本发明涉及医药
技术领域：
，特别是制备抗糖尿病药物
技术领域：
，具体是一种n-3-(4-r2取代)-(1-r1取代苯并咪唑)-(1’-r3取代)-2’-氧代-烟酰胺类抗糖尿病化合物及其制备方法与应用。
背景技术：
：随着生活水平提高及人口寿命的延长，糖尿病发病率迅速增长，全世界大约有8.4％的人口患有糖尿病，预计到2020年患病人口将高达5.5亿。糖尿病有i型和ii型糖尿病之分，其中ii型糖尿病患者的比率占到95％，ii型糖尿病的病因主要是由于机体不能充分正常的利用胰岛素，从而导致糖代谢的失衡，引发高血糖和及其并发症。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(pparγ)是核受体家族中的一个非常重要的成员，它们在调节糖代谢和脂类平衡方面具有重要的功能。现在pparγ已经作为一个重要的药物筛选靶标用于治疗糖尿病、肥胖症、癌症等。皮下脂肪组织随着年龄的增长而逐渐减少，它的调节是开发抗老化化合物来改善人皮肤的光老化的一种策略。人脂肪组织的脂肪细胞组织间充质干细胞可以作为一个模型，发现新的抗衰老化合物。目前，市场上最常见的噻唑二酮(tdz)类的抗糖尿病药物有罗格列酮、吡格列酮等，但该类药毒副作用很大，在欧美国家的使用已受到了不同程度的限制毒副作用较大，此类药物市场销售发展受到了限制，因此研发新型毒副作用小，效果好的抗糖尿病药物非常关键和必要。技术实现要素：本发明的目的是提供一种抗糖尿病化合物制备方法及用途。该抗糖尿病化合物是n-3-(4-r2取代)-(1-r1取代苯并咪唑)-(1’-r3取代)-2’-氧代-烟酰胺类衍生物。该类化合物有较好的抗糖尿病活性，可以作为新型抗糖尿病药物，用于预防或者治疗糖尿病及其糖尿病并发症。本发明提供n-3-(4-r2取代)-(1-r1取代苯并咪唑)-(1’-r3取代)-2’-氧代-烟酰胺类衍生物及其盐，其结构通式如式i所示：其中，r1为h，c1-c6烷基，c1-c6烷氧基；r2为c1-c6烷基，c1-c6烷氧基，卤素；r3为c1-c6烷基，c1-c6烷氧基，取代或未取代的6-10元芳基或5-10元杂环基，所述的杂环基含有1-3个n，o或s的杂原子；所述取代基为：c1-c6烷基，c1-c6烷氧基，卤素。本发明优选通式i所示的衍生物及其盐：其中，r1为h，c1-c4烷基，c1-c4烷氧基；r2为c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，卤素；r3为c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，取代或未取代的6元芳基或5-6元杂环基，所述的杂环基含有1-3个n，o或s的杂原子；所述取代基为：c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，卤素。本发明优选通式i所示的衍生物及其盐：其中，r1为h，c1-c4烷基，c1-c4烷氧基；r2为c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，卤素；r3为c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，取代或未取代的苯基，所述取代基为：c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，卤素。本发明优选通式i所示的衍生物及其盐：其中，r1为h，c1-c4烷基，c1-c4烷氧基；r2为c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，卤素；r3为取代或未取代的苯基，所述取代基为：c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，卤素。本发明优选通式i所示的衍生物及其盐：其中，r1为h，甲基，乙基；r2为c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，卤素；r3为取代或未取代的苯基，所述取代基为：c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，卤素。