本发明涉及微生物发酵技术的应用，具体地说是一种发酵型烟用玫瑰花提取物及其制备方法。
背景技术：
玫瑰是蔷薇科蔷薇属落叶丛生灌木，玫瑰花又名徘徊花、刺玫、笔头花等，玫瑰花中含有的天然玫瑰油的主要成分是单萜类化合物，如芳樟醇、香叶醇、香茅醇以及玫瑰醚、倍半萜烯、倍半萜含氧化合物及苯衍生物，这种天然玫瑰油不仅气味宜人而且抗氧化，抗肿瘤，扩张血管，降血糖等等功效。如今，不同口味的香烟越来越收到消费者的青睐，尤其对于女性香烟消费者而言，具有花香的香烟不仅改善了香烟刺喉的缺点而且清香的花香味使人心情愉悦。
中国发明专利(授权公告号CN102406231 B授权公告日2013.12.11)公开了一种发酵型烟用玫瑰花提取物及其制备方法。它是将玫瑰花水提取物加入葡萄糖制得培养基，将保藏号为CCTCC NO：M209272、保藏名称为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae HHL-1的培养物制得培养液，然后将培养基置入培养液中进行发酵制备而成。该发明所制备的发酵型烟用玫瑰花提取物具有浓郁的玫瑰花香，并带有宜人的酸甜香气，添加到卷烟中，其具有丰富烟香、增加甜感、降低刺激性及柔和烟气的作用。但是酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae HHL-1发酵会产生大量的酒香味，这种酒香味浓郁，掩盖了玫瑰花水提取物的清香，而且制备玫瑰花水提取物会有大量的玫瑰花残渣，玫瑰花残渣里含有大量蛋白质，淀粉，纤维素以及各种矿物质，如何将这些残渣再利用将很大程度地节约资源，降低生产成本。
技术实现要素：
本发明的目的就是针对上述缺陷，提供一种发酵型烟用玫瑰花提取物及其制备方法，得到的发酵型烟用玫瑰花提取物不仅降低了对喉部鼻部的刺激而且具有明显的玫瑰花香，该制备工艺简单，降低了生产成本。
为实现上述目的，本发明的技术方案是：
一种发酵型烟用玫瑰花提取物，它是将玫瑰花水提取物与玫瑰花残渣酶解液混合制成玫瑰花培养基，将米曲霉与酿酒酵母制成种子液加入玫瑰花培养基中发酵制备而成；所述玫瑰花残渣酶解液是向玫瑰花残渣液中加入纤维素酶；所述玫瑰花残渣液是制备玫瑰花水提取物后得到的滤渣，并向滤渣中加入水而得。
优选地，所述纤维素酶占玫瑰花残渣液重量的0.05～0.1％，所述米曲霉与酿酒酵母种子液中米曲霉与酿酒酵母的总量为1×108～3×108cfu/mL。
一种发酵型烟用玫瑰花提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)将玫瑰花晒干，研磨成玫瑰花粉，取100g玫瑰花粉加入900g无菌水，回流提取4～5h，0.2μm微孔滤膜过滤，收集滤液与滤渣；滤液为玫瑰花水提取物，滤渣进行下一步处理；
2)向滤渣中加入9倍重量的无菌水得到玫瑰花残渣液，并控制pH为5.0～6.5，向玫瑰花残渣液中加入纤维素酶，酶解反应完毕后离心，取上清液得到玫瑰花残渣酶解液；
3)将步骤1)得到的玫瑰花水提取物与步骤2)得到的玫瑰花残渣酶解液混合，再加入0.05～0.50％氯化钠和0.08～0.2％的葡糖糖经过高压灭菌锅处理制得玫瑰花培养基，控制玫瑰花培养基的pH为6.5～7.5；
4)将米曲霉与酿酒酵母菌种接入YPD液体培养基中，恒温摇床温度为25～30℃，转速为150～160rpm，培养1～2天后得到米曲霉与酿酒酵母种子液；
