一种厚孢轮枝菌剂及其保护剂和制备方法与流程

本发明涉及一种微生物菌剂，具体涉及一种用于生物防治的厚孢轮枝菌剂及其保护剂和制备方法。

背景技术：

厚孢轮枝菌又名厚垣孢普可尼亚菌(Pochonia chlamydosporia)，该菌属于半知菌亚门(Deuteromycotina)、丝孢纲(Hyphomycetes)、丝孢目(丛梗孢目)(Moniliales)、丝孢科(丛梗孢科)(Monilaccae)、普可尼亚属(Pochonia)。

根结线虫是引起作物根结线虫病的病原物，其寄主范围十分广泛，流行于热带和亚热带地区，每年都给世界农作物的经济带来巨大损失。目前，防治根结线虫病的方法有多种，其中生物防治的方法对人畜和环境的影响较小，是控制线虫最安全的方式，目前防治线虫应用最为广泛的菌为淡紫拟青霉和厚孢轮枝菌。

关于厚孢轮枝菌，目前研究方向主要是其生防效果、发酵条件优化、与虫卵的寄生机理研究等。但也有人对其进行了商品化，并取得不错的效果。汪来发等将淡紫拟青霉固体菌剂与厚孢轮枝菌菌剂混合制成复合菌剂，在室内、小区和大田试验中都能取得较好的防治效果,两者互不拮抗，并能促进植物生长。庄占兴等利用厚孢轮枝菌防治烟草根结线虫，在田间试验中防治效率在70％以上，并能促进作物增产。但是厚孢轮枝菌要进行商品化，还需要提高其有效期，石妍的研究表明，将厚孢轮枝菌孢子粉做成可湿性粉剂在4℃条件下，90天后，有效活菌下降了30％，在常温条件下保藏则下降了75.38％。厚孢轮枝菌的不易保存给利用其进行生物防控带来了困难，因此研发一种更为有效的保护剂能使得厚孢轮枝菌的有效期更长就非常有意义了。

技术实现要素：

本发明的目的是克服现有技术的缺点，提供一种能够有效延长厚孢轮枝菌保存期的保护剂，以及保存期长的厚孢轮枝菌的菌剂及其制备方法。

本发明首先提供一种组合物，含有以下重量份的原料：沸石粉30-50份、腐殖酸15-25份、玉米淀粉25-45份、蔗糖0.2-2份、氯化钠0.1-1.5份、吐温80 0.1-1.2份、氯霉素0.01份。

优选地，本发明的组合物含有以下重量份的原料：沸石粉35-45份、腐殖酸18-23份、玉米淀粉30-40份、蔗糖0.5-1.5份、氯化钠0.4-1.2份、吐温80 0.4-1份、氯霉素0.01份。

更优选地，本发明的组合物含有以下重量份的原料：沸石粉42份、腐殖酸20份、玉米淀粉36份、蔗糖1.2份、氯化钠1份、吐温80 0.5份、氯霉素0.01份。

本发明提供了上述组合物在制备菌剂中的应用。

本发明提供了含有上述组合物的菌剂。

优选地，所述菌剂为厚孢轮枝菌(Pochonia chlamydosporia)菌剂。

所述厚孢轮枝菌(Pochonia chlamydosporia)菌剂是将厚孢轮枝菌与本发明所述的组合物按照质量比2:8混合均匀，调节水分至15％-20％，造粒后干燥至水分8％以下即得。发明人反复研究发现，水分低于15％造粒成粒率不佳，大于20％不容易造粒，因此选择水分为15％-20％。

优选地，本发明的菌剂为颗粒状。本发明经过大量研究发现，本发明的菌剂剂型为颗粒型，有利于保质期的延长，其他剂型均不如颗粒型的保质期长。

本发明提供了一种保存期长的厚孢轮枝菌(Pochonia chlamydosporia)菌剂的制备方法，将厚孢轮枝菌(Pochonia chlamydosporia)的菌丝与本发明所述的组合物按照质量比2:8混合均匀，调节水分至15％-20％，造粒后干燥至水分8％以下即得。

其中，厚孢轮枝菌(Pochonia chlamydosporia)的菌丝是厚孢轮枝菌经过液体发酵离心后收集菌丝而得。

厚孢轮枝菌液体发酵培养基为土豆培养基(PS培养基)，培养温度为25-28℃，转速为120r/min，通气量为2.5kg，培养时间为5-7天，离心收集菌丝的机械为碟片式离心机，转速为6000r/min。将获得的菌丝与本发明组合物混合，调节水分至15％-20％，双模快速造粒机造粒，造粒后在30℃条件下干燥，干燥至水分在8％以下即得。

进一步地，本发明提供了上述菌剂在防治作物线虫病中的应用。

进一步地，本发明提供了上述菌剂在促进作物生长中的应用

本发明有益效果在于：

1、本发明提供的组合物可用于厚孢轮枝菌剂的保护剂，可增强菌剂的稳定性，延长菌剂的有效期，根据企业标准，菌剂含量≥2亿cfu/g为合格产品，本产品有效期大于1年。

2、本发明的菌剂制备方法简单易操作，成本低。

附图说明

图1为实施例6的厚孢轮枝菌菌剂含量随时间的变化。

图2为实施例7的厚孢轮枝菌菌剂含量随时间的变化。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。

若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段；若未特别指明，实施例中所用试剂均为市售。

本实施例采用的厚孢轮枝菌购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号ACCC30604。

实施例1厚孢轮枝菌剂的制备(1)

