1.指示油菜种子高油酸含量的核苷酸突变位点,其特征在于,该位点是位于编码甘蓝型油菜油酸去饱和酶FAD2的核苷酸序列,即BnFAD2基因序列,通过以下至少一个核苷酸非保守突变产生的突变核苷酸序列:(1)位于BnFAD2同源基因BnFAD2-1核苷酸序列316处G至A的置换,即:G316A,突变基因命名为BnFAD2-1H;(2)位于BnFAD2同源基因BnFAD2-2核苷酸序列908处G至A的置换,即:G908A,突变基因命名为BnFAD2-2H。
2.根据权利要求1所述的指示油菜种子高油酸含量的核苷酸突变位点,其特征在于,所述BnFAD2-1基因核苷酸序列为SEQ ID NO.1,编码氨基酸序列为SEQ ID NO.2;所述BnFAD2-2基因核苷酸序列为SEQ ID NO.3,编码氨基酸序列为SEQ ID NO.4。
3.根据权利要求1或2所述的指示油菜种子高油酸含量的核苷酸突变位点,其特征在于,BnFAD2-1H基因序列为SEQ ID NO.5,由1155个碱基组成,编码甘蓝型油菜油酸去饱和酶Ⅰ,与其它来源的油菜油酸去饱和酶Ⅰ的核酸序列相比,BnFAD2-1H基因包含一处有义的碱基突变:G316A,即在序列316处存在G316A的置换;BnFAD2-1H核苷酸编码的蛋白质,其序列为SEQ ID NO.6,由384个氨基酸残基组成,在蛋白序列106位置处的氨基酸残基为赖氨酸(K);
BnFAD2-2H基因序列为SEQ ID NO.7,由1155个碱基组成,编码甘蓝型油菜油酸去饱和酶Ⅱ,与其它来源的油菜油酸去饱和酶Ⅱ的核酸序列相比,BnFAD2-2H基因包含一处有义的碱基突变:G908A,即在序列908处存在G908A的置换;BnFAD2-2H核苷酸编码的蛋白质,其序列为SEQ ID NO.8,由384个氨基酸残基组成,在蛋白序列303位置处的氨基酸残基为谷氨酸(E)。
4.根据权利要求1或2所述的指示油菜种子高油酸含量的核苷酸突变位点,其特征在于,所述突变核苷酸序列还包括突变基因BnFAD2-1H或BnFAD2-2H通过至少一个核苷酸的置换、插入或缺失而衍生的核苷酸序列,并且与所述突变基因BnFAD2-1H或BnFAD2-2H至少90%同源性的同源核酸序列或者互补序列。
5.权利要求1-4之一所述指示油菜种子高油酸含量的核苷酸突变位点的特异引物,包括:
BnFAD2引物3:5'-CGTCTGGGTCATAGCCAACG-3';
BnFAD2引物4:5'-CGTCTGGGTCATAGCCAACA-3';
BnFAD2引物5:5'-GACGCTCACGGTCGTTGTAGATG-3';
BnFAD2引物6:5'-CACCGTTGACAGAGACTTCGG-3';
BnFAD2引物7:5'-CACCGTTGACAGAGACTTCGA-3';
BnFAD2引物8:5'-ACACACCTTTCTTCTCACCTTGC-3';
其中,BnFAD2引物3和BnFAD2引物5组配引物对,能对普通油菜(即野生型)BnFAD2-1的316位点碱基G进行特异扩增,扩增片段373bp;
BnFAD2引物4和BnFAD2引物5组配引物对,能特异的针对BnFAD2-1H基因的316位点的突变碱基A进行特异扩增,扩增片段373bp;
BnFAD2引物6和BnFAD2引物8组配引物对,能对野生型BnFAD2-2的908位点碱基G进行特异扩增,扩增片段244bp;
BnFAD2引物7和BnFAD2引物8组配引物对,能特异的针对BnFAD2-2H的908位点的突变碱基A进行特异扩增,扩增片段244bp。
6.权利要求5所述指示油菜种子高油酸含量的核苷酸突变位点的特异引物在含有BnFAD2同源基因BnFAD2-1核苷酸序列G316A或BnFAD2同源基因BnFAD2-2核苷酸序列G908A突变位点的高油酸油菜品种(系)选育中的应用。