一种五肽胃泌素合成方法与流程

技术特征：

1.一种五肽胃泌素合成方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)制备树脂(1)：

将树脂2-Chlorotrityl Chloride Resin在有机溶液DCM或DMF中浸泡，使树脂2-Chlorotrityl Chloride Resin充分溶胀；用有机溶液DMF或DCM溶解片段Fmoc-Asp-Phe-NH₂、DIPEA后，与树脂2-Chlorotrityl Chloride Resin混合震荡，常温下过夜反应使片段充分连接在树脂上后，抽掉溶液，用DMF，DCM，无水甲醇各洗三遍；然后加入过量无水甲醇震荡或搅拌1-4h封闭树脂，抽干，得到树脂(1)：

2)固相法合成五肽胃泌素肽树脂：

以步骤1)所得的树脂(1)为载体通过固相合成法，依次偶联Fmoc-Met-OH，Fmoc-Trp-OH，Boc-β-Ala-OH；得到五肽胃泌素肽树脂；具体方法如下：

2.1)树脂预处理：将树脂(1)用DMF或DCM浸泡充分溶胀，抽掉后用DMF洗净；

2.2)加入脱帽试剂：

向树脂(1)中加入其2-3倍体积量的脱帽试剂反应4-6min，然后抽滤，用DMF洗涤，抽滤，再添加树脂(1)2-3倍体积量的脱帽试剂反应8-12min，去除Fmoc保护基团；然后洗涤6遍，洗涤剂依次为：DMF、无水甲醇、DMF、DCM+DMF、DMF、DMF或用DMF洗6遍，抽掉；以DMF为溶剂加入1.2-3倍摩尔量的Fmoc-Met-OH，和偶联剂，1.2-6倍摩尔量的有机碱，偶联1-3小时，用茚三酮检测反应进程，偶联完全后抽掉反应液，用DMF洗净；重复2.2)中上述步骤直至完成最后一个氨基酸Boc-β-Ala-OH；用DMF洗三遍，DCM洗三遍，无水甲醇洗三遍；完成洗涤和树脂收缩，干燥得到五肽胃泌素肽树脂；

3)切割：

以DCM为溶剂，配制体积比为2％的TFA切割试剂，进行冷冻；取出后向切割试剂中加入步骤2)所得的五肽胃泌素肽树脂，在-10至10℃下震荡18-22min；然后升温至23-27℃震荡1.5-2.5h；抽滤，收集滤液；滤液加入有机碱，调解pH至中性，旋蒸去掉溶液，用石油醚或乙醚洗涤3-6遍，干燥得到五肽胃泌素粗品；

4)通过HPLC检测粗品纯度，经纯化、转盐、冻干后得五肽胃泌素精品。

2.如权利要求1所述的一种五肽胃泌素合成方法，其特征在于，所述片段Fmoc-Asp-Phe-NH₂的制备方法如下：

以Fmoc-Asp(otbu)-OH和H-Phe-NH₂为原料，加入HOBT，DCC或DIC溶于有机溶剂THF或DCM或DMF中，25-35℃下反应2-8小时，反应结束后处理得到片段Fmoc-Asp(otbu)-Phe-NH₂；用TFA酸解2-6小时后处理得到Fmoc-Asp-Phe-NH₂。

3.如权利要求1所述的一种五肽胃泌素合成方法，其特征在于，步骤2.2)中所述脱帽试剂为体积比为20％的DBLK溶液。

4.如权利要求1所述的一种五肽胃泌素合成方法，其特征在于，步骤2.2)中所述偶联剂选自TBTU、HBTU、HATU、PYBOP、HOBT、DIC一种或多种。

5.如权利要求1所述的一种五肽胃泌素合成方法，其特征在于，所述有机碱为DIPEA或NMM。

6.如权利要求1所述的一种五肽胃泌素合成方法，其特征在于，步骤2.2)中，用无水甲醇洗三遍时，无水甲醇每次洗涤时间为5-10min。