本发明优选通式i所示的衍生物及其盐：其中，r1为h，甲基，乙基；r2为氯，氟，溴，甲基，乙基；r3为取代或未取代的苯基，所述取代基为：c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，卤素。本发明优选通式i所示的衍生物及其盐：其中，r1为h，甲基，乙基；r2为氯，氟，溴，甲基，乙基；r3为取代或未取代的苯基，所述取代基为氟、氯。本发明优选如下结构的衍生物及其盐：本发明的衍生物可与无机酸或有机酸反应形成盐，其中所述无机酸为盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸或磷酸；所述的有机酸为甲酸、乙酸、丙酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸或酒石酸。本发明还提供了一种药物组合物，包含所述的衍生物及其盐和药学上可接受的赋形剂。本发明还提供了该衍生物的制备方法，本发明提供的制备上述衍生物的方法，合成步骤简便且易于操作。该类化合物具有非常好的抗糖尿病活性，在制备抗糖尿病药物领域，具有重要的实用价值和应用前景。本发明提供的制备式i所述衍生物的方法，包括如下步骤：1)使式ii所示化合物与邻苯二胺发生缩合、环合、还原反应，得到式iii所示化合物。其中，式ii、iii中r2的定义同式i中r2。2)使式iv所示化合物与2-羟基烟酸甲酯反应得到式v所示化合物；然后在碱性条件下水解得到式vi化合物；其中，式iv、v、vi中r1的定义同式i中r1。3)使式iii所述化合物与式vi所示化合物在缩合剂存在下进行缩合反应，得到式i所示化合物。上述方法，步骤1)中式ii所示化合物与邻苯二胺进行缩合反应的反应介质为四氢呋喃；进行环合反应的反应介质为冰醋酸，反应条件为110℃加热回流，反应时间为2-6小时，优选4小时；还原反应条件为氯化亚锡酸性条件。步骤2)中所述偶联反应的反应介质为dmf；所述碱性条件由1～2m的氢氧化钠水溶液与乙醇的混合溶液提供，其中水与乙醇的体积比为1:1～1:10。步骤3)中所述缩合反应的反应介质为thf，反应条件为室温，反应时间为8-12小时，具体选择8小时。具体实施方式下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均为市售。实施例1n-(3-(1h-苯并[d]咪唑-2-基)-4-氯苯基)-1-(4-氟苄基)-2-氧代-吡啶-3-甲酰胺的制备(化合物1)步骤1)n-(2-氨基苯基)-2-氯-5-硝基苯甲酰胺的合成于100ml圆底烧瓶中，2-氯-5-硝基苯甲酸2.01g(10mmol)溶于50ml无水四氢呋喃，加入草酰氯5ml，滴加3滴dmf，室温搅拌4小时。旋蒸浓缩得淡黄色的2-氯-5-硝基苯甲酰氯固体，无水四氢呋喃溶解，待用。于另一100ml圆底烧瓶中，邻苯二胺2.16(20mmol)溶于40ml无水四氢呋喃，加入5ml三乙胺，冰浴下缓慢滴加2-氯-5-硝基苯甲酰氯的四氢呋喃溶液，常温搅拌过夜，浓缩，加入水100ml后析出固体，抽滤，用水洗涤，得到深黄色n-(2-氨基苯基)-2-甲基-5-硝基苯甲酰胺固体。步骤2)2-(2-氯-5-硝基苯基)-1h-苯并[d]咪唑的合成于100ml圆底烧瓶中，n-(2-氨基苯基)-2-氯-5-硝基苯甲酰胺1.45g(5mmol)溶于20ml冰乙酸，110℃下回流3小时。将淡黄色透明液倒入水中，水层黄色浑浊，加入饱和碳酸氢钠调至弱酸，有大量乳白色絮状固体析出，抽滤，收集滤饼，硅胶拌样，柱色谱，洗脱剂(pe:ea＝6:1～9:1)，旋蒸浓缩得淡黄色2-(2-氯-5-硝基苯基)-1h-苯并[d]咪唑固体。步骤3)3-(1h-苯并[d]咪唑-2-基)-4-氯苯胺的合成将2-(2-氯-5-硝基苯基)-1h-苯并[d]咪唑0.68g(2.5mmol)溶到乙醇中，加入氯化亚锡2.6g(12.8mmol)，80℃回流8小时。旋蒸浓缩母液得到褐色的盐酸水溶液，溶于水变成淡黄的透明液，用氢氧化钠调节到弱碱性，等量乙酸乙酯萃取两遍，饱和食盐水洗涤，硫酸镁干燥，过滤，旋蒸浓缩得暗黄色3-(1h-苯并[d]咪唑-2-基)-4-氯苯胺固体。