孔径、结构的控制合成，一方面满足中分子毒素吸附材料的孔径要求（4-10nm）和增强了吸附作用，同时又改善了细菌纤维素的血液相容性。

技术实现要素：

本发明旨在寻求一种血液吸附用细菌纤维素可控生物合成的技术方法。为尿毒症血液净化提供新型的吸附材料，缓解尿毒症患者的痛苦，延长生命，提高生存质量。

本发明提供相容性良好，制作工艺简单，成本低廉的一种血液吸附用细菌纤维素的制备方法。

本发明的技术方案：血液吸附用细菌纤维素的制备方法，其特征在于：将振荡培养24h的木醋杆菌种子液按质量百分比是6%的比例接种于改良的SH的培养基中，在30℃下静置培养7天，得到细菌纤维素湿膜；将细菌纤维素湿膜经流水冲洗过后使用蒸馏水漂洗，然后采用1%氢氧化钠溶液煮沸4小时，再用流水冲洗后于室温下在0.5%乙酸中浸泡半小时，用蒸馏水冲洗干净，烘干。

所述改良的SH培养基的制备方法是：将蒸馏水1L，糖20~30g，蛋白胨7.5~10 g，酵母粉7.5~10 g，磷酸氢二钠7.5~10 g，柠檬酸0.5~1.5 g且pH5.0~6.0混合均匀成为改良的SH培养基。

所述木醋杆菌种子液的制备方法是：将木醋杆菌单菌落接种于改良的SH培养基中，振荡培养24h成为木醋杆菌种子液。

所述细菌纤维素是通过调节木醋杆菌培养体系中糖的剂量和比例来控制细菌纤维素孔径及理化性质。

所述糖为葡萄糖或单糖或多糖或几种不同的碳源物质按比例合成的物质。

所述单糖包括葡萄糖。

所述多糖包括氨基葡萄糖。

上述细菌纤维素膜，其作为医用血液净化材料清除血液里的毒素应用。

本发明制备方法简单易行，成本低廉；本发明制备的血液吸附用细菌纤维素血液相容性好。本发明制备的血液吸附用细菌纤维素应用前景广阔，既能达到治疗目的，又能减轻患者的经济负担。

附图说明

图1为以葡萄糖为碳源生物合成的细菌纤维素红外光谱图；

图2为以葡萄糖和氨基葡萄糖为碳源生物合成的细菌纤维素红外光谱图；图3为以氨基葡萄糖为碳源生物合成的细菌纤维素红外光谱图（与具体实施例相对应）；

图4为以葡萄糖为碳源生物合成的细菌纤维素扫描电镜图；

图5为以葡萄糖和氨基葡萄糖为碳源生物合成的细菌纤维素扫描电镜图；

图6为以氨基葡萄糖为碳源生物合成的细菌纤维素扫描电镜图，它与具体实施例相对应；

图7 是不同碳源生物合成的细菌纤维素的溶血率统计。

所述细菌纤维素是通过调节木醋杆菌培养体系中糖的剂量和比例来控制细菌纤维素孔径及理化性质。

葡萄糖合成的细菌纤维素的溶血率为0.38%；葡萄糖和氨基葡萄糖合成的细菌纤维素的溶血率为0.65%；氨基葡萄糖合成的细菌纤维素的溶血率0.1%。

具体实施方式

实施例1

1、培养基原料：1000mL蒸馏水、葡萄糖20~30g，蛋白胨7.5~10g，酵母粉7.5~10 g，磷酸氢二钠7.5~10 g，柠檬酸0.5~1.5 g且pH5.0~6.0；

2、将上述原料经过121℃高压灭菌15min，冷却至室温；

3、将木醋杆菌菌种接入，30℃下振荡培养24h成为木醋杆菌种子液；

4、再次配料：1000mL蒸馏水、葡萄糖20~30g，蛋白胨7.5~10 g，酵母粉7.5~10 g，磷酸氢二钠7.5~10 g，柠檬酸0.5~1.5 g且pH5.0~6.0，121℃高压灭菌15min，待培养基冷却至室温后，将木醋杆菌种子液按质量百分比是6%的比例接入，30℃下静置培养7天得到细菌纤维素湿膜；

5、将细菌纤维素湿膜经过流水冲洗后使用蒸馏水漂洗；

6、采用1%的氢氧化钠溶液煮沸4小时；

7、用蒸馏水冲洗后于室温下在浓度是0. 5%乙酸中浸泡0.5小时；

8、用蒸馏水冲洗干净，置于烘箱内60℃下干燥得到细菌纤维素干膜。

实施例2

1000mL蒸馏水、葡萄糖20~30g，蛋白胨7.5~10 g，酵母粉7.5~10 g，磷酸氢二钠7.5~10 g，柠檬酸0.5~1.5 g且pH5.0~6.0，121℃高压灭菌15min，待培养基冷却至室温后，将木醋杆菌菌种接入，30℃下振荡培养24h成为木醋杆菌种子液；

1000mL蒸馏水、氨基葡萄糖5~7.5g，葡萄糖15~25 g，蛋白胨7.5~10 g，酵母粉7.5~10 g，磷酸氢二钠7.5~10 g，柠檬酸0.5~1.5 g且pH5.0~6.0，121℃高压灭菌15min，待培养基冷却至室温后，将木醋杆菌种子液按质量百分比6%的比例接入，30℃下静置培养7天得到细菌纤维素湿膜；

将细菌纤维素湿膜流水冲洗后使用蒸馏水漂洗，然后采用1%氢氧化钠溶液煮沸4小时，再用蒸馏水冲洗后于室温下在0. 5%乙酸中浸泡0.5小时，用蒸馏水冲洗干净；置于烘箱60℃下干燥得到细菌纤维素干膜。

实施例3

1000mL蒸馏水、葡萄糖20~30g，蛋白胨7.5~10 g，酵母粉7.5~10 g，磷酸氢二钠7.5~10 g，柠檬酸0.5~1.5 g且pH5.0~6.0，121℃高压灭菌15min，待培养基冷却至室温后，将木醋杆菌菌种接入，30℃下振荡培养24h成为木醋杆菌种子液；

1000mL蒸馏水、氨基葡萄糖20~30g，蛋白胨7.5~10 g，酵母粉7.5~10 g，磷酸氢二钠7.5~10 g，柠檬酸0.5~1.5 g且pH5.0~6.0，121℃高压灭菌15min，待培养基冷却至室温后，将木醋杆菌种子液按质量百分比是6%的量接入，30℃下静置培养7天得到细菌纤维素湿膜；

将细菌纤维素湿膜流水冲洗后使用蒸馏水漂洗，然后采用1%氢氧化钠溶液煮沸4小时，再用蒸馏水冲洗后于室温下在0. 5%乙酸中浸泡0.5小时，用蒸馏水冲洗干净；置于烘箱60℃下干燥得到细菌纤维素干膜。