一种从土壤样品中高效筛选大丽轮枝菌拮抗细菌的方法与流程

文档序号:12412583阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种从土壤样品中高效、快速筛选拮抗细菌的方法,其特征在于按照以下几个步骤进行:

a.称取10g待分离拮抗细菌的土壤样品加入100mL含玻璃珠的无菌水中,静置20min,在200r/min摇床中振荡30min,即为土壤悬液,用无菌移液枪吸取5mL土壤悬液加入45mL无菌水中,按1∶10进行系列稀释,得到10-1,10-2,10-3,10-4,10-5的稀释液,取适宜的稀释度,用无菌移液枪吸取100μL不同稀释梯度的稀释液均匀涂布于直径为15cm的LB培养基平板上,每梯度重复涂布3个平板,平板置于30℃培养箱中培养2d;

b.将大丽轮枝菌接种在PDA培养基中活化,取菌落边缘处菌块接种于PDB液体培养基中,25℃,200r/min振荡培养7d,无菌纱布过滤除去菌丝后,用血球计数板对大丽轮枝菌孢子计数,并将孢子液浓度稀释为1×107CFU/mL;

c.将喷雾器放入70℃烘箱加热1h灭菌,将大丽轮枝菌孢子液加入灭菌的喷雾器中,在长有细菌的平板上喷1.5mL大丽轮枝菌孢子液,待平板中喷雾的孢子液在超净工作台中晾干后,将平板用封口膜封好后置于28℃培养箱中培养2-3d;

d.喷雾接种2-3d后,平板中长满大丽轮枝菌菌丝,如果平板中的细菌周围出现明显的抑菌圈,说明该抑菌圈内的细菌对大丽轮枝菌有一定的拮抗能力,为拮抗菌。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:将所有抑菌圈内的拮抗菌挑出,在另一LB平板中划线,纯化,用平板拮抗实验进一步验证拮抗菌的拮抗作用,将确定为拮抗菌的菌株接种于LB液体培养基,30℃,200r/min摇床培养24h,吸取菌液加入同体积30%的甘油,混匀后于-70℃保存。

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