一种替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐的结晶及其制备方法与流程

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐的结晶及其制备方法。

背景技术：

替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐具有式(I)所示的结构，化学名称为N-[(S)-[[(1R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基乙氧基]甲基]苯氧基氧膦基]-L-丙氨酸1-甲基乙基酯半富马酸盐。

替诺福韦艾拉酚胺(Tenofovir alafenamide)是Gilead Sciences公司正在开发的一种核苷逆转录酶抑制剂，是替诺福韦的前药，用于口服治疗慢性乙型肝炎病毒(HBV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)感染。

替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐最早公开于WO2013025788，该专利申请中所得结晶为替诺福韦艾拉酚胺和半富马酸在乙腈溶液中反应得到，并借助选择性结晶进行纯化拆分。CN104558036中公开了替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐的另一晶型，通过将替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐在乙醚或乙腈等溶剂体系中结晶得到。

药用化合物晶型的变化通常导致化合物具有不同的熔点、溶解度、稳定性、生物活性等，这些均是影响药物制备的难易、储存稳定性、制剂难易和生物利用度等的重要因素。当化合物存在多晶型时，由于特定多晶型物具有特异性的热力学性质和稳定性，因此在制备的过程中，了解在各个剂型中应用的化合物的晶型是重要的，以保证生产过程应用相同形态的药物。因此，保证化合物是单一的晶型或是一些晶型的已知混和物是必要的。

在判断何种多晶型物是优选的时候，必须比较他们的许多性质并且优选的多晶型物是基于许多物理性质做出选择的。完全可能的是一种多晶型在某些方面如制备的难易、稳定性等被认为是关键性的条件下是优选的。在其它情况下，不同的多晶型物可能因更高的溶解度或优良的药代动力学而优选。

药用化合物的新的多晶型物的发现提供了改善药物物理特性的机会，即扩展了物质的全部性质，从而可以更好地指导化合物及其制剂的研究。当发现一个药物有几种多晶型存在时，必须仔细研究生成每一种晶型的条件。这样，批与批之间都能保持一定的结晶条件，以保证原料、药物制剂具有均匀一致的晶型。重结晶用溶剂、结晶速率或其它因素的改变可能导致一种晶型占优势的现象。

技术实现要素：

本申请一方面提供了一种替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐的结晶，使用Cu-Kα辐射，所述结晶的X-射线粉末衍射在以下2θ角度位置具有衍射峰：7.02°、8.62°、11.02°、12.12°、13.90°、15.86°、16.30°、17.62°、18.32°、20.26°、20.82°、23.16°、26.60°和27.84°。

进一步优选地，所述结晶在以下2θ角度位置具有衍射峰：7.02°、8.62°、11.02°、12.12°、13.90°、14.90°、15.86°、16.30°、17.62°、18.32°、18.68°、19.60、20.26°、20.82°、21.22°、21.36°、22.50°、23.16°、24.08°、25.08°、26.60°、27.84°、28.76°和31.60°。

在本申请的一些实施方案中，所述的替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐的结晶，使用Cu-Kα辐射，在2θ角为9.7±0.2°处没有衍射峰。

本申请另一方面，提供了上述替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐结晶的制备方法，包括：

a)将替诺福韦艾拉酚胺游离碱和富马酸用有机溶剂溶解；

b)将少量晶种加入至步骤a)得到的溶液中；

c)析晶，过滤，减压干燥，得替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐的结晶。

其中，步骤a)中有机溶剂选自所述溶剂选自C₁-C₄烷基醇、丙酮、四氢呋喃、乙腈、乙酸乙酯、1,4-二氧六环的一种或几种的混合物，其中所述的C₁-C₄烷基醇选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇；在一些实施方案中，所述的溶剂为丙酮；在一些实施方案中，所述的溶剂为异丙醇和乙醇的混合物，混合溶剂的体积比为9:1～1:1，优选地，混合溶剂的体积比为3:1。