厚孢轮枝菌液体发酵培养基为土豆培养基(PS培养基)，培养温度为25-28℃，转速为120r/min，通气量为2.5kg,培养时间为7天。用碟片式离心机将发酵液离心处理，转速为6000r/min。将获得的菌丝与保护剂混合，其中，沸石粉42kg、腐殖酸20kg、玉米淀粉36kg、蔗糖1.2kg、氯化钠1kg、吐温80 0.5kg、氯霉素0.01kg、厚孢轮枝菌菌丝25.18kg。调节水分至20％左右，双模快速造粒机造粒，造粒后在30℃条件下干燥，干燥至水分在8％以下即得。

实施例2厚孢轮枝菌剂的制备(2)

厚孢轮枝菌制剂液体发酵培养基为土豆培养基(PS培养基)，培养温度为25-28℃，转速为120r/min，通气量为2.5kg,培养时间为5天。用碟片式离心机将发酵液离心处理，转速为6000r/min。将获得的菌丝与保护剂混合，其中，沸石粉30kg、腐殖酸15kg、玉米淀粉25kg、蔗糖0.2kg、氯化钠0.1kg、吐温80 0.1kg、氯霉素0.01kg、厚孢轮枝菌菌丝17.60kg。调节水分至20％左右，双模快速造粒机造粒，造粒后在30℃条件下干燥，干燥至水分在8％以下即得。

实施例3厚孢轮枝菌剂的制备(3)

厚孢轮枝菌制剂液体发酵培养基为土豆培养基(PS培养基)，培养温度为25-28℃，转速为120r/min，通气量为2.5kg,培养时间为6天。用碟片式离心机将发酵液离心处理，转速为6000r/min。将获得的菌丝与保护剂混合，其中，沸石粉50kg、腐殖酸25kg、玉米淀粉45kg、蔗糖2kg、氯化钠1.5kg、吐温80 1.2kg、氯霉素0.01kg、厚孢轮枝菌菌丝31.18kg。调节水分至20％左右，双模快速造粒机造粒，造粒后在30℃条件下干燥，干燥至水分在8％以下即得。

实施例4厚孢轮枝菌剂的制备(4)

厚孢轮枝菌制剂液体发酵培养基为土豆培养基(PS培养基)，培养温度为25-28℃，转速为120r/min，通气量为2.5kg,培养时间为5天。用碟片式离心机将发酵液离心处理，转速为6000r/min。将获得的菌丝与保护剂混合，其中，沸石粉35kg、腐殖酸18kg、玉米淀粉30kg、蔗糖0.5kg、氯化钠0.4kg、吐温80 0.4kg、氯霉素0.01kg、厚孢轮枝菌菌丝21.08kg。调节水分至20％左右，双模快速造粒机造粒，造粒后在30℃条件下干燥，干燥至水分在8％以下即得。

实施例5厚孢轮枝菌剂的制备(5)

厚孢轮枝菌制剂液体发酵培养基为土豆培养基(PS培养基)，培养温度为25-28℃，转速为120r/min，通气量为2.5kg,培养时间为7天。用碟片式离心机将发酵液离心处理，转速为6000r/min。将获得的菌丝与保护剂混合，其中，沸石粉45kg、腐殖酸23kg、玉米淀粉40kg、蔗糖1.5kg、氯化钠1.2kg、吐温80 1kg、氯霉素0.01kg、厚孢轮枝菌菌丝27.93kg。调节水分至20％左右，双模快速造粒机造粒，造粒后在30℃条件下干燥，干燥至水分在8％以下即得。

实施例6厚孢轮枝菌剂保存效果试验

将实施例1制得的厚孢轮枝菌剂分别在室温和4℃℃条件下保存，每隔15天测定其活菌数，测定方法为血小球计数板计数法。其结果如图1所示。经过120天的保存后，检测发现在4℃条件下厚孢轮枝菌活菌数损失11.26％，常温条件下厚孢轮枝菌活菌数损失31.92％。该效果优于石妍提出的可湿性粉剂的有效期(该文献名称为《厚垣孢普可尼亚菌PC152菌株生物学及制剂工艺研究》，可湿性粉剂配方为：润湿剂吐温-80 5％、分散剂PEG6000 5％、紫外保护剂0.9％、载体硅藻土45％、以孢子粉补足至100％。4℃贮存90天，损失23.08％，室温贮存90天，损失75.38％)。

采用本发明实施例2-5制得的菌剂进行上述对比试验，结果与实施例1结果类似。

实施例7本发明厚孢轮枝菌剂稳定性试验

将实施例1制得的厚孢轮枝菌剂分别在室温和4℃条件下保存，每隔15天测定其活菌数，测定方法为血小球计数板计数法。经过375天的保存后仍然还有2.15亿cfu/g，根据企业标准(有效活菌数≥2亿cfu/g，标准高于国家规定的有效活菌数≥0.5亿cfu/g)，本产品有效期可达到1年，结果如图2所示虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

以上的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案做出的各种变型和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。