5)向玫瑰花培养基中加入米曲霉与酿酒酵母种子液，在发酵罐中发酵；
6)发酵完毕后，离心发酵液，取上清液，将上清液用旋转蒸发仪浓缩得到浓缩发酵液，向浓缩发酵液中添加重量百分比为2～20％的丙二醇，即得到发酵型烟用玫瑰花提取物。
优选地，所述步骤2)中纤维素酶占玫瑰花残渣液重量的0.05～0.1％，酶解时间为2～3h；所述步骤4)中米曲霉与酿酒酵母种子液中米曲霉与酿酒酵母的总量为1×108～3×108cfu/mL；所述步骤5)中发酵工艺为：pH值为6.0～8.0，搅拌转速为250～300rpm，通气量为6～8VVM，发酵温度为25℃～30℃，发酵时间为2d～4d；所述步骤5)中米曲霉与酿酒酵母种子液的体积为玫瑰花培养基体积的5～10％，所述步骤6)中旋转蒸发仪的温度为70～80℃，转速为120～140rpm，时间为1～2h。
本发明采用的纤维素酶、胰蛋白酶与果胶酶购于武汉生物制品研究所，米曲霉菌种购自武汉大学菌种保藏中心，酿酒酵母为来自专利公开号102406231A中的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae HHL-1，中的为旋转蒸发仪的型号为BUCHIR-3000型。
本发明的有益效果是：
1、本发明采用米曲霉与酿酒酵母共同发酵，相比于单纯利用酿酒酵母，其香气清淡，不会掩盖玫瑰花的花香，而且能柔和玫瑰花花香，使烟用玫瑰花提取物不刺鼻喉，烟气更加飘逸。
2、结合酶解法制备玫瑰花提取物，不仅充分利用玫瑰花的残渣，降低了生产成本，而且能使玫瑰花的香味物质更充分的释放，香气充足。
具体实施方式
为更好地理解本发明，结合具体实例对发明进行详细的说明。
实施例1
发酵型烟用玫瑰花提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)将玫瑰花晒干，研磨成玫瑰花粉，取100g玫瑰花粉加入900g无菌水，回流提取4h，0.2μm微孔滤膜过滤，收集滤液与滤渣；滤液为玫瑰花水提取物，滤渣进行下一步处理；
2)向滤渣中加入9倍重量的无菌水得到玫瑰花残渣液，并控制pH为5.0，向玫瑰花残渣液中加入纤维素酶，纤维素酶占玫瑰花残渣液重量的0.05％，酶解时间为3h；酶解反应完毕后离心，取上清液得到玫瑰花残渣酶解液；
3)将步骤1)得到的玫瑰花水提取物与步骤2)得到的玫瑰花残渣酶解液混合，再加入0.05％氯化钠和0.08％的葡糖糖经过高压灭菌锅处理制得玫瑰花培养基，控制玫瑰花培养基的pH为6.5；
4)将米曲霉与酿酒酵母菌种接入YPD液体培养基中，恒温摇床温度为25℃，转速为160rpm，培养2天后得到米曲霉与酿酒酵母种子液，米曲霉与酿酒酵母种子液中米曲霉与酿酒酵母的总量为1×108cfu/mL；
5)向玫瑰花培养基中加入米曲霉与酿酒酵母种子液，米曲霉与酿酒酵母种子液的体积为玫瑰花培养基体积的10％；在发酵罐中发酵，发酵工艺为：pH值为6.0，搅拌转速为250rpm，通气量为6VVM，发酵温度为25℃℃，发酵时间为2d；
6)发酵完毕后，离心发酵液，取上清液，将上清液用旋转蒸发仪浓缩得到浓缩发酵液，旋转蒸发仪的温度为70℃，转速为140rpm，时间为2h；向浓缩发酵液中添加重量百分比为2％的丙二醇，即得到发酵型烟用玫瑰花提取物。
