体外肝细胞异质性培养装置及其培养方法与流程

文档序号:12108372阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种体外肝细胞异质性培养装置,其特征在于,包括诱导芯片和与所述诱导芯片相连通的微量注射泵;所述诱导芯片包括用于形成浓度梯度的流体分流通道以及与所述流体分流通道相通的细胞诱导区域。

2.根据权利要求1所述的体外肝细胞异质性培养装置,其特征在于,所述诱导芯片利用光刻蚀技术铸模制备。

3.根据权利要求1所述的体外肝细胞异质性培养装置,其特征在于,所述诱导芯片采用聚二甲基硅氧烷制备。

4.根据权利要求1所述的体外肝细胞异质性培养装置,其特征在于,所述流体分流通道沿所述诱导芯片纵长方向依次布设有呈对称分布的第一、第二培养基入口以及与所述培养基入口连接且相通的用于形成浓度梯度培养液的分流通道。

5.根据权利要求4所述的体外肝细胞异质性培养装置,其特征在于,所述分流通道至少包括依次连通的若干级分流通道,其中,第一级分流通道提供两个分别与第一、第二培养基入口连通以灌入不同浓度或不同成分的诱导液的一级入口,并形成三个一级出口;下一级分流通道的入口与上一级分流通道的出口一一对应连通,并且所述下一级分流通道的出口数量比所述上一级分流通道的出口数量多一个。

6.根据权利要求5所述的体外肝细胞异质性培养装置,其特征在于,所述分流通道还包括第二级分流通道和第三级分流通道;所述第二级分流通道提供三个二级入口以分别与三个所述一级出口连通,并形成四个二级出口;所述第三级分流通道提供四个三级入口以分别与四个所述二级出口连通,并形成五个三级出口。

7.根据权利要求6所述的体外肝细胞异质性培养装置,其特征在于,五个所述三级出口并排设置并汇集到所述细胞诱导区域。

8.根据权利要求4所述的体外肝细胞异质性培养装置,其特征在于,所述第一培养基入口和第二培养基入口的直径分别为500μm。

9.根据权利要求6所述的体外肝细胞异质性培养装置,其特征在于,所述第一级分流通道、第二级分流通道、第三级分流通道的宽度以及深度均为100μm。

10.根据权利要求1所述的体外肝细胞异质性培养装置,其特征在于,所述细胞诱导区域呈十字形,其纵向通道顶端与所述流体分流通道的末端连接且相通,以通入诱导液;其纵向通道底端开设废弃液出口;其横向通道两侧对称各开设细胞悬液入口。

11.根据权利要求10所述的体外肝细胞异质性培养装置,其特征在于,所述纵向通道的宽度为1mm,长度为4mm;所述横向通道的宽度为1mm,长度为6.5mm。

12.根据权利要求10所述的体外肝细胞异质性培养装置,其特征在于,所述纵向通道底端废弃液出口直径为750μm。

13.一种体外肝细胞异质性培养方法,其特征在于,采用权利要求1至12任意一项所述的体外肝细胞异质性培养装置。

14.根据权利要求13所述的体外肝细胞异质性培养方法,其特征在于,包括以下步骤:

将肝细胞悬液加入到所述细胞诱导区域并等待所述肝细胞贴壁生长;

从所述流体分流通道持续匀速通入不同浓度或不同成分的诱导液,以便诱导形成异质性分布的体外肝细胞。

15.根据权利要求14所述的体外肝细胞异质性培养方法,其特征在于,所述肝细胞来源于原代肝细胞。

16.根据权利要求14所述的体外肝细胞异质性培养方法,其特征在于,所述肝细胞的培养液配方包括DMEM基础培养基、10%胎牛血清、0.5U/ml胰岛素、7ng/ml胰高血糖素、20ng/ml上皮生长因子、7.5μg/ml氢化可的松、200U/ml青霉素、200μg/ml链霉素。

17.根据权利要求14所述的体外肝细胞异质性培养方法,其特征在于,所述肝细胞悬液的细胞浓度为1.5×107/ml。

18.根据权利要求14所述的体外肝细胞异质性培养方法,其特征在于,所述细胞诱导区域加入所述肝细胞悬液之前,在37℃条件下用50μg/ml的纤维连接蛋白溶液进行浸润。

19.根据权利要求18所述的体外肝细胞异质性培养方法,其特征在于,所述浸润时间为45min。

20.根据权利要求14所述的体外肝细胞异质性培养方法,其特征在于,待肝细胞贴壁之后,将所述细胞诱导区域加入所述肝细胞悬液的入口关闭。

21.根据权利要求14所述的体外肝细胞异质性培养方法,其特征在于,所述诱导液包含WEB培养液,所述WEB培养液包括William’s E基础培养基、4mmol/l谷氨酰胺、200U/ml青霉素和200μg/ml链霉素。

22.根据权利要求21所述的体外肝细胞异质性培养方法,其特征在于,用于研究糖代谢和氨代谢的异质性肝细胞的诱导方法为:从所述第一培养基入口灌入含胰高血糖素100nmol/l的第一诱导液,并从所述第二培养基入口灌入含胰岛素100U/L的第二诱导液,诱导时间为24小时。

23.根据权利要求21所述的体外肝细胞异质性培养方法,其特征在于,用于研究酒精代谢和药物代谢的异质性肝细胞的诱导方法为:从所述第一培养基入口灌入所述WEB培养液,并从所述第二培养基入口灌入含2μmol/l的3-甲基胆蒽的第三诱导液,诱导时间为24小时。

24.根据权利要求14所述的体外肝细胞异质性培养方法,其特征在于,诱导形成异质性分布的肝细胞之后,还包括在所述体外肝细胞异质性培养装置中进行肝细胞生理功能的研究。

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