辣木叶黄酮提取物的降糖、胰岛保护活性试验方法及其用途与流程

技术特征：

1.辣木叶黄酮提取物的降糖、胰岛保护活性试验方法，其特征在于，它包含以下步骤：

S1、黄酮提取物的制备：称取辣木叶黄酮粉末80-100mg，定容至1mL，混匀，经0.22um滤器滤过，分装成5个等量样品，待用；

S2、葡萄糖摄取试验：将试验用HepG2细胞溶液用0.25％胰蛋白酶液消化后，接种于培养板中，然后一起置于CO₂培养箱中培养，其中，HepG2细胞溶液的细胞浓度为0.8-1.5×10⁵个/mL，待细胞贴壁后，弃去原培养液，用葡萄糖试剂盒测定各孔培养液中初始葡萄糖的浓度，计为G₁，换无血清培养液，饥饿10-12h，加入DMEM高糖培养液160-200μL，再分别加入20-50μL样品，孵育24-28h后用葡萄糖试剂盒测定各孔培养液中葡萄糖的浓度，计为G₂，采用以下公式计算葡萄糖的消耗量G_C，其中，n为培养板中试验的孔数，根据葡萄糖摄取活性系数K，判断样品葡萄糖摄取活性，G₀为同体积的异槲皮苷试验样品进行葡萄糖摄取试验得到的葡萄糖消耗量，异槲皮苷试验样品中异槲皮苷的含量为0.0156mg/mL；

S3、糖脂代谢活性试验：取用人工诱导2型糖尿病大鼠模型样品组和对照组各10只，其中，人工诱导2型糖尿病大鼠模型的标准为空腹血糖大于7.8mmol/L或餐后2h血糖大于11.1mmol/L，样品组和对照组按样品组的剂量给予等量的生理盐水，于确定大鼠成模当天统一开始灌胃给药，连续灌胃21天，每天8：00AM-9:00AM定时空腹给药一次，灌胃后再给予等量的饲料与饮水，21天后取分别取各组大鼠的血糖变化率，大鼠血脂指标含量，大鼠血清SOD与MDA含量的测定以及胰岛素指数的计算；

S4、胰岛保护活性试验：将糖脂代谢活性试验中样品组和对照组的大鼠胰脏用波恩氏液固定，经过脱水、透明、浸蜡后，用石蜡包埋，切片，厚度为4.5-5.5μm，30-45℃烘箱加热固定，对胰腺切片进行HE染色和醛复红染色，脱水，透明，封片，于显微镜下观察，并拍照记录，根据HE染色的胰腺切片中胰岛细胞的数量A₂与对照组中胰岛细胞数量A₁，计算胰岛细胞数量变化率M，其中A₂、A₁分别为样品组合对照组中HE染色的切片下的10只大鼠胰脏细胞数量的平均值，根据醛复红染色胰岛β细胞所代表的红色区域面积计算胰岛β细胞增长率N，其中，B₂、B₁分别为样品组合对照组中醛复红染色的切片下10只大鼠胰岛β细胞数量所代表的红色区域面积的平均值。

2.如权利要求1所述的辣木叶黄酮提取物的降糖、胰岛保护活性试验方法，其特征在于：所述的辣木叶黄酮粉末由以下方法制得：取辣木叶粉以50-60％v/v乙醇为溶剂，料液比为1:50-60g/ml，进行微波萃取，收集提取液，其中，微波功率为300-400W，提取时间为6-10min，然后提取液滤过，旋转蒸发仪减压浓缩，回收乙醇至干，无水乙醇复溶后静置12小时滤过，除去水溶性杂质，滤液再经旋转蒸发仪减压浓缩，除去乙醇，以蒸馏水稀释，高浓度黄酮溶液分装为2mL/管于15mL螺口带盖离心管，置于真空超低温冷冻干燥仪48h，黄酮完全冻干为粉末，取出后，密封，避光，-80℃保存。

3.根据权利要求1所述的辣木叶黄酮提取物的降糖、胰岛保护活性试验方法，其特征在于:所述的葡萄糖摄取试验步骤中培养板的孔数为96孔。

4.根据权利要求1所述的辣木叶黄酮提取物的降糖、胰岛保护活性试验方法，其特征在于:所述的试验用HepG2细胞溶液是由以下方法制得：将HepG2细胞接种于细胞培养瓶中，加入1640培养液，置于37℃、饱和湿度的5％CO2培养箱中培养，每隔2d更换1次培养液，3d后传代，传代数1:4，取对数生长期的细胞进行试验。

5.如权利要求1-4任一所述的辣木叶黄酮提取物，其特征在于：所述的辣木叶黄酮提取物用于降低血糖、修复胰腺β细胞分泌胰岛素功能的药物及医药产品。