实施例2
发酵型烟用玫瑰花提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)将玫瑰花晒干，研磨成玫瑰花粉，取100g玫瑰花粉加入900g无菌水，回流提取5h，0.2μm微孔滤膜过滤，收集滤液与滤渣；滤液为玫瑰花水提取物，滤渣进行下一步处理；
2)向滤渣中加入9倍重量的无菌水得到玫瑰花残渣液，并控制pH为6.5，向玫瑰花残渣液中加入纤维素酶，纤维素酶占玫瑰花残渣液重量的0.1％，酶解时间为2h；酶解反应完毕后离心，取上清液得到玫瑰花残渣酶解液；
3)将步骤1)得到的玫瑰花水提取物与步骤2)得到的玫瑰花残渣酶解液混合，再加入0.50％氯化钠和0.2％的葡糖糖经过高压灭菌锅处理制得玫瑰花培养基，控制玫瑰花培养基的pH为7.5；
4)将米曲霉与酿酒酵母菌种接入YPD液体培养基中，恒温摇床温度为30℃，转速为150rpm，培养1天后得到米曲霉与酿酒酵母种子液，米曲霉与酿酒酵母种子液中米曲霉与酿酒酵母的总量为3×108cfu/mL；
5)向玫瑰花培养基中加入米曲霉与酿酒酵母种子液，米曲霉与酿酒酵母种子液的体积为玫瑰花培养基体积的5％；在发酵罐中发酵，发酵工艺为：pH值为8.0，搅拌转速为300rpm，通气量为8VVM，发酵温度为30℃，发酵时间为4d；
6)发酵完毕后，离心发酵液，取上清液，将上清液用旋转蒸发仪浓缩得到浓缩发酵液，旋转蒸发仪的温度为80℃，转速为120rpm，时间为1h；向浓缩发酵液中添加重量百分比为20％的丙二醇，即得到发酵型烟用玫瑰花提取物。
实施例3
发酵型烟用玫瑰花提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)将玫瑰花晒干，研磨成玫瑰花粉，取100g玫瑰花粉加入900g无菌水，回流提取4.5h，0.2μm微孔滤膜过滤，收集滤液与滤渣；滤液为玫瑰花水提取物，滤渣进行下一步处理；
2)向滤渣中加入9倍重量的无菌水得到玫瑰花残渣液，并控制pH为6.0，向玫瑰花残渣液中加入纤维素酶，纤维素酶占玫瑰花残渣液重量的0.08％，酶解时间为2.5h；酶解反应完毕后离心，取上清液得到玫瑰花残渣酶解液；
3)将步骤1)得到的玫瑰花水提取物与步骤2)得到的玫瑰花残渣酶解液混合，再加入0.2％氯化钠和0.1％的葡糖糖经过高压灭菌锅处理制得玫瑰花培养基，控制玫瑰花培养基的pH为7.0；
4)将米曲霉与酿酒酵母菌种接入YPD液体培养基中，恒温摇床温度为28℃，转速为155rpm，培养2天后得到米曲霉与酿酒酵母种子液，米曲霉与酿酒酵母种子液中米曲霉与酿酒酵母的总量为2×108cfu/mL；
5)向玫瑰花培养基中加入米曲霉与酿酒酵母种子液，米曲霉与酿酒酵母种子液的体积为玫瑰花培养基体积的8％；在发酵罐中发酵，发酵工艺为：pH值为7.0，搅拌转速为280rpm，通气量为7VVM，发酵温度为28℃，发酵时间为3d；
6)发酵完毕后，离心发酵液，取上清液，将上清液用旋转蒸发仪浓缩得到浓缩发酵液，旋转蒸发仪的温度为75℃，转速为130rpm，时间为1.5h；向浓缩发酵液中添加重量百分比为10％的丙二醇，即得到发酵型烟用玫瑰花提取物。
将实施例1～3进行评吸试验，结果见表1：
表1
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。