结构确证数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ,9.88(s,1h),8.54(d,j＝2.7hz,1h),8.29(dd,j＝8.7hz,2.7hz,1h),7.86(d,j＝8.7hz),7.25(dd,j＝7.8hz,1.5hz,1h),6.99(dt,j＝7.8hz,1.5hz,1h),6.75(dd,j＝7.8hz,1.5hz,1h),6.59(dt,j＝7.5hz,1.5hz,1h),5.00(s,2h)。步骤4)(4-氟苄基)-2-氧代-吡啶-3-甲酸的合成于100ml圆底烧瓶中，加入2-羟基烟酸甲酯1.53g(10mmol)，碳酸钾2.76g(20mmol)，dmf50ml，4-氟氯苄1.73g(12mmol)，50℃下反应8h，浓缩除去dmf，倒入水中，二氯甲烷萃取，浓缩得到油状产物，之后直接加入乙醇：水：氢氧化钠(7:3:1.5mol)溶液50ml，80℃下反应0.5h，浓缩，反应液用1m盐酸调节ph5-6，大量白色固体析出，抽滤，得白色(4-氟苄基)-2-氧代-吡啶-3-甲酸固体。结构确证数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ14.42(s,1h),8.41(dt,j＝6.8,1.9hz,2h),7.44(dd,j＝8.6,5.6hz,2h),7.21(t,j＝8.8hz,2h),6.77(t,j＝6.9hz,1h),5.30(s,2h).步骤5)n-(3-(1h-苯并[d]咪唑-2-基)-4-氯苯基)-1-(4-氟苄基)-2-氧代-吡啶-3-甲酰胺的合成在50ml的圆底烧瓶中加入0.001mol的3-(1h-苯并[d]咪唑-2-基)-4-氯苯胺，dipea0.52ml(0.003mol)以及thf5ml，搅拌下加入0.001mol的制备的(4-氟苄基)-2-氧代-吡啶-3-甲酸，hobt0.15g(0.001mol)，0.21gedci(0.001mol)，反应24小时，用饱和nahco3水溶液洗涤，二氯甲烷萃取30ml×3，再用2m的稀hcl溶液洗涤，浓缩，析出白色粉末状结晶，抽滤，水洗涤，干燥，便得到所要的目标化合物。需要纯化时，采用硅胶柱色谱分离，流动相采用二氯甲烷和甲醇系统(1:0～20:1)。结构确证数据如下：1hnmr(400mhz,dmso)δ12.82(s,1h),12.31(s,1h),8.52(dd,j＝7.3,2.0hz,1h),8.37(dd,j＝6.5,2.0hz,1h),8.31(d,j＝2.5hz,1h),7.91(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),7.68(dd,j＝5.7,3.2hz,2h),7.64(d,j＝8.8hz,1h),7.47(dd,j＝8.5,5.6hz,2h),7.31–7.25(m,2h),7.23(t,j＝8.9hz,2h),6.72(t,j＝6.9hz,1h),5.33(s,2h).13cnmr(100mhz,dmso)δ162.2,162.1,162.0,149.2,144.7,144.6,144.5,137.9,133.0,133.0,131.5,130.6,130.5,126.2,123.1,122.8,122.6,120.2,116.0,115.9,115.8,115.7,107.8,52.3.选用其它取代的氯苄，采用与上完全相同的制备方法，得到其它(取代苄基)-2-氧代-吡啶-3-甲酸，最后与3-(1h-苯并[d]咪唑-2-基)-4-氯苯胺缩合，便得到其它式i中的产物。实施例2n-(3-(1h-苯并[d]咪唑-2-基)-4-氯苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-2-氧代-吡啶-3-甲酰胺的制备(化合物2)1hnmr(400mhz,dmso)δ12.75(s,1h),12.35(s,1h),8.47(d,j＝6.6hz,1h),8.29(s,2h),7.89(d,j＝6.7hz,1h),7.73(d,j＝7.1hz,1h),7.63–7.58(m,2h),7.35(d,j＝8.1hz,2h),7.27–7.23(m,2h),6.92(d,j＝8.1hz,2h),6.67(t,j＝6.5hz,1h),5.24(s,2h),3.72(s,3h).13cnmr(100mhz,dmso)δ162.2,162.1,159.5,149.2,144.5,144.4,143.6,137.9,135.2,131.52,130.6,130.0(2c),128.8,126.2,123.3,123.1,122.6,122.2,120.1,119.6,114.6(2c),112.3,107.7,55.6,52.4.