一株高产β‑D‑呋喃果糖苷酶的黑曲霉菌株及其液态发酵产酶方法与流程

文档序号:12410855阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一株高产β-D-呋喃果糖苷酶的黑曲霉菌株,其特征在于:所述菌株具体为黑曲霉菌株(Aspergillus niger)QL-225,保藏编号为CGMCC No.13168。

2.如权利要求1所述的一株高产β-D-呋喃果糖苷酶的黑曲霉菌株,其特征在于:所述黑曲霉菌株QL-225液态发酵所产β-果糖苷酶的最适作用pH为4.0-7.0,最适作用温度范围为40℃-60℃。

3.如权利要求1-2任一所述的一株高产β-D-呋喃果糖苷酶的黑曲霉菌株的液态发酵产酶方法,主要包括以下步骤:

斜面培养:取一环黑曲霉菌株QL-225接种于PDA斜面培养基,30℃下恒温培养72h,得到一级种子;

摇瓶培养:挑取一环一级种子接入种子培养基中,恒温34℃,摇床转速200rpm条件下培养72h,得到二级种子液;

种子罐培养:将所述二级种子液按照接种量5%(v/v)接入种子罐培养基,恒温34℃、转速200-800rpm条件下培养48h,得到三级种子液;

发酵罐培养:将所述三级种子液按照接种量5%(v/v)接入发酵罐培养基,恒温34℃,转速200-800rpm,通风量设置为:发酵第0h至24h为0.25vvm、发酵第24h至48h为0.5vvm、发酵第48h至发酵结束为1.0vvm,通过向培养基中流加补料培养基,发酵全程控制pH4.5-5.5,发酵至酶活增长缓慢,菌体自溶严重时结束发酵,发酵周期为120-140h,得到最终发酵液;

将所述最终发酵液通过提取与精制方法,获得β-D-呋喃果糖苷酶成品酶制剂。

4.如权利要求3所述的一株高产β-D-呋喃果糖苷酶的黑曲霉菌株的液态发酵产酶方法,其特征在于:所述PDA斜面培养基:蔗糖25g,NaNO3 2g,MgSO4 0.5g,KCl 0.5g,FeSO40.01g,K2HPO4 1g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,pH 4.5,121℃灭菌20min;

所述种子培养基:麦芽汁150mL,琼脂3g,pH 4.5,121℃灭菌20min;

所述种子罐培养基按质量分数组成:葡萄糖2%,酵母粉1.5%,KH2PO4 0.15%,CaCl20.005%,蒸馏水配置,调节pH 4.5,121-123℃灭菌30-35min;

所述发酵罐培养基按质量分数组成:玉米淀粉4%,玉米粉4%,豆饼粉4%,硫酸铵1%,KH2PO4 0.3%,玉米浆0.6%,CaCl2 0.5%,蒸馏水配置,调节pH 4.5,121-123℃灭菌30-35min;

所述补料培养基按质量分数组成:玉米淀粉10%,硫酸铵1%,KH2PO4 0.1%,玉米浆0.6%,CaCl2 0.5%,蒸馏水配置,调节pH 4.5,121-123℃灭菌30-35min。

5.如权利要求3所述的一株高产β-D-呋喃果糖苷酶的黑曲霉菌株的液态发酵产酶方法,其特征在于:所述β-D-呋喃果糖苷酶的提取与精制方法如下:

向所述最终发酵液中加入2-5%珍珠岩助滤剂,用板框80-200目、压力0.15-0.2MPa进行板框压滤,得到板框压滤液;

将所述板框压滤液用1%的20#硅藻土进行精滤1-3h,得到精滤酶液;

用5-20KD超滤膜对所述精滤酶液进行超滤浓缩,得到超滤浓缩液;

向所述超滤浓缩液中加入质量分数为:0.1~0.4%(m/v)稳定剂、5%~10%(m/v)防腐剂;之后用1%~3%的20#硅藻土进行过滤除菌,即得到β-D-呋喃果糖苷酶液体成品酶制剂。

6.如权利要求5所述的一株高产β-D-呋喃果糖苷酶的黑曲霉菌株的液态发酵产酶方法,其特征在于:所述β-D-呋喃果糖苷酶的提取与精制方法如下:

向所述最终发酵液中加入3.5%珍珠岩助滤剂,用板100目、压力0.16MPa进行板框压滤,得到板框压滤液;

将所述板框压滤液用1%的20#硅藻土进行精滤2h,得到精滤酶液;

用10KD超滤膜对所述精滤酶液进行超滤浓缩,得到超滤浓缩液;

在所述超滤浓缩液中加入质量百分比为:0.3%(m/v)稳定剂、7.5%(m/v)防腐剂;之后用2%的20#硅藻土进行过滤除菌,即得到β-D-呋喃果糖苷酶液体成品酶制剂。

7.如权利要求5或6所述的一株高产β-D-呋喃果糖苷酶的黑曲霉菌株的液态发酵产酶方法,其特征在于:所述稳定剂为柠檬酸钠,所述防腐剂由质量比分别为(0.2~0.4):(3~7):(1~3)的山梨酸钾、苯甲酸钠,焦亚硫酸钠组成。

8.如权利要求7所述的一株高产β-D-呋喃果糖苷酶的黑曲霉菌株的液态发酵产酶方法,其特征在于:所述稳定剂为柠檬酸钠,所述防腐剂由质量比分别为0.3:5:2的山梨酸钾、苯甲酸钠,焦亚硫酸钠组成。

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