其中，步骤a)在加热条件下溶解，加热的温度为40℃～70℃；在一些实施方案中，加热的温度为50℃～60℃。

其中，步骤b)中替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐晶种的制备方法为：依次加入第一有机溶剂、替诺福韦艾拉酚胺、富马酸，加热回流溶解，过滤，减压蒸除溶剂，加入第二有机溶剂，室温析晶，减压干燥，得到所述晶种。

其中，步骤b)中第一有机溶剂和第二有机溶剂独立选自C₁-C₄烷基醇、丙酮、四氢呋喃、乙腈、乙酸乙酯、1,4-二氧六环中的一种或几种的混合物；在一些实施方案中，所述的第一有机溶剂为乙腈，第二有机溶剂为异丙醇和乙醇的混合物，混合溶剂的体积比为3:1；在一些实施方案中，步骤b)中制备晶种时的析晶的时间为20～30小时；在一些实施方案中，步骤b)中制备晶种时的析晶的时间为24小时。

其中，步骤c)析晶温度为0℃～30℃，优选室温，析晶时间为6～24小时，在一些实施方案中，析晶温度为25±5℃，析晶时间为6小时。干燥温度不超过60℃；在一些实施方案中，所述的干燥温度为50℃。

本申请的另一方面，还提供了含上述结晶的结晶组合物，组合物中上述结晶占组合物重量的50％以上，优选在70％以上，更优选在90％以上，最优选在95％以上，该组合物中可含有少量的其他结晶或无定形物。

本申请另一方面，提供了含上述结晶、结晶组合物的药物组合物。所述的药物组合物还包含一种或多种药用辅料，视需要，还可包含其它治疗活性成分。

所述的药物组合物优选以口服方式给药。适合口服的药物组合物包括片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、滴丸、糊剂、散剂、酊剂等，优选片剂和胶囊剂。其中片剂可以是普通片剂、分散片、泡腾片、缓释片、控释片或肠溶片，胶囊剂可以是普通胶囊、缓释胶囊、控释胶囊或肠溶胶囊。

本申请的药物组合物可使用本领域公知的常规药用辅料通过常规方法制得。常规的药用辅料包括填充剂、吸收剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。填充剂包括淀粉、乳糖、甘露醇、微晶纤维素等；吸收剂包括硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙、氧化镁等；润湿剂包括水、乙醇等；粘合剂包括羟丙甲纤维素、聚维酮、微晶纤维素等；崩解剂包括交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、表面活性剂、低取代羟丙基纤维素等；润滑剂包括硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇、十二烷基硫酸镁、微粉硅胶、滑石粉等。药用辅料还包括着色剂、甜味剂等。

再一方面，本申请提供了上述结晶、结晶组合物、药物组合物在制备用于治疗抗病毒药物中的用途。其中所述的病毒为慢性乙型肝炎病毒(HBV)或人类免疫缺陷病毒(HIV)。

需要说明的是，在X-射线衍射光谱(XRD)中，由结晶化合物得到的衍射谱图对于特定的晶体往往是特征性的，其中谱带的相对强度可能会因为结晶条件、粒径和其它测定条件的差异而产生的优势取向效果而变化。因此，衍射峰的相对强度对所针对的晶体并非是特征性的，判断是否与已知的晶体相同时，更应该注意的是峰的相对位置而不是它们的相对强度。此外，对任何给定的晶体而言，峰的位置可能存在轻微误差，这在结晶学领域中也是公知的。例如，由于分析样品时温度的变化、样品移动或仪器的标定等，峰的位置可以移动，2θ值的测定误差有时约为±0.2°。因此，在确定每种晶体结构时，应该将此误差考虑在内。在XRD图谱中通常用2θ角或晶面距d表示峰位置，两者之间具有简单的换算关系：d＝λ/2sinθ，其中d代表晶面距，λ代表入射X射线的波长，θ为衍射角。