实施例3n-(3-(1h-苯并[d]咪唑-2-基)-4-氯苯基)-1-(2,4-二氟苄基)-2-氧代-吡啶-3-甲酰胺的制备(化合物3)1hnmr(400mhz,dmso)δ12.77(s,1h),12.31(s,1h),8.51(dd,j＝7.3,2.0hz,1h),8.37(dd,j＝6.4hz,1.6hz,1h),8.31(d,j＝2.6hz,1h),7.91(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),7.68(s,2h),7.64(d,j＝8.8hz,1h),7.47(dd,j＝8.6,5.6hz,2h),7.29–7.26(m,2h),7.22(t,j＝8.9hz,2h),6.71(t,j＝6.9hz,1h),5.32(s,2h).13cnmr(100mhz,dmso)δ162.2,162.1,162.0,149.2,144.7(2c),144.5,137.9,133.0,132.9,131.5,130.6,130.6,130.6,126.2,123.1,122.8(2c),122.6,120.2,116.1,115.9(2c),107.8,52.3.实施例4n-(3-(1h-苯并[d]咪唑-2-基)-4-氯苯基)-1-(2,6-二氟苄基)-2-氧代-吡啶-3-甲酰胺的制备(化合物4)1hnmr(400mhz,dmso)δ12.79(s,1h),12.10(s,1h),8.50(dd,j＝7.3,2.0hz,1h),8.30(d,j＝6.0hz,1h),8.25(d,j＝2.5hz,1h),7.86(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),7.67(s,2h),7.61(d,j＝8.7hz,1h),7.50–7.42(m,1h),7.25(dd,j＝6.0,3.1hz,2h),7.14(t,j＝8.2hz,2h),6.69(t,j＝7.0hz,1h),5.38(s,2h).13cnmr(100mhz,dmso)δ161.6,162.0,161.9,161.4,149.2,145.2,144.9,137.8,131.5,131.3,131.2,130.6,126.2,122.8,122.7,120.0,112.4,112.3,112.0,111.8,107.30,43.63.活性测试实施例1pparγ竞争结合试验在制备完整的tr-fret-ppar缓冲液之前使缓冲容器达到室温，用1mol/l的dtt加入tr-fret-ppar缓冲液，使最终得到5mmol/l的浓度。将测试化合物在tr-fret-ppar缓冲液中稀释至2x浓度并混均匀。在室温下用tr-fret-ppar缓冲液来稀释之前储备好的溶液100倍来制备一个4x地塞米松pan-ppargreen溶液(20nm)，在室温下至少稳定两小时。在常温下用tr-fret-ppar缓冲液制备一个含有20nm的tbanti-gst抗体(4x)和4xpparγ蛋白，轻微震荡几次使其混合均匀。将tbanti-gst抗体加入tr-fret-ppar缓冲液使之浓度为20nm(4x)。在一个微量滴定板上，吸取试剂，在板上摇晃30秒并混合均匀。覆盖试验板防止试剂见光和蒸发，室温下(20-25℃)孵化1～6小时。在520nm和495nm测量荧光信号，计算tr-fret值，绘制曲线，计算ic50值。化合物的ic50(单位μm)值pparγ化合物11.2化合物260.2化合物30.2化合物40.4通过细胞和激酶测试实验结果表明，本发明的化合物具有很好的pparγ抑制活性，特别是化合物3和4达到了纳摩尔，比阳性对照药格列本脲(ic50＝3μm)的活性要好。并且初期的细胞毒性试验也表明，该类化合物的毒性很小，具有很好的开发价值。当前第1页12