本申请制备得到的替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐结晶，具有纯度高、结晶度高、稳定性好、吸湿度小、流动性好等优点；同时，本发明提供的替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐结晶的制备方法简单，收率高，结晶条件温和，适合工业化生产，能够更好地满足制药业需求。

附图说明

图1替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐结晶的X-射线粉末衍射(XRD)图

图2替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐结晶的热解重量分析(TGA)图

具体实施方式

以具体的实施例说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于下述的实施例范围。所采用的试剂均为市售产品。

采集数据所用的仪器及方法：

X-射线粉末衍射光谱(XRD)在下述条件下测定，仪器及其型号：D/Max-RA日本RigakuXMiniFlexⅡX-射线粉末衍射仪；射线：单色Cu-Ka射线扫描方式：θ/2θ，扫描范围：0～40°，电压：30Kv，电流15mA；检测环境条件：温度：23.9℃，湿度：38.6％。

热重分析(TGA)在下述条件下测定，仪器及其型号：TG 209F3热重分析仪；扫描速率：l0℃/min；扫描范围：30℃～300℃；保护气体：氮气。

实施例1替诺福韦艾拉酚胺的制备

将20kg(R)-(+)-9-[2-(羟基苯氧基磷酰甲氧基)丙基]腺嘌呤加入反应釜中，依次加入140L乙二醇二甲醚、13.2kg氯化亚砜，加热至约70～80℃,反应24小时，减压蒸除溶剂，加入100L甲苯，得酰氯甲苯溶液。在反应釜中加入28kg L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、115kg二氯甲烷，降温到0℃，搅拌下加入20kg三乙胺，氮气保护下搅拌3小时，过滤，滤液中加入4A分子筛干燥过夜，过滤，加入5.6kg三乙胺，氮气保护，降温至-20～-30℃，滴加酰氯的甲苯溶液，滴完升至室温反应30min，用100L×3 10％磷酸二氢钠溶液洗3次，100L 15％KHCO₃洗1次，100L水洗1次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，蒸干。加入50L甲苯和乙腈混合溶液(甲苯/乙腈＝4：1)，溶解后，加入500g活性炭，脱色10min，过滤，降温到0-10℃析晶5小时，过滤，50℃真空干燥5小时，得类白色固体13kg。

实施例2替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐晶种的制备

将100mL乙腈，替诺福韦艾拉酚胺10g，富马酸1.3g加入反应瓶中，加热回流溶解，过滤，减压蒸除溶剂，加入75mL异丙醇、25mL乙醇，室温析晶24小时，50℃减压干燥4小时，得类白色固体1.5g。

实施例3替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐结晶的制备

将750ml异丙醇、250ml乙醇，替诺福韦艾拉酚胺100g，富马酸13g加入反应瓶中，加热到50-60℃溶解，过滤，加入少量晶种，室温析晶6小时，过滤，50℃减压干燥4小时，得类白色固体103g。使用Cu-Kα辐射，得到其X射线粉末衍射数据如表1所示，其XRD图如图1所示。

表1

其热重分析(TGA)图如图2所示。

实施例4替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐结晶的制备

将10L丙酮，替诺福韦艾拉酚胺1kg，加入反应釜中，加热回流溶解，加入富马酸130g，溶清后过滤，加入少量晶种，室温析晶6小时，过滤，50℃减压干燥4小时，得类白色固体1.05kg，其具有图1所示的X射线粉末衍射图。

实施例5替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐结晶的稳定性

本文中实施例3结晶的稳定性实验参照中国药典2010版二部附录XIX C中描述的方法进行测试，结果如表2所示。

表2

从高温、强光以及高湿度条件下的实验结果可以看出，本申请的替诺福韦艾拉酚胺半富马酸盐结晶纯度高、吸湿度小、热力学稳定的，且X-射线粉末衍射测定显示结晶未发生改变，因此特别适用于